专利名称:新型吡啶衍生物的制备方法
本发明涉及由通式(1)表示的吡啶衍生物及其无毒性的盐类，
式中R1是氢原子或低级烷基，该烷基可以用羟基、低级烷基或二低级烷基氨基取代;R2是氢原子、氨基或低级烷基氨基;R3是低级烷基。
这类衍生物及其无毒性的盐类具有抗过敏作用，可用做治疗过敏性疾病，例如哮喘病、花粉过敏症、特应性皮炎等的药物。
由通式(1)表示的2，6-二(N-低级烷基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸衍生物在先有技术资料中没有公开过，所以是新的。类似于本发明这种物质的2，6-二(N-低级烷基氨基甲酰基)吡啶衍生物在日本公开特许105920/83和159465/83中作为抗癌药被公开。然而，这这些文献资料没有讲明或提出这种类型的吡啶衍生物具有抗过敏效应。
另一方面，据说免疫球蛋白E(IgE)抗体对于患有哮喘病、花粉过敏症、特应性皮炎或诸如此类过敏性疾病的患者起重要的作用，在有上述疾病的患者中经常观测到其血液中的免疫球蛋白E(IgE)的含量非常高。
本发明者研究了许多化合物，考察它们的有选择地抑制免疫球蛋白E(IgE)抗体产生的活性，发现当用免疫球蛋白E(IgE)抗体产生能力异常增加的试验动物进行试验时，本发明的化合物甚至在给药剂量低时也显示出有选择地抑制免疫球蛋白E(IgE)抗体产生的作用。此外，本发明者还发现这样一个事实，即本发明的化合物在低浓度下也有抑制化学介体从肥大细胞中释放出来的作用，这些化学介体的例子有组胺、过敏反应迟缓反应物质等等。这种释放过程是由免疫球蛋白E(IgE)抗体与相应抗原作用而引起的。因而，本发明者发现，本发明的化合物同时具有上述两种有用的作用，于是他们继续研究并最终完成了本发明。
在对通式(Ⅰ)所给出的各取代基的定义中，“低级烷基”指的是有1-4个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基等。如果该低级烷基是R1的定义之一，那么它可以在任何部位被羟基、低级烷氧基或二低级烷基氨基取代。
同样，“低级烷氧基”指的是其烷基部分和上述低级烷基的定义相同的烷氧基。
术语“低级烷基氨基”包括单和二烷基氨基。
如上所述，用通式(Ⅰ)表示的化合物是新的，并且可按如下方案，由通式(Ⅱ)的化合物与低级烷基胺反应，再用一般的方法有选择地水解化合物(Ⅰa)的4位酯基而制备
式中R′1和R1相同，但是不包括氢原子，R′2和R2相同或是卤原子，而R2和R3和上文定义的一样。必要时，可将化合物(Ⅰb)的4位羧基酯化而引入不同的烷基。
在象四氢呋喃、二氧六环、乙腈或乙醇之类的溶剂中，在0-50℃的温度下，每摩尔化合物(Ⅱ)同2-20摩尔的用通式R3NH2表示的伯胺进行反应，生成上述酰胺。此外，还可以用一般的方法通过水解通式(Ⅰb)的化合物制备本发明的化合物。
如果想制备R2是低级烷基氨基的通式(Ⅰ)的化合物，则可以使通式(Ⅲ)的化合物与低级烷基胺反应而将化合物(Ⅲ)酰胺化，同时将3位氯原子转换成低级烷基氨基，
式中R′1和上文定义的相同。
本发明用下列实施例和实验进一步说明。
实验1对被动皮肤过敏反应(PCA)的抑制作用用I.Mota的方法[“Immunology”7.681-699(1964)]制取抗卵清蛋白的大鼠抗血清并稀释400倍。将稀释的抗血清(0.1毫升)注射到大鼠(SD/JCL品系、雄性、9周龄)背侧的皮下，使它们受到被动免疫。
48至72小时之后，给每只大鼠口服悬浮在1%阿拉伯胶水溶液中的本发明的化合物。给药后五分钟，在每只大鼠的尾部用1毫升含有等体积的0.5%卵清蛋白的盐水溶液和0.5%伊凡斯蓝(Evans Blue)的盐水溶液的混合液作静脉注射。30分钟后，将每只大鼠处死并用片山国嘉(Katayama)等人的方法定量测定外渗的染剂[“Microbiol.Immunol”22，89-101(1978)]。
通过比较试验组与对照组中渗出的伊凡斯蓝的量计算抑制百分率。在对照组中对试验动物给药的阿拉伯胶水溶液中不含试验化合物。
结果如表1所示。在表1中，30-50%、51-70%、71-90%和91%或更高的抑制率分别用等级+、++、+++和++++来表示。试验化合物的序号与实施例号相对应。
表1化合物序号 剂量(毫克/公斤) 抑制百分率1 5 ++++2 50 +4 10 ++
表1(续)7 10 ++8 10 ++10 10 +++11 10 ++++实验2对免疫球蛋白E(IgE)抗体的抑制作用SJL/J品系小鼠(8周龄)用400伦琴的X射线注射并同时腹膜内注射1微克钥孔
