专利名称：新的半胱氨酸衍生物,它们的制备方法和含有它们的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的基质金属蛋白酶抑制剂，该抑制剂以使用在氨基和羧基官能基上衍生有非肽型基团的L-或D-半胱氨酸(式1)为基础。本发明还涉及这种抑制剂的制备方法及其在治疗学领域中的应用。
基质金属蛋白酶(MMP)家族已变成药物设计的主要目标，因为这些酶与组织重塑及结缔组织转化有关，从而被卷入下述几种疾病，其中(i)发生快速的胞外基质降解，例如在充血性心力衰竭和高度转移性肿瘤细胞外渗期间，或者(ii)发生缓慢的胞外基质降解，例如关节硬化损害形成与破裂、骨关节炎中的软骨基质损失、骨质疏松中的骨基质退化、牙周病中的龈退化、Alzheimer斑块形成中的基质重塑与沉积和类风湿关节炎。
MMP家族目前包括14个成员，其中十个是以可溶形式由细胞分泌形成，四个是膜结合酶。MMP是依赖于锌并且需要钙的酶，它们受组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)家族成员之一的抑制。已研制出作为异羟肟酸酯、N-羧基烷基衍生物、膦酰胺酸酯和次膦酸酯，以及用硫羟基作为活性部位锌原子的配体的这类酶的合成抑制剂。个约80个残基的N-端前肽该前肽形成一个分离的较小结构域，其中包含三个α-螺旋结构和一个占据活性位置的伸展肽。所有这些结构中的催化域都含有两个Zn2+离子，即，一个“结构”锌离子和一个“催化”锌离子。“催化”锌离子被具有共有序列HEXXHXXGXXH的三个组胺酰残基的侧链配位。受抑制的酶中的“催化”锌的第四配体是抑制剂的配位基团，所述抑制剂如异羟肟酸酯或羧酸酯；在前肽pro-MMP中，第四配体是半胱氨酸残基的硫羟基(1)。
相应地，至今提出的基于硫羟基的胶原酶抑制剂通常是包含半胱氨酸或类半胱氨酸氨基酸的肽结构，且其设计是以底物的结合模式为基础，近来则提到含有半胱氨酸的前肽。
本发明涉及一类如式I所示的由半胱氨酸以非肽方式衍生形成的新的MMP抑制剂，其制备方法，含有这些化合物的药物组合物及其在医学中的治疗用途。
其中A代表-CO-，-SO2-，-NH-CO-或-O-CO-；R1代表氢，含1-15个碳原子的直链或支链饱和或不饱和烃基，或是被卤素、巯基、羟基、烷氧基、氨基或硝基取代的、或者被可任选有一个或几个取代基的碳环非芳族或芳族环系或者可任选被取代的芳族或非芳族杂环取代的C1-C15烃基，或其药理上可接受的盐或其旋光形式。
R代表羟基，含1-15个碳原子的直链或支链饱和或不饱和烃基，或是被可任选有一个或几个取代基的碳环芳族或非芳族环系或者可任选被取代的芳族或非芳族杂环取代的C1-C15烃基，或其药理上可接受的盐或其旋光形式。
关于式I，R或/和R1代表含1-15个碳原子的支链饱和或不饱和烃基，选自甲基、乙基、丙基、正丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等，乙烯基等，以及相应的炔基，例如乙炔。
该烃基的碳环芳族或非芳族取代基选自C3-C6环烷基，如环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或C6-C14碳环芳族取代基，如苯基，萘基或蒽基，或杂环非芳族取代基，如吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基，或杂环芳族取代基，如吡咯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、嘧啶基、嘌呤基、吲哚基、喹啉基、咔唑基。
碳环芳族或非芳族环系或杂环可任选地被一个或几个取代基取代，所述取代基如卤素、硝基、羟基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氨基、巯基、羧基、氰基或磺基。
如果A代表-CO-，则残基R1CO-优选选自以下羧酸的残基；甲酸、乙酸、丙酸、己酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生四烯酸、山萮酸、十八碳烯酸、亚油酸、亚麻酸、3-巯基丙酸、二羟乙酸、丙二酸、琥珀酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、3-硝基丙酸、萘基乙酸、4-氨基苯乙酸、丙烯酸、肉桂酸、4-氨基肉桂酸、氨基巴豆酸、富马酸、马来酸、苯二甲酸、苯甲酸、硝基苯甲酸、3-氨基苯甲酸、4-氨基苯甲酸、氨茴酸、水杨酸、3-氨基水杨酸、4-氨基水杨酸、5-氨基水杨酸、萘甲酸、对苯基苯甲酸、菲甲酸、烟酸、3-氨基吡嗪-2-碳酸、吡啶羧酸、哌嗪羧酸、哌啶羧酸。
