专利名称：抗新城疫卵内免疫接种方法
技术领域：
本发明涉及一种适于抗新城疫感染卵内免疫接种的疫苗、一种新城疫病毒株在制备上述疫苗中的应用、以及通过用含有新城疫病毒株的疫苗进行卵内免疫接种预防家禽新城疫感染的方法。
Sharma等人(美国专利4458630)曾详细叙述了含病毒疫苗的卵内免疫接种方法。具体地说，该专利教导了可以将活的马立克氏病病毒注入到卵内的羊水中，然后使胚胎感染，疫苗病毒复制达到高效价，从而诱导所处理的胚胎中形成保护性抗体。(Sharma，AvianDiseases 29，1155，1167-68，1985)。
Ahmad等人的美国专利5427791描述了抗新城疫的胚胎免疫接种方法。在该专利中，为了实现活新城疫病毒(NDV-B1株)的非致病性减毒，使用甲磺酸乙酯(EMS)对病毒进行了修饰。
这类修饰的缺点是，EMS是一种诱变剂，所以人们怀疑该疫苗也会起诱变剂的作用，这对疫苗的正常使用是不利的。另一方面，未经处理的NDV-B1不能用于卵内免疫接种，因为卵内注射这种未修饰的病毒后几乎所有的胚胎都会死亡。
另外，已发现这些修饰的病毒的最低有效剂量和最大安全剂量之间相差不到10(以对数计不到1)。就实用的目的而言，并考虑到由生产过程造成的及由于储存过程中的损耗产生的误差，上述差额过小。
现已出人意料地发现，含有NDW株新城疫病毒的疫苗制剂特别适用于卵内应用。因此，本发明涉及NDW株新城疫病毒在家禽的卵内免疫接种中的应用。本发明的另一个实施方案涉及NDW株新城疫病毒在制备适于给家禽卵内施用的疫苗中的应用。
新城疫病毒NDW株的样品保藏于巴斯德研究所的国立微生物保藏中心(CNCM of Institut Pasteur)，保藏编号为781。参见EP 351908。
NDW株的施用量最好在每卵10-1至103之间，尤其是10-0.7至102.2之间。
为获得最佳免疫效果，发现可以在孵化17-19天，优选孵化18天时施用含NDW的疫苗。
实施例1
用于卵内施用的NDW疫苗的制备将原种病毒(保藏于巴斯德研究所的国立微生物保藏中心，保藏编号为I-781)接种到含胚SPF鸡卵的尿囊腔中，制得工作种子病毒储液。
以同样方式将工作种子病毒接种到含胚SPF卵的尿囊腔中，制得疫苗。孵化后，收集含有疫苗病毒的尿囊液。将尿囊液稀释并于-50℃下冷冻储存。
分装前，将尿囊液融化，进一步稀释至所需的疫苗病毒浓度，与稳定剂混合后分装到小瓶中并冷冻干燥。
实施例2NDW疫苗在SPF卵内的安全性利用Sharma和Burmester所述的方法(Avian Diseases 26(1)，134-149)，在羊膜中孵化18天时，用实施例1所述的疫苗对SPF卵进行免疫接种。
按下表所示的方案对6组卵进行免疫接种。
表1用NDW疫苗对SPF卵进行卵内免疫接种的安全性组别 疫苗剂量(以EID50计) 卵数 孵化百分比1 102.225 762 101.225 843 100.225 844 10-0.825 885 10-1.825 926 对照 25 96结论用NDW疫苗在胚胎发育18天时对SPF卵进行卵内免疫接种，在每卵101.2至102.2EID50之间的最大剂量下是安全的。
实施例3卵内NDW疫苗在带有母体抗体的商品鸡卵中的安全性利用Sharma和Burmester所述的方法(Avian Diseases 26(1)，134-149)，在羊膜中孵化18天时，用实施例1所述的疫苗对带有母体抗体的商品鸡卵进行免疫接种。
按下表所示的方案对8组卵进行免疫接种。
