一种神经修复膜及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医用生物材料技术领域，具体涉及一种神经修复膜及其制备方法。
【背景技术】
[0002]周围神经损伤是临床常见创伤之一，研宄表明，患者发生损伤后，应采取有效措施对损伤神经的连续性和完整性进行修复，使损伤神经近端发出再生轴芽，并到达远端重新支配靶器官。若患者未进行及时修复或修复方法不当，将可使其产生神经瘤甚至致残，严重影响患者生活质量。如何提高神经的修复效果，仍是热门课题。
[0003]目前临床中修复周围神经损伤的金标准仍然是显微镜下行神经外膜缝合术，单纯神经缝合后，断端周围出现炎性细胞的侵入，吻合口及神经束间瘢痕组织形成，阻碍再生神经纤维通过吻合口长入神经远端；吻合口暴露，神经生长因子外流，亦会降低神经的修复效果。怎样进一步提高神经再生的速度和质量，寻找新的修复方法仍是迫切需要解决的问题。理想的神经修复方法应相对无创，可减少神经吻合口周围粘连，防止瘢痕组织形成，迅速恢复神经修复的最佳环境，减少神经生长因子外流。
[0004]细胞外基质(ECM)是由细胞合成并分泌到细胞外间质中的大分子物质，主要由三类成分组成:1.结构蛋白:如胶原、弹性蛋白和基膜粘连蛋白等；2.多糖:如糖胺聚糖、蛋白聚糖、透明质酸和硫酸软骨素等；3.粘连蛋白:如纤粘连蛋白和层粘连蛋白等，此外还有一些脂质和生长因子等。将脱细胞组织基质用于组织修复已成为目前国际再生医学领域的研宄热点，通过将脱细胞组织工程支架植入人体代替受损组织，为组织细胞提供再生环境，促进组织修复。目前已有脱细胞真皮基质、脱细胞心脏膜瓣和脱细胞小肠粘膜下层基质等多种用于组织修复的细胞外基质产品。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种神经修复膜，通过将细胞外基质制备成膜，包裹损伤神经的缝合口，为神经再生提供良好的微环境，防止神经与周围组织粘连，促进神经再生。
[0006]本发明的另一目的是提供了上述神经修复膜的制备方法。
[0007]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种神经修复膜的制备方法，包括如下步骤:
(O取新鲜动物组织，去除附属脂肪等，机械粉碎成小块；
(2)用去离子水振荡漂洗经粉碎的动物组织3~5次；
(3)用质量浓度为0.05%~0.5%的胰蛋白酶溶液振荡处理l~6h，去离子水漂洗干净；
(4)用质量浓度为1%~5%的十二烷基硫酸钠溶液振荡处理l~6h，去离子水漂洗干净；
(5)将得到的细胞外基质冷冻干燥；
(6)将冻干的细胞外基质用高速匀浆机粉碎溶于0.l~lmol/L的乙酸溶液中，倒入平底模具中低温干燥成膜；
(7)将得到的膜用碱溶液(0.lmol/L的NaOH或KOH溶液)中和，然后水洗至pH中性，晾干即得神经修复膜。
[0008]进一步的，本发明所述动物组织选自哺乳动物的真皮、肌腱、羊膜、小肠粘膜下层、韧带、神经、血管和心脏瓣膜。
[0009]进一步的，本发明所述神经修复膜的厚度为0.01-0.5mm。
[0010]进一步的，本发明所述神经修复膜还可以进行交联以延长其降解时间。
[0011]与现有技术相比，本发明具有以下优点:
本发明通过先粉碎再脱细胞方法去除了动物组织中的免疫原性物质，完整保留组织细胞外基质成分，再将细胞外基质溶解并干燥成膜，直接包裹损伤神经的缝合口，为神经再生提供良好的微环境，具有防止神经与周围组织粘连，促进神经再生的作用。
【附图说明】
[0012]图1为本发明所制备的神经修复膜照片。
[0013]图2为使用神经修复膜修复SD大鼠坐骨神经断裂的照片。
[0014]图3为术后8周时试验组SD大鼠坐骨神经照片。
[0015]图4为术后8周时对照组SD大鼠坐骨神经照片。
【具体实施方式】
[0016]下面通过实施例对本发明作出进一步的详细说明，旨在用于说明本发明而非限定本发明。
[0017]实施例1以猪真皮为原料制备神经修复膜。
