专利名称：：冬虫夏草药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及治疗白细胞减少症的药物，具体涉及以冬虫夏草为主的中药组方。目前，虽然G-CSF(粒细胞集落刺激因子)或GM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)对治疗白细胞减少症有较好的疗效，但作为生物制品，存在半衰期短、反复使用毒付作用较强以及费用较高的缺点，在临床应用中受到很大的限制；中医临床中用于治疗白细胞减少症的组方(汤剂)虽也有一定的疗效，但由于中医治疗需要辩证施治，不便于临床广泛使用，且对白细胞减少症有效的中药如鸡血藤、女真子、枸杞等单独使用的疗效也均有限，因而临床上对原发性血小板减少症、白细胞减少症的治疗尚缺乏有效的常规药物，因此，研究和开发对白细胞减少症有较好疗效、且给药方便、费用较低的常规药，有利于临床白细胞减少症的患者尤其是肿瘤放疗或化疗后白细胞减少症的治疗及为进一步接受放疗或化疗创造条件。冬虫夏草是具有补肺益肾、止血化痰作用的传统名贵中药，用于治疗久咳虚喘、营嗽咯血、阳痿遗精、腰膝酸痛等症具有较好的疗效。近年来的研究证明，冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草(Cordycepssinensis(Berr.)Sacc.)寄生在蝙蝠科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，其菌丝已被分离和人工培养。通过其有效成分的研究发现，人工菌丝与冬虫夏草的有效成分相同或相似，除了含人体必需氨基酸和微量元素、维生素、麦角甾醇及生物碱外，其发挥治疗作用的药理活性成分为虫草多糖及虫草素即腺嘌呤核苷(adeninenucleotide)等成分。这些活性成分具有以下几方面的药理作用。(一)对免疫功能的调节作用(1)对单核巨噬细胞系统的增强作用可明显提高小鼠脾腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬百分率，能对抗可的松引起的腹腔巨细胞吞噬功能的降低，增加单核细胞、巨噬细胞表面Fc受体数目，并能通过刺激小鼠腹腔粘附细胞分泌高滴度的IL-1参与调节免疫反应。(2)对细胞免疫的影响对小鼠胸腺细胞具致有丝分裂作用，能直接刺激T淋巴细胞增殖，提高淋巴细胞转化率。对环磷酰胺引起的脾脏T淋巴细胞EAC玫瑰花结形成减少有拮抗作用。虫草能明显增强小鼠体内、外NK的杀伤活性，并保护环磷酰胺所致免疫抑制小鼠NK活性的降低。(二)造血促进作用冬虫夏草能够抑制人血小板聚集，升高血小板数量，能显著促进小鼠造血干细胞(CFU-S)、骨髓红系祖细胞(CFU-E、BVFU-E)、骨髓成纤维祖细胞(CFU-F)和骨髓粒-单系祖细胞(CFU-GM)的增殖，并能拮抗三尖杉酯碱、可的松、环磷酰胺对造血机能的损害和外周血白细胞的降低作用。但是，我们的研究也发现，单一的虫草制剂用于保健滋补的效果虽好，但用于白细胞减少症的治疗则临床疗效仍有限。因此，如何更有效地提高疗效，则是虫草药用的关键。本发明的目的即在于提供一种冬虫夏草药物组合物，以提高冬虫夏草治疗白细胞减少症的药效。本发明的目的还在于提供所述冬虫夏草药物组合物的制备方法。本发明者根据实验研究的结果，将冬虫夏草配以具有改善微循环的丹参以及增强免疫功能、刺激骨髓造血的刺五加和滋补肝肾、促进造血的枸杞，组成新的药物组合物，来达到刺激骨髓造血、提高白细胞数量的目的。本发明的冬虫夏草药物组合物包含(以重量百分比计)冬虫夏草25-40％、丹参15-30％、刺五加15-30％和枸杞15-30％。较佳为包含冬虫夏草30％、丹参25％、刺五加25％和枸杞20％。本发明的冬虫夏草药物组合物的制备方法包括将冬虫夏草和虫草菌丝按所述比例配以丹参、刺五加和枸杞，进行水提、浓缩、干燥或灌装及灭菌操作。本发明的冬虫夏草药物组合物的具体制备工艺如下将冬虫夏草和虫草菌丝(25-40％)用水浸泡2-3小时后，煎提2次，每次2-3小时，过滤后减压浓缩；将丹参、刺五加和枸杞(各15-30％)洗净后用水浸泡2-3小时，煎提2次，每次2-3小时，过滤浓缩；将水提液混合后雾化干燥，制成10-25目的粉末；质检，装填成胶囊，干燥密封包装后于60Co源下5000Rad照射灭菌。