专利名称：人血小板糖蛋白Ib/Ix的米摩托培和抗米摩托培的制作方法
本申请是1995年3月17日递交的美国申请序列号No.08/406,330的部分再续申请，所述申请的内容引入本文作为参考。
本发明涉及功能上能够模仿单克隆的结合位点的肽(即，米摩托培mimotope)，该单克隆抗体识别人血小板糖蛋白的Ib/IX复合物内的表位，和涉及能够结合该肽的分离的分子(即，抗米摩托培mimotope)。
在本申请中，参考引用了多种出版物，许多这类出版物被置于圆括号中。在“详细描述”的下面，提供了这些出版物的完整资料。在本申请中，完整地引入这些出版物作为参考文献。
目前人们确信威勒布兰特病因子(vWf)的血小板糖蛋白Ib/IX(GPIb/IX)受体由GPIb(160kDa)和GPIX(17kDa)以非共价键结合形成的1∶1杂二聚体复合物组成(Du等人，1987)。依次，GPIb由二硫键连接的140kDaα链(GPIbα)和22kDaβ链(GPIbβ)组成(Fitzgerald和Phillips 1989)。
GPIb/IX复合物包括一个主要的介导依赖威勒布兰特病因子(vWF)的血小板粘连的血液血小板上的跨膜受体复合物(Roth 1991；Lopez1994；Clemetson和Clemetson 1995)。命名为血小板型威勒布兰特病疾病(PT-vWD)的人常染色体显性性状出血紊乱代表了天然存在的上调的GPIb/IX受体的模型(Miller和Castella 1982；Miller等人，1983)。在这一功能紊乱情况中，不正常的低浓度的化学调节剂瑞斯托菌素能够促进vWF与GPIb/IX的相互作用。另外，将来自这类病人的血小板以低于正常血小板所需的剪应力聚集(Murata等人，1993)。已发现一个亲缘族的PT-vWD病人具有单个点突变，导致在GPIb的α链的残基233处缬氨酸替代了甘氨酸(Miller等人，1991)。在另外两个显示PT-vWD表现型的亲缘族(Weiss等人，1982；Takahashi等人，1980)中已经描述了在非常接近残基239附近的第二个点突变(缬氨酸替代甲硫氨酸)(Russell和Roth 1993；Takahashi等人，1995)。
在1980年，Miller等人开发了一系列抗vWf的GPIb/IX复合物受体的单克隆抗体(mab)。具体地说，详细地鉴定了单克隆抗体C-34并确定了mab C-34识别了血小板糖蛋白Ib/IX复合物内的表位(Miller等人1990)。在这些和随后的工作中，Miller等人证明单克隆抗体C-34，AS-2和AS-7是依赖于威勒布兰特病因子的瑞斯托菌素诱导的正常血小板聚集的潜在的抑制剂。Miller等还证明了所有三个单克隆抗体的表位位于GPIb/IX复合物内。Miller等人能够将AS-2和AS-7的单克隆结合位点定位于45kDa的GPIbα的氨基末端45kDa。最近有人将C-34的表位定位于在中国仓鼠卵巢细胞的表面上表达的GPIbα链的细胞外部分(Chambers等人，1995)。C-34在Western影印中不能与变性的GPIbα结合(Ward和Berndt 1995；Clemetson Hugli 1995)，或在各种实验条件下不能免疫沉淀从血小板中移去的GPIbα的细胞外区域(Miller等人1990)，这强烈地表明了C-34识别的该表位是高度依赖于构型的。但是，最近Ward和Berndt已经报道了在用胰蛋白酶消化纯化的分子后用125I标记的glycocalicin的1·His-Arg·293氨基末端片段的C-34成功的免疫沉淀(Ward和Berndt1995)。
确定各种单克隆抗体的结合位点的尝试已经导致研制了表位文库。Parmley和Smith开发了在表面能够呈现外源表位的噬菌体表达载体(Parmley和Smith1988)。这一载体可以用于构建实质上包括短(如六个氨基酸)肽的所有可能序列的噬菌体的大的集合。他们也开发了生物淘选，这是利用特异的抗体呈现外源表位的亲和纯化噬菌体的方法(参见Parmley和Smith1988；Cwirla等1990；Scott和Smith1990；Christian等人1992；Smith和Scott1993)。
在开发了表位文库后，Smith等人指出利用噬菌体表达载体和Parmley和Smith的生物淘选技术鉴定来自给定长度的所有可能序列的表位是可能的。这产生了通过生物淘选表位文库鉴定抗体的肽配体的想法，然后可用于疫苗设计，并测定表位图谱，鉴定基因，和许多其它应用(Parmley和Smith1988；Scott1992)。
利用表位文库和生物淘选，研究表位序列的研究人员发现模仿该表位的替代序列，即没有鉴定为连续的线性天然序列或必须完全存在于天然蛋白质序列中的序列。将这些模仿的肽称为mimotopes。通过这种方式已经发现了各种结合位点/蛋白质的mimotopes。LaRocca等人(1992)在大肠杆菌中表达了人乳房上皮粘蛋白串联重复的mimotope。Balass等人(1993)鉴定了模仿乙酰胆碱受体的依赖于构型的结合位点的六肽。Hobart等(1993)分离了模仿C6表位的mimotope(补体的第六个成分的表位)。
通过定义，这些mimotopes的序列，没有鉴定为连续的线性天然序列或必须以任何方式存在于天然存在的分子中，即天然存在蛋白质。该mimotope的序列只形成功能上模仿天然存在的蛋白质上的结合位点的肽。例如，Balass等(1993)的mimotope模仿乙酰胆碱受体的结合位点。
许多这些mimotope是短肽。能够容易地大量合成并能模仿天然存在的序列(即，结合位点)的短肽的可获得性提供了巨大的应用潜力。
所以有必要对有用的mimotope进行阐明。
本发明的mimotopes满足了这一需要。所以，本发明提供了功能上模仿单克隆抗体的结合位点的分离的肽，该单克隆抗体识别人血小板糖蛋白Ib/IX复合物内的表位。该分离的肽是mimotope。如果单克隆抗体能结合该肽，那么该肽在功能上模仿了该单克隆抗体的结合位点。
本发明进一步提供了能够结合该肽的分离的分子，该分子例如可以是抗体，第二个肽，碳水化合物，DNA分子，RNA分子，或任何化学合成分子。该分离分子是抗mimotope。结合受体的抗mimotope可以用于介导那个受体的功能活性。
所以本发明也提供了调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法，它们中的每一种都依赖于威勒布兰特病因子通过糖蛋白Ib/IX复合物受体与血小板的相互作用。这些方法使血小板与分子(抗mimotope)接触，以调节血小板的粘连，聚集，或凝集。
本发明进一步提供能够与单克隆抗体C-34结合的分离的肽，以及能够与这样的肽结合的分离的分子。同时提供的是通过使血小板与分子(抗mimotope)接触调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法。
在优选的实施方案中，能够与单克隆抗体C-34结合的分离的肽包括对应于SEQ ID NO38WNWRYREYV的氨基酸序列。
本发明还进一步提供了能够与单克隆抗体SZ-2结合的分离的肽，以及能够与这样的肽结合的分离的分子。同时提供的是通过使血小板与分子(抗mimotope)接触调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法。
结合附图从下面的详细说明的优选的实施方案可以清楚地了解本发明的这些和其它特征和优点，其中附
图1说明了存在威勒布兰特病因子时瑞斯托菌素诱导的血小板的完全聚集；附图2说明了由20μg/ml的单克隆抗体C-34对瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集的抑制作用；附图3说明了在0.14μM的具有SEQ ID NO1AWNWRYREYV的合成肽的mimotope存在下由20μg/ml的mab C-34连续地抑制瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集；附图4说明了在0.27μM的具有SEQ ID NO1AWNWRYREYV的合成肽的mimotope存在下，20μg/ml的mabC-34对瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集的抑制的部分中和；附图5说明了在0.55μM具有SEQ ID NO1AWNWRYREYV的合成肽的mimotope存在下，20μg/ml的mab C-34对瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集的抑制的部分中和；附图6说明了在1.1μM的具有SEQ ID NO1AWNWRYREYV的合成的肽mimotope存在下，20μg/ml的mab C34对托菌素诱导的血小板的聚集的抑制的部分中和；附图7说明了在2.3μM的具有SEQ ID NO1AWNWRYREYV的合成的肽mimotope存在下，20μg/ml的mab C-34对瑞斯托菌素诱导的血小板聚集的抑制的完全中和；附图8说明了功能上筛选候选的抗mimotope噬菌体克隆。在22℃，用250μl的柠檬酸PRP温育150μl指明的噬菌体克隆1小时后，通过在37℃搅拌条件下，加入0.8mg/ml的瑞斯托菌素开始聚集；附图9-11说明了合成肽对瑞斯托菌素诱导的甲醛固定的血小板的聚集的影响；和附图12a-12c是用于探测血小板糖蛋白Ibα的结构关系的mimotopes和抗mimotope的图示轮廓。
本发明通过了功能上模仿单克隆抗体的结合位点的分离的肽，该单克隆抗体识别人糖蛋白Ib/IX复合物内的表位。将这一肽称为mimotope。
在一个优选的实施方案中，将单克隆抗体命名为C-34，并且该肽包括选自包括下列序列的组的氨基酸序列SEQ ID NO1 AWNWRYREYVSEQ ID NO2 KWNWRNKYVSEQ ID NO3 LSTWRYFEYVSEQ ID NO4 YLGWRYSEYVSEQ ID NO5 TQMWRAREYLSEQ ID NO6 WRQREYWDPVSEQ ID NO7 EGSWRYRKGGSEQ ID NO8 GYHWWRNWEYSEQ ID NO9 KGFLWRARNWSEQ ID NO10MNWKHWRARHSEQ ID NO11FKWREWRGKLSEQ ID NO12PDRQVRLWVRSEQ ID NO13RVLRHWHPRTSEQ ID NO14GRRVWMLNHGSEQ ID NO15KKGRHHVTRVSEQ ID NO16GGVCKCWQCLSEQ ID NO17FSHSYGSAIRSEQ ID NO18MHGHRRPGLASEQ ID NO19MSKKPHLGLRSEQ ID NO20TMWVELYSLKSEQ ID NO21FVDPGRAGRGSEQ ID NO23FRCCVFSCCLLSSEQ ID NO24GFRCLVSLGGCF
SEQ ID NO25YSLWGLPVGDVVSEQ ID NO26LPLLWFNGAGFFSEQ ID NO27VWGLFRGLENGSSEQ ID NO28SLWRQWRGLFVVSEQ ID NO29TLSLFGGRDKGFSEQ ID NO30IGPAVSCLFRVCSEQ ID NO31MSLFPLSFCRLISEQ ID NO32ALFSSVWGDVTLSEQ ID NO33GWFGPFWVRGSGSEQ ID NO34FWVSVGGVEGVVSEQ ID NO35LGAFGGAGFLWRSEQ ID NO36CRGIVFLFVGWLSEQ ID NO37FWLVKGAGAWRFSEQ ID NO39QVRLWARAGAGQSEQ ID NO40GLAVTFGSVLEGSEQ ID NO41VRWMCVIRLGVRSEQ ID NO42RLWGPGVSRPVLSEQ ID NO43CGSSLFRGPRCPSEQ ID NO44LGISSLSFLQLRSEQ ID NO45TWGWDGVSYLFLSEQ ID NO46TRSLFDDFVSLRSEQ ID NO47CYASLFRSRLCASEQ ID NO48DGSVRVVWVRLLSEQ ID NO49LSGFPVALVRFASEQ ID NO50LGGGLLVGSVFPSEQ ID NO51VWARGVFRDRFFSEQ ID NO52TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO53WLGGIFSCLVCG
SEQ ID NO54WFLRDVGCGSCLSEQ ID NO55SRCGVFTWCSRSSEQ ID NO56RCLVGYRCWGGVSEQ ID NO57GFRCLVMGGGCASEQ ID NOS8CGFDLVCARLFGSEQ ID NO59DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO60ILDGCFFLGRCPSEQ ID NO61CVRWLVSAGCSGSEQ ID NO62CVGCWLVCDVLLSEQ ID NO63CLFVFAAGFACGSEQ ID NO64SCALFGSCFGISSEQ ID NO65CWGGVGVCGLLVSEQ ID NO66KRAWWKQKWVSEQ ID NO67CVGGVASRCGVLSEQ ID NO68SGAVLAGPFGVWSEQ ID NO69CRAFDRVGVCVWSEQ ID NO70RCLVGYVVGGVWSEQ ID NO71VCLVYRSVDCWASEQ ID NO72WRVFCFTCVVWASEQ ID NO73LWREWRGLFAVLSEQ ID NO74SGAVLAGPLWRLSEQ ID NO75FVVRGGTFLFVRSEQ ID NO77TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO78DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO79CAWHRLSFCGLVSEQ ID NO80CFGSALVLAVLA andSEQ ID NO81WFWDMSGEWGGL更具体地说，该肽包括对应于共有序列SEQ ID NO38WNWRYREYV的氨基酸序列。
SEQ ID NOs1到21，23-37，39-75和77-81代表的这些肽中的每一个都模仿了mab C-34的GPIb/IX内的结合位点。所以，Mab C-34与其中的每一个肽结合。但是，其中每一个肽的序列不能识别连续的线性天然序列或必须完全存在于GPIb/IX的复合物的任何链的序列内(即，GPIbα，GPIbβ，GPIX)，所以该肽模仿了mab C-34结合位点，因而为mimotope。本发明的肽也包括上面例举的肽的片段，它们保留了功能上模仿单克隆抗体如C-34的结合位点的能力。具有对应于SEQ IDNO38的氨基酸序列的肽是这样的片段的例子，该片段是包括对应于SEQ ID NO1的氨基酸序列的肽片段。
在另一个实施方案中，将单克隆抗体命名为SZ-2，该肽包括选自包括下面序列组中的氨基酸序列的肽SEQ ID NO83 WHWRSSWKSGSEQ ID NO84 HRPLSWKGRASEQ ID NO85 WHRRPMSWYSSEQ ID NO86 ARIKIWKPRWSEQ ID NO87 KRGWHWKSLHSEQ ID NO88 KKSWWVRMPRSEQ ID NO89 AKSWRYWRMPSEQ ID NO90 KRWKVYHRWPSEQ ID NO91 LHRWKQSPRTSEQ ID NO92 LIRWKPHGWRSEQ ID NO93 QKKFFSRWKHSEQ ID NO76 KWWVPRHRVWSEQ ID NO82 RSKWWVHRHSSEQ ID NO109RWWHWVHRETSEQ ID NO110KRWLWWANPRSEQ ID NO111RHLWWGGRMKSEQ ID NO112RLWPQHRGHR
SEQ ID NO113KRWHIRPTIRSEQ ID NO114KRFKTHVHGRSEQ ID NO115TKRFKHRHFLSEQ ID NO116AKWHWHTRGRSEQ ID NO117WHRHWGGFRISEQ ID NO118WHRNKPTWHSSEQ ID NO119WHRAGVRAKVSEQ ID NO120FKRFWHTGHRSEQ ID NO121MMAWHARVARSEQ ID NO122WIWHRPIKVKSEQ ID NO123WHRTLPKRGHSEQ ID NO124VKHFRWRPVASEQ ID NO125KRHWRFQLSNSEQ ID NO126KRHRLASMAPSEQ ID NO127WRWRWRGVLRSEQ ID NO128RLHAHHARHRSEQ ID NO129RWGAKHRVRVSEQ ID NO130AMGWRPVKHRSEQ ID NO131KWRWRMHQHYSEQ ID NO132WLSKLGHRHASEQ ID NO133KHCSIHTRLRSEQ ID NO134GSAERMSEGHSEQ ID NO135FPLWNVLTMTSEQ ID NO136SFAGVGWFALLGSEQ ID NO137CDLWVCFLDGGGSEQ ID NO138LVARFPPPYGGVSEQ ID NO139SIVWLTRPKGSEQ ID NO140CRYRALNGVLSEQ ID NO141ALTSRTWARQSEQ ID NO142TRYMLSRQSN
SEQ ID NO143AMREARITVKSEQ ID NO144WRRHVPLRILSEQ ID NO145FHRWNRPMVTSEQ ID NO146HRYKKTPVPMSEQ ID NO147WLHVKRRPVVSEQ ID NO148WVRHKHPIVPSEQ ID NO149LSMRRRQFQSSEQ ID NO150FHWRDKWRTGSEQ ID NO151RMRRPGITVKSEQ ID NO152GHRWNRPMVTSEQ ID NO153WHRHTPKRIPSEQ ID NO154WHWQRSRPALSEQ ID NO155KRTWWHYIRP andSEQ ID NO156KRWRHSLPAS.