如果A代表-SO2，则残基R1SO2-优选选自以下磺酸的残基甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、3-羟基丙磺酸、邻氨基苯磺酸(苯胺-2-磺酸)、萘磺酸、萘胺磺酸、氨基甲磺酸、2-巯基乙磺酸、2-氯乙磺酸、N，N′-二甲基氨基磺酸、哌啶磺酸、5-(2-氨基乙氨基)-1-萘磺酸、碘酰喹啉磺酸、吡啶-3-磺酸、对甲苯磺酸、2-(对甲苯氨基)萘-6-磺酸、癸基甲磺酸、2-[(2-氨基-2-氧乙基)氨基]乙磺酸、2-(N-环己基氨基)乙磺酸、2-[二(2-羟乙基)氨基]乙磺酸、N-2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸、2-(N-吗啉代)乙磺酸、哌嗪-N，N′-二(2-乙磺酸)、3-(2-吡啶基)-5，6-二(4-苯磺酸)-1，2，4-三嗪。
如果A代表-NHCO-，则残基R1-NH-CO-优选选自以下脲衍生物的残基正丁基一，R-(+)-α-苯乙基-，R-(-)-1-(1-萘基)-乙基-，乙基-，丙基-，己基-，辛基-，苄基-，氯苄基-，甲基苄基-，3-吡啶甲基-，2-(氨甲基)-吡啶基脲。
如果A代表-O-CO-，则残基R1-O-CO-优选选自以下氨基甲酸酯的残基氨基甲酸甲酯，氨基甲酸乙酯，氨基甲酸9-芴基甲酯，氨基甲酸9-(2-磺基)芴基甲酯，氨基甲酸9-(2，7-二溴)芴基甲酯，氨基甲酸4-甲氧基苯甲酰甲基酯，氨基甲酸2，2，2-三氯乙基酯，氨基甲酸2-苯基乙酯，氨基甲酸1-(1-金刚烷基)-1-甲基乙酯，氨基甲酸1，1-二甲基-2-卤代乙基酯，氨基甲酸1-甲基-1-(4-联苯基)-1-甲基乙酯，氨基甲酸2-(2′-吡啶基)乙酯，氨基甲酸1-金刚烷基酯，氨基甲酸乙烯基酯，氨基甲酸烯丙酯，氨基甲酸1-异丙基烯丙酯，氨基甲酸4-硝基肉桂酯，氨基甲酸8-喹啉基酯，氨基甲酸环己酯，氨基甲酸苄酯，氨基甲酸对甲氧基苄酯，氨基甲酸对硝基苄酯，氨基甲酸对溴苄酯，氨基甲酸9-蒽基甲酯，氨基甲酸二苯基甲酯，氨基甲酸2-甲基磺酰乙酯，氨基甲酸2-(对甲苯磺酰)乙酯，氨基甲酸4-甲硫基苯酯。
R优选选自以下基团乙基-，丙基-，己基-，辛基-，苄基-，4-氯苄基-，4-甲基苄基-，3-吡啶甲基-，2-(甲基)-吡啶基-，4-(甲基)吡啶基-，3-苯基丙基-，4-苯基丁基-，2-(对甲苯基)乙基-，3-硝基苄基-，苄乙基-，2-苯乙基-，金刚烷基-，吡啶基-，苯基-，胆甾烯基-，萘基-，4-苯氧基苯基或吲哚基乙基-。
优选的式I化合物是实施例5-22的化合物及下表中的化合物<
>
式I化合物由不同结构和不同性质的三部分组成。螯合基团SH用于活化位置的Zn2+离子，疏水基团R1或R与疏水的S′1蛋白质袋相互作用，并且对于沿p′底物结合裂隙的附加的疏水相互作用产生影响。
通式I的抑制剂可发展成不同病理含义(例如骨质疏松、类风湿性关节炎、牙周病、关节硬化、充血性心力衰竭、肿瘤侵袭和转移以及血管形成)所要求的不同MMP的选择性抑制剂。
已知文献中提到过类似的化合物。但是，它们是肽化合物，而且在人血浆中的半衰期很差。
由提高代谢稳定性考虑来选择半胱氨酸衍生物的化学结构。相应地，将氨基用羧酸酰化来产生酰胺，但最好是已知对于酶促代谢作用更稳定的尿烷基衍生物。类似地，C-端的羧基被衍生成酰胺而不是酯化，以便避免由于脂被脂酶水解而造成的快速清除速率。另外，选择已知对肽酶更稳定的N-烷基和N-芳基酰胺。
采用经典的有机合成步骤来合成抑制剂(2)。相关的式II L-和D-胱氨酸衍生物按照肽化学的标准方法制备，然后按照示意
图1，用EDCI/HOBt酰胺化。随后如流程1所示，利用还原剂如硫醇或者最好是用膦类如三丁基膦，将式III胱氨酸化合物还原成式I半胱氨酸衍生物。
流程1.合成本发明MMP抑制剂的一般路线本发明化合物特异地抑制MMP，它们在药理上适用于治疗类风湿性关节炎和溶胶原活性在其中是促进因素的有关疾病，例如，角膜溃疡、骨质疏松、牙周病、佩吉氏病、龈炎、肿瘤侵袭、营养不良性表皮松解症、大泡形成、全身性溃疡、表皮溃疡、胃溃疡等。这些化合物特别适用于治疗类风湿性关节炎(原发慢性多关节炎，PCP)、全身性红斑狼疮(SLE)、小儿类风湿性关节炎、肖格仑综合症(口眼干燥关节炎综合症)、结节性多动脉炎及有关的血管炎如韦格纳肉芽肿病、巨细胞动脉炎、肺出血肾炎综合症、过敏性脉管炎、多肌炎和皮肌炎、全身性硬皮病、贝切特综合症、赖特尔综合症(关节炎+尿道炎+结膜炎)、混合性结缔组织病(Sharp氏综合症)、关节强硬脊椎炎(M.Bechterew)。
本发明化合物可以经任何合适的途径给药，优选以适合该途径的药物组合物形式和对预定的治疗有效的剂量给药。为防止或抑制病症进展，所需的本发明化合物的治疗有效剂量可容易地由本领域普通技术人员确定。
因此，本发明提供了一类新的药物组合物，其中含有一种或多种本发明化合物和与之配合的一种或多种可药用的无毒载体和/或辅剂(本文统称为“载体材料”)以及如果需要的话，含有其它活性成分。本发明化合物和组合物可以例如血管内、腹膜内、皮下、肌内或局部给药。
