专利名称:甾体皂苷药物组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种留体皂苷药物组合物，具体地说，是主要以黄山药、穿龙薯蓣为原 料提取的留体皂苷药物组合物。
背景技术：
留体皂苷(steroidal saponins)是植物中一类重要的生物活性物质，留体皂苷的 研究在天然产物化学中一直占有重要的地位。留体皂苷的苷元是含有27个碳原子的螺甾 烷醇或呋留烷醇，大多数存在于单叶子植物的百合科，石蒜科和薯蓣科植物中。
黄山药又名姜黄、姜黄草、老虎姜、猴节莲，为薯蓣科薯蓣属植物黄山药 Dioscoreapanthaica Prain et Burkill的根茎，分布于西南及湖北、湖南等地；能理气止 痛，解毒消肿，主治胃气痛，吐泻腹痛，跌打损伤，疮疡肿毒，毒蛇咬伤等症[国家中医药管 理局《中华本草编委会》中华本草(1999年上海科学技术出版社)第8卷，P8. 247]。穿山龙 为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino的根茎，又名穿山骨、穿地龙、 狗山药、山常山、穿山骨、火藤根、姜黄、土山薯、竹根薯、铁根薯、雄姜、黄鞭、野山药、地龙 骨、金刚骨、串山龙、过山龙，分布于东北、华北、西北及河南、湖北、山东、江苏、安徽、浙江、 江西、四川等地；能祛风除湿，活血通络，止咳；主治风湿痹痛，肢体麻木，胸痹心痛，慢性气 管炎，跌打损伤，疟疾，痈肿等症[国家中医药管理局《中华本草编委会》中华本草(1999年 上海科学技术出版社)第8卷，P238]。《中华人民共和国药典》1977年版一部P435-436将 穿山龙作为中药材收入其中。
目前，对黄山药、穿山龙的研究甚少。李伯刚等人从黄山药中分离并鉴定得到2 种水难溶留体皂苷薯蓣皂苷(dioscin)和纤细皂苷(gracillin)[李伯刚等，植物学报， 1986,28(4) 409-411]；董梅等人从黄山药中分离得到3种留体皂苷[董梅等，药学学报 2001，36(1) :42-45]，其化学结构分别鉴定为，伪原薯蓣皂苷(留体皂苷1)，DI-9(留体皂 苷6)；方一苇等人从穿山龙中分离得到2种水难溶甾体皂苷薯蓣皂苷(dioscin)和纤细 皂苷(gracillin)，两种均为川龙冠心宁的药用成分[方一苇等，药学学报1982,17(5) 388-391]；都述虎等人从穿山龙中分离得到从穿龙薯蓣总皂苷中分得2个留体皂苷(1个水 难溶性皂苷和1个水溶性皂苷)，其化学结构分别鉴定为纤细皂苷等[都述虎等，药学学报 2002,37(4) :267-270]。另一项国内研究公开了薯蓣总皂苷提取物中含有的8种留体皂苷 的结构式[李伯刚，周正质.中药新药与临床.1994，13 (2) :75-76]，治疗冠心病的有效成 分为该八种留体皂苷，其中包括薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、原纤细皂苷、纤细皂苷等。中国专利 (申请号CN02128119.X)螺甾烷醇类甾体皂苷在制备治疗心血管疾病药物中的应用，公开 了六种螺甾烷醇类甾体皂苷的新用途。中国专利(申请号CN02112159. 1)具有治疗心肌缺 血，心绞痛和心肌梗死功能的药物组合物，公开了含有薯蓣皂苷元的药物组合物的新用途。 到目前为止仅从黄山药、穿山龙中分离鉴定了伪原薯蓣皂苷(I)、薯蓣皂苷(III)。
虽然上述资料公开了黄山药、穿山龙含有多种对治疗心血管疾病有效的甾体皂 苷，但仅仅是对两种植物中的有效成分的化学研究，由于有些成分含量极低，在制药上并无
5太大价值。众所周知，从植物中获得纯的有用价值的化合物极为困难，成本很高，同时也为 了避免难以预料的副作用，一般不使用植物中的有效纯化合物，而使用药用植物提取物直 接作用药用原料，成本低而且应用简便。但植物提取物的一个缺陷是，由于植物采收季节和 产地不同都会造成有效成分含量的波动，同时，如果主要有效成分及其含量不清楚，都会给 药品的质量控制造成很大困难，因此，为了保持植物药的质量稳定，清楚知道植物中各基本 药效成分及其含量是很重要的，目前由于技术手段所限和留体皂苷的种类复杂，至今未见 确切的主要有效成分、含量及其纯度的报道。
传统的制备留体总皂苷的方法用甲醇或乙醇热提，所得的醇溶液浓缩，除去甲醇 或乙醇，再用氯仿等脱脂，然后用含水的正丁醇提取，所得的正丁醇溶液浓缩即得留体总皂 苷。以上工艺存在如下缺点(1)收率低，成本高，(2)生产周期长，(3)需要大量的有机溶 剂，生产上存在易燃易爆有毒的危险，同时带来严重的环境污染，(4)能耗大，由于正丁醇沸 点高，造成浓缩干燥困难，(5)产品色泽差；且不适合工业化生产。按传统的工艺制备甾体 总皂苷，各留体皂苷含量不稳定，导致药效不稳定。
发明内容
为了克服上述缺陷，本发明的技术方案是提供了 一种留体皂苷药物组合物，本发 明的另一技术方案是提供了该留体皂苷药物组合物的制备方法和用途。
本发明提供了一种甾体皂苷药物组合物，它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇 甾体皂苷，通式C螺留烷醇类留体皂苷或皂苷元，其重量配比为呋留烷醇留体皂苷5-25 份、螺留烷醇类留体皂苷1-10份，
