酸组成，控制温度，浓度和反应时间以达到既灌注到了末梢血管(可塑性)，又稳固限制类弹性蛋白多肽不流出肿瘤边界。
[0022]二.类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂的配制方法，包括以下步骤:
(1)称取50mg类弹性蛋白多肽风干絮状固体物质；
(2)将絮状固体物质按照50:1比例溶于PBS缓冲液中；
(3)将上述溶液置放于冰盒中低温保存，即得1000uM浓度的类弹性蛋白多肽溶液；
(4)将100uM浓度的类弹性蛋白多肽溶液用PBS缓冲液稀释一倍低温保存，即得500uM浓度的类弹性蛋白多肽溶液。
[0023]本发明所述的类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂的使用方法，包括以下步骤:
(I)利用内镜循腔进镜，缓慢少量给气，到达操作部位； (2)利用氩气刀进行APC标记，确定病变范围，范围约3.0cm ；
(3)自活检孔道插入一次性注射针，于操作部位标记边缘注射混有0.5%美兰染色剂的类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂(浓度为500uM);
(4)注射后待局部黏膜完全隆起，黏膜与固有肌层充分分离，立即经活检孔道插入钩刀、配合IT刀通电剥离切除黏膜。
[0024]实施例1:类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂在大鼠胃部黏膜下剥离术中有效性和安全性的研宄
1.1实验方法:
54只雄性SD大鼠随机分为三部分(n=18 )。每次实验三个组随机各取一只同时进行以下实验，重复进行。禁食24h后称重，5%水合氯醛(0.7ml/100g)腹腔内注射麻醉。大鼠取仰卧位，固定四肢于无菌实验台上，切开腹部，纱布衬垫，暴露鼠胃，用虹膜剪沿胃大弯剪开胃组织，打开胃壁暴露胃黏膜并去除残留物。在整个实验操作过程中密切观察大鼠的呼吸、心率。操作过程中大鼠如出现躁动、挣扎等反应，及时补充麻药，从小量开始，速度缓慢，防止发生麻醉意外。
[0025]第一组观察不同软组织分离制剂分离组织的有效性。根据注射不同的注射剂随机分为三个亚组(n=6)，暴露胃后壁实验组黏膜下注射类弹性蛋白多肽(ELP)，对照组分别注射透明质酸钠(SH)和生理盐水(NS)均为0.2ml，观察并用游标卡尺记录药物注射后Omin，5min，I Omin, 30min及60min局部黏膜隆起厚度及黏膜表面的改变；第二组显微镜下观察注射不同软组织分离制剂后30min黏膜隆起的HE组织学表现(n=6);第三组，观察黏膜下剥离时不同软组织分离制剂对出血的影响(n=6)。给予上述软组织分离制剂处理后，用无菌手术刀片完整切除黏膜下注射后形成的隆起部位，利用电子天平称取棉签重量测定黏膜切除20分钟内的出血量。
[0026]1.2实验结果
(I)黏膜隆起厚度的变化
ELP、SH 和 NS 组注射后初始抬举厚度为 4.14 ± 0.37mm、3.77 ± 0.43mm、3.43 ± 0.67mm ；30min、60min后ELP组抬举厚度为胃壁厚度的2.0?2.3倍；SH组为1.5倍；NS组为0.5?