对于所有的给药，药物组合物可以是片剂、胶囊、悬浮液或液体形式。药物组合物优选制成含特定数量活性组分的剂量单位形式。这类剂量单位的实例是药片或胶囊。对于哺乳动物，合适的日剂量可以随患者的状况及其它因素有很大变化。但是，每kg体重约0.1-300mg、特别是每kg体重约1-30mg的剂量可能是合适的。活性成分也可以用注射方式给药。
用本发明化合物和/或组合物治疗疾病时的剂量方案要根据多种因素选定，包括患者的类型、年龄、重量、性别和健康状况，感染的严重性，给药的途径及使用的具体化合物，因此可以有很大变化。
为治疗的目的，本发明化合物通常与一种或多种适合指定用药途径的辅剂组合。如果是口服，化合物可以与乳糖、蔗糖、淀粉、链烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，然后压片或灌入胶囊以方便服用。或者是，可以将化合物溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠和/或各种缓冲剂中。其它的辅剂和给药方式也是药学领域中广为人知的。当然，在任何指定情形下的合适剂量都取决于所治疗的病症的本质和严重性、用药的途径和所涉及的哺乳动物的物种，包括其大小和任何个体特异性。
有代表性的载体、稀释剂和辅剂包括例如水、乳糖、明胶、淀粉、硬脂酸镁、滑石、植物油、树胶、聚亚烷基二醇、凡士林等。药物组合物可以作成固体形式，例如颗粒、粉末或栓剂，或作成液体形式，例如溶液、悬浮液或乳状液。药物组合物中可以加入常规的药物辅剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂等。
为用于治疗类风湿性关节炎，本发明化合物可以以任何方便的途径给药，优选以适合该途径的药物组合物形式和对于预想的治疗有效的剂量给药。在治疗关节炎时，可以方便地采用口服或关节内注射到受侵袭的关节中的方式给药。
如上所述，服用的剂量和治疗方案要取决于例如疾病、其严重程度、所治疗的患者及其对治疗的响应，因此可以有很大的变化。酶试验使用MMP8(Phe79-MMP8)和MMP3的催化域进行抑制试验。酶试验是在25℃下于10mM CaCl2、100mM NaCl、50mMTris/HCl(pH7.6)中进行，酶浓度为8nM，对于MMP8和MMP3分别使用荧光底物Dnp-Pro-Leu-Gly-Leu-Trp-Ala-D-Arg-NH2(Bachem M-1855，1×10-5M)和Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH2(Bachem M-2110，4×10-6M)。基本上按照Stack等(3)所述(对MMP8)和Nagase等(4)所述(对于MMP3)进行测定。在100秒内监测350nm(MMP8)或390nm(MMP3)处荧光的增强，以确定水解的初始速度。动力学数据的评价按照Copeland等(5)所述进行。
表I.用通式I的非肽L-半胱氨酸衍生物抑制MMP8和MMP3的实例
合成一般方法A)酰胺化将1mmol N，N′-尿烷基胱氨酸、2mmol HOBT(羟基苯并三唑)和2.08mmol EDCI(N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐)溶解或悬浮于10ml THF中。胺的加入量是过剩的(2.5-5mmol)，在盐酸盐的情形，加入等量的N-甲基吗啉。将反应混合物在室温下搅拌过夜，浓缩至小体积，分配在乙酸乙酯和水之中。有机层用5％ NaHCO3、5％KHSO4和水洗二次，用MgSO4干燥。蒸发溶剂，残余物自乙酸乙酯中用合适的溶剂(如石油醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚或戊烷)沉淀。
B)还原胱氨酸化合物(1mmol)在10ml 95％三氟乙醇中与1.5mmol三丁基膦反应。将反应混合物在室温下搅拌过夜，蒸发至小体积，用乙酸乙酯稀释后，用合适的溶剂如石油醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚或戊烷使产物沉淀。N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸异羟肟酸酯(5a)由N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸(2)和羟胺按照步骤(A)制备。产率22％；TLC上均一(溶剂体系氯仿/甲醇，4∶1；Rf＝0.5)。