通式B
其中，通式A中，呋甾烷醇甾体皂苷为
通式 B 中
通式C中
进一步地，含有下列化合物通式A中，当
时，为伪原薯蓣皂苷
时，为伪原纤细薯蓣皂苷(II)；通式B中，当
时，
为原薯蓣皂苷
时，为原纤细皂苷(V)；通式C中，項10<@时
为薯蓣皂苷(III)，
其中，伪原薯蓣皂苷(I)和/或原薯蓣皂苷(IV) 5 22份伪原纤细薯蓣皂苷(II) 和/或原纤细皂苷(V) 1 5份、薯蓣皂苷(III) 1 8份。
更进一步地，含有伪原薯蓣皂苷(1)5 20份、伪原纤细薯蓣皂苷(11)1 3份、 薯蓣皂苷(111)1 5份。
更进一步地，含有伪原薯蓣皂苷(1)12 18份、伪原纤细薯蓣皂苷(11)1份、薯蓣 皂苷(III) 1.2 2. 5份。
所述的甾体皂苷来源于薯蓣科薯蓣属植物黄山药Dioscorea panthaica Prain etBurkill>^^W!i Dioscorea nipponica Makino 白勺
其中，所述留体总皂苷提取物中，留体总皂苷含量大于80% (w/w)，留体总皂苷以 薯蓣皂苷计，其含量不少于65% (w/w) 0
其中，所述的提取物中含有伪原薯蓣皂苷(I)、伪原纤细薯蓣皂苷(II)、薯蓣皂苷 (III)三种甾体皂苷的含量之和不少于甾体总皂苷的50% w/w。[0024]所述的提取物具有如图1所示的HPLC指纹图谱，其中，指纹图谱的特征峰分别为 伪原薯蓣皂苷(I)保留时间28. 27min ；伪原纤细薯蓣皂苷(II)保留时间29. 5min ；薯蓣 皂苷(III)保留时间57. lOmin。
色谱条件色谱柱:Alltima C184. 6 X 250_，5um，梯度洗脱，蒸发光散射检测器检 测，漂移管温度100°c，气体流速2. OL/min。
所述的提取物是由如下方法制备
a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜采集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉 碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意 比例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的15 25倍；
b、将a步骤制备的提取液冷却过滤、滤液通过吸附树脂柱、弃去流出液，用水洗至 流出液至无色，弃去水洗液；
c、将b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50 % 90 %乙醇、30 80%含水甲醇或60 95%含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；
d、将c步骤的浓缩液加60 95%醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥，即得。
其中，所述的提取物的制备方法步骤b中当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它 低脂肪醇时，先减压浓缩，再冷却过滤。
所采用的溶剂提取法中，可选用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低级脂肪醇中的 一种溶媒，也可以选用其中的任意两种或者多种溶剂以任意比例组成的混合溶媒，在室温 下浸润提取或者用超声波振荡提取，或者在加热状态下浸润提取或回流提取。提取次数可 以是一次，也可以是多次。
所采用的大孔树脂吸附法中，树脂可选用HPD1(1(1、HPD30> LD140, D101以及其他类型的 大孔吸附树脂，或以上不同型号的大孔吸附树脂按一定比例混合，洗脱溶媒用水、甲醇、乙 醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一种或多种，洗脱时可以浓度洗脱，也可以 梯度洗脱。
本发明药物组合物是由所述的留体皂苷或提取物为活性成分，加上药学上可接受 的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。
其中，所述的制剂是片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。
本发明还提供了该药物组合物的制备方法，它包括如下步骤
称取含有通式A和/或通式B的呋留烷醇留体皂苷，通式C螺留醇类留体皂苷，重 量配比为呋留烷醇留体皂苷5 25份、螺留烷醇类留体皂苷1 10份；混合，加入药学上 可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
本发明提供的药物组合物还可以由以下方法制备
a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜采集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉 碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意 比例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的15 25倍；