或将冬虫夏草水提液减压浓缩至500ml；取丹参、刺五加、枸杞的水提液减压浓缩至1500ml将两种水提浓缩液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，过滤(3G砂芯滤器)；用10ml易拉罐分装成口服液，100℃蒸汽灭菌40分钟。毒性试验急性毒性试验小鼠(20±2g)40只，用最大浓度(30g/kg体重，相当于推荐临床剂量3000mg/60kg的600倍)、最大容积一次给予小鼠灌胃后，连续观察7天，未见动物死亡。慢性毒性试验用本发明的冬虫夏草药物组合物干粉给16只家兔(2.0+0.5kg)口服，10g/kg/天(相当于临床推荐剂量的200倍)，连续口服90天，观察动物的一般状况，并进行血常规、肾功能肝功能及心、肺、肝、肾、脾、睾丸、脑垂体、胃肠道病理检查等项目的检查，结果均在正常范围内，表明该剂量下无明显的不良反应。因此，本发明的冬虫夏草药物组合物是安全无毒的。实验药理学研究将昆明种小鼠(20±2g)腹腔内注射5-氟尿嘧啶(5-Fu,150mg/kg体重)后，随机分组(每组10只小鼠)，分别给予皮下注射重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF2μg/次，1次/天，连续注射5天)、口服冬虫夏草药物组合物干粉(5000mg/kg体重)、口服冬虫夏草菌丝干粉(5000mg/kg体重)、口服刺五加浸膏干粉(5000mg/kg体重)、口服枸杞浸膏干粉(5000mg/kg体重)治疗，并以口服生理盐水(PS)为对照组，治疗后每三天动态观察小鼠外周血白细胞数量及分类和血小板计数，并于治疗后15天进行脾脏和骨髓造血功能的检测。结果见表1。表1冬虫夏草药物组合物对大剂量化疗小鼠外周血白细胞、血小板水平的影响(x±s,n=10)*与B组相比，P＜0.05；Δ与B组相比，P＜0.01。以上结果表明，大剂量化疗小鼠服用本发明的冬虫夏草药物组合物后，6天后即可见化疗小鼠外周血白细胞数量由对照组的3620±1120/mm3上升至4693±912/mm3，与化疗的对照组相比，具有明显的差异；至第12天时，与化疗的对照组相比，差异有非常显著的统计学意义；治疗后第12天时血小板的数量(6896±1018)也显著高于对照组(4433±953)，第15天时的血小板数更是远远高于化疗的对照组。然而，口服单纯的冬虫夏草菌丝干粉，虽也可提高化疗小鼠外周血白细胞和血小板的数量，但效果明显低于冬虫夏草药物组合复方，而口服单纯的刺五加或枸杞则仅见白细胞在第12天有所提高。因此，本发明的冬虫夏草药物组合物能明显减轻大剂量化疗后小鼠外周血白细胞和血小板的降低程度，而且其作用是单独使用冬虫夏草、刺五加或枸杞所不能比拟的。进一步研究其促进造血作用的机理发现，治疗后第15天时，该制剂可明显促进骨髓粒细胞一单核细胞克隆形成单位(CFU-GM)、巨核细胞克隆形成单位(CFU-MK)及脾脏克隆形成单位(CFU-S)的形成，结果见表2。表2．冬虫夏草药物组合物对大剂量化疗小鼠CFU-GM、CFU-MK和CFU-S水平的影响(x±s,n=10).*与B组相比，P＜0.05；Δ与B组相比，P＜0.01。由此可见，本发明的冬虫夏草药物组合物能刺激骨髓造血，促进机体造血功能的恢复。临床药理学研究选择一般情况良好、接受全程化疗的肿瘤病人，共57例，白细胞均降至低于3.5×109/L，分为给药组和对照组，两组病种组成及所受化疗方案基本相同，按WHO抗癌药物急性与亚急性毒性反应分度标准，两组病例骨髓抑制情况、白细胞下降程度基本相似。治疗组男17例，女15例，平均年龄47岁；对照组男14例，女11例，平均年龄45岁。治疗组患者服用冬虫夏草药物组合物胶囊，每日3次，每次4粒；对照组服用鲨肝醇(0.1/次，1日3次)、利血生(20mg/次，1日3次)。连服20天为一疗程，每周查血1次，以3周为限，3周后无效者采用其它治疗。疗效评判标准显效3周内白细胞数提高1.0×109/L且白细胞总数在4.0×109/L以上。有效3周内白细胞数提高0.6～1.0×109/L且白细胞总数在3.5×109/L以上。