SEQ ID NOS83-93，76，82和109-156代表的各个肽模仿了mab SZ-2的GPIb/IX内的结合位点。所以mab SZ-2与称为mimotope的其中的各个肽结合。本发明的肽也包括上面例举的肽的片段，这些片段保留了功能上模仿单克隆抗体SZ-2的结合位点的能力。
根据本发明，单克隆抗体(它的结合位点被本发明的肽，即C-34或SZ-2模仿)识别人的糖蛋白Ib/IX复合物内的表位。
本发明也提供了能够与该肽结合的分离分子。将该分离分子称为抗mimotope。该抗mimotope分子可以是任何适当的分子如，抗体，第二个肽，碳水化合物，DNA分子，RNA分子，或化学合成分子。能够与mimotope结合的这些肽，蛋白质或其它生物学，合成，或半合成分子，可以通过下述的方法来鉴定，即制备抗mimotope的抗体；从能产生一组或亚组具有高mimotope序列亲和性的分子的噬菌体，化合物，杂交瘤细胞，或其它类型的文库，细胞，或化学合成物中筛选；或利用计算机辅助或其它理论途径设计具有高mimotope序列亲和性的分子可以鉴定。利用能够与肽的mimotope(参见Joyce1994)结合的核酸的体外演变也可以研制适当的抗mimotope。
在一个实施方案中，本发明的抗mimotope构成包括选自下列组的氨基酸的肽SEQ ID NO94 RHVAWWRQGVSEQ ID NO95 AKHRWWRRPVSEQ ID NO96 KHFMRHRHGVSEQ ID NO97 AGLNHWWKHKSEQ ID NO98 RRSTWHWWHASEQ ID NO99 VAKWRHWNRQSEQ ID NO157AYGVRHLGLSSEQ ID NO158KKWGQHRQRSSEQ ID NO159WRWMHWMPHASEQ ID NO160WHWLARHRTVSEQ ID NO161RHRHRGFQPRSEQ ID NO162RGWRWHKYWQSEQ ID NO163KRHAWMKSRLSEQ ID NO164LLLVGGSELTSEQ ID NO165KKVWMFSYNESEQ ID NO166LSCRGCRAFVSEQ ID NO167HEGCEAQDELSEQ ID NO168SVRHIWFHVK
SEQ ID NO169GTWDLWRKGSSEQ ID NO170RWLWPRVHKTSEQ ID NO171HSPFRHVQPR andSEQ ID NO172WVRGHHREVR.
产生这些特定的抗mimotope肽，其抗模仿单克隆抗体C-34的结合位点的mimotope。
这些抗mimotopes可以作为抗血栓形成的药物。例如，mab C-34与GPIb/IX的结合抑制了瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集。mimotope肽模仿的GPIb/IX的结合位点，抗mimotope分子与mimotope肽结合。所以，可以是肽的抗mimotopes本身应该补充mimotope肽。如此，抗mimotopes应该能够与血小板糖蛋白Ib/IX复合物内的mab C-34或mabSZ-2的原始表位结合，从而如mab C-34或mab SZ-2那样诱导同样的效应，即，抑制由威勒布兰特病因子的瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集。
所以本发明提供了调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法，该方法包括选择血小板和将血小板与本发明的抗mimotope分子接触。这样的接触导致了威勒布兰特病因子通过糖蛋白Ib/IX受体与血小板相互作用，从而调节血小板的粘连，聚集，或凝集。
本发明也提供了能够与单克隆抗体C-34结合的分离的肽，该肽包括选自下列组的氨基酸序列
SEQ ID NO1 AWNWRYREYVSEQ ID NO2 KWNWRNKKYVSEQ ID NO3 LSTWRYFEYVSEQ ID NO4 YLGWRYSEYVSEQ ID NO5 TQMWRAREYLSEQ ID NO6 WRQREYWDPVSEQ ID NO7 EGSWRYRKGGSEQ ID NO8 GYHWWRNWEYSEQ ID NO9 KGFLWRARNWSEQ ID NO10MNWKHWRARHSEQ ID NO11FKWREWRGKLSEQ ID NO12PDRQVRLWVRSEQ ID NO13RVLRHWHPRTSEQ ID NO14GRRVWMLNHGSEQ ID NO15KKGRHHVTRVSEQ ID NO16GGVCKCWQCLSEQ ID NO17FSHSYGSAIRSEQ ID NO18MHGHRRPGLASEQ ID NO19MSKKPHLGLRSEQ ID NO20TMWVELYSLKSEQ ID NO21FVDPGRAGRGSEQ ID NO23FRCCVFSCCLLSSEQ ID NO24GFRCLVSLGGCFSEQ ID NO25YSLWGLPVGDVVSEQ ID NO26LPLLWFNGAGFFSEQ ID NO27VWGLFRGLENGSSEQ ID NO28SLWRQWRGLFVVSEQ ID NO29TLSLFGGRDKGFSEQ ID NO30IGPAVSCLFRVCSEQ ID NO31MSLFPLSFCRLISEQ ID NO32ALFSSVWGDVTLSEQ ID NO33GWFGPFWVRGSGSEQ ID NO34FWVSVGGVEGVVSEQ ID NO35LGAFGGAGFLWRSEQ ID NO36CRGIVFLFVGWLSEQ ID NO37FWLVKGAGAWRF
SEQ ID NO39QVRLWARAGAGQSEQ ID NO40GLAVTFGSVLEGSEQ ID NO41VRWMCVIRLGVRSEQ ID NO42RLWGPGVSRPVLSEQ ID NO43CGSSLFRGPRCPSEQ ID NO44LGISSLSFLQLRSEQ ID NO45TWGWDGVSYLFLSEQ ID NO46TRSLFDDFVSLRSEQ ID NO47CYASLFRSRLCASEQ ID NO48DGSVRVVWVRLLSEQ ID NO49LSGFPVALVRFASEQ ID NO50LGGGLLVGSVFPSEQ ID NO51VWARGVFRDRFFSEQ ID NO52TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO53WLGGIFSCLVCGSEQ ID NO54WFLRDVGCGSCLSEQ ID NO55SRCGVFTWCSRSSEQ ID NO56RCLVGYRCWGGVSEQ ID NO57GFRCLVMGGGCASEQ ID NO58CGFDLVCARLFGSEQ ID NOS9DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO60ILDGCFFLGRCPSEQ ID NO61CVRWLVSAGCSGSEQ ID NO62CVGCWLVCDVLLSEQ ID NO63CLFVFAAGFACGSEQ ID NO64SCALFGSCFGISSEQ ID NO65CWGGVGVCGLLVSEQ ID NO66KRAWWKQKWVSEQ ID NO67CVGGVASRCGVLSEQ ID NO68SGAVLAGPFGVWSEQ ID NO69CRAFDRVGVCVWSEQ ID NO70RCLVGYVVGGVWSEQ ID NO71VCLVYRSVDCWA
SEQ ID NO72WRVFVFTCVVWASEQ ID NO73LWREWRGLFAVLSEQ ID NO74SGAVLAGPLWRLSEQ ID NO75FVVRGGTFLFVRSEQ ID NO77TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO78DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO79CAWHRLSFCGLVSEQ ID NO80CFGSALVLAVLASEQ ID NO81WFWDMSGEWGGL.
本发明进一步提供的是任何上面的肽的片段，其中该片段保留与单克隆抗体C-34结合的能力。SEQ ID NO38代表了这样的片段，它是SEQ ID NO1的一个片段。
本发明也提供了与上面的肽也称作为抗mimotope，任凭结合的分离的分子，适当的分子包括抗体，另一个肽，DNA或RNA分子，碳水化合物，或化学合成分子。
如上所述，所以本发明提供了调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法，该方法包括选择血小板和将血小板与抗mimotope分子接触。这样的接触导致威勒布兰特病因子通过糖蛋白Ib/IX受体与血小板相互作用，从而调节血小板的粘连，聚集，或凝集。
在一个优选的实施方案中，本发明提供能够与单克隆抗体C-34结合并包括对应于SEQ ID NO38WNWRYREYV的氨基酸序列的分离的肽。
本发明进一步提供了能够与单克隆抗体SZ-2结合的分离的肽，该肽包括选自由下面的序列组成的组的氨基酸SEQ ID NO83WHWRSSWKSGSEQ ID NO84HRPLSWKGRASEQ ID NO85WHRRPMSWYSSEQ ID NO86ARIKIWKPRWSEQ ID NO87KRGWHWKSLHSEQ ID NO88KKSWWVRMPR
SEQ ID NO89 AKSWRYWRMPSEQ ID NO90 KRWKVYHRWPSEQ ID NO91 LHRWKQSPRTSEQ ID NO92 LIRWKPHGWRSEQ ID NO93 QKKFFSRWKHSEQ ID NO76 KWWVPRHRVWSEQ ID NO82 RSKWWVHRHSSEQ ID NO109RWWHWVHRETSEQ ID NO110KRWLWWANPRSEQ ID NO111RHLWWGGRMKSEQ ID NO112RLWPQHRGHRSEQ ID NO113KRWHIRPTIRSEQ ID NO114KRFKTHVHGRSEQ ID NO115TKRFKHRHFLSEQ ID NO116AKWHWHTRGRSEQ ID NO117WHRHWGGFRISEQ ID NO118WHRNKPTWHSSEQ ID NO119WHRAGVRAKVSEQ ID NO120FKRFWHTGHRSEQ ID NO121MMAWHARVARSEQ ID NO122WIWHRPIKVKSEQ ID NO123WHRTLPKRGHSEQ ID NO124VKHFRWRPVASEQ ID NO125KRHWRFQLSNSEQ ID NO126KRHRLASMAPSEQ ID NO127WRWRWRGVLRSEQ ID NO128RLHAHHARHRSEQ ID NO129RWGAKHRVRVSEQ ID NO130AMGWRPVKHRSEQ ID NO131KWRWRMHQHYSEQ ID NO132WLSKLGHRHASEQ ID NO133KHCSIHTRLR
SEQ ID NO134GSAERMSEGHSEQ ID NO135FPLWNVLTMTSEQ ID NO136SFAGVGWFALLGSEQ ID NO137CDLWVCFLDGGGSEQ ID NO138LVARFPPPYGGVSEQ ID NO139SIVWLTRPKGSEQ ID NO140CRYRALNGVLSEQ ID NO141ALTSRTWARQSEQ ID NO142TRYMLSRQSNSEQ ID NO143AMREARITVKSEQ ID NO144WRRHVPLRILSEQ ID NO145FHRWNRPMVTSEQ ID NO146HRYKKTPVPMSEQ ID NO147WLHVKRRPVVSEQ ID NO148WVRHKHPIVPSEQ ID NO149LSMRRRQFQSSEQ ID NO150FHWRDKWRTGSEQ ID NO151RMRRPGITVKSEQ ID NO152GHRWNRPMVTSEQ ID NO153WHRHTPKRIPSEQ ID NO154WHWQRSRPALSEQ ID NO1S5KRTWWHYIRP andSEQ ID NO1S6KRWRHSLPAS.