b、将a步骤制备的提取液冷却过滤、滤液通过吸附树脂柱、弃去流出液，用水洗至 流出液至无色，弃去水洗液；
c、将b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50 % 90 %乙醇、30 80%含水甲醇或60 95%含水丙酮中含水甲醇或含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；
d、将c步骤的浓缩液加60 95%醇醇沉，过滤，收集滤液；
e、取d步骤所述的滤液，浓缩干燥，加入药物上可接受的辅料或辅助性成分制备 成药学上常用的制剂。
e、取d步骤所述的滤液，浓缩干燥，加入药物上可接受的辅料或辅助性成分制备 成药学上常用的制剂。
其中，步骤b中，当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓缩， 再冷却过滤。
本发明还提供了该药物组合物在制备治疗和预防心脑血管疾病药物中的应用。其 中，所述药物是治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、高血脂或缺血性脑血管病的药 物。
通过对本发明药物组合物中三个留体皂苷成分的测定，药效稳定性高，疗效可靠， 同时提供三个留体皂苷成分的鉴定方法，可控性强，且本发明药物日服剂量300 600mg， 服用剂量少，为临床提供了 一种新的选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
图1原薯蓣皂苷标样、化合物1-8混合的HPLC分析谱图，图中1-8号峰分别对应 化合物1-8 ；
图2实施例1的组合物的HPLC分析谱图，图中1号峰为化合物1，6号峰对化合物 2，7号峰对应化合物9，8号峰对应化合物3，11号峰对应化合物5 ；
图3实施例2的组合物的HPLC分析谱图，图中1号峰为化合物1，6号峰对化合物 2，7号峰对应化合物9，8号峰对应化合物3，10号峰对应化合物5 ；
图4实施例3的组合物的HPLC分析谱图，图中1号峰为化合物1，6号峰对化合物 2，7号峰对应化合物9，8号峰对应化合物3，10号峰对应化合物5 ； 具体实施方式
实施例1本发明药物组合物的制备
中药穿山龙的干燥根茎100kg，粉碎，用95%乙醇(1200LX3)回流，第一次3小 时，第二、三次各2小时，滤过，合并提取液；回收乙醇，加水至2g/ml，冷藏24小时，离心；上 清液过HPD■吸附树脂柱，先用水洗至流出液无色后，用70%乙醇洗脱；接收70%乙醇洗脱 部分，浓缩，将浓缩液加75%乙醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥，再经真空干燥即得穿山 龙总甾体皂苷，收率为2. 32%。甾体总皂苷含量为85% (w/w) 0
实施例2本发明药物组合物的制备
中药黄山药的干燥根茎100kg，切片，用12倍(V/W)水煎煮4次，第一次3小时， 第二、三、四次各2小时，滤过，合并提取液；放至室温，离心；上清液过大孔吸附树脂柱 [HPD100/LD100 = 7 3(W/W)]，先用水洗至流出液无色后，再用10%乙醇洗脱，最后用75%乙醇洗脱；接收75 %乙醇洗脱部分，浓缩，将浓缩液加80 %乙醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩， 干燥回收乙醇至无醇味，再经喷雾干燥即得黄山药总留体皂苷，收率为1. 15%。留体总皂苷 含量为90% (w/w)。
实施例3本发明药物组合物的制备
新鲜穿山龙的干燥根茎400kg，切片，用8倍(V/W)水煎煮3次，第一次3小时，第 二、三次各2小时，滤过，合并提取液；放至室温，离心；上清液过大孔吸附树脂柱[HPD1Q(i/ LD101 = 6 4 (W/W)]，先用水充分正反洗后，再用10%乙醇洗脱，最后用80%乙醇洗脱；接 收80 %乙醇洗脱部分，浓缩，将浓缩液加90%乙醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，回收乙醇至 无醇味，再经喷雾干燥即得穿山龙总留体皂苷，收率为0.56%。留体总皂苷为95% (w/w) 0
实施例4本发明药物组合物中化合物的制备及鉴定
取实施例1粗提物1278g，分散于11100ml水中，依次用乙酸乙酯(7500ml X 4)、正 丁醇(7500ml X 5)进行萃取，得乙酸乙酯萃取物102g和正丁醇萃取物503g。取正丁醇部分 236g进行硅胶柱层析(①10. 5X52cm，2000g)，氯仿-甲醇-水(9 1 0. 1)梯度洗脱， 每瓶接收500ml洗脱剂，共收集160份。Fr. 16-21析出化合物8 (140mg)，Fr. 41-45析出化 合物7(427mg)，Fr. 56-65析出化合物6 (30g) Fr. 94-104析出化合物5(8. 62g)，即为本发明 的甾体皂苷(III)。Fr. 113-127合并为E(26g)，进行硅胶柱层析(①6. 5X71cm，800g)，氯 仿-甲醇(5 1)水饱和洗脱，E过柱Fr. 14-20合并为B(4g)，过0DS纯化得化合物4(1. 3g)。 Fr. 128-143合并为F(63g)，进行硅胶柱层析(①7 X 52cm，850g)，氯仿-甲醇(5 1)水饱 和洗脱，F过柱Fr. 36-60合并为A(10g)，0DS纯化得化合物3 (115mg)，F过柱Fr. 61-68合 并为B(llg)，0DS纯化得化合物9(105mg)，即为本发明的甾体皂苷(II)。F过柱Fr. 69-78 合并为C(10g)，0DS纯化得化合物2(2. 89g)，即为本发明的甾体皂苷(I)。