1.0倍。ELP组与SH或NS组相比黏膜隆起变化更为缓慢稳定，差异有显著性；注射5min后的各时间点，ELP组黏膜隆起厚度与SH、NS组相比差异性显著，即ELP组黏膜隆起厚度始终明显大于SH、NS组，参照图1，ELP组、SH组、NS组黏膜隆起在60min内均有下降趋势，ELP组更为缓慢、持久!★ELP'SH与NS相比Ρ〈0.05 ；■ ELP与SH相比Ρ〈0.05。
[0027](2)组织学改变
30min时不同软组织分离制剂维持黏膜厚度的组织学表现如下，组织学观察ELP组维持黏膜隆起厚度明显大于SH、NS组，参照图2，注射5min后，ELP组黏膜隆起厚度始终明显大于SH、NS组；注射1min后，SH组与NS组相比差异有统计学意义，即SH组黏膜隆起厚度大于NS组，★?〈().05 ;ELP注射部位的周围组织中未见明显的炎性细胞浸润，未见组织细胞明显的坏死；参照图3，ELP注射部位的周围组织中未见明显的炎性细胞浸润，未见组织细胞明显的坏死。
[0028](3)各组黏膜隆起剥离出血量
ELP组、SH组及NS组黏膜隆起剥离时的出血量分别为854.8±98.9mg、726.3±104.8mg、1144.0±112.4mg。ELP组、SH组分别与NS组相比差异有显著性，即类弹性蛋白多肽与SH组在黏膜剥离后的出血量明显低于NS组，参照图4，不同组黏膜切除均有出血；ELP与SH组在黏膜剥离后的出血量明显低于NS组；▲:P<0.05。
[0029]1.3实验结论
黏膜下注射类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂，在黏膜下组织中的弥散明显延缓，在黏膜下形成较持久的液体垫维持黏膜厚度，有利于黏膜组织的剥离切除，并可以减少出血量；组织学观察类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂注射部位的周围组织中未见明显的炎性细胞浸润及坏死。这些结果提示其可以有效地减少黏膜剥离中并发症的发生并且对组织未造成明显损伤，具有作为内镜治疗操作过程中黏膜下软组织分离制剂的潜在可能性。
[0030]实施例2:类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂在内镜下黏膜剥离术中有效性和安全性的研宄
2.1实验方法:
小猪(35.1 + 3.5kg)禁食水24小时，小猪腿部备皮，取左侧卧位，肌注氯胺酮(20mg/kg)，插管连接呼吸机，并以丙泊酚静脉诱导并维持麻醉。同时打开内镜主机，调试好工作站和刻录机，安装胃镜，连接吸引器，连接好电切设备，备好一次性注射针，注射器等。利用内镜循腔进镜，缓慢少量给气，到达胃部；利用氩气刀进行APC标记，范围约3.0cm;自活检孔道插入一次性注射针，于胃壁标记边缘注射混有0.5%美兰的类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂(浓度为500uM);注射后待局部黏膜完全隆起，立即经活检孔道插入钩刀、配合IT刀通电剥离。观察黏膜切除操作的难易程度，并发症发生情况，剥离的黏膜完整情况。术毕，复苏动物，送回动物房继续饲养，两周后复查胃镜，观察局部溃疡愈合情况。参见图5、图6、图7、图8、图9。
[0031]2.2实验结果，参见图10、图11、图12。
[0032](I)单次注射1ml的类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂后可使标记区域黏膜完全隆起；电切过程不需要再次补充类弹性蛋白多肽；
(2)电切剥离黏膜容易，未出现出血、穿孔等并发症；
(3)标记黏膜可以完整切除，未见标记区域黏膜残留；
(4)术后复查胃镜局部溃疡明显缩小。
[0033]2.3实验结论
单次黏膜下注射类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂可以使黏膜和固有肌层充分分离，操作过程持续期间不需要再次补充软组织分离制剂，并且大大降低了手术并发症发生率，操作形成的人工溃疡愈合良好。以上证明类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂可以作为一种新型理想的黏膜下软组织分离制剂，应用于内镜治疗，提高内镜下治疗的高效和安全性。
【主权项】
1.一种类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂，其特征在于:将类弹性蛋白多肽风干絮状固体物质溶于磷酸盐缓冲液配制成的终浓度为500uM-1000uM的液体制剂。
2.一种类弹性蛋白多肽在制备软组织分离制剂中的应用，其是将类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂填充于胃肠道黏膜下，类弹性蛋白多肽相变为凝胶状，使胃肠黏膜与固有肌层充分的分离。
【专利摘要】本发明公开了一种类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂及应用，属于类弹性蛋白多肽的医药配置品及用途。本发明所述类弹性蛋白多肽制备的软组织分离制剂是由类弹性蛋白多肽风干絮状固体物质溶于磷酸盐缓冲液配制成的终浓度为500uM-1000uM的液体制剂；其应用是将该液体制剂填充于胃肠道黏膜下层，类弹性蛋白多肽相变为凝胶状，使胃肠黏膜层与固有肌层充分的分离。这种填充剂注射后,胃肠道软组织分离距离显著增加且分离持续时间延长，而不需多次注射；该软组织分离制剂具有良好的生物相容性；其可降解特性更消除了异物残留的担忧。因此本发明适用于消化内镜下治疗中软组织分离，以便切除消化道的病变组织，使操作安全有效。
【IPC分类】A61P41-00, A61K38-16
【公开号】CN104721810
【申请号】CN201510092358
【发明人】刘文天, 刘文革, 王邦茂, 郑忠青, 王涛, 赵明星, 张续乾, 荆洋
【申请人】天津医科大学总医院
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月2日