本发明进一步提供的是任何上述的肽的片段，其中该片段保留与单克隆抗体SZ-2结合的能力。本发明也提供了能够与上述的肽(抗mimotope)结合的分离分子，和提供使血小板与抗mimotope分子接触而调节血小板的粘连，聚集或凝集。
下面进一步详细描述本发明。
C-34表位如Miller等人(1990)报道，将来自血小板糖蛋白Ib的α链中的突变230·WKQ(G→V)233V·234的杂合型的血小板型威勒布兰特病(PT-vWD)患者的血小板用作生产鼠mab的免疫原。一个这样的mab C-34抑制瑞斯托菌素诱导的病人或正常血小板的聚集，但不抑制其它聚集试剂诱导的聚集。如交叉免疫电泳所证明，mab C-34识别GPIb/IX复合物内的表位。在对新鲜的血小板的间接的免疫荧光研究中，对于正常人和病人，四个不同的抗GPIb mab中的任何一个与另一个的比例几乎是唯一的(0.88-1.14)。相反，mab C-34与这样一个mab(AP-1)结合的比例对正常的血小板是0.31±0.02(平均值±SE)，而对病人的血小板明显地增加到0.54±0.01(P＜0.001)。在3H标记的血小板的NP-40溶解物的免疫沉淀中，饱和浓度的mab C-34比AS-2或其它抗GPIb mab产生更微弱的带。与其它抗GPIb mab相反，C-34不与GPIb的纯化的125I标记的glycocalicin片段或由交叉免疫电泳鉴定的glycocalicin衍生物结合。在用胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶消化的3H标记的血小板的免疫沉淀研究中，C-34不能鉴定glycicalicin和由mab AS-2或mab AS-7免疫沉淀的GPIbα的氨基末端45kDa的片段。
所以，利用三种独立的技术(在放射性标记完整的血小板和随后蛋白水解消化这些糖蛋白后，免疫沉淀血小板糖蛋白；免疫沉淀放射性标记的纯化的glycocalicin；交叉免疫电泳血小板糖蛋白)(Miller等1990)，已经表明当C-34识别GPIb/IX复合物内的表位时，该表位似乎不存在于glycocalicin中。
而这些研究报道了一种相当简单的方法，该方法成功地将mab AS-2和AS-7表位定位于GPIbα的45kDa区域，这一研究证明不能将mab C-34定位于glycocalicin的任何单个胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶区域。另外，mab C-34不产生与识别GPIX的mab相同的免疫沉淀图谱。
用噬菌体展示文库对Mab C-34进行生物淘选Scott和Smith(1990)提出了利用在噬菌体中任意合成的肽插入片段定义肽配体的方法。Cwirla等人(1990)和Devlin等人(1990)公开了相关的方法。从那时起，报道了一篇文献，其中已经将原始六肽插入片段和更大的插入片段用于鉴定单克隆抗体识别的表位。对于已知为GPIb/IX的血小板vWF受体内的关键表位的检测，这一技术具有巨大的潜力。本文公开的研究着重于单克隆抗体C-34，用本文公开的mab C-34的方法可以用于其它在GPIb/IX中具有结合位点(表位)的单克隆抗体。
利用了一个平衡很好的来自加拿大的Dr.Bruce Malcom的十肽文库(10-单体)(Christian等人于1992描述过)和来自Clontech技术实验室(Palo Alto，CA)的十二肽文库(12-单体)。在十二肽文库中，在每个密码子的开始两个位置中腺苷的频率减少引起下面用它们的单字母密码I，M，T，N，K，Y，H，Q，D，和E表示的氨基酸的特征性出现不足。通过插入合成的低聚核苷酸的混合物，将两个文库构建到Fuse5载体(Scott和Smith1990)，而任意十肽(或任意修饰的十二肽)与噬菌体的少数病毒包被蛋白pIII融合。每个文库具有约3×108个独立克隆的复杂度，和每升1012到1014的效价。而Malcom文库只构成部分十肽文库，作为六肽文库它是完整的。
利用这些文库的方案主要是按照最近由Scott(1992)提出的综述，并通过修饰利用了如Smith和Scott(1993)最近描述的使用这些系统的详细方法。本文所用的方案如下。
具体地说，在第一轮生物淘选中，用封闭液(0.5％BSA，0.1MNaHCO3，0.1μg/ml的抗生蛋白链菌素，0.2％NaN3)填充每个60mm的链霉抗生物素蛋白包被的培养皿2小时，然后用TBS-0.5％吐温洗涤3次。用1ml TBS-吐温稀释用1μg生物素化的Mab并且在4℃过夜温育的1μl文库(约1×1011个噬菌体)，将这一混合物加入培养皿中，并在室温下摇动15分钟。用TBS-吐温洗涤培养皿10次，通过见800μl的0.1N HCl(用甘氨酸将pH调节到2.2)-1mg/ml BSA吸移到培养皿中洗脱结合的噬菌体。然后将洗脱物吸移到含有48μl 2M Tris的microfuge管中，将pH调节到约8。
利用Amicon Centricon-30过滤器(Amicon公司，Beverly，MA)浓缩洗脱物并用TBS洗涤两次。通过从TBS-0.1％的明胶中的小量的浓缩洗脱物制成稀释液滴定出最后产物，并加入1μl每种稀释液制成19μlTBS-明胶，然后加入20μl饥饿的K91大肠杆菌细胞，并在室温下温育10分钟。在加入200μl含有0.2μg/ml四环素(Tc)的NYZ培养基和在37℃温育1小时后，将混合物铺在含有40μg/ml四环素的NZY琼脂平板上并使其在37℃下生长过夜。
在滴定后，将第一轮生物淘选得到的全部浓缩洗脱物(约50μl)加入到等体积的新鲜饥饿K91细胞，并按照Smith和Scott所述的方法进行扩增(1993)。在第一次PEG/NaCl沉淀后，将得到的沉淀溶解于1ml TBS。然后用PEG/NaCl第二次沉淀噬菌体，允许在4℃停留至少1小时，在4℃离心后收集沉淀。在仔细除去所有上清液后，将沉淀溶解于100μlTBS。然后滴定扩增产物。
第一轮生物淘选得到5×10-7％的产量。第二轮生物淘选也利用了1μg含有1×1011噬菌体的生物素化的C-34，得到4×10-3％的产量。如第一轮一样，浓缩和扩增第二轮生物淘选。在第三轮中，对2.5×1011个噬菌体进行0.01μg的生物素化的C-34生物淘选。得到产量为3×10-4％。在洗脱培养皿中结合的噬菌体后，终止第三轮。这一洗脱物不进行浓缩和扩增。在每轮前后进行滴定，将百分产量计算相对于噬菌体的起始数的洗脱部分中得到的噬菌体数(Christian等1992)。通常产量应该逐渐大于10-5到超过背景，通常观察到的值为10-4到10-1。在随后的生物淘选中增加的百分产量特定地表明选择到的是亲和性提高的克隆。
对于涉及发现结合mimotope肽(SEQ ID NO1AWNWRYREYV)的肽的研究，对原始的十肽文库进行了两轮生物淘选，在第一轮中利用了1μg生物素化的mimotope肽，在第二轮中利用了0.01μg。得到的产量分别为3×10-6％和2×10-3％。
在一些实验中，利用含有约500个分离很好的菌落的NZY+Tc琼脂平板可以进行如Christian等人(1992)描述的免疫学筛选试验。将菌落转移到硝酸纤维滤膜(Biorad实验室，Hercules，CA)上，并用TNT缓冲液(10mM Tris，pH8.0，150mM NaCl，0.05％吐温20)马上洗涤滤膜两次，用TNT缓冲液中的20％的正常山羊血清在室温下温和搅拌封闭30分钟，然后在已经用封闭缓冲液稀释1∶1000的初级mab在室温下温育2小时。随后在室温下，在洗涤缓冲液A(TNT缓冲液+0.1％BSA)，洗涤缓冲液B(TNT缓冲液+0.1％BSA+0.1％NP-40)，然后又在洗涤缓冲液A中依次洗涤10分钟，然后在室温下在次级过氧化物酶—共轭的山羊抗鼠IgG中温育1-1/2小时。用前洗涤滤纸，然后进行最后的TN(10mMTris，pH7.5，150mM NaCl)洗涤。在将滤膜置于ABTS底物中后观察到显色。
然后通过a)选择来自免疫筛选的阳性的菌落；或b)跳过筛选步骤并任意选择菌落(约100个)使单个菌落的小培养物生长过夜。将每个菌落接种到2ml含有20μg/ml的四环素的NZY培养基中，强烈摇动使这些培养物在37℃生长过夜。第二天，离心培养物沉淀细胞，并除去上清液。然后将1ml上清液中加入到150μl的PEG/NaCl，并在4℃过夜沉淀噬菌体。在随后离心和除去上清液后，将沉淀溶解于1ml TBS中。
为了进行DNA测序，用酚提取400μl溶解的沉淀一次，将得到的水相(约300μl)加入到500μl的TE和80μl的3M乙酸钠缓冲液。然后加入1ml的乙醇，使其在4℃下过夜沉淀ssDNA。然后在4℃将每个样品微离心30分钟，用70％的ETOH洗涤DNA沉淀一次，干燥，并重悬浮于7μl的H2O中。可以将该模板储存于-20℃直到使用。
由于非常丰富的GC Sfi l克隆位点侧接插入区(Christian等人1992)，利用含有32P-dATP和定位于插入位点的3’方向40个核苷酸处的反义引物(引物具有SEQ ID NO1005’-CTCATAGTTAGCGTAACG-3’)的测序酶7-deaza dGTP DNA测序试剂盒(Amersham-US生物化学，Arlington Heights，IL)进行测序反应。利用IBI STS 45测序仪器(Eastman柯达公司，Rochester，NY)将样品在标准的6％的测序胶上电泳。
为了发现共有序列，将GCG软件(遗传学计算机集团公司，MadisonWI)用于校正从多重克隆得到的序列。当然在寻找结合位点的新mab的情况中，甚至在mab C-34的情况中，存在需要寻找不仅在GPIbα中，而且在GPIbβ，GPIX，和事实上在其它已经储存于现有的数据库(SwissProt，基因库，EMBL，等)中的序列。确实，这一分析可以提供重要的新信息，表明特定的单克隆抗体的表位可以由必定处于接近的空间位置的GPIb/IX的多重成份组成。
在这点上，如果克隆的数目高，可以利用ELISA试验估价单个颗粒。简要地说，可以用生物素化的mab过夜温育已经进行两次PEG沉淀并随后调整了滴定度的噬菌体，接着，可以在已经在前面用甲醛固定的血小板(或其它mab识别的适当的固定靶)包被的微滴板的孔中加入mab-噬菌体混合物。在一系列洗涤步骤后，加入生物素蛋白—过氧化物酶，再次洗涤孔，加入色原底物，最后在ELISA平板读数器上读数。在这一试验中信号长度的相对下降提供了用于最有希望作进一步研究的克隆的指示。就结合起始抗体的能力，可以化学地合成和鉴定以这种方式鉴定的共有序列。然后可以将显示高的抗体结合亲和力的肽用作鼠和/或兔中的免疫原。
mab C-34的表位图谱研究利用mab C-34将上面讨论的两个噬菌体展示文库用于图谱研究。关于在二或三轮生物淘选后选择的克隆中强烈的共有研制，平衡的十一单体肽文库的结果是十分肯定的。不仅存在对9-单体序列SEQ ID NO38WNWRYREYV的明显的共有，而且存在包括这一序列(SEQID NO1)D10-单体肽，而在生物淘选中氨基末端的丙氨酸似乎具有最大的选择优点，因为发现含有这一序列的克隆频率最高。
在下面排列中包括一系列的克隆序列。下面划双线的代表共有氨基酸，下面划单线的氨基酸代表与共有氨基酸具有明显的同源性。
频率C34 Clone SEQ ID NO1
52C34 Clone SEQ ID NO2
1C34 Clone SEQ ID NO3
14C34 Clone SEQ ID NO4
7C34 Clone SEQ ID NO5
2C34 Clone SEQ ID NO6
1C34 Clone SEQ ID NO7
1C34 Clone SEQ ID NO8
2C34 Clone SEQ ID NO9
1C34 Clone SEQ ID NO10
1C34 Clone SEQ ID NO11
1C34 Clone SEQ ID NO12
1C34 Clone SEQ ID NO13
1
C34 Clone SEQ ID NO14
2C34 Clone SEQ ID NO15
22C34 Clone SEQ ID NO16
1C34 Clone SEQ ID NO17FSHSYGSAIR1C34 Clone SEQ ID NO18MHGHRRPGLA1C34 Clone SEQ ID NO19MSKKPHLGLR1C34 Clone SEQ ID NO20TMWVELYSLK1C34 Clone SEQ ID NO21FVDPGRAGRG1C34 Clone SEQ ID NO66KRAWWKQKWV1部分限制于其氨基酸目录的第二个肽展示文库的结果表明与C-34结合的一系列克隆，而没有显示mimotope共有系列SEQ ID NO38。来自第二个文库的一系列克隆序列包括在下面的排列中。SEQ ID NO22是来自氨基酸484到499的GPIbα的天然序列，并代表从第二个文库分离的克隆显示的可能的天然表位序列。符号’代表潜在的胰凝乳蛋白酶切割位点。如上所述，在第二个文库中下面划双线的代表可能的天然序列(SEQ ID NO22)而下面划单线的氨基酸代表与可能的天然序列明显同源的。
下面的克隆序列也是从第二个肽展示文库得到的SEQ ID NO39QVRLWARAGAGQSEQ ID NO40GLAVTFGSVLEGSEQ ID NO41VRWMCVIRLGVRSEQ ID NO42RLWGPGVSRPVLSEQ ID NO43CGSSLFRGPRCPSEQ ID NO44LGISSLSFLQLRSEQ ID NO45TWGWDGVSYLFLSEQ ID NO46TRSLFDDFVSLRSEQ ID NO47CYASLFRSRLCASEQ ID NO48DGSVRVVWVRLLSEQ ID NO49LSGFPVALVRFASEQ ID NO50LGGGLLVGSVFPSEQ ID NO51VWARGVFRDRFFSEQ ID NO52TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO53WLGGIFSCLVCGSEQ ID NO54WFLRDVGCGSCLSEQ ID NO55SRCGVFTWCSRSSEQ ID NO56RCLVGYRCWGGVSEQ ID NO57GFRCLVMGGGCASEQ ID NO58CGFDLVCARLFGSEQ ID NO59DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO60ILDGCFFLGRCPSEQ ID NO61CVRWLVSAGCSGSEQ ID NO62CVGCWLVCDVLLSEQ ID NO63CLFVFAAGFACGSEQ ID NO64SCALFGSCFGISSEQ ID NO65CWGGVGVCGLLVSEQ ID NO67CVGGVASRCGVLSEQ ID NO68SGAVLAGPFGVWSEQ ID NO69CRAFDRVGVCVWSEQ ID NO70RCLVGYVVGGVWSEQ ID NO71VCLVYRSVDCWASEQ ID NO72WRVFVFTCVVWASEQ ID NO73LWREWRGLFAVLSEQ ID NO74SGAVLAGPLWRLSEQ ID NO75FVVRGGTFLFVR
SEQ ID NO77TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO78DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO79CAWHRLSFCGLVSEQ ID NO80CFGSALVLAVLA andSEQ ID NO81WFWDMSGEWGGL.