柱层析用硅胶(160-200目，200-300目)，TLC用GF254硅胶为青岛海洋化工厂产 品，反向硅胶0DS(Cosmosil 75C18-0PN)为日本Nacalai tesque公司产品，反相高效硅胶板 RP-18F254 为 Merck 产品。
经MS H NMR、13C NMR、DEPT、HMQC、HMBC等现代波谱学方法结合理化常数鉴定了它 们的结构如下
质谱仪为Finnigan LCQdeca ；核磁共振仪为Bruker AM-400，TMS为内标。
化合物9 (伪原纤细皂苷)
化合物9的13C NMR数据分别与伪原薯蓣皂苷[3]和纤细皂苷[4]比较，结果发现化 合物9的26-C所接糖信号及苷元部分的化学位移与伪原薯蓣皂苷完全吻合，而剩余糖的信 号与纤细皂苷的糖信号完全吻合，因此初步判断化合物9为原纤细皂苷在C2(l C22脱去1 分子水的产物(即伪原纤细皂苷(II)。
在HMBC谱中，1-H-glc"“ ( S 4. 83)与苷元26-C( S c 74. 7)相关；l-H-rha" ( 8H 6.40)，l-H-glc〃 ‘ (SH 5. 10)分别与 2-C-glc' (6C 76. 8), 3-C-glc ‘ ( S c 89. 3)相关， 1-H-glc' (6h 4.95)与苷元3-C(Sc 77. 7)相关，也证实了上述推测的糖的连接位置和顺序。
综上所述，化合物9的结构鉴定为26-0- 3 -D-吡喃葡萄糖基_3 0，26- 二 醇-25 (R)化合物7 (Progenin II :3_0_[ a _L_鼠李吡喃糖(1 — 4) ]化合物6(Progenin III :3_0-[ a-L-鼠李吡喃糖(1 — 2) ]化合物5 (薯蓣皂苷dioscin)白色针状结晶。ESI-MS m/z 891 [M+Na]+， 869 [M+H] +，577 [M-rha-rha+H] +，437 [M-rha-rha-glc+Na] +，903 [M+Cl]、867 [M_H]、 721[M-rha-Hr ；1H NMR(400MHz, C5D5N) 8 1. 74 (3H, d, J = 6. 5Hz)，1. 60 (3H, d, J = 6. 2Hz) 分别显示2个鼠李糖的甲基质子信号，S6.37(lH，br，S)，5.83(lH，br，S)显示两个鼠李糖 的构型为a型，6 4. 92(lH,d,J = 6. 4Hz)显示葡萄糖的构型为3型，S 1. 11 (3H，d，CH3_21， J = 6. 8Hz)，1. 02 (3H, s, CH「19)，0. 79 (3H, s, CH3_18)，0. 66 (3H, d, CH3_27，J = 4. 9Hz)分 别显示薯蓣皂苷元的4个甲基质子信号。化合物5的13C NMR数据(见Table 4)与文献[1] 报道吻合。为薯蓣皂苷。
化合物4 (3 3，26- 二醇-(25R) A 5,20(22)- 二 烯-呋甾-26-0- 3 _D_ 吡喃葡萄糖 苷)白色粉末。ESI-MS m/z 907[M+Na]885[M+H]723[M-glc+H]577[M-glc-rha+H] 437 [M-glc-rha-glc+Na]+, 883 [M-H] “ ；1H NMR(400MHz, C5D5N) 8 1. 61 (3H, s, CH3_21)， 0. 99 (3H, d, CH3-27, J = 6. 4Hz)，0. 89 (3H, s, CH「19)，0. 70 (3H, s, CH3_18)显示甾体皂苷元 的4个甲基质子信号。6 4. 95(lH,d,J = 7. 5Hz)，4.82(lH，d，J = 6. 1Hz)表明化合物4中 的葡萄糖为0构型，6 5. 90(lH,br,s)表明化合物4中含有一个a构型的鼠李糖；化合物 4的13C NMR数据(见Table 4)，苷元部分与化合物7比较C-3由S 71. 2 — 78. 3说明除了 C-26位接糖外，C-3位也接糖，化合物4的13C NMR数据与文献[4]报道吻合。
化合物3 (26-0-0-D-吡喃葡萄糖 _3 0，26- 二 醇 _(25R) — A5’ 20(22)-3 -0-{[a-L-(25R)-吡喃鼠李糖(1 — 4) ]-3 _D_吡喃葡萄糖苷})白色粉末。ESI-MS m/z 907 [M+Na]885 [M+H]723 [M-glc+H]577 [M-glc-rha+H]+ ；1H NMR (600MHz, C5D5N)