[0018]取新鲜猪真皮，去除多余脂肪后机械粉碎，用去离子水震荡漂洗3次，之后用质量浓度为0.2%的胰蛋白酶溶液振荡漂洗2h，去离子水漂洗干净，之后用质量浓度为3%的十二烷基硫酸钠溶液振荡漂洗3h，去离子水漂洗干净，得到脱细胞猪真皮基质，将其冷冻干燥，取冻干脱细胞真皮基质用高速匀浆机粉碎溶于0.5mol/L的乙酸溶液中，然后倒入平底模具中，低温烘干，然后用0.lmol/L的NaOH溶液中和，去离子水清洗至pH中性，晾干即得神经修复膜(见图1)，为延长其降解时间，选用254nm紫外线照射交联2h。
[0019]实施例2对实施例1制备的神经修复膜进行生物相容性试验研宄，包括细胞毒性反应试验、溶血试验和皮内反应试验。
[0020]( I)细胞毒性反应试验
方法:按表面积6cm2神经修复膜加ImL浸提介质(含血清的MEM培养基)的比例，(37± I) °C，(24±2) h制备试验液，取试验液按照GB/T16886.5-2003规定的浸提液试验方法进行，按照GB/T14233.2-2005规定评级。
[0021]结果:神经修复膜细胞毒性反应小于I级。
[0022](2)溶血试验
方法:按表面积6 cm2神经修复膜加ImL0.9%氯化钠溶液比例，(37± I) V ’ (24±2)h制备试验液，按照GB/T16886.4-2003规定试验方法进行。
[0023]结果:神经修复膜溶血率为1.8%，小于5%，符合血液相容性标准。
[0024](3)皮内反应试验
方法:按表面积6 cm2神经修复膜加ImL浸提介质(生理盐水和植物油)的比例，(37±1) °C，(72±2) h制备试验液，取试验液按照GB/T16886.10-2005中规定试验方法进行。
[0025]结果:神经修复膜与溶剂对照平均计分之差小于1.0o
[0026]实施例3用实施例1制备的神经修复膜修复SD大鼠坐骨神经损伤。
[0027]建立SD大鼠坐骨神经损伤模型，试验组进行端对端缝合后，再用实施例1制备的神经修复膜包裹缝合口(图2)，对照组仅采用端对端缝合。术后8周进行解剖观察，可见试验组SD大鼠坐骨神经周围无组织粘连，神经修复膜已完全被降解吸收，缝合口吻合良好，无神经瘤形成(图3)。对照组SD大鼠坐骨神经周围明显发生组织粘连，缝合口周围有神经瘤形成(图4)。
[0028]应当指出，在不偏离本发明精神的前提下，还可以对本发明进行若干修改或改进，这对于本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，也同样落入本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种神经修复膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)取新鲜动物组织，去除附属脂肪等，机械粉碎成小块； (2)用去离子水振荡漂洗经粉碎的动物组织3~5次；(3)用质量浓度为0.05%~0.5%的胰蛋白酶溶液振荡处理l~6h，去离子水漂洗干净； (4)用质量浓度为1%~5%的十二烷基硫酸钠溶液振荡处理l~6h，去离子水漂洗干净； (5)将得到的细胞外基质冷冻干燥； (6)将冻干的细胞外基质用高速匀浆机粉碎溶于0.l~lmol/L的乙酸溶液中，倒入平底模具中低温干燥成膜； (7)将得到的膜用碱溶液(0.lmol/L的NaOH或KOH溶液)中和，然后水洗至pH中性，晾干即得神经修复膜。
2.根据权利要求1所述，其特征在于，所述动物组织选自哺乳动物的真皮、肌腱、羊膜、小肠粘膜下层、韧带、神经、血管和心脏瓣膜。
3.根据权利要求1所述，其特征在于，所述神经修复膜的厚度为0.01-0.5_。
4.根据权利要求1所述，其特征在于，所述神经修复膜还可以进行交联以延长其降解时间。
【专利摘要】本发明公开了一种神经修复膜及其制备方法，主要包括原料处理、脱细胞、基质溶解、干燥成膜、中和水洗等过程。本发明制备的神经修复膜保留了细胞外基质的活性成分，直接包裹周围神经缝合口，为神经再生提供良好的微环境，能够防止神经与周围组织粘连，促进神经再生。
【IPC分类】A61L27-36
【公开号】CN104740685
【申请号】CN201510178573
【发明人】高秀岩, 任孝敏, 姜红, 敖强, 王爱军
【申请人】烟台隽秀生物科技有限公司
【公开日】2015年7月1日
【申请日】2015年4月16日