FAB-MSm/z＝539.2[M+H+]；C22H26N4O8S2计算值M＝538.2。苄氧羰基-L-半胱氨酸异羟肟酸酯(5)按照步骤(B)由5a制备。用快速层析法纯化(洗脱剂CH2Cl2/MeOH，95∶5，随后45∶5)。产率18％。1H-NMR(d6-DMSO)10.7(bs，1H，NHOH)；8.89(bs，1H，OH)；7.50(d，1H，NHureth.)；7.38(m，5H，arom.H′s)；5.03(s，2H，CH2v.Z)；3.99(m，1H，H-C(α))；2.75/2.66(2xm，2H，β-CH2)；2.29(bs，1H，SH).二叔丁氧羰基-L-胱氨酸二苄基酰胺(6a)由N，N′-二叔丁氧羰基-L-胱氨酸(12)和苄胺按照步骤(A)制备。产率77％。在TLC上均一(溶剂体系环己烷/氯仿/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.7)。L-胱氨酸二苯甲酰胺盐酸盐(6b)13.87g(22.4mmol)6a在100ml 4.6M HCl/二噁烷中于室温下搅拌过夜，收集沉淀，用乙醚充分洗。产量11g(定量)。N，N′-二乙酰基-L-胱氨酸二苯甲酰胺(6c)将300mg(0.61mmol)6b分配在乙酸乙酯和40ml NaHCO3(5％)之中，然后与乙酸酐(0.27g，2.6mmol)反应。有机层用水洗，用MgSO4干燥，蒸发至干。产率94％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/氯仿/乙酸45∶45∶10，Rf＝0.4)。N-乙酰基-L-半胱氨酸苯甲酰胺(6)将6c按照步骤(B)还原。产率65％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.7)；熔点186-189℃。1H-NMR(d6-DMSO)8.56(t，1H，NH，酰胺)，8.23(d，1H NH 尿烷)；7.32-7.09(m，5H，芳香H′s)；4.56，或4.38(m，1H，H-Cα)；4.28(m，2H，CH2-Bn)；3.12/2.89，或2.79/2.69(2xm，2H，β-CH2)；2.30(bs，1H，SH)；1.87(d，3H，CH3).FAB-MSm/z＝253.1[M+H+]；C12H16N2O2S计算值M＝252.1N，N-二甲酰-L-胱氨酸二苯甲酰胺(7a)由6b和甲酸按照步骤(A)制备。产率59％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10；Rf＝0.1)。N-甲酰-L-半胱氨酸苯甲酰胺(7)按照步骤(B)还原7a。产率62％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸；45∶45∶10；Rf＝0.45)；熔点180-183℃。1H-NMR(d6-DMSO)8.58(t，1H，NH，酰胺)；8.35(d，1H，NH 尿烷)；8.10(s，1H，甲酰基-H)；7.33-7.21(m，5H，芳香H′s)；4.49，(m，1H，H-Cα)；4.30(d，2H，CH2-Bn)；2.82/2.72(2xm，2H，β-CH2)；2.26(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝239.0[M+H+]；C11H14N2O2S计算值M＝238.3叔丁氧羰基-L-半胱氨酸苯甲酰胺(8)按照步骤(B)还原6a。产率38％，在TLC上均一(溶剂体系庚烷/叔丁醇/乙酸，5∶1∶1，Rf＝0.7)；熔点97-100℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.38(m，1H，NH，酰胺)；7.32-7.21(m，5H，芳香H′s)；6.95(d，1H，NH-尿烷)；4.29(d，2H，CH2-Bn)；4.08(m，1H，H-Cα)；2.81/2.68(2xm，2H，β-CH2)；2.29(bs，1H，SH)；1.40(s，9H，t-Bu).FAB-MSm/z＝311.1[M+H+]；C15H22N2O3S计算值M＝310.1N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸二苯甲酰胺(9a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和苯甲胺按照(A)得到。产率90％。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸苯甲酰胺(9)按照(B)还原9a。