118 1. 62 (3H, s, CH3-21)，1. 02 (3H, d, CH「27，J = 6. 5Hz)，0. 88 (3H, s, CH3_19)，0. 70 (3H, s, CH3-18)显示甾体皂苷元的4个甲基质子信号，Sl.77(3H，d，J = 6.0Hz)显示鼠李糖末端 甲基质子信号；13CNMR( 150MHz，C5D5N)数据(见Table 4)，苷元部分同化合物8，化合物3的 NMR数据与文献[5]报道吻合。
化合物2(伪原薯蓣皂苷)白色粉末。ESI-MS m/z :1053[M+Na]+, 723[M-rha-glc+H] +，577[M-rha-glc-rha+H] +，415[M-rha-glc-rha-glc+H] +，1029[M-H] 883 [M-rha-H]-JHNMR(400MHz，C5D5N) 8 1. 61 (3H, s, CH3-21) , 1. 03 (3H, s, CH3_19)， 0. 99(3H，d，CH3-27，J = 6. 8Hz)，0. 70 (3H，s，CH3_18)显示 4 个甲基质子信号，8 1. 74(3H，d， J = 7. 2Hz)，1.60(3H，d，J = 7. 7Hz)分别显示2个鼠李糖的甲基质子信号，6 6. 37(lH,br, s),5. 83 (1H, br，s)表明两个鼠李糖的构型是 a 型，6 4. 92 (1H, d，J = 6. 9Hz)，4. 81 (1H， d，J = 7. 7Hz)表明两个葡萄糖的构型是0型；化合物2的13C NMR数据(见Table 4)与 文献[5]报道吻合。
化合物1(原薯蓣皂苷)分离鉴定方法见李伯刚，周正质.中药新药与临 床 1994，13(2) :75-76。
表1.化合物2-9的13C NMR数据(溶剂C5D5N)
通过上述方法，可分离并鉴定本发明药物组合物中各化合物。
实施例5本发明药物组合物的质量控制
将9个已经结构鉴定的对照品混合进样通过HPLC分析，色谱条件色谱柱 AlltimaC184. 6X250mm，5um，梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测，漂移管温度10(TC，气体流[0094] 上述试验证明，本发明药物组合物中伪原薯蓣皂苷(I)、伪原纤细皂苷(II)、薯裁 阜苷(III)均在恒定的比例中，通过直接控制三个化合物的含量，可以达到控制本发明药
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速2. OL/min。梯度洗脱表如下
表2梯度洗脱表
色谱图见附图1。
将实施例1、2、3所得的组合物经HPLC分析，色谱图分别见附图1、2、3，用外标两点 法对数方程计算化合物I、II、III的重量百分含量，见表3。
表3化合物⑴、(II)、(III)的对甾体总皂苷的重量百分比
通过对本发明组合物20批次的跟踪测试，表明三个化合物在组合物中含量相对 稳定，故将三个化合物作为质量指标，可控性强。见表4
表4各批次本发明组合物各留体皂苷对留体总皂苷的重量百分比
物质量的目的。在不同原料、不同提取工艺中，上表中伪原薯蓣皂苷(I)与原薯蓣皂苷(IV) 可以相互转换；但是通过试验表明，相同原料，相同工艺的批次中，伪原薯蓣皂苷(I)或原 薯蓣皂苷(IV)的含量基本恒定，伪原纤细皂苷(II)或原纤细皂苷(V)的含量基本恒定，可 以将其中含量较高的一种或二者之和作为质量控制成分之一，即本发明药物组合物伪原薯 蓣皂苷(I)和/或原薯蓣皂苷(IV)、伪原纤细皂苷(II)和/或原纤细皂苷(V)、薯蓣皂苷 (III)均在恒定的比例中，通过直接控制该三类化合物的含量，可以达到控制本发明药物质 量的目的。
实施例6本发明药物组合物胶囊剂的制备
每粒胶囊的组成
总甾体皂苷(实施例2制得)100g
淀粉150g (共制成1000粒)
按上述比例取、淀粉，混勻，装胶囊。每粒装250mg，用于心脑血管疾病治疗，口服， 每日三次，每次1 2粒。二月为一疗程。
每粒含甾体皂苷以薯蓣皂苷计，不少于65. Omg。
实施例7 片剂的制备
片剂组成
总甾体皂苷(实施例2制得)100g
HPMC LV10030g
乳糖70g
硬脂酸镁lg(共制成1000片)
总甾体皂苷、HPMC、乳糖混勻，以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50°C干 燥3h，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混勻压片，每片重0.15g。用于心脑血管疾病治疗，口服， 每日三次，每次1 2片。二月为一疗程。
每片含甾体皂苷以薯蓣皂苷计，不得少于65. Omg。
实施例8注射液的制备
注射液组成总留体皂苷50g
吐温 8010ml
氯化钠8g(共制成1000ml)
总甾体皂苷，加10 % Na2C03调PH至7. 0-7. 5，冷藏滤过，加吐温-80，NaCl，加注射 用水至1000ml，G3垂熔漏斗(玻璃)滤过，分装，灌封，100°C流通蒸气灭菌30min即得。用 于心脑血管疾病治疗，皮下注射，每日二次，每次1 2ml。二月为一疗程。
每支含甾体皂苷以薯蓣皂苷计，不得少于65. Omg。
软胶囊、滴丸可按常规方法，加入常用基质制备。