将共有序列与天然序列比转对试图发现上面的肽(SEQ ID NO38)的共有序列与GPIbα中的天然序列或瑞士蛋白质或NCBI数据库中的其它已知蛋白质的关系作了更大的尝试。没有发现相关性。因此，这一序列代表“mimotope”即，模仿天然表位(单克隆抗体的结合位点)的肽，尽管在初级氨基酸序列水平缺乏明显的同源性(对于mimotope，参见Motti等人1994，Larocca等人1992，Lenstra等人1992，Balass等人1993，Hobart等人1993，和Luzzago等人1993)。正如在总结了上面SEQ ID NO1-21和66之后注意到的，不是所有选择的克隆是这一共有基团的部分，并且有了进一步的测序线索，可能衍生出天然表位。
通过利用部分限制它的氨基酸目录的第二个肽展示文库，得到另一系列与C-34结合而不出现mimotope共有肽的克隆(“C34b系列”)。在对这些克隆测序后，通过沿着GPIbα移动一个7个氨基酸的窗，一次前进一个氨基酸，并确定GPIbα分子中作为位置功能的基团得分来进行FASTA分析(Pearson和Lipman1988；Pearson1990)。
通常，该结果不提供在这些克隆中共有发展意义上的强制匹配。但是，SEQ ID NO22代表这一分析揭露的可能天然的GPIbα序列。
凝集研究通过标准方法制备人富于血小板的原生质(PRP)柠檬酸盐(Miller等1983)。为了研究mimotope肽中和C-34，用磷酸缓冲盐(PBS)，20μg/mlC-34mab，或20μg/ml前面已经用各种浓度的肽在22℃温育30分钟的C-34在22℃将350μL含有150,000血小板/μl的PRP温育10分钟。然后使PRP上升到37℃并以1200rpm在Chrono-Log Lumi-聚集器(Chrono-Log公司，Havertown，PA)中搅拌。加入1mg/ml瑞斯托菌素(Helena实验室，Beaumont，TX)开始聚集。为了筛选展示潜在的抗mimotope肽的细菌克隆序列，用250μl柠檬酸PRP在22℃温育PEG/NaCl沉淀的噬菌体1小时，转移到聚集器中，然后加入瑞斯托菌素直到最后浓度0.8mg/ml。通过将150μl溶解于PBS中的肽的变化的稀释液，pH6.0，在22℃与250μl甲醛固定(Macfarlane等1975)的血小板(1.5×105/ml)预温育2-4小时，然后将混合物在聚集器中加热到37℃，加入纯化的vWF(Miller等人1983)(1U/ml)，并加入0.9mg/ml的瑞斯托菌素开始聚集，进行合成肽对依赖vWF的血小板的聚集抑制潜力的研究。
合成肽化学方法合成(Genosys生物技术，The Woodlands，Texas)包括共有序列的肽(SEQ ID NO38)。合成的肽具有对应于SEQ ID NO1的氨基酸序列。还合成了带有附着在氨基末端的丙氨酸上的生物素(N-羟基琥珀酰亚胺己酸长链空间臂生物素化)的这一肽的修饰形式。将1mg化学合成的生物素化的肽溶解于1ml的含有20μl DMSO的水。由于最后浓度20μg/ml的C-34是瑞斯托菌素诱导的柠檬酸富血小板原生质(RPR)聚集的潜在抑制剂，通过测定在这一过程中该肽是否中和C-34的抑制活性可以估价合成肽的潜力。因此，以各种浓度的试验或对照肽在22℃将约10μg的C-34温育30分钟，然后将混合物加入PRP中，使最终体积约为0.5ml，再在22℃下温育10分钟。正如从得到的聚集曲线(图1-7)可以看到的那样，合成肽完全中和C-34，产生约1.0μg/ml的中和一半的C-34，其中约0.55μM的生物素化的肽。当利用肽(SEQ IDNO38)的非生物素化形式时，观察到C-34抗体中和的同样方式，而在约3.0μM处中和一半。该肽本身(天然或生物素化)不诱导血小板聚集，它也不表现出具有非特异效应，它对ADP诱导的聚集没有任何影响。
更具体地说，图1显示了在存在威勒布兰特病因子时，瑞斯托菌素诱导的血小板的完全聚集。图2显示了20μg/ml的mabC-34对瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集的抑制。图3-7显示了在存在0.14，0.27，0.55，1.1，和2.3μM的具有SEQ ID NO1的合成的生物素化的肽mimotope时20μg/ml的mab C-34对瑞斯托菌素诱导的血小板的聚集的抑制的各种中和程度。在图3中，0.14μM的肽不中和C-34的抑制；在图7中，2.3μM的肽完全中和C-34的抑制，并且图4-6显示C-34抑制的中和的各种程度。
合成肽的其它使用化学合成的肽可以与牛血清白蛋白接合和用于在兔中产生单克隆抗体。如下所述，标准方法可用于免疫兔并收集血清。可以测试多克隆抗体与正常血小板以及重组GPIbαd野生型和缬氨酸233突变形式的结合能力。对于显示与血小板结合的高亲和力的多克隆抗体，可以进行功能研究。这些研究包括粘连，聚集，凝集，和vWF结合。如果空间障碍表现出妨碍了更特异的抗体调节效应的精确估价，可以制造多克隆抗体的F(ab)’2和Fab片段(Becker和Miller1989，Kupinski和Miller1986，和Miller等人1986)。可以得到≥95％纯度的识别或固定与加高或减少结合vWF的亲和力相关的构型的合成肽的多克隆抗体并与牛血清白蛋白或另一个载体蛋白接合，生产鼠多克隆抗体。
生产合成肽的抗体鼠利用BALB/c鼠可以进行单克隆抗体的生产。免疫B-细胞供体鼠可以包括用在TiterMaxTM佐药中混合的抗原如下免疫它们在第1天中通过在后胁腹肌肉内注射，注射50μg抗原/20μl乳剂×2。在第28和56天通过尾巴放血得到血液样品以便通过ELISA试验检测滴定度。在最大滴定度(通常56天)通过吸入CO2对鼠进行无痛苦死亡术，然后可以进行脾切除术，收获脾细胞用于通过标准方法制备杂交瘤。
兔在新西兰白兔中可以生产多克隆抗体。可以通过耳的动脉从用庆大霉素/rompun(20mg/kg IM的庆大霉素HCl和4mg/kg IM的xylazine)镇静的兔中收集预免疫的血清。在每次放血中可以收集10-15％的总血液体积。可以用#40的刀片刮掉盖住耳朵的毛发，用70％的乙醇擦洗，利用灭菌的22量规的蝶型板收集血液。可以将抗原与RIBI佐药或TITER-MAXTM佐药混合，并根据制造商的说明使用。然后刮去背上的毛发，用70％的乙醇擦洗，根据制造商的说明推荐，可以利用带有抗原/佐药混合物的灭菌的25量规的针皮下和肌肉内给药。如对预免疫样品所述可以收集免疫血清样品。当达到足够的滴定度时，在耳后，用戊基巴比妥钠(60mg/kg BW)麻醉动物直到达到深度无痛苦死亡。通过心脏穿刺可以马上将血液收集在塑料离心管中，允许血液凝块；然后，可以离心血液并抽吸血清和储存于-70℃。对于无痛苦死亡，当在60mg/kg剂量的戊基巴比妥钠麻醉下，通过心脏穿刺可以使兔子流血。
开发C-34抗mimotope肽然后将mimotope十肽本身用作寻找“抗mimotope”肽的探针。具体地说，当许多肽与暴露于溶液中的部分mimotope肽反应时，将“抗mimotope”肽定义为不仅选自多轮死亡淘选，而且提供与天然表位的功能反应的一些测量措施的肽，从而相似于原始多克隆抗体。正如图8所示，46个噬菌体克隆中的一个克隆得到纯化并随后在功能血小板试验中测试确定背景水平上的抑制活性。这一“抗mimotope”克隆展示具有SEQID NO94RHVAWWRQGV的序列，该序列的羧基末端的一半与GPIbα的残基230-234相同，而只有残基231处的保守替代(Lys→Arg)。(参见来自225-237[SEQ ID NO101]的GPIbα序列和来自225-234[SEQ ID NO173ENVYVWKQGV]的GPIbα序列)。在最终确定的57个独特序列中，如下所示另外5个序列显示了各种程度的结构同源性。其它抗mimotope序列也包括下列序列SEQ ID NO157AYGVRHLGLSSEQ ID NO158KKWGQHRQRSSEQ ID NO159WRWMHNMPHASEQ ID NO160WHWLARHRTVSEQ ID NO161RHRHRGFQPRSEQ ID NO162RGWRWHKYWQSEQ ID NO163KRHAWMKSRLSEQ ID NO164LLLVGGSELTSEQ ID NO165KKVWMFSYNESEQ ID NO166LSCRGCRAFVSEQ ID NO167HEGCEAQDELSEQ ID NO168SVRHIWFHVKSEQ ID NO169GTWDLWRKGSSEQ ID NO170RWLWPRVHKTSEQ ID NO171HSPFRHVQPR andSEQ ID NO172WVRGHHREVR.