产率41％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10；Rf＝04)；熔点148-152℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.50(m，1H，NH，酰胺)；7.49(d，1H，NH 尿烷)；7.37-7.23(m，10H，芳香，H′s)；5.06(dd，2H，CH2v.Z)；4.30(d，2H，CH2-Bn)；4.16(m，1H，H-Cα)；2.84/2.70(2xm，2H，β-CH2)；2.33(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝345.0[M+H+]；C18H20N2O3S计算值M＝344.4N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸二-4-吡啶基甲酰胺(10a)由N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸和4-(氨甲基)吡啶按照步骤(A)制备。产率59％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.65)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-4-吡啶基甲酰胺(10)由10a按照步骤(B)制备。产率65％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.8)；熔点122-125℃。1H-NMR(d6-DMSO)8.61(t，1H，NH，酰胺)；8.48/7.37/7.25(m，分别为，9H，芳香H′s)；7.56(d，1H，NH-尿烷)；5.08(dd，2H，CH2，Z)；4.32(d，2H，CH2-Bn)；4.18(m，1H，H-Cα)，2.87/2.72(2xm，2H，β-CH2)；2.40(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝346.2[M+H+]；C17H19N3O3S计算值M＝345.1N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸二-3-吡啶基甲酰胺(11a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和3-(氨甲基)吡啶按照步骤(A)得到。产率69％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.2)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-3-吡啶基甲酰胺(11)按照步骤(B)还原11a。产率14％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.8)；熔点125-127℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.58(t，1H，NH，酰胺)；8.50/8.45/7.65/7.36(m，分别为，9H，芳香，H′s)；7.52(d，1H，NH-尿烷)；5.07(dd，2H，CH2v.Z)；4.42(d，2H，CH2-Bn)；4.15(m，1H，H-Cα)；2.82/2.71(2xm，2H，β-CH2)；2.36(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝346.1[M+H+]；C17H19N3O3S计算值M＝345.1N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸二-2-吡啶基甲酰胺(12a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和2-(氨甲基)吡啶按照步骤(A)得到。产率96％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.7)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-2-吡啶基甲酰胺(12)按照(B)还原12a。产率33％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.8)；熔点129-131℃。1H-NMR(d6-DMSO)8.59(t，1H，NH，酰胺)；8.48/7.72/7.36-7.22(m，分别为，9H，芳香H′s)；7.52(d，1H，NH-尿烷)；5.07(dd，2H，CH2v.Z)；4.49(d，2H，CH2-Bn)；4.20(m，1H，H-Cα)；2.85/2.72(2xm，2H，β-CH2)；2.42(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝346.1[M+H+]；C17H19N3O3S计算值M＝345.1N，N′-二苯甲酰-L-胱氨酸二苯甲酰胺(13a)由6a和苯甲酸按照(A)制备。产率78％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸；45∶45∶10，Rf＝0.65)。