以下通过药效学试验证明本发明药物组合物的有益效果。
试验例1伪原纤细皂苷(II)对大鼠急性心肌梗死的影响
使用实施例4所得伪原纤细皂苷(II)的进行了以下相关药理试验
取Wistar大鼠，180_220g/只，随机分为3组，即对照组、伪原纤细皂苷高、低剂量 组，每组12只。对照组灌胃给予蒸馏水，其余各组按表中高剂量(3mg/kg)、低剂量(1.5mg/ kg)分别灌胃给予相应药液(均以蒸馏水配制)。每天给药1次，连续给药一周。末次给药lh后，氨基甲酸乙酯(Urathan，lg/kg)腹腔麻醉大鼠，仰位固定，沿胸骨中线剪开动物皮 肤，在胸骨左缘3-5肋开口，迅速挤出心脏后，立即结扎左心冠状动脉前降支根部，将心脏 放回胸腔，关闭胸腔并缝合恢复自主呼吸。结扎3h后结束试验，心脏结扎线以下横切5片， 硝基四氮唑蓝染色，采用多媒体彩色病理图分析系统(MPIAS-500)，以固定象距测量正常心 肌及梗塞心肌面积，观察心肌梗塞程度，结果进行统计学处理(t检验)，结果见表4。
表4伪原纤细皂苷(II)对心肌缺血致心肌梗塞的影响(x士s)
注与模型组比较，*P< 0.05 **P < 0.01
表4结果显示，与模型组比较，化合物(II)高、低剂量组大鼠梗塞心肌面积、梗塞 区重量、梗塞区占心室比以及梗塞区占全心比均明显降低(分别P < 0. 01和P < 0. 05)，且 呈量效关系，说明本发明新化合物伪原纤细皂苷(II)具有明显减轻心肌梗塞程度，缩小梗 塞面积，减轻梗塞区重量，对心肌缺血有明显的保护作用。
上述药效试验说明，本发明药物组合物中的新化合物伪原纤细皂苷(II)不仅仅 是新的发现，且实验充分证明该新化合物具有药效，可单独用于制剂使用，药效明确。
试验例2本发明药物组合物治疗心绞痛，对血脂、血小板聚集功能的影响
临床共观察胸痹(心绞痛)患者1084例患者，采用随机、对照、双盲法。随机分别 给与六1、六2、六3、六4、复方丹参片或硝酸异山梨酯。
从性别、年龄、病程、合并症等几个方面，对参加服用药物的病例，进行了均衡性 (可比性)检验。检验结果表明A1、A2、A3、A4胶囊组和复方丹参片组与硝酸异山梨酯组病 人之间在性别、年龄、病程和合并症方面没有显著差异，具有可比性。
A1、A2、A3、A4、B、C六药均装入胶囊，外观一致。五组药物均口服，每次1粒，每天 3次，五药均以8周为一疗程。在服上述六种药物期间，病人停用一切对冠脉血流、血脂及血 压有影响的药物。在病情急需时，可临时加用，一旦病情好转则停药，并记录用药量。
最后揭盲A1、A2、A3为实施例1、2、3组合物按实施例6的方法制得胶囊，A4为老 工艺组合物按实施例6的方法制得胶囊，A1、A2、A3、A4每粒胶囊中总皂苷含量相同，剂量每 次200mg，每天3次；B为复方丹参片，剂量每次3片，每天3次；C为硝酸异山梨酯，剂量每 次5mg，每天3次。
接受治疗者用药前停用对冠性病有效的药物3天，进行血、尿常规，肝、肾功能，血 脂分析，静息心电图和负荷试验。疗程结束，全部复查以上各项指标。
治疗期间停用降压、降脂、扩张冠状动脉药物，仅对心绞痛发作频繁或严重心率失 常患者临时给以硝酸甘油类药物，并记录停减量。
疗效评定标准按1979年全国中西医结合防治冠心病、心绞痛心律失常研究座谈 会修订的《冠心病心绞痛及心电图疗效评定标准》进行评定。
结果见表5、表6:
16[0134]表5五组药物对心绞痛疗效的比较
经Ridit分析，A1、A2、A3组分别与B组、A1、A2、A3组分别与C组比较，均P < 0. 01。 x2分析比较Al、A2、A3组分别和B组显效率，P < 0. 05 ；Al、A2、A3组分别组和C组显效率 比较，P < 0. 01。表明实施例1、2、3的本发明组合物胶囊对心绞痛的疗效均优于复方丹参 片(B)和硝酸异山梨酯(C)。对缓解心绞痛症状总有效率为89.9%、90.5%、90.4%，疗效 确切，即证明通过控制三个成分，达到了有效、稳定的药效。
用本发明的制备方法与常规方法相比，成本降低35%以上，收率提供13%，在相 同原料用量，经258例临床观察，采用本发明药物药效提高5%以上。
对心肌缺血的疗效8周疗程，本发明药物组合物对心肌缺血疗效的比较，见表6。
表6五组药物对心肌缺血疗效的比较
经Ridit分析，Al、A2、A3组分别与硝酸异山梨酯组对心肌缺血的疗效无显著性 差异(均P > 0.05)、但六1、六2、々3组优于复方丹参片，均？< 0.01。x2分析比较Al、A2、 A3组显效率分别优于复方丹参片，P < 0. 05 ；A1、A2、A3组显效率分别与硝酸异山梨酯无显 著差异，均P > 0. 05。表明实施例1、2、3的本发明组合物胶囊对心绞痛的疗效均优于复方 丹参片(B)，与硝酸异山梨酯(C)等效。对静息心电图ST-T段总有效率为55.5%、56.0%、 54.8%，疗效确切，即证明通过控制三个成分，达到了有效、稳定的药效。本发明组合物疗效 比按老工艺提取的组合物疗效提高5%以上。
对血脂的作用治疗前有高胆固醇血症者164例，高甘油三脂血症162例，治疗后高 胆固醇患者中有78例恢复正常，高甘油三脂患者中有87例恢复正常。血胆固醇由治疗前 6. 8士 1. lmmol/L降至治疗后6. 3士 1. lmmol/L，血甘油三脂由治疗前2. 4士0. 8mmol/L降至 治疗后1. 9 士0. 7mmol/L,经t检验，差别有非常显著意义(P < 0. 01)。