无效3周内白细胞数提高不足0.6×109/L或白细胞总数在3.5×109/L以下。结果见表3。表3冬虫夏草药物组合物对化疗患者外周血白细胞的影响<tablesid="table1"num="003"><table>组别例数治疗前均值治疗后均值显效(％)有效(％)无效(％)组合物组322910±4124623±63410(31.25)18(56.5)4(13.5)对照组252932±4253741±5834(16)11(44)10(40)</table></tables>从上述结果可见，化疗患者服用冬虫夏草复方胶囊20天后，外周血白细胞数量由治疗前的29104±412/mm3上升至治疗后的4623±634/mm3，总有效率为87.7％，表明口服复方制剂能明显减轻大剂量化疗后患者外周血白细胞和血小板的降低程度，效果优于常规的升白药物鲨肝醇和利血生。综上所述，本发明的冬虫夏草药物组合物可用于各种原因(包括肿瘤放、化疗)引起的白细胞、血小板减少症；也适用于提高机体抗感染、抗肿瘤免疫力和促进机体造血功能及疲劳恢复。以下用实施例对本发明进行举例说明，它们旨在阐述本发明的最佳实施方案。本领域技术人员根据本发明的启示，结合本领域的常识所做的各种变更，均落在本申请权利要求的范围内。实施例1将冬虫夏草10g、虫草菌丝600g水浸泡2-3小时后，用水煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩成500ml；取丹参500g、刺五加500g、枸杞400g洗净后水浸泡2-3小时，用水煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩；将水提液混合后雾化干燥，制成10-25目的粉末；装填成1000粒胶囊(2号)，干燥密封包装后于60Co源下5000Rad照射灭菌。质检结果(1)、胶囊的内容物呈咖啡色，速溶于水，有少许沉淀物，取0.2mg溶于2ml双蒸水后，pH为4.5-5.5；(2)、稀释100倍后作波长190-600nm的连续扫描，在262nm处呈特殊峰型，以丹参酮、异秦皮啶作对照进行薄层层析，可作为鉴别；(3)、活性成分中多糖含量为0.08％、核苷酸含量＞0.025％。实施例2将冬虫夏草10g、虫草菌丝500g水浸泡2-3小时后，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩成500ml；取丹参、刺五加、枸杞各500g洗净后水浸泡2-3小时，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩；将水提液混合后雾化干燥，制成10-25目的粉末；装填成胶囊1000粒，干燥密封包装后于60Co源下5000Rad照射灭菌。质检结果(1)、胶囊的内容物呈咖啡色，速溶于水，有少许沉淀物，取0.2mg溶于2ml双蒸水后，pH为4.5-5.5；(2)、稀释100倍后作波长190-600nm的连续扫描，在262nm处呈特殊峰型，以丹参酮、异秦皮啶作对照进行薄层层析，可作为鉴别；(3)、活性成分中多糖含量为0.09％、核苷酸含量＞0.02％。实施例3将冬虫夏草10g、虫草菌丝800g水浸泡2-3小时后，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩成500ml；取丹参、刺五加、枸杞各400g洗净后水浸泡2-3小时，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩；将水提液混合后雾化干燥，制成10-25目的粉末；装填成胶囊1000粒，干燥密封包装后于60Co源下5000Rad照射灭菌。质检结果(1)、胶囊的内容物呈咖啡色，速溶于水，有少许沉淀物，取0.2mg溶于2ml双蒸水后，pH为4.5-5.5；(2)、稀释100倍后作波长190-600nm的连续扫描，在262nm处呈特殊峰型，以丹参酮、异秦皮啶作对照进行薄层层析，可作为鉴别；(3)、活性成分中多糖含量为0.07％、核苷酸含量＞0.03％。