N-苯甲酰-L-半胱氨酸苯甲酰胺(13)按照步骤(B)还原13a。产率57％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸；45∶45∶10，Rf＝0.55)；熔点174-176℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.56(t，1H，NH，酰胺)；7.92(d，1H，NH 尿烷)；7.57-7.22(m，10H，芳香H′s)；4.59，(m，1H，H-Cα)，4.31(d，2H，CH2-Bn)；2.98/2.89(2xm，2H，β-CH2)；2.41(t，1H，SH)FAB-MSm/z＝315.1[M+H+]；C17H18N2O2S计算值M＝314.1N，N′-二(甲苯磺酰基)-L-胱氨酸二苯甲酰胺(14a)390mg(0.794mmol)6b与180mg(0.952mmol)甲苯磺酰氯在6ml吡啶中反应。室温下搅拌12小时后，滤出固体，将滤液加甲苯、最后加叔丁基甲醚蒸发至干。产率81％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.7)。N-甲基磺酰-L-半胱氨酸苯甲酰胺(14)按照(B)还原14a。产率54％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，4∶1，Rf＝0.6)；熔点180-182℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.41(t，1H，NH，酰胺)；7.98/7.68/7.35-7.14(m，分别为and d′s，10H，芳香 H′s，NH 尿烷)；4.13(d，2H，CH2-Bn)；3.86(m，1H，H-Cα)；2.59(m，2H，β-CH2)；2.38(s，3H，CH3)；2.17(t，1H，SH).FAB-MSm/z＝365.1[M+H+]；C17H20N2O3S计算值M＝364.1N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸二-2-苯基乙酰胺(15a)由N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸和2-苯基乙胺根据步骤(A)得到。产率34％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，19∶1，Rf＝0.8)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-2-苯基乙酰胺(15)按照(B)还原15a。产率61％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.6)；熔点119-121℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.02(t，1H，NH，酰胺)；7.39-7.18(m，11H，芳香H′s，NH尿烷)；5.03(dd，2H，CH2v.Z)，4.06(m，1H，H-Cα)；2.72/2.61(2xm，4H，CH2-CH2)；2.22(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝359.1[M+H+]；C19H22N2O3S计算值M＝358.1。N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸-二-2-(4-羟苯基乙酰胺)(16a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和2-(4-羟苯基)乙胺按照步骤(A)制备。产率71％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.5)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-2-(4-羟苯基)乙酰胺(16)按照步骤(B)还原16a。产率24％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.6)；熔点133-135℃；1H-NMR(d6-DMSO)9.11(s，1H，酚，OH)；7.98(t，1H，NH，酰胺)；7.38(m，6H，芳香.v.Z，NH尿烷)；6.99/6.68(2xd，4H，芳香 酚.H′s)；5.04(dd，2H，CH2vZ)；4.05(m，1H，H-Cα)；2.73/2.60(2xm，4H，CH2-CH2)；2.26(bs，1H，SH)FAB-MSm/z＝357.2[M+H+]；C19H22N2O4S计算值M＝374.1。