对血小板聚集功能的影响该药对二磷腺苷(ADP)和肾上腺素诱导的血小板聚集 均有明显影响，ADP使聚集率有治疗前68% 士 15%降至治疗后60% 士 15%，肾上腺素使聚集率由治疗前73% 士 15%降至治疗后64% 士 12%，经经t检验，差别有非常显著意义(P < 0. 01)。
本发明药物组合物对冠心病人临床症状改善
表7本发明药物组合物胶囊治疗前后主要症状改变
不良反应本组826例在服药期间有头晕5例，胃腹部不适9例，头痛2例，面部发 热1例，均不影响治疗。治疗前后所作血、尿常规，肝、肾功能结果均在正常范围内。
通过上述制备工艺、结构测定、定量控制及药效学试验说明，本发明药物组合物中 的三种化合物伪原薯蓣皂苷(I)、伪原纤细皂苷(II)、薯蓣皂苷(III)同时进行控制，有效 的控制质量，提高药效及药物的稳定性，药物服用剂量小，使用方便。
参考文献
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权利要求
一种甾体皂苷药物组合物，其特征在于它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇甾体皂苷，通式C螺甾烷醇类甾体皂苷或皂苷元，其重量配比为呋甾烷醇甾体皂苷5～25份、螺甾烷醇类甾体皂苷1～10份，通式A通式B通式C其中，通式A中，呋甾烷醇甾体皂苷为通式B中通式C中，FC20015702200580033335201C00011.tif,FC20015702200580033335201C00012.tif,FC20015702200580033335201C00013.tif,FC20015702200580033335201C00014.tif,FC20015702200580033335201C00021.tif,FC20015702200580033335201C00022.tif,FC20015702200580033335201C00023.tif
2.根据权利要求
1所述留体皂苷药物组合物，其特征在于含有下列化合物通式A 中，当 -glc^Ck时，为伪原薯蓣皂苷⑴； _gle《时，为伪原纤细薯蓣皂苷 (II)；通式B中，当 _ 时，为原薯蓣皂苷(IV) ； -8lc<T 时，为原纤细 皂苷(V)；通式C中，,时为薯蓣皂苷(III)， 其中，伪原薯蓣皂苷(I)和/或原薯蓣皂苷(IV) 5 22份、伪原纤细薯蓣皂苷(II)和 /或原纤细皂苷(V) 1 5份、薯蓣皂苷(III) 1 8份。
3.根据权利要求
2所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于含有伪原薯蓣皂苷 (I) 5 20份、伪原纤细薯蓣皂苷(II) 1 3份、薯蓣皂苷(III) 1 5份。
4.根据权利要求
3所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于含有伪原薯蓣皂苷 (I) 12 18份、伪原纤细薯蓣皂苷(II) 1份、薯蓣皂苷(III) 1. 2 `2. 5份。
5.根据权利要求
1 4任一项所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的甾体 皂苷来源于薯蓣科薯蓣属植物黄山药Dioscorea panthaica Prain et Burkill、穿龙薯蓣 Dioscorea nipponica Makino 的提取物。
6.根据权利要求
5所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述提取物中，留体总皂 苷以薯蓣皂苷计，其含量不少于65% w/w。
7.根据权利要求
5所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的提取物中含有伪 原薯蓣皂苷(I)、伪原纤细薯蓣皂苷(II)、薯蓣皂苷(III)三种留体皂苷的含量之和不少于 甾体总皂苷的50% w/w。
8.根据权利要求
6或7所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的提取物具 有如图1所示的HPLC指纹图谱，其中，指纹图谱的特征峰分别为伪原薯蓣皂苷(I)保留 时间28. 27min ；伪原纤细薯蓣皂苷(II)保留时间29. 5min ；薯蓣皂苷(III)保留时间 57.IOmin0色谱条件色谱柱:Alltima C18 4. 6 X 250mm，5um，梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测， 漂移管温度100°C，气体流速2. OL/min。
9.根据权利要求