利用具有SEQ ID NO94RHVAWWRQGV的化学合成肽进行进一步的研究。这一十肽能完全抑制瑞斯托菌素诱导的聚集，而IC50有200-400μg/ml存在(图9)。对应于在PT-vWD中观察到的突变，在位置9(SEQ ID NO104)的(Gly→Val)的替代略微降低了IC50，尽管几乎是完全抑制，又一次看到在715μg/ml。为了更接近天然结构，研究了在位置7有(Arg→Lys)替代的肽。如图10所示，观察到了含有Lys肽的Gly和Val形式之间更明显的差异。而当RHVAWWKQVV(SEQ ID NO105)肽保留了潜在的抑制活性，RHVAWWKQGV(SEQ ID NO106)肽只能发挥轻微的抑制，除了在最高的测试浓度处。最后，合成了在残基233处含有Gly的野生型GPIbα228-237肽(SEQ ID NO108)和在这一位置Val替代了Gly的PT-vWD突变体(SEQ ID NO107)。如图11所示，最终野生型肽是没有抑制活性的。相反，对应于PT-vWD突变体的肽能够完全抑制瑞斯托菌素诱导的聚集，而IC50约为400μg/ml。在PBS，pH6.0中重新构建冻干的肽并用250μl的甲醛固定的血小板(1.5×105/ml)与150μl各种浓度的稀释液在22℃温育2-4小时，然后加入1U/ml纯化的vWF，再加入0.9mg/ml的瑞斯托菌素聚集。
mimotope/抗mimotope的三维空间说明图12a-12c展示了mimotope和抗mimotope的三维空间说明。在图12a中，展示了在含有能识别单克隆抗体C-34的原始表位10的血小板糖蛋白Ibα的细胞外领区内的区域。图12b展示了模仿三维空间的原始表位(10，如图12a所示)，而没有原始表位的初级氨基酸序列的mimotope肽12的结构。该mimotope肽也识别或结合单克隆抗体C-34。
图12c说明了与抗mimotope肽14结构相关的mimotope肽12的结构。抗mimotope肽序列与三维空间中的mimotope肽的表面互补，如单克隆抗体C-34与原始表位(参见图12a)。
mab SZ-2的表位图谱研究利用单克隆抗体SZ-2也进行的表位图谱研究。选择了mab SZ-2(Ruan等1987)因为已知它的表位位于GPIbα的45kDa区(Fox等1988；Molino等1993)；该表位似乎是相对依赖构型的，因为在SDS中变性后转移到硝酸纤维膜上的SZ-2(Molino等1993)强烈地影印GPIbα，glycocalicin或GPIbα45kDa片段；并且这一mab的表位定位需要普及因为它可以商购，并在世界范围内可广泛用于各种研究性和临床的研究。
与SZ-2一起利用了平衡很好的10-单体任意肽展示文库。在两轮或第三轮免疫筛选的三轮生物淘选后，对噬菌体克隆序列测序并分析得到的推测肽序列与轮廓清楚的图谱的趋同性，该序列有望包括在成熟GPIbα分子的开始300个氨基酸内。将得到的展示序列与已知存在于血小板表面的包括GPIa，GPIbα，GPIbβ，GPIIb，GPIIIa，GPIV，GPIX，和血小板FCgamma2受体的糖蛋白序列的可得系列比较。
根据下列观察，最可信的多重噬菌体序列与天然血小板序列的一致性可能是与血小板FCgamma2受体的残基而不是GPIbα首先，噬菌体序列与GPIbα的比较的GCG FASTA和WORDSEARCH分析确实显示了几个需要的相似区域，除了单个的，还存在以明显匹配的可信方式出现的天然分子中的短长度的氨基酸。第二，利用制备和滴定了高纯度的PEG沉淀的开始的50个克隆序列，进行ELISA试验，其中噬菌体与生物素化的SZ-2的结合抑制了以后SZ-2与固定的glycocalicin的结合。50个克隆序列中只有一个展示具有SEQ ID NO83WHWRSSWKSG的序列，证明能够完全中和SZ-2，其它可得的克隆序列甚至没有接近的中和潜力。但是，这一克隆序列似乎不代表克隆序列的明显的趋同方式，它也不提供与GPIbα内的序列比与其它可得克隆序列更广泛的匹配。但是，在其它血小板表面蛋白的计算机辅助分析中，对于下面显示的血小板FCgamma2受体的区域这一序列以最高的FASTA得分出现，其中在提出的共有序列表中它与第二个肽出现。对其它几个克隆序列测序，措施的肽首先表示在SEQ ID NO84HRPLSWKGRA的系列中。记住，这一肽也有SWK序列，但是另外还有SWK氨基端3个残基出的R。下面显示了定位于血小板FCgamma2受体的趋同性序列是在与提出的共有系列匹配最近的GPIbα内的系列。
SEQ ID NO102FCGB_HUMAN 148 I V L
C H
D K P L V KSEQ ID NO84 H
P L
G R ASEQ ID NO83W H W R S
S GSEQ ID NO85 W H R
P M
Y SSEQ ID NO86 A
I K I
P R WSEQ ID NO87 K
G W H
S L HSEQ ID NO88 K
W V R M P RSEQ ID NO89 A K
R Y W R M PSEQ ID NO90 K R
V Y H R W PSEQ ID NO91 L H R
Q S P R TSEQ ID NO92 L I R
P H G W RSEQ ID NO93 Q K K F F S R
HSEQ ID NO103GPIbα221 D N A E N V Y V
V D V K A M TSEQ ID NO91 L H R
S P R TSEQ ID NO83 W H W R S S
S
虽然已经详细地说明和描述了优选的实施方案，对本领域技术人员仍需要说明的是，不脱离本发明的精神可以作各种修饰，附加，替代和诸如此类，所以也考虑这些内容也是在下面的权利要求书中定义的本发明的保护范围之内。
参考文献表Balass，M.et al.，Proc Natl Acad Sci USA 9010638-10642(November 1993).Becker，B.H.and Miller，J.L.，Blood 74690-694(1989).Chambers，M.et al.，in Leucocyte Typing VWhite Cell DifferentiationAntigens，ed.Schlossman，S.，pp.1343-1345，oxford University Press，NewYork(1995).Christian，R.B.et al.，J Mol Biol 227711-718(1992).Chemetson，K.J.and Clemetson，J.M.，Sem.Thromb.Hemost.21130-136(1995).Clemetson，K.J. and Hugli，B.，in Leucocyte Typing VWhite CellDifferentiation Antigens，ed.Schlossman，S.，pp.1323-1325 oxford UniversityPress，New York(1995).Cwirla，S.E.et al.，Proc Natl Acad Sci USA 876378-6382(August 1990).Devlin，J.J.et al.，Science 249404-406(1990).Du，X.et al.，Blood 691524-1527(1987).Fitzgerald，L.A.and Phillips，D.R.，in Platelet ImmunobiologyMolecular andClinical Aspects，Kunicki，T.J.and George，J.N.，Eds.，pp.9-30，Lippincott，Philadelphia PA(1989).Fox，J.E.B.et al.，J.Biol Chem 2634882-4890(1988).Hobart，M.J.et al.，Proc R Soc London B 252157-162(1993).Joyce，G.F.，Current Opinion in Structural Biology 4331-336(1994).Kupinski，J.M.and Miller，J.L.，Thromb Res 43335-334(1986).LaRocca，D.et al.，Hybridoma 11191-201(1992).Lenstra，J.A.et al.，J Immunol Methods 152149-157(1992).Lopez，J.A.，Blood Coag.& Fibrinolysis 597-119(1994).Luzzago，A.et al.，Gene.12851-57(1993).Macfarlane，D.E.，et al.Thrombos Diath Haemorrh 34306-308(1975).Miller，J.L.and Castella，A.，Blood 60790-794(1982).Miller，J.L.et al.，J Clin Invest 721532-1542(1983).Miller，J.L.et al.，Blood 68743-751(1986).Miller，J.L.et al.，Blood 701804-1809(1987).Miller，J.L.et al.，Br J Haemotol 74313-319(1990).Miller，J.L.et al.，Proc Natl Acad Sci USA 884761-4765(1991).Miller，J.L.et al.，Blood 79439-446(1992).Molino，M.et al.，Blood 822442-2451(1993).Motti，C.et al.，Gene 146191-198(1994).Murata，M.，et al.，J Clin Invest 921555-1558(1993).Parmley，S.F.and Smith，G.P.，Gene 73305-318(1988).Pearson，W.R.and Lipman，D.J.，Proc Natl Acad Sci USA 852444-2448(1988).Pearson，W.R.Methods in Enzymology 18363-98(1990).Roth，G.J.，Blood 775-19(1991).Ruan，C.et al.，Blood 69570-577(1987).Russell，S.D.and Roth，G.J.，Blood 811787-1791(1993).Scott，J.K.，Trends in Biochem Sci 17241-245(1992).Scott，J.K.and Smith，G.P.，Science 249386-390(July 27，1990).Smith，G.P.and Scott，J.K.，Methods in Enzymology 217228-257(1993).Takahashi，H.et al.，Thromb Res 19857-867(1980).Takahashi，H.et al.，Blood 85727-733(1995).Ward，C.M.and Berndt，M.C.，in Leucocyte Typing VWhite CellDifferentiation Antigens，ed.Schlossman，S.，pp.1336-1337，Oxford UniversityPress，New York(1995).Weiss，H.J.et al.，N Engl J Med 306326-362(1982).
序列表(1)总的资料(i)申请人纽约州立大学研究机构(ii)发明的题目人血小板糖蛋白Ib/IX的mimotope和抗mimotope(iii)序列的数目173(iv)通讯地址(A)收信人Nixon，Hargrave，Devans和Doyle LLP(B)街道Clinton广场，P.O.Box 1051(C)州纽约(E)国家美国(F)邮编14603(v)计算机可读资料(A)媒体类型软盘(B)计算机IBM PC兼容机(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件Patent In Release#1.0，#1.30版(vi)当前申请资料(A)申请号PCT系列号No.08/556,597，1995年11月13日递交(B)递交日期如上(C)分类(vii)代理机构资料
(A)姓名Braman，Susan J.