N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸-二-4-氯苯甲酰胺(17a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和4-氯苯甲酰胺按照(A)得到。产率99％；在TLC上均一(溶剂体系CHCl3/MeOH，19∶1，Rf＝0.8)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-4-氯苯甲酰胺(17)按照步骤(B)还原17a。产率71％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.85)；熔点137-139℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.53(t，1H，NH，酰胺)；7.51(d，1H，NH尿烷)；7.38-7.26(m，9H，芳香.H′s)；5.06(dd，2H，CH2v.Z)，4.29(d，2H，CH2-Bn)；4.13(m，1H，H-Cα)；2.82/2.70(2xm，2H，β-CH2)；2.53(bs，1H，SH).FAB-MSm/z＝379.1[M+H+]；C18H19CIN2O3S计算值M＝378.1。N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸-二-3-苯基丙酰胺(18a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和3-苯基丙胺按照步骤(A)得到。产率94％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.7)。N-苄氧羰基-L-半胱氨酸-3-苯基丙酰胺(18)按照(B)还原18a。产率76％；在TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.7)；熔点104-106℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.02(t，1H，NH，酰胺)；7.43(d，1H，NH尿烷)；7.38-7.15(m，10H，芳香H′s)；5.05(dd，2H，CH2v.Z)；4.09(m，1H，H-Cα)；3.12(m，2H，N-CH2)；2.70/2.69(2xm，2H，β-CH2)；2.58(t，2H，CH2-Ph)；2.32(bs，1H，SH)；1.70(m，2H，CH2-CH2-CH2).FAB-MSm/z＝373.2[M+H+]；C20H24N2O3S计算值M＝372.2。N，N′-二苄氧羰基-L-胱氨酸-二-色酰胺(19a)由N，N′-二苄氧羰基胱氨酸和色胺按照(A)得到。产率75％；TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.6)。苄氧羰基-L-半胱氨酸色酰胺(19)按照步骤(B)还原19a。产率62％；TLC上均一(溶剂体系环己烷/CHCl3/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.7)；熔点150-152℃；1H-NMR(d6-DMSO)10.80(s，1H，NH-色胺)；8.09(t，1H，NH酰胺)；7.54-6.96(m，11H，芳香H′s，尿烷NH)；5.05(dd，2H，CH2，v.Z)；4.08(m，1H，H-C(α))；3.32(m，2H，NHCH2CH2)；2.82(t，2H，NHCH2CH2)；2.77/2.65(2xm，2H，β-CH2)；2.26(m，1H，SH).FAB-MSm/z＝398.2[M+H+]；C21H23N3O3S计算值M＝397.2。N，N′-二己酰-L-胱氨酸-二-苯甲酰胺(20a)由6b和己酸按照步骤(A)得到。产率86％；TLC上均一(溶剂体系；环己烷/氯仿/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.6)。1H-NMR(d6-DMSO)8.48(t，1H，NH，酰胺)；8.02(d，1H，NH尿烷)；7.3-7.2(m，5H，芳香H′s)；4.41(m，1H，H-Cα)；4.28(d，2H，CH2-Bn)；2.80/2.70(2xm，2H，β-CH2)；2.25(t，1H，SH)；2.17(m，2H，-CH2-CO-)；1.49-1.21(m，10H，烷基)，0.87(t，3H，-CH3).N-己酰-L-半胱氨酸苯甲酰胺(20)按照步骤(B)还原20a。产率69％；熔点141-143℃；1H-NMR(d6-DMSO)1H-NMR(d6-DMSO)8.48(t，1H，NH酰胺)；8.02(d，1H，NH-ureth.)；7.31-7.2(m，5H，芳香 H′s)；4.40(m，1H，H-Cα)；4.22(d，2H，CH2-Bn)；2.80/2.70(2xm，2H，β-CH2)；2.3(bs，1H，SH)；2.12(m，2H，-CH2-CO-)；1.50-1.19(m，6H，烷基)，0.85(t，3H，-CH3)FAB-MSm/z＝309.2[M+H+]；C16H24N2O2S计算值M＝308.2。N，N′-二辛酰-L-胱氨酸-二苯甲酰胺(21a)由6a和辛酸按照步骤(A)制备。产率86％；TLC上均一(溶剂体系环己烷/氯仿/乙酸，45∶45∶10，Rf＝0.6)。N-辛酰-L-半胱氨酸苯甲酰胺(21)