实施例4将冬虫夏草10g、虫草菌丝500g水浸泡2-3小时后，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩成500ml；取丹参、刺五加、枸杞各500g洗净后水浸泡2-3小时，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩1500ml；将水提液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，过滤(3G砂芯滤器)；分装10ml易拉罐，100℃蒸汽灭菌40分钟。质检结果(1)、口服液呈咖啡色，有少许沉淀物，pH为4.0-5.5；(2)、100倍稀释后作波长190-600nm的连续扫描，在262nm处呈特殊峰型；(3)、活性成分中多糖含量为0.07％、核苷酸含量＞0.02％。实施例5将冬虫夏草10g、虫草菌丝600g水浸泡2-3小时后，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩成500ml；取丹参500g、刺五加500g、枸杞400g洗净后水浸泡2-3小时，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩1500ml；将水提液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，过滤(3G砂芯滤器)；分装10ml易拉罐，100℃蒸汽灭菌40分钟。质检结果(1)、口服液呈咖啡色，有少许沉淀物，pH为4.0-5.5；(2)、100倍稀释后作波长190-600nm的连续扫描，在262nm处呈特殊峰型；(3)、活性成分中多糖含量为0.07％、核苷酸含量＞0.025％。实施例6将冬虫夏草10g、虫草菌丝800g水浸泡2-3小时后，煎提2次，每次2-3小时，减压浓缩成500ml；取丹参、刺五加、枸杞各400g洗净后水浸泡2-3小时，煎提2次，减压浓缩1500ml；将水提液混合后加5％蜂蜜、2％砂糖，过滤(3G砂芯滤器)；分装10ml易拉罐，100℃蒸汽灭菌40分钟。新型冬虫夏草复方制剂的特征在于(1)、口服液呈咖啡色，有少许沉淀物，pH为4.0-5.5；(2)、100倍稀释后作波长190-600nm的连续扫描，在262nm处呈特殊峰型；(3)、活性成分中多糖含量为0.06％、核苷酸含量＞0.03％。权利要求1．一种冬虫夏草药物组合物，以重量百分比计包含冬虫夏草25-40％丹参15-30％剌五加15-30％和枸杞15-30％。2．如权利要求1所述的冬虫夏草药物组合物，其中各组分的重量百分比为冬虫夏草30％、丹参25％、剌五加25％和枸杞20％。3．如权利要求1所述的冬虫夏草药物组合物，所述组合物为胶囊。4．如权利要求1所述的冬虫夏草药物组合物，所述组合物为口服液，其中还包含蜂蜜和砂糖。5．如权利要求1所述的冬虫夏草药物组合物的制备方法，其特征包括将冬虫夏草和虫草菌丝按所述比例配以丹参、剌五加和枸杞，进行水提、浓缩、干燥或罐装及灭菌操作。6．如权利要求5所述的制备方法，其中水提操作包括将冬虫夏草用水浸泡2-3小时，煎提2次；及将丹参、剌五加和枸杞洗净后用水浸泡2-3小时，煎提2次，每次2小时。7．如权利要求5或6所述的制备方法，其中水提液经过滤、减压浓缩后，合并，雾化干燥，制成10-25目粉末，装填胶囊，干燥密封包装后于60Co源下5000Rad照射灭菌。8．如权利要求5或6所述的制备方法，其中冬虫夏草水提液减压浓缩至500ml，丹参剌五加和枸杞水提液减压浓缩至1500ml，合并后加5％蜂蜜、2％砂糖、过滤；分装成口服液，100℃蒸汽灭菌40分钟。全文摘要本发明提供冬虫夏草药物组合物及其制备方法。本发明以冬虫夏草为主要原料,配以丹参、刺五加,枸杞,将各药水提,水提液混合后制成口服液;或混合后雾化干燥,制成粉末,装填胶囊。该药物组合物能刺激骨髓造血、升高外周血白细胞和血小板、提高机体抗病毒及抗肿瘤的免疫功能,适用于各种原因(包括肿瘤放、化疗)引起的白细胞、血小板减少症,也适用于提高机体抗感染、抗肿瘤免疫力和促进机体疲劳恢复。文档编号A61P35/02GK1301564SQ99127488公开日2001年7月4日申请日期1999年12月30日优先权日1999年12月30日发明者曹雪涛,王全兴申请人:上海华晨生物技术研究所