(B)登记号34，103(C)参考登记号20884/102(viii)电信资料(A)电话(716)263-1636(B)电传(716)263-1600(2)SEQ ID NO1的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO1Ala Trp Asn Trp Arg Tyr Arg Glu Tyr Val1 5 10(2)SEQ ID NO2的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性
(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO2Lys Trp Asn Trp Arg Asn Lys Lys Tyr Val1 5 10(2)SEQ ID NO3的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO3Leu Ser Thr Trp Arg Tyr Phe Glu Tyr Val1 5 10(2)SEQ ID NO4的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO4Tyr Leu Gly Trp Arg Tyr Ser Glu Tyr Val1 5 10(2)SEQ ID NO5的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO5Thr Gln Met Trp Arg Ala Arg Glu Tyr Leu15 10(2)SEQ ID NO6的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO6Trp Arg Gln Arg Glu Tyr Trp Asp Pro Val1 5 10(2)SEQ ID NO7的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO7Glu Gly Ser Trp Arg Tyr Arg Lys Gly Gly15 10(2)SEQ ID NO8的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO8Gly Tyr His Trp Trp Arg Asn Trp Glu Tyr1 5 10(2)SEQ ID NO9的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性
(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO9Lys Gly Phe Leu Trp Arg Ala Arg Asn Trp15 10(2)SEQ ID NO10的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO10Met Asn Trp Lys His Trp Arg Ala Arg His1 5 10(2)SEQ ID NO11的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO11Phe Lys Trp Arg Glu Trp Arg Gly Lys Leu1 5 10(2)SEQ ID NO12的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO12Pro Asp Arg Gln Val Arg Leu Trp Val Arg1510(2)SEQ ID NO13的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO13Arg Val Leu Arg His Trp His Pro Arg Thr1 5 10(2)SEQ ID NO14的资料
(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO14Gly Arg Arg Val Trp Met Leu Asn His Gly1 5 10(2)SEQ ID NO15的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO15Lys Lys Gly Arg His His Val Thr Arg Val1 5 10(2)SEQ ID NO16的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO16Gly Gly Val Cys Lys Cys Trp Gln Cys Leu1 5 10(2)SEQ ID NO17的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO17Phe Ser His Ser Tyr Gly Ser Ala Ile Arg1 510(2)SEQ ID NO18的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(xi)序列描述SEQ ID NO18Met His Gly His Arg Arg Pro Gly Leu Ala1 5 10(2)SEQ ID NO19的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO19Met Ser Lys Lys Pro His Leu Gly Leu Arg1 5 10(2)SEQ ID NO20的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO20Thr Met Trp Val Glu Leu Tyr Ser Leu Lys1 5 10(2)SEQ ID NO21的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO21Phe Val Asp Pro Gly Arg Ala Gly Arg Gly1 5 10(2)SEQ ID NO22的资料(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO22Cys Cys Leu Leu Pro Leu Gly Phe Tyr Val Leu Gly Leu Phe Trp Leu15 1015
(2)SEQ ID NO23的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO23Phe Arg Cys Cys Val Phe Ser Cys Cys Leu Leu Ser1 5 10(2)SEQ ID NO24的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO24Gly Phe Arg Cys Leu Val Ser Leu Gly Gly Cys Phe15 10
(2)SEQ ID NO25的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO25Tyr Ser Leu Trp Gly Leu Pro Val Gly Asp Val Val1 5 10(2)SEQ ID NO26的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO26Leu Pro Leu Leu Trp Phe Asn Gly Ala Gly Phe Phe15 10
(2)SEQ ID NO27的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO27Val Trp Gly Leu Phe Arg Gly Leu Glu Asn Gly Ser1 5 10(2)SEQ ID NO28的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO28Ser Leu Trp Arg Gln Trp Arg Gly Leu Phe Val Val1 5 10(2)SEQ ID NO29的资料
(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO29Thr Leu Ser Leu Phe Gly Gly Arg Asp Lys Gly Phe15 10(2)SEQ ID NO30的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO30Ile Gly Pro Ala Val Ser Cys Leu Phe Arg Val Cys1 5 10(2)SEQ ID NO31的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO31Met Ser Leu Phe Pro Leu Ser Phe Cys Arg Leu Ile1 5 10(2)SEQ ID NO32的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO32Ala Leu Phe Ser Ser Val Trp Gly Asp Val Thr Leu1 5 10(2)SEQ ID NO33的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO33Gly Trp Phe Gly Pro Phe Trp Val Arg Gly Ser Gly1 5 10(2)SEQ ID NO34的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO34Phe Trp Val Ser Val Gly Gly Val Glu Gly Val Val1 5 10(2)SEQ ID NO35的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数
(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO35Leu Gly Ala Phe Gly Gly Ala Gly Phe Leu Trp Arg1 5 10(2)SEQ ID NO36的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO36Cys Arg Gly Ile Val Phe Leu Phe Val Gly Trp Leu1 5 10(2)SEQ ID NO37的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数
(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO37Phe Trp Leu Val Lys Gly Ala Gly Ala Trp Arg Phe1 510(2)SEQ ID NO38的资料(i)序列特征(A)长度9个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO38Trp Asn Trp Arg Tyr Arg Glu Tyr Val15(2)SEQ ID NO39的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(xi)序列描述SEQ ID NO39Gln Val Arg Leu Trp Ala Arg Ala Gly Ala Gly Gln1 5 10(2)SEQ ID NO40的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO40Gly Leu Ala Val Thr Phe Gly Ser Val Leu Glu Gly1 5 10(2)SEQ ID NO41的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO41Val Arg Trp Met Cys Val Ile Arg Leu Gly Val Arg1 5 10(2)SEQ ID NO42的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO42Arg Leu Trp Gly Pro Gly Val Ser Arg Pro Val Leu1 5 10(2)SEQ ID NO43的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO43Cys Gly Ser Ser Leu Phe Arg Gly Pro Arg Cys Pro1510(2)SEQ ID NO44的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO44Leu Gly Ile Ser Ser Leu Ser Phe Leu Gln Leu Arg1 5 1O(2)SEQ ID NO45的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO45Thr Trp Gly Trp Asp Gly Val Ser Tyr Leu Phe Leu1 5 10
(2)SEQ ID NO46的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO46Thr Arg Ser Leu Phe Asp Asp Phe Val Ser Leu Arg1 5 10(2)SEQ ID NO47的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO47Cys Tyr Ala Ser Leu Phe Arg Ser Arg Leu Cys Ala1 5 10(2)SEQ ID NO48的资料(i)序列特征
(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO48Asp Gly Ser Val Arg Val Val Trp Val Arg Leu Leu1 5 10(2)SEQ ID NO49的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO49Leu Ser Gly Phe Pro Val Ala Leu Val Arg Phe Ala1 5 10(2)SEQ ID NO50的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO50Leu Gly Gly Gly Leu Leu Val Gly Ser Val Phe Pro1 5 10(2)SEQ ID NO51的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO51Val Trp Ala Arg Gly Val Phe Arg Asp Arg Phe Phe1 5 10(2)SEQ ID NO52的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO52Thr Gly Leu Leu Ala Gly Pro Val Trp Arg Trp Thr1 5 10(2)SEQ ID NO53的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO53Trp Leu Gly Gly Ile Phe Ser Cys Leu Val Cys Gly1 510(2)SEQ ID NO54的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性
(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO54Trp Phe Leu Arg Asp Val Gly Cys Gly Ser Cys Leu1 5 10(2)SEQ ID NO55的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO55Ser Arg Cys Gly Val Phe Thr Trp Cys Ser Arg Ser1 5 10(2)SEQ ID NO56的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(xi)序列描述SEQ ID NO56Arg Cys Leu Val Gly Tyr Arg Cys Trp Gly Gly Val1 5 10(2)SEQ ID NO57的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO57Gly Phe Arg Cys Leu Val Met Gly Gly Gly Cys Ala1 5 10(2)SEQ ID NO58的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO58Cys Gly Phe Asp Leu Val Cys Ala Arg Leu Phe Gly1 5 10(2)SEQ ID NO59的资料
(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO59Asp Ser Gly Val Arg Trp Phe Phe Gly Phe Leu Gly1 5 10(2)SEQ ID NO60的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO60Ile Leu Asp Gly Cys Phe Phe Leu Gly Arg Cys Pro1 5 10(2)SEQ ID NO61的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO61Cys Val Arg Trp Leu Val Ser Ala Gly Cys Ser Gly1 5 10(2)SEQ ID NO62的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO62Cys Val Gly Cys Trp Leu Val Cys Asp Val Leu Leu1 5 10(2)SEQ ID NO63的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO63Cys Leu Phe Val Phe Ala Ala Gly Phe Ala Cys Gly1 5 10(2)SEQ ID NO64的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO64Ser Cys Ala Leu Phe Gly Ser Cys Phe Gly Ile Ser1 5 10(2)SEQ ID NO65的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数
(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO65Cys Trp Gly Gly Val Gly Val Cys Gly Leu Leu Val1 5 10(2)SEQ ID NO66的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO66Lys Arg Ala Trp Trp Lys Gln Lys Trp Val1 5 10(2)SEQ ID NO67的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(xi)序列描述SEQ ID NO67Cys Val Gly Gly Val Ala Ser Arg Cys Gly Val Leu1 5 10(2)SEQ ID NO68的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO68Ser Gly Ala Val Leu Ala Gly Pro Phe Gly Val Trp1 5 10(2)SEQ ID NO69的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO69Cys Arg Ala Phe Asp Arg Val Gly Val Cys Val Trp1 5 10(2)SEQ ID NO70的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO70Arg Cys Leu Val Gly Tyr Val Val Gly Gly Val Trp1 5 10(2)SEQ ID NO71的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO71Val Cys Leu Val Tyr Arg Ser Val Asp Cys Trp Ala1 510(2)SEQ ID NO72的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO72Trp Arg Val Phe Val Phe Thr Cys Val Val Trp Ala1 5 10(2)SEQ ID NO73的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO73Leu Trp Arg Glu Trp Arg Gly Leu Phe Ala Val Leu1 5 10(2)SEQ ID NO74的资料
(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO74Ser Gly Ala Val Leu Ala Gly Pro Leu Trp Arg Leu1 5 10(2)SEQ ID NO75的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO75Phe Val Val Arg Gly Gly Thr Phe Leu Phe Val Arg1 5 10(2)SEQ ID NO76的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO76Lys Trp Trp Val Pro Arg His Arg Val Trp1 5 10(2)SEQ ID NO77的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO77Thr Gly Leu Leu Ala Gly Pro Val Trp Arg Trp Thr1 5 10(2)SEQ ID NO78的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性
(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO78Asp Ser Gly Val Arg Trp Phe Phe Gly Phe Leu Gly1 5 10(2)SEQ ID NO79的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO79Cys Ala Trp His Arg Leu Ser Phe Cys Gly Leu Val1 5 10(2)SEQ ID NO80的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(xi)序列描述SEQ ID NO80Cys Phe Gly Ser Ala Leu Val Leu Ala Val Leu Ala1 5 10(2)SEQ ID NO81的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO81Trp Phe Trp Asp Met Ser Gly Glu Trp Gly Gly Leu1 5 10(2)SEQ ID NO82的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO82Arg Ser Lys Trp Trp Val His Arg His Ser1 5 10
(2)SEQ ID NO83的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO83Trp His Trp Arg Ser Ser Trp Lys Ser Gly1 5 10(2)SEQ ID NO84的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO84His Arg Pro Leu Ser Trp Lys Gly Arg Ala1 5 10(2)SEQ ID NO85的资料
(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO85Trp His Arg Arg Pro Met Ser Trp Tyr Ser1 5 10(2)SEQ ID NO86的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO86Ala Arg Ile Lys Ile Trp Lys Pro Arg Trp1 5 10(2)SEQ ID NO87的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO87Lys Arg Gly Trp His Trp Lys Ser Leu His1 5 10(2)SEQ ID NO88的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO88Lys Lys Ser Trp Trp Val Arg Met Pro Arg1 5 10(2)SEQ ID NO89的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数
(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO89Ala Lys Ser Trp Arg Tyr Trp Arg Met Pro1 5 10(2)SEQ ID NO90的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO90Lys Arg Trp Lys Val Tyr His Arg Trp Pro15 10(2)SEQ ID NO91的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(xi)序列描述SEQ ID NO91Leu His Arg Trp Lys Gln Ser Pro Arg Thr1 5 10(2)SEQ ID NO92的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO92Leu Ile Arg Trp Lys Pro His Gly Trp Arg1 5 10(2)SEQ ID NO93的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO93Gln Lys Lys Phe Phe Ser Arg Trp Lys His1 5 10(2)SEQ ID NO94的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO94Arg His Val Ala Trp Trp Arg Gln Gly Val1 5 10(2)SEQ ID NO95的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO95Ala Lys His Arg Trp Trp Arg Arg Pro Val1 5 10(2)SEQ ID NO96的资料
(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO96Lys His Phe Met Arg His Arg His Gly Val1 5 10(2)SEQ ID NO97的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO97Ala Gly Leu Asn His Trp Trp Lys His Lys1 5 10(2)SEQ ID NO98的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO98Arg Arg Ser Thr Trp His Trp Trp His Ala1 5 10(2)SEQ ID NO99的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(xi)序列描述SEQ ID NO99Val Ala Lys Trp Arg His Trp Asn Arg Gln1 5 10(2)SEQ ID NO100的资料(i)序列特征(A)长度18个碱基对(B)类型核酸(C)链数单链(D)几何结构线性