按照步骤(B)还原21a。产率73％；熔点137-139℃；1H-NMR(d6-DMSO)1H-NMR(d6-DMSO)8.48(t，1H，NH，酰胺)；8.02(d，1H，NH-尿烷)；7.3-7.2(m，5H，芳香H′s)；4.41(m，1H，H-Cα)；4.28(d，2H，CH2-Bn)；2.80/2.70(2xm，2H，β-CH2)；2.25(t，1H，SH)；2.17(m，2H，-CH2-CO-)；1.49-1.21(m，10H，烷基)，0.87(t，3H，-CH3).FAB-MSm/z＝337.2[M+H+]；C18H28N2O2S计算值M＝336.2。N，N′-二癸酰-L-胱氨酸-二-苯甲酰胺(22a)由6b和癸酸根据步骤(A)制备。产率定量；TLC上均一(溶剂体系环己烷/氯仿/乙酸，45∶45∶10；Rf＝0.9)。N-癸酰-L-半胱氨酸苯甲酰胺(22)按照步骤(B)还原22a。产率33％；Rf＝0.7；熔点138-140℃；1H-NMR(d6-DMSO)8.46(t，1H，NH，酰胺)；8.02(d，1H，NH-尿烷)；7.3-7.2(m，5H，芳香H′s)；4.4(m，1H，H-Cα)；4.29(d，2H，CH2-Bn)；2.80/2.70(2xm，2H，β-CH2)；2.25(t，1H，SH)；2.18(m，2H，-CH2-CO-)；1.49-1.19(m，14H，烷基)，0.85(t，3H，-CH3).FAB-MSm/z＝365.2[M+H+]；C20H32N2O2S计算值M＝364.2。1.Beckett.R.P.；Davidson，A.H.；Drummond.A.H.；Huxley，P；Whittaker，M.Drug Disc.Today(当代药物发现)19962.Wünsch，E.in Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie(有机化学方法)，Vol.15/I，Springer Verlag，Stuttgart，1974。3.Stack，M.S.；Gray，R.D.J.Biol.Chem.(生物化学杂志)1989，264，4277。4.Nagase，H.；Fields，C.G.；Fields，G.B.J.Biol.Chem.(生物化学杂志)1994，269，20952。5.Copeland，R.A.；Lombardo，D.；Giannaras，J.；Decicco.C.P.Bioorg.Med.Chem.Lett.(生物有机医学化学快报)1995，5，1947。
权利要求
1.通式I代表的化合物
该化合物结合并抑制基质金属蛋白酶(MMP)，其中半胱氨酸部分含有未被保护的硫羟基，该半胱氨酸部分为L-或D-构型，其中A代表-CO-、-SO2-、-NH-CO-或-O-CO-，R1代表氢，含1-15个碳原子的直链或支链饱和或不饱和烃基，或是被卤素、巯基、羟基、烷氧基、氨基或硝基取代的、或者被可任选有一个或几个取代基的碳环非芳族或芳族环系或者可任选被取代的芳族或非芳族杂环取代的C1-C15烃基，或其药理上可接受的盐或其旋光形式；R代表羟基，含1-15个碳原子的直链或支链饱和或不饱和烃基，或是被可任选有一个或几个取代基的碳环非芳族或芳族环系或者任选被取代的芳族或非芳族杂环取代的C1-C15烃基，或其药理上可接受的盐或其旋光形式。
2.一种药物组合物，该药物组合物中含有权利要求1的化合物，或其药理上可接受的盐，或其旋光形式，以及可药用的载体。
3.权利要求2的治疗用组合物，用于治疗类风湿性关节炎和溶胶原活性在其中是促进因素的其它有关疾病。
4.根据权利要求3的用途，其中治疗剂的剂量为每kg体重0.1-300mg。
5.根据权利要求3或4的用途，其中治疗剂经口服、血管内、腹膜内、皮下、肌内或局部给药。
全文摘要
通式(Ⅰ)代表的一种化合物,该化合物结合并抑制基质金属蛋白酶(MMP),其中半胱氨酸部分含有一个未被保护的硫羟基,该半胱氨酸部分是L－或D－构型,其中A代表－CO－、－SO
文档编号A61K31/405GK1261878SQ98806716
公开日2000年8月2日 申请日期1998年5月6日 优先权日1997年5月7日
发明者J·C·D·米勒, E·格拉夫冯勒德恩, L·莫洛德 申请人:柏林马克斯普朗克科学促进协会