表2用NDW疫苗对商品鸡卵进行卵内免疫接种的安全性组别 疫苗剂量(以EID50计) 卵数 孵化百分比1 10650 682 10550 703 10450 744 10350 765 10250 916 10150 847 10050 968 对照50 88结论对带有母体抗体的鸡卵进行卵内免疫接种，在剂量高达每卵至少102EID50时是安全的(对孵化没有任何影响)。
实施例4用NDW疫苗对SPF卵进行卵内免疫接种的效力在SPF卵中检查按实施例1制备的NDW疫苗的效力。
预防作用的参数为接种后的抗体响应(血凝抑制试验＝HI试验)和接种后死亡百分率。接种病毒为新城疫病毒Hertz 33/56株，每只鸡的施用量为105.0EID50。
按下表所示的方案对5组卵进行免疫接种。
表3SPF卵卵内接种的效力组别疫苗剂量HI效价接种后死亡百分率(以EID50计) (以2log计)4周6周1101.74.6未测 02101.05.15.7 03100.03.63.3 0410-0.73.33.2 115对照 1.01.0 100结论用NDW疫苗在胚胎发育18天时对SPF卵进行卵内免疫接种是有效的。每卵约10-0.7的疫苗剂量是卵内NDW免疫接种的最小剂量。
实施例5用NDW疫苗对带有母体抗体的商品鸡卵进行卵内免疫接种的效力在带有母体抗体的商品鸡卵中检查按实施例1制备的NDW疫苗的效力(1日龄时HI效价为5.1)。
预防作用的参数为接种后的抗体响应(HI试验)和接种后死亡百分率。接种病毒为新城疫病毒Hertz 33/56株，每只鸡的施用量为105.0EID50。
按下表所示的方案对3组卵进行免疫接种。
表4商品鸡卵卵内接种的效力组别疫苗剂量3周龄时接种后3周龄时(以EID50计) HI效价 死亡百分率(以2log计)1 1023.9 02 10-12.4 03 对照 1.0 100结论用NDW疫苗在胚胎发育18天时对商品鸡卵进行卵内免疫接种是有效的，并不由于母体抗体的存在而受到影响。
权利要求
1.一种用于抗新城疫感染的家禽卵内免疫接种疫苗，其特征在于该疫苗含有一种具有NDW株特征的病毒，NDW株的样品保藏于巴斯德研究所的国立微生物保藏中心，保藏编号为I-781。
2.权利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒的施用量为每卵10-1至103EID50之间。
3.权利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒的施用量为每卵10-0.7至102.2EID50之间。
4.权利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒在孵化17至19天时卵内施用。
5.权利要求1的疫苗，其特征在于NDW株病毒在孵化18天时卵内施用。
6.新城疫病毒NDW株在制备适于卵内免疫接种的疫苗中的应用，所述新城疫病毒NDW株保藏于巴斯德研究所的国立微生物保藏中心，保藏编号为I-781。
7.权利要求6的应用，其特征在于NDW株病毒的量为每卵10-1至103之间。
8.权利要求6的应用，其特征在于NDW株病毒的量为每卵10-0.7至102.2之间。
9.一种预防或治疗家禽新城疫感染的方法，该方法包括卵内施用一种疫苗，该疫苗含有一种具有NDW株特征的病毒，NDW株的样品保藏于巴斯德研究所的国立微生物保藏中心，保藏编号为I-781。
全文摘要
本发明涉及一种用于抗新城疫感染的家禽卵内免疫接种疫苗。该疫苗含有一种命名为NDW的新城疫病毒株,NDW保藏于巴斯德研究所的国立微生物保藏中心,保藏编号为I－781。
文档编号A61P31/12GK1240360SQ97180718
公开日2000年1月5日 申请日期1997年12月16日 优先权日1996年12月17日
发明者F·G·达维拉尔 申请人:戴米纳科有限公司