(ii)分子类型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO100CTCATAGTTA GCGTAACG(2)SEQ ID NO101的资料(i)序列特征(A)长度13个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO101Glu Asn Val Tyr Val Trp Lys Gln Gly Val Asp Val Lys1 5 10(2)SEQ ID NO102的资料(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO102Ile Val Leu Arg Cys His Ser Trp Lys Asp Lys Pro Leu Val Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO103的资料(i)序列特征(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO103Asp Asn Ala Glu Asn Val Tyr Val Trp Lys Gln Gly Val Asp Val Lys AlaMet Thr1 5 10 15(2)SEQ ID NO104的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO104Arg His Val Ala Trp Trp Arg Gln Val Val15l0(2)SEQ ID NO105的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO105Arg His Val Ala Trp Trp Lys Gln Val Val1 5 10(2)SEQ ID NO106的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO106Arg His Val Ala Trp Trp Lys Gln Gly Val1 5 10
(2)SEQ ID NO107的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO107Tyr Val Trp Lys Gln Val Val Asp Val Lys1 5 10(2)SEQ ID NO108的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO108Tyr Val Trp Lys Gln Gly Val Asp Val Lys1 510(2)SEQ ID NO109的资料(i)序列特征
(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO109Arg Trp Trp His Trp Val His Arg Glu Thr1 510(2)SEQ ID NO110的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO110Lys Arg Trp Leu Trp Trp Ala Asn Pro Arg1 5 10(2)SEQ ID NO111的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO111Arg His Leu Trp Trp Gly Gly Arg Met Lys1 5 10(2)SEQ ID NO112的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO112Arg Leu Trp Pro Gln His Arg Gly His Arg1 5 10(2)SEQ ID NO113的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性
(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO113Lys Arg Trp His Ile Arg Pro Thr Ile Arg1 5 10(2)SEQ ID NO114的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO114Lys Arg Phe Lys Thr His Val His Gly Arg1 5 10(2)SEQ ID NO115的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO115Thr Lys Arg Phe Lys His Arg His Phe Leu1 5 10(2)SEQ ID NO116的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO116Ala Lys Trp His Trp His Thr Arg Gly Arg1 5 10(2)SEQ ID NO117的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO117Trp His Arg His Trp Gly Gly Phe Arg Ile1 5 10(2)SEQ ID NO118的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO118Trp His Arg Asn Lys Pro Thr Trp His Ser1 5 10(2)SEQ ID NO119的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO119Trp His Arg Ala Gly Val Arg Ala Lys Val1 510
(2)SEQ ID NO120的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO120Phe Lys Arg Phe Trp His Thr Gly His Arg1 5 10(2)SEQ ID NO121的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO121Met Met Ala Trp His Ala Arg Val Ala Arg1 5 10(2)SEQ ID NO122的资料(i)序列特征
(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO122Trp Ile Trp His Arg Pro Ile Lys Val Lys1 5 10(2)SEQ ID NO123的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO123Trp His Arg Thr Leu Pro Lys Arg Gly His1 5 10(2)SEQ ID NO124的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO124Val Lys His Phe Arg Trp Arg Pro Val Ala1 5 10(2)SEQ ID NO125的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO125Lys Arg His Trp Arg Phe Gln Leu Ser Asn1 5 10(2)SEQ ID NO126的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO126Lys Arg His Arg Leu Ala Ser Met Ala Pro1 5 10(2)SEQ ID NO127的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO127Trp Arg Trp Arg Trp Arg Gly Val Leu Arg1 5 10(2)SEQ ID NO128的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO128Arg Leu His Ala His His Ala Arg His Arg1 5 10(2)SEQ ID NO129的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO129Arg Trp Gly Ala Lys His Arg Val Arg Val1 5 10(2)SEQ ID NO130的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性
(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO130Ala Met Gly Trp Arg Pro Val Lys His Arg1 5 10(2)SEQ ID NO131的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO131Lys Trp Arg Trp Arg Met His Gln His Tyr1 5 10(2)SEQ ID NO132的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO132Trp Leu Ser Lys Leu Gly His Arg His Ala1 510(2)SEQ ID NO133的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO133Lys His Cys Ser Ile His Thr Arg Leu Arg1 5 10(2)SEQ ID NO134的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO134Gly Ser Ala Glu Arg Met Ser Glu Gly His1 5 10(2)SEQ ID NO135的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO135Phe Pro Leu Trp Asn Val Leu Thr Met Thr15 10(2)SEQ ID NO136的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO136Ser Phe Ala Gly Val Gly Trp Phe Ala Leu Leu Gly1 5 10
(2)SEQ ID NO137的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO137Cys Asp Leu Trp Val Cys Phe Leu Asp Gly Gly Gly1 5 10(2)SEQ ID NO138的资料(i)序列特征(A)长度12个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO138Leu Val Ala Arg Phe Pro Pro Pro Tyr Gly Gly Val1 5 10
(2)SEQ ID NO139的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO139Ser Ile Val Trp Leu Thr Arg Pro Lys Gly1 5 10(2)SEQ ID NO140的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO140Cys Arg Tyr Arg Ala Leu Asn Gly Val Leu1 5 10
(2)SEQ ID NO141的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO141Ala Leu Thr Ser Arg Thr Trp Ala Arg Gln1 5 10(2)SEQ ID NO142的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO142Thr Arg Tyr Met Leu Ser Arg Gln Ser Asn1 5 10(2)SEQ ID NO143的资料(i)序列特征
(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO143Ala Met Arg Glu Ala Arg Ile Thr Val Lys1 510(2)SEQ ID NO144的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO144Trp Arg Arg His Val Pro Leu Arg Ile Leu1 5 10(2)SEQ ID NO145的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数
(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO145Phe His Arg Trp Asn Arg Pro Met Val Thr1 5 10(2)SEQ ID NO146的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO146His Arg Tyr Lys Lys Thr Pro Val Pro Met1 5 10(2)SEQ ID NO147的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO147Trp Leu His Val Lys Arg Arg Pro Val Val1 5 10(2)SEQ ID NO148的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO148Trp Val Arg His Lys His Pro Ile Val Pro1 5 10(2)SEQ ID NO149的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO149Leu Ser Met Arg Arg Arg Gln Phe Gln Ser15 10(2)SEQ ID NO150的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO150Phe His Trp Arg Asp Lys Trp Arg Thr Gly1 5 10(2)SEQ ID NO151的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO151Arg Met Arg Arg Pro Gly Ile Thr Val Lys1 510(2)SEQ ID NO152的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO152Gly His Arg Trp Asn Arg Pro Met Val Thr1 5 10(2)SEQ ID NO153的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO153Trp His Arg His Thr Pro Lys Arg Ile Pro1 5 10(2)SEQ ID NO154的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO154Trp His Trp Gln Arg Ser Arg Pro Ala Leu1 5 10(2)SEQ ID NO155的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO155Lys Arg Thr Trp Trp His Tyr Ile Arg Pro1 5 10
(2)SEQ ID NO156的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO156Lys Arg Trp Arg His Ser Leu Pro Ala Ser1 5 10(2)SEQ ID NO157的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO157Ala Tyr Gly Val Arg His Leu Gly Leu Ser1 510(2)SEQ ID NO158的资料
(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO158Lys Lys Trp Gly Gln His Arg Gln Arg Ser1 5 10(2)SEQ ID NO159的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO159Trp Arg Trp Met His Trp Met Pro His Ala1 5 10(2)SEQ ID NO160的资料(i)序列特征
(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO160Trp His Trp Leu Ala Arg His Arg Thr Val1 5 10(2)SEQ ID NO161的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO161Arg His Arg His Arg Gly Phe Gln Pro Arg1 5 10(2)SEQ ID NO162的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO162Arg Gly Trp Arg Trp His Lys Tyr Trp Gln1 5 10(2)SEQ ID NO163的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO163Lys Arg His Ala Trp Met Lys Ser Arg Leu1 5 10(2)SEQ ID NO164的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO164Leu Leu Leu Val Gly Gly Ser Glu Leu Thr1 5 10(2)SEQ ID NO165的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO165Lys Lys Val Trp Met Phe Ser Tyr Asn Glu1 5 10(2)SEQ ID NO166的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO166Leu Ser Cys Arg Gly Cys Arg Ala Phe Val15 10(2)SEQ ID NO167的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO167His Glu Gly Cys Glu Ala Gln Asp Glu Leu1 5 10(2)SEQ ID NO168的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽
(ix)序列描述SEQ ID NO168Ser Val Arg His Ile Trp Phe His Val Lys1 510(2)SEQ ID NO169的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO169Gly Thr Trp Asp Leu Trp Arg Lys Gly Ser1 5 10(2)SEQ ID NO170的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO170Arg Trp Leu Trp Pro Arg Val His Lys Thr1 5 10(2)SEQ ID NO171的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO171His Ser Pro Phe Arg His Val Gln Pro Arg1 5 10(2)SEQ ID NO172的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO172Trp Val Arg Gly His His Arg Glu Val Arg1 5 10
(2)SEQ ID NO173的资料(i)序列特征(A)长度10个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链数(D)几何结构线性(ii)分子类型肽(ix)序列描述SEQ ID NO173Glu Asn Val Tyr Val Trp Lys Gln Gly Val1 5 10
权利要求
1.功能上模仿单克隆抗体的结合位点的分离肽，该单克隆抗体识别人血小板糖蛋白Ib/IX复合物内的表位。
2.根据权利要求1所述的分离肽，其中将单克隆抗体命名为C-34。
3.根据权利要求2所述的分离肽，其中所述的肽包括选自下列组序列的氨基酸序列SEQ ID NO1 AWNWRYREYVSEQ ID NO2 KWNWRNKKYVSEQ ID NO3 LSTWRYFEYVSEQ ID NO4 YLGWRYSEYVSEQ ID NO5 TQMWRAREYLSEQ ID NO6 WRQREYWDPVSEQ ID NO7 EGSWRYRKGGSEQ ID NO8 GYHWWRNWEYSEQ ID NO9 KGFLWRARNWSEQ ID NO10MNWKHWRARHSEQ ID NO11FKWREWRGKLSEQ ID NO12PDRQVRLWVRSEQ ID NO13RVLRHWHPRTSEQ ID NO14GRRVWMLNHGSEQ ID NO15KKGRHHVTRVSEQ ID NO16GGVCKCWQCLSEQ ID NO17FSHSYGSAIRSEQ ID NO18MHGHRRPGLASEQ ID NO19MSKKPHLGLRSEQ ID NO20TMWVELYSLKSEQ ID NO21FVDPGRAGRGSEQ ID NO23FRCCVFSCCLLSSEQ ID NO24GFRCLVSLGGCFSEQ ID NO25YSLWGLPVGDVVSEQ ID NO26LPLLWFNGAGFFSEQ ID NO27VWGLFRGLENGSSEQ ID NO28SLWRQWRGLFVVSEQ ID NO29TLSLFGGRDKGFSEQ ID NO30IGPAVSCLFRVCSEQ ID NO31MSLFPLSFCRLISEQ ID NO32ALFSSVWGDVTLSEQ ID NO33GWFGPFWVRGSGSEQ ID NO34FWVSVGGVEGVVSEQ ID NO35LGAFGGAGFLWRSEQ ID NO36CRGIVFLFVGWLSEQ ID NO37FWLVKGAGAWRFSEQ ID NO39QVRLWARAGAGQSEQ ID NO40GLAVTFGSVLEGSEQ ID NO41VRWMCVIRLGVRSEQ ID NO42RLWGPGVSRPVLSEQ ID NO43CGSSLFRGPRCPSEQ ID NO44LGISSLSFLQLRSEQ ID NO45TWGWDGVSYLFLSEQ ID NO46TRSLFDDFVSLRSEQ ID NO47CYASLFRSRLCASEQ ID NO48DGSVRVVWVRLLSEQ ID NO49LSGFPVALVRFASEQ ID NO50LGGGLLVGSVFPSEQ ID NO51VWARGVFRDRFFSEQ ID NO52TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO53WLGGIFSCLVCGSEQ ID NO54WFLRDVGCGSCLSEQ ID NO55SRCGVFTWCSRSSEQ ID NO56RCLVGYRCWGGVSEQ ID NO57GFRCLVMGGGCASEQ ID NO58CGFDLVCARLFGSEQ ID NO59DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO60ILDGCFFLGRCPSEQ ID NO61CVRWLVSAGCSGSEQ ID NO62CVGCWLVCDVLLSEQ ID NO63CLFVFAAGFACGSEQ ID NO64SCALFGSCFGISSEQ ID NO65CWGGVGVCGLLVSEQ ID NO66KRAWWKQKWVSEQ ID NO67CVGGVASRCGVLSEQ ID NO68SGAVLAGPFGVWSEQ ID NO69CRAFDRVGVCVWSEQ ID NO70RCLVGYVVGGVWSEQ ID NO71VCLVYRSVDCWASEQ ID NO72WRVFVFTCVVWASEQ ID NO73LWREWRGLFAVLSEQ ID NO74SGAVLAGPLWRLSEQ ID NO75FVVRGGTFLFVRSEQ ID NO77TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO78DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO79CAWHRLSFCGLVSEQ ID NO80CFGSALVLAVLA andSEQ ID NO81WFWDMSGEWGGL.
4.根据权利要求2所述的分离肽，其中所述包括对应于SEQ IDNO38WNWRYREYV的氨基酸序列。
5.权利要求3所述的分离肽的片段，其中该片段功能上模仿单克隆抗体C-34的结合位点。
6.根据权利要求5所述的片段，其中所述片段具有对应于SEQ IDNOWNWRYREYV的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的分离肽，其中将单克隆抗体命名为SZ-2。
8.根据权利要求7所述的分离肽，其中所述肽包括选自下列组的氨基酸序列SEQ ID NO83WHWRSSWKSGSEQ ID NO84HRPLSWKGRASEQ ID NO85WHRRPMSWYSSEQ ID NO86ARIKIWKPRWSEQ ID NO87LRGWHWKSLHSEQ ID NO88KKSWWVRMPRSEQ ID NO89AKSWRYWRMPSEQ ID NO9OKRWKVYHRWPSEQ ID NO91LHRWKQSPRTSEQ ID NO92LIRWKPHGWRSEQ ID NO93QKKFFSRWKHSEQ ID NO76KWWVPRHRVWSEQ ID NO82RSKWWVHRHSSEQ ID NO109RWWHWVHRETSEQ ID NO110KRWLWWANPRSEQ ID NO111RHLWWGGRMKSEQ ID NO112RLWPQHRGHRSEQ ID NO113KRWHIRPTIRSEQ ID NO114KRFKTHVHGRSEQ ID NO115TKRFKHRHFLSEQ ID NO116AKWHWHTRGRSEQ ID NO117WHRHWGGFRISEQ ID NO118WHRNKPTWHSSEQ ID NO119WHRAGVRAKVSEQ ID NO120FKRFWHTGHRSEQ ID NO121MMAWHARVARSEQ ID NO122WIWHRPIKVKSEQ ID NO123WHRTLPKRGHSEQ ID NO124VKHFRWRPVASEQ ID NO125KRHWRFQLSNSEQ ID NO126KRHRLASMAPSEQ ID NO127WRWRWRGVLRSEQ ID NO128RLHAHHARHRSEQ ID NO129RWGAKHRVRVSEQ ID NO130AMGWRPVKHRSEQ ID NO131KWRWRMHQHYSEQ ID NO132WLSKLGHRHASEQ ID NO133KHCSIHTRLRSEQ ID NO134GSAERMSEGHSEQ ID NO135FPLWNVLTMTSEQ ID NO136SFAGVGWFALLGSEQ ID NO137CDLWVCFLDGGGSEQ ID NO138LVARFPPPYGGVSEQ ID NO139SIVWLTRPKGSEQ ID NO140CRYRALNGVLSEQ ID NO141ALTSRTWARQSEQ ID NO142TRYMLSRQSNSEQ ID NO143AMREARITVKSEQ ID NO144WRRHVPLRILSEQ ID NO145FHRWNRPMVTSEQ ID NO146HRYKKTPVPMSEQ ID NO147WLHVKRRPVVSEQ ID NO148WVRHKHPIVPSEQ ID NO149LSMRRRQFQSSEQ ID NO150FHWRDKWRTGSEQ ID NO151RMRRPGITVKSEQ ID NO152GHRWNRPMVTSEQ ID NO153WHRHTPKRIPSEQ ID NO154WHWQRSRPALSEQ ID NO155KRTWWHYIRP andSEQ ID NO156KRWRHSLPAS.