血蓝素(KLH)与4毫升氢氧化铝凝胶的混合物。一周后，用1微克二硝基苯基接合KLH(DNP-KLH)与4毫克氢氧化铝凝胶混合物对小鼠进行腹膜内给药。从用DNP-KLH免疫的第二天起，每只小鼠被强制通过胃导管口服悬浮在1%阿拉伯胶水溶液中的试验化合物，对照组中的小鼠只服用阿拉伯胶溶液。
抽取按上述处理过的每只小鼠的血清，采用类似于实验1所述的“大鼠48小时PCA试验”测定其中免疫球蛋白E(IgE)的量。免疫球蛋白E(IgE)的量用能观察到直径5毫米或更大些的皮肤反应斑出现的最大血清稀释量来表示。
抑制百分率可以表示为试验组的免疫蛋白E(IgE)的量与对照组的相应量之比。
结果列于下面的表2中。在表2中，25-50%、50-75%和75%或更高的抑制效率分别用等级++、+++和++++来表示。试验化合物的序号相应于实施例号。
表2化合物序号 剂量(毫克/公斤) 抑制百分率1 5 ++++2 50 ++++5 5 +++8 5 +++10 10 ++++11 5 ++++实施例1将11克40%的甲胺水溶液慢慢加到16.8克吡啶-2，4，6-三羧酸三乙酯与140毫升四氢呋喃的混合物中，再搅拌混合物过夜。添加醋酸(9克)之后，减压蒸发反应混合物，然后将水加入剩余物中，接着用氯仿提取。分离出有机层并将其蒸干，残余物用硅胶柱色谱法纯化。产物用氯仿和己烷混合液重结晶，得到8.9克2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸乙酯，熔点183-184℃。
核磁共振谱(CDCl3)δ8.86(2H，s)、8.40(2H，d)、4.42(2H，q)、2.98(6H，d)、1.40(3H，t)实施例2将甲醇(20毫升)加到4.5克按实施例1制备的2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸乙酯中，将0.9克氢氧化钠在20毫升水中的溶液加入混合液中，同时进行搅拌。将该混合液加热到50-60℃，添加250毫升水后，经过滤除去少量不溶物。
将稀盐酸加入滤液中调整其PH值到5，加热到90-100℃后，再慢慢补加稀盐酸使其PH值降至2-3。让混合液冷却，经过滤回收固体，水洗，得到3.5克2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸，熔点＜300℃。
核磁共振谱(DMSO-d6)δ9.34(2H，d)、8.57(2H，s)、2.97(6H，d)实施例32，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸(1克)与甲醇(50毫升)混合，将亚硫酰氯(2毫升)加到混合液中。加完亚硫酰氯后，在室温下搅拌混合液过夜。然后减压蒸发混合液，将水加入残余物中，再用氯仿提取。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤并蒸干。残留的晶体用甲苯重结晶，得到0.4克2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸甲酯，熔点202-203℃。
核磁共振谱(CDCl3)δ8.81(2H，s)、8.18(2H，d)3.93(3H，s)、2.98(6H，d)实施例4-7用类似于实施例1中所述的方法，制备列于表3中的各个化合物。
表3
实施例号 R1熔点(℃) 重结晶介质核磁共振谱(δ)4 正丙基 180-181 氯仿/己烷 8.81(2H，s)、8.35(2H，d)、4.30(2H，t)、2.98(6H，d)、1.5-2.1(4H，m)、1.00(3H，t)5 异丙基 183-184 甲苯 8.82(2H，s)、8.08(2H，d)5.28(1H，七重谱线)3.02(6H，d)、1.35(6H，d)6 异丁基 230-232 氯仿/己烷 8.80(2H，s)、8.15(2H，d)、4.12(2H，d)、2.96(6H，d)、1.7-2.5(1H，m)、1.00(6H，d)7 2-甲氧基 9.30(2H，d)、8.47(2H，s)、-乙基 194-195 氯仿/己烷 4.48(2H，m)、3.70(2H，m)、3.32(3H，s)、2.90(6H，d)实施例8将实施例2中制备的2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸(2.3克)与50毫升四氢呋喃和3.1克乙二醇相混合。加入2.5克二环己基碳二亚胺后，在室温下搅拌混合液过夜，然后蒸发混合液，残余物用硅胶柱色谱法提纯，并用二甲基甲酰胺/苯重结晶，得到0.3克2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸2-羟乙酯，熔点214-215℃。