5所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的提取物是由如下 方法制备a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜采集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉碎 后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意比 例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的15 25倍；b、将a步骤制备的提取液冷却过滤、滤液通过吸附树脂柱、弃去流出液，用水洗至流出 液至无色，弃去水洗液；C、将b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50% 90%乙醇、30 80%含 水甲醇或60 95%含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；d、将c步骤的浓缩液加60 95%醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥，即得。
10.根据权利要求
9所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的提取物的制备方 法步骤b中当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓缩，再冷却过滤。
11.根据权利要求
1 4任一项所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于它是由所述 的甾体皂苷或黄山药、穿山龙提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分 制备而成的制剂。
12.根据权利要求
11所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的制剂是片剂、 胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。
13.根据权利要求
12所述的留体皂苷药物组合物，其特征在于所述的制剂是软胶囊。
14.一种制备权利要求
1 13任一项所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤 称取含有通式A和/或通式B的呋留烷醇留体皂苷，通式C螺留醇类留体皂苷，重量配比为呋留烷醇留体皂苷5 25份、螺留烷醇类留体皂苷1 10份；混合，加入药学上可接 受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
15.一种制备权利要求
1 13任一项所述的药物组合物的制备方法，它包括如下步骤a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜采集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉碎 后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意比 例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的15 25倍；b、将a步骤制备的提取液冷却过滤、滤液通过吸附树脂柱、弃去流出液，用水洗至流出 液至无色，弃去水洗液；C、将b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、50% 90%乙醇、30 80%含 水甲醇或60 95%含水丙酮中含水甲醇或含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓 缩；d、将c步骤的浓缩液加60 95%醇醇沉，过滤，收集滤液；e、取d步骤所述的滤液，浓缩干燥，加入药物上可接受的辅料或辅助性成分制备成药 学上常用的制剂。
16.根据权利要求
15所述的药物组合物的制备方法，其特征在于步骤b中，当提取液 含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓缩，再冷却过滤。
17.权利要求
1 13任一项所述的药物组合物在制备治疗和预防心脑血管疾病药物中 的应用。
18.权利要求
17所述的应用，其特征在于在制备治疗和预防治疗冠心病、心绞痛、心 肌梗死、心律失常、高血脂或缺血性脑血管病的药物中的应用。
专利摘要
本发明提供了一种甾体皂苷药物组合物，它含有通式A和/或通式B的呋甾烷醇甾体皂苷，通式C螺甾烷醇类甾体皂苷，其重量配比为呋甾烷醇甾体皂苷5-25份、螺甾烷醇类甾体皂苷1-10份。本发明还提供了该甾体皂苷药物组合物的制备方法和其中三种甾体皂苷成分的HPLC鉴定方法，以及其在制备预防和治疗心血管疾病的药物中的应用。
文档编号A61P9/06GKCN101035548 B发布类型授权 专利申请号CN 200580033335
公开日2010年9月29日 申请日期2005年9月29日
发明者付铁军, 刘忠荣, 及元乔, 李伯刚, 祁伟, 邹文俊, 黄瑜 申请人:成都地奥制药集团有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (1), 非专利引用 (2),