9.能够与权利要求1所述的肽结合的分离分子。
10.根据权利要求9所述的分离分子，其中所述的分子是化学合成的。
11.根据权利要求9所述的分离分子，其中该分子包括抗体。
12.根据权利要求9所述的分离分子，其中该分子包括第二个肽。
13.根据权利要求12所述的分离分子，其中所述的第二个肽包括选自下列组序列的氨基酸序列SEQ ID NO94 RHVAWWRQGVSEQ ID NO95 AKHRWWRRPVSEQ ID NO96 KHFMRHRHGVSEQ ID NO97 AGLNHWWKHKSEQ ID NO98 RRSTWHWWHASEQ ID NO99 VAKWRHWNRQSEQ ID NO157AYGVRHLGLSSEQ ID NO158KKWGQHRQRSSEQ ID NO159WRWMHWMPHASEQ ID NO160WHWLARHRTVSEQ ID NO161RHRHRGFQPRSEQ ID NO162RGWRWHKYWQSEQ ID NO163KRHAWMKSRLSEQ ID NO164LLLVGGSELTSEQ ID NO165KKVWMFSYNESEQ ID NO166LSCRGCRAFVSEQ ID NO167HEGCEAQDELSEQ ID NO168SVRHIWFHVKSEQ ID NO169GTWDLWRKGSSEQ ID NO170RWLWPRVHKTSEQ ID NO171HSPFRHVQPR andSEQ ID NO172WVRGHHREVR.
14.根据权利要求9所述的分离分子，其中该分子选自包括DNA分子和RNA分子的组。
15.调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法，该方法包括选择血小板，和将所述的血小板与权利要求9的分子接触，从而影响通过糖蛋白Ib/IX受体的威勒布兰特病因子与血小板的相互作用并调节所述的血小板的粘连，聚集，或凝集。
16.能够结合单克隆抗体C-34的分离肽，该肽包括选自包括下列组的氨基酸序列SEQ ID NO1 AWNWRYREYVSEQ ID NO2 KWNWRNKKYVSEQ ID NO3 LSTWRYFEYVSEQ ID NO4 YLGWRYSEYVSEQ ID NO5 TQMWRAREYLSEQ ID NO6 WRQREYWDPVSEQ ID NO7 EGSWRYRKGGSEQ ID NO8 GYHWWRNWEYSEQ ID NO9 KGFLWRARNWSEQ ID NO10MNWKHWRARHSEQ ID NO11FKWREWRGKLSEQ ID NO12PDRQVRLWVRSEQ ID NO13RVLRHWHPRTSEQ ID NO14GRRVWMLNHGSEQ ID NO15KKGRHHVTRVSEQ ID NO16GGVCKCWQCLSEQ ID NO17FSHSYGSAIRSEQ ID NO18MHGHRRPGLASEQ ID NO19MSKKPHLGLRSEQ ID NO20TMWVELYSLKSEQ ID NO21FVDPGRAGRGSEQ ID NO23FRCCVFSCCLLSSEQ ID NO24GFRCLVSLGGCFSEQ ID NO25YSLWGLPVGDVVSEQ ID NO26LPLLWFNGAGFFSEQ ID NO27VWGLFRGLENGSSEQ ID NO28SLWRQWRGLFVVSEQ ID NO29TLSLFGGRDKGFSEQ ID NO30IGPAVSCLFRVCSEQ ID NO31MSLFPLSFCRLISEQ ID NO32ALFSSVWGDVTLSEQ ID NO33GWFGPFWVRGSGSEQ ID NO34FWVSVGGVEGVVSEQ ID NO35LGAFGGAGFLWRSEQ ID NO36CRGIVFLFVGWLSEQ ID NO37FWLVKGAGAWRFSEQ ID NO39QVRLWARAGAGQSEQ ID NO40GLAVTFGSVLEGSEQ ID NO41VRWMCVIRLGVRSEQ ID NO42RLWGPGVSRPVLSEQ ID NO43CGSSLFRGPRCPSEQ ID NO44LGISSLSFLQLRSEQ ID NO45TWGWDGVSYLFLSEQ ID NO46TRSLFDDFVSLRSEQ ID NO47CYASLFRSRLCASEQ ID NO48DGSVRVVWVRLLSEQ ID NO49LSGFPVALVRFASEQ ID NO50LGGGLLVGSVFPSEQ ID NO51VWARGVFRDRFFSEQ ID NO52TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO53WLGGIFSCLVCGSEQ ID NO54WFLRDVGCGSCLSEQ ID NO55SRCGVFTWCSRSSEQ ID NO56RCLVGYRCWGGVSEQ ID NO57GFRCLVMGGGCASEQ ID NO58CGFDLVCARLFGSEQ ID NO59DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO60ILDGCFFLGRCPSEQ ID NO61CVRWLVSAGCSGSEQ ID NO62CVGCWLVCDVLLSEQ ID NO63CLFVFAAGFACGSEQ ID NO64SCALFGSCFGISSEQ ID NO65CWGGVGVCGLLVSEQ ID NO66KRAWWKQKWVSEQ ID NO67CVGGVASRCGVLSEQ ID NO68SGAVLAGPFGVWSEQ ID NO69CRAFDRVGVCVWSEQ ID NO70RCLVGYVVGGVWSEQ ID NO71VCLVYRSVDCWASEQ ID NO72WRVFVFTCVVWASEQ ID NO73LWREWRGLFAVLSEQ ID NO74SGAVLAGPLWRLSEQ ID NO75FVVRGGTFLFVRSEQ ID NO77TGLLAGPVWRWTSEQ ID NO78DSGVRWFFGFLGSEQ ID NO79CAWHRLSFCGLVSEQ ID NO80CFGSALVLAVLA andSEQ ID NO81WFWDMSGEWGGL.
17.根据权利要求16所述的分离肽的片段，其中该片段能够与单克隆抗体C-34结合。
18.根据权利要求17所述的片段，其中所述片段具有对应于SEQID NO38WNWRYREYV的氨基酸序列。
19.能够与权利要求16所述的肽结合的分离分子。
20.根据权利要求19所述的分离分子，其中所述分子是化学合成的。
21.根据权利要求19所述的分离分子，其中该分子包括抗体。
22.根据权利要求19所述的分离分子，其中该分子包括第二个肽。
23.根据权利要求22所述的分离分子，其中所述的第二个肽包括选自下列组的氨基酸SEQ ID NO94RHVAWWRQGVSEQ ID NO95AKHRWWRRPVSEQ ID NO96KHFMRHRHGVSEQ ID NO97AGLNHWWKHKSEQ ID NO98RRSTWHWWHASEQ ID NO99VAKWRHWNRQSEQ ID NO157AYGVRHLGLSSEQ ID NO158KKWGQHRQRSSEQ ID NO159WRWMHWMPHASEQ ID NO160WHWLARHRTVSEQ ID NO161RHRHRGFQPRSEQ ID NO162RGWRWHKYWQSEQ 1D NO163KRHAWMKSRLSEQ ID NO164LLLVGGSELTSEQ ID NO165KKVWMFSYNESEQ ID NO166LSCRGCRAFVSEQ ID NO167HEGCEAQDELSEQ ID NO168SVRHIWFHVKSEQ ID NO169GTWDLWRKGSSEQ ID NO170RWLWPRVHKTSEQ ID NO171HSPFRHVQPR andSEQ ID NO172WVRGHHREVR.
24.根据权利要求19所述的分离分子，其中该分子选自包括DNA分子和RNA分子的组。
25.调节血小板的粘连，聚集或凝集的方法，该方法包括选择血小板，和将所述的血小板与权利要求19的分子接触，从而通过糖蛋白Ib/IX受体影响威勒布兰特病因子与血小板的相互作用并调节所述的血小板的粘连，聚集或凝集。
26.能够与单克隆抗体C-34结合的分离肽，该肽包括对应于SEQID NO38WNWRYREYV的氨基酸序列。
27.能够与单克隆抗体SZ-2结合的分离肽，该肽包括选自下列组的氨基酸序列SEQ ID NO83 WHWRSSWKSGSEQ ID NO84 HRPLSWKGRASEQ ID NO85 WHRRPMSWYSSEQ ID NO86 ARIKIWKPRWSEQ ID NO87 KRGWHWKSLHSEQ ID NO88 KKSWWVRMPRSEQ ID NO89 AKSWRYWRMPSEQ ID NO90 KRWKVYHRWPSEQ ID NO91 LHRWKQSPRTSEQ ID NO92 LIRWKPHGWRSEQ ID NO93 QKKFFSRWKHSEQ ID NO76 KWWVPRHRVWSEQ ID NO82 RSKWWVHRHSSEQ ID NO109RWWHWVHRETSEQ ID NO110KRWLWWANPRSEQ ID NO111RHLWWGGRMKSEQ ID NO112RLWPQHRGHRSEQ ID NO113KRWHIRPTIRSEQ ID NO114KRFKTHVHGRSEQ ID NO115TKRFKHRHFLSEQ ID NO116AKWHWHTRGRSEQ ID NO117WHRHWGGFRISEQ ID NO118WHRNKPTWHSSEQ ID NO119WHRAGVRAKVSEQ ID NO120FKRFWHTGHRSEQ ID NO121MMAWHARVARSEQ ID NO122WIWHRPIKVKSEQ ID NO123WHRTLPKRGHSEQ ID NO124VKHFRWRPVASEQ ID NO125KRHWRFQLSNSEQ ID NO126KRHRLASMAPSEQ ID NO127WRWRWRGVLRSEQ ID NO128RLHAHHARHRSEQ ID NO129RWGAKHRVRVSEQ ID NO130AMGWRPVKHRSEQ ID NO131KWRWRMHQHYSEQ ID NO132WLSKLGHRHASEQ ID NO133KHCSIHTRLRSEQ ID NO134GSAERMSEGHSEQ ID NO135FPLWNVLTMTSEQ ID NO136SFAGVGWFALLGSEQ ID NO137CDLWVCFLDGGGSEQ ID NO138LVARFPPPYGGVSEQ ID NO139SIVWLTRPKGSEQ ID NO140CRYRALNGVLSEQ ID NO141ALTSRTWARQSEQ ID NO142TRYMLSRQSNSEQ ID NO143AMREARITVKSEQ ID NO144WRRHVPLRILSEQ ID NO145FHRWNRPMVTSEQ ID NO146HRYKKTPVPMSEQ ID NO147WLHVKRRPVVSEQ ID NO148WVRHKHPIVPSEQ ID NO149LSMRRRQFQSSEQ ID NO150FHWRDKWRTGSEQ ID NO151RMRRPGITVKSEQ ID NO152GHRWNRPMVTSEQ ID NO153WHRHTPKRIPSEQ ID NO154WHWQRSRPALSEQ ID NO155KRTWWHYIRP andSEQ ID NO156KRWRHSLPAS..
28.根据权利要求27所述的分离肽的片段，其中该片段能够与单克隆抗体SZ-2结合。
29.能够与权利要求27所述的肽结合的分离分子。
30.根据权利要求29所述的分离分子，其中所述分子是化学合成的。
31.根据权利要求29所述的分离分子，其中分子包括抗体。
32.根据权利要求29所述的分离分子，其中该分子包括第二个肽。
33.根据权利要求29所述的分离分子，其中该分子选自包括DNA分子和RNA分子的组。
34.调节血小板的粘连，聚集，或凝集的方法，该方法包括选择血小板和将所述的血小板与权利要求29所述分子的分子接触，从而通过糖蛋白Ib/IX受体影响威勒布兰特病因子与血小板的相互作用并调节所述的血小板的粘连，聚集，或凝集。
全文摘要
本发明涉及功能上模仿单克隆抗体的结合位点的分离的肽。该单克隆抗体识别人血小板糖蛋白Ib/IX复合物内的表位。该肽称为mimotope。本发明还提供了能结合该肽,或mimotope的分离的分子,该分子可能是抗体,第二个肽,碳水化合物,DNA分子,RNA分子,或其它天然或化学合成的分子。该分离分子被称为抗mimotope。本发明特别提供了模仿单克隆抗体C－34和SZ－2的结合位点的mimotopes,以及C－34mimotopes的抗mimotopes。
文档编号A61K38/00GK1202175SQ96198270
公开日1998年12月16日 申请日期1996年11月8日 优先权日1995年11月13日
发明者乔纳森·L·米勒, 维基·A·莱尔 申请人:纽约州立大学研究基金会