核磁共振谱(DMSO-d6)δ9.32(2H，d)、8.48(2H，s)、4.98(1H，t)、4.37(2H，m)、3.77(2H，m)、2.90(6H，d)实施例9将吡啶-2，4，6-三羧酸三乙酯用做起始化合物，按实施例1和2中所述的方法使其与乙胺反应，然后与氢氧化钠水溶液反应，得到2，6-二(N-乙基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸。得率39%，熔点278-280℃(用四氢呋喃/苯重结晶)实施例10将总量为30克的40%甲胺水溶液在室温下分三次每隔一天加到7.5克3-氨基吡啶-2，4，6-三羧酸三乙酯在100毫升四氢呋喃和100毫升乙醇的溶液中。开始反应后四天，将醋酸(25克)加到反应混合液中，再在减压条件下将其蒸发。把水加到剩余物中并用氯仿提取。有机层用硫酸钠干燥并将其蒸干。剩余物用硅胶柱色谱法提纯，并在甲苯中重结晶，得到3.5克3-氨基-2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸乙酯，熔点185-186℃。
核磁共振谱(CDCl3)δ7.8-9.2(5H)4.34(2H，q)、2.92(6H，dd)、1.33(3H，t)实施例11按实施例10的方法使3-氯吡啶-2，4，6-三羧酸三乙酯同甲胺反应，得到3-甲氨基-2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸乙酯。得率51%，熔点169-170℃(在甲苯中重结晶)。
核磁共振谱(CDCl3)δ9.59(2H，d)、8.60(2H，d)、8.1-8.5(2H)、4.32(2H，q)2.7-3.1(9H，m)、1.33(3H，t)
实施例12将二甲氨基乙基氯(1.2克)加到2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸(2.37克)与异丙醇(30毫升)的混合液中，再在搅拌下回流2天。让混合液冷却之后，过滤收集产生的结晶，并在甲醇/本中重结晶，得到0.5克2，6-二(N-甲基氨基甲酰基)吡啶-4-羧酸2-二甲氨基乙酯盐酸盐，熔点240-242℃(分解)。
核磁共振谱(DMSO-d6)δ9.66(2H，d)、8.64(2H，s)、4.78(2H，m)、3.60(2H，m)、2.90(12H)文件名称 页 行 补正前 补正后说明书 1 倒14 低级烷基 低级烷氧基权利要求
书 1 式(Ⅰ)下第 低级烷基 低级烷氧基1行摘要 1 2 低级烷基 低级烷氧基
权利要求
1.制备通式(Ⅰ)的化合物及其无毒盐的方法，
式中R1是氢原子或低级烷基，该烷基可以被羟基、低级烷基或二低级烷基氨基取代，R2是氢原子、氨基或低级烷基氨基，R3是低级烷基，该方法包括，使通式(Ⅱ)的化合物与通式R3NH2-其中R和上面定义的相同-的低级烷基胺反应，得到通式(Ia)的化合物，
式(Ⅱ)中R′1除不是氢原子外，和R1相同，R′2和R2相同或是卤原子，
式Ia中R′1、R2和R3和上面定义的相同，将化合物(Ia)的4位酯基有选择地水解成羧基，当引入不同的烷基时，有选择地酯化4位羧基。
2.根据权利要求
1的方法，其中所说的第一个反应在0到50℃的温度下，在惰性有机溶剂中进行。
3.根据权利要求
1或2的方法，其中对于每摩尔化合物(Ⅱ)，所用的低级烷基胺的量在2到20摩尔的范围内。
专利摘要
本发明涉及如上通式(I)的化合物及其无毒性的盐和它们的制备方法，式中R这种化合物及其盐通过两种不同的机理表现出抗过敏效应，并可期望用做治疗象哮喘病、花粉过敏症、特应性皮炎等过敏性疾病的药物。
文档编号C07D213/81GK86103501SQ86103501
公开日1987年1月21日 申请日期1986年5月23日
发明者森陆司, 大井信广, 大杉义征, 山下泰弘 申请人:中外制药株式会社导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan