后通过再给予MAPCs进行 维持。可将MPCs初始通过一种方法给予，之后通过相同的方法或者一种或多种不同的方 法给予。受试者的MPCs水平可通过持续给予该细胞来维持。各个实施方案都是通过静脉 内注射来或者初始给予MAPCs，或者维持它们在受试者中的水平，或者同时这两种情况。在 各个实施方案中，取决于患者身体状况和本文别处论述到其它因素，使用其它的给予方式。
[0264] 要指出的是，通常对人受试者的治疗时间比实验动物长，但是治疗的时间长度通 常与疾病过程的时间长度和治疗的有效性相称。本领域技术人员在使用在人和/或在动物 (如大鼠、小鼠、非人灵长类动物等）中进行的其它程序的结果来对人用适当剂量进行确定 时，会将这一点加以考虑。基于这些考虑因素和在考虑了本公开说明书和现有技术所提供 的指导下进行的这种确定，会使技术人员无需太多的实验就能这样做。
[0265] 初次给予和进一步剂量的合适方案或者序贯给药的合适方案，可以都相同或者可 以不同。技术人员可根据本公开说明书、本文引述的文献和本领域的知识来确定适当的方 案。
[0266] 治疗的剂量、频率和持续时间要取决于许多因素，包括疾病的性质、受试者和可能 给予的其它疗法。因此，有多种方案可用来给予MAPCs。
[0267] 在一些实施方案中，将MAPCs以一个剂量给予受试者。在其它实施方案中，将 MAPCs以一系列的两个或多个剂量序贯给予受试者。在其中MAPCs以单剂量、以两个剂量和 /或以两个以上剂量给予的一些其它实施方案中，各剂量可以相同或不同，且它们之间以相 等或不相等的间隔时间给予。
[0268] 可将MPCs在多个时间范围里多次给予。在一些实施方案中，MPCs在不到一天 时间里给予。在其它实施方案中，它们在两天、三天、四天、五天或六天时间里给予。在一些 实施方案中，MAPCs在几个星期的时间里每个星期给予一次或多次。在其它实施方案中，它 们在几个星期时间里给予，持续一个月到几个月。在各个实施方案中，它们可在几个月时间 里给予。在其它实施方案中，它们可在一年或多年的时间里给予。通常，治疗的时间长度要 与疾病过程的时间长度、所应用的疗法的有效性以及所治疗的受试者的身体状况和反应相 称。
[0269] 免痔调节件MAPCs的治疗用涂
[0270] MAPCs的免疫调节特性可用于治疗多种紊乱、功能异常和疾病，如本质上作为继发 作用或者作为治疗的副作用呈现有害免疫系统过程和作用的那些紊乱、功能异常和疾病。 下文会论述几个例子。
[0271] 在这点上许多实施方案涉及到将MAPCs作为唯一疗法或者作为与另一治疗的辅 助疗法给予其免疫系统被削弱（或缺损）的受试者。在这点上在本发明多个实施方案中，将 MAPCs辅助于已经给予、正在给予、将要给予受试者的放射疗法或化学疗法或者放射疗法和 化学疗法的组合来给予受试者。在许多这种实施方案中，放射疗法、化学疗法或者放射疗法 和化学疗法的组合是移植疗法的一部分。在多个实施方案中，给予MAPCs以治疗有害的免 疫应答如HVG或GVHD。
[0272] 在这点上在多个实施方案中，受试者是非同基因（通常是异基因）血小板或骨髓 细胞移植物的接受者，受试者的免疫系统已被放射疗法、化学疗法或者放射疗法和化学疗 法的组合所削弱或切除，正将免疫抑制药物给予受试者，受试者有发展移植物抗宿主病的 危险或已经发展该疾病，将MAPCs辅助于移植、放射疗法和/或化学疗法和免疫抑制药物中 的任何一个或多个来给予受试者，以治疗如改善、阻止或消除受试者的移植物抗宿主病。
[0273] 肿瘤
[0274] 术语"肿瘤"一般指涉及到细胞的克隆增殖的疾病。肿瘤可以是良性的，也就是说 是非进行性的和非复发性的，因此如果这样的话，一般是不会威胁生命的。肿瘤还可以是恶 性的，也就是说它们会进行性地恶化、扩散，因此通常会危险生命，且往往是致命的。
[0275] 在各个实施方案中，将MPCs给予患上肿瘤的受试者以辅助于对肿瘤的治疗。例 如，在这点上在本发明一些实施方案中，受试者有患上血细胞或骨髓细胞的肿瘤的风险或 者正患上该肿瘤，并已进行或将进行血液或骨髓移植。采用本文所述的MAPC分离、表征和 扩增方法，并结合本文在MPCs的免疫抑制特性方面的公开内容，可给予MPCs以治疗如防 止、抑制或减少会使移植疗法复杂化的不利免疫反应如HVG和GVHD。
[0276] 在多个涉及到移植疗法的实施方案中，可将MAPCs单独地或者与其它药剂一起用 于免疫抑制目的。可将MPCs在进行一种或多种移植之前、过程中或之后给予。如果是在 移植过程中给予，可将MPCs与移植材料分开或一起给予。如果是分开给予，可将MPCs与 其它移植材料序贯给予或同时给予。此外，对在进行移植物给予的同时或大约同时进行的 MAPCs给予而言另外地或者替代地，可将MAPCs远在移植之前和/或远在移植之后给予。
[0277] 可以与MPCs联用的其它药剂，具体的说是在移植疗法中联用，包括免疫调节剂， 如在本文别处有描述的免疫调节剂，具体的说是免疫抑制剂，更具体的说是本文别处描述 的特别是为此描述的免疫抑制剂，即皮质类固醇、环胞菌素A、环胞菌素样免疫抑制化合物、 硫唑嘌呤、环磷酰胺、甲氨喋呤和免疫抑制性单克隆抗体药剂中的一种或多种。
[0278] 在这点上在本发明实施方案中用MAPCs进行治疗的骨髓肿瘤疾病，包括骨髓增殖 性疾病（"MPDs")、骨髓增生异常综合征（或状态）（"MDSs〃）、白血病及包括多发性骨髓 瘤和淋巴瘤在内的淋巴增殖性疾病。
[0279] MPDs以血髓中的细胞的异常和自发增殖为显著特征。这种疾病可仅涉及一种细胞 类型，或者涉及几种细胞类型。通常，MPDs涉及到三种细胞谱系，它们是红细胞谱系、粒细 胞谱系和血小板谱系。三种谱系受涉及的情况随MPD的不同而不同，且随所出现的各个类 型的不同而不同。通常，它们所受影响不同，在给定的肿瘤中主要影响一种细胞谱系。MPDs 没有明显恶性；不过它们被归类为肿瘤，以血髓中的造血前体细胞的异常自我复制为特征。 尽管如此，MPDs具有发展成急性白血病的潜力。
[0280] MDSs和MPDs -样是克隆疾病，它们以血髓中的造血前体细胞的异常自我复制为 特征。和MPDs-样，它们能发展成急性白血病。大多数但不是所有的MDSs显示外周血血 球减少（慢性骨髓单核细胞性白血病例外），而MPDs不显示。
[0281] 这些疾病的实验室和临床表现可随它们的进程而不同，且在各次发病之间也不 同。各种表现可能重叠，可能难以作出可靠的诊断来将一种疾病与所有其它疾病区别开来。 因此，对骨髓造血细胞的肿瘤的诊断需要特别小心，以免将事实上致命性恶性疾病误诊为 良性疾病。
[0282] 以下疾病属在本发明各个实施方案中可主要地或辅助地用MPCs进行治疗的骨 髓增殖性疾病（MPDs):慢性髓细胞性白血病（"CML")/慢性粒细胞性白血病（"CGL")、原 因不明的骨髓纤维化（agnogenic myelofibrosis)、特发性血小板增多症和真性红细胞增 多症。
[0283] 以下疾病属在本发明各个实施方案中可主要地或辅助地用MPCs进行治疗的骨 髓增生异常综合征（MDSs):难治性贫血、环形铁粒幼细胞性难治性贫血、伴过多原始细胞 的难治性贫血、伴过多转化中原始细胞的难治性贫血和慢性骨髓单核细胞性白血病。
[0284] 以下疾病属在本发明各个实施方案中可主要地或辅助地用MAPCs进行治疗的淋 巴增殖性疾病（包括多发性骨髓瘤和淋巴瘤在内）：前-B急性淋巴母细胞性白血病、慢性 淋巴细胞性白血病（"CLL"）、B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、多发性骨髓瘤、T急性 淋巴母细胞性白血病、外周型T细胞淋巴瘤、其它淋巴样白血病和其它淋巴瘤。
[0285] 在本发明多个实施方案中可主要地或辅助地用MAPCs进行治疗的肿瘤还有：骨髓 细胞的良性肿瘤、骨髓增殖性疾病、骨髓增生异常综合征或急性白血病；慢性髓细胞性白 血病（"CML")(也称慢性粒细胞性白血病（"CGL"))、原因不明的骨髓纤维化、特发性 血小板增多症、真性红细胞增多症、其它骨髓增殖性疾病、急性多发性骨髓瘤、髓母细胞性 白血病、急性前髓细胞性白血病、前-B急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病 ("CLL"）、B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓瘤、T急性淋巴母细胞性白血病、外周型T细 胞淋巴瘤、其它淋巴样白血病、其它淋巴瘤或其它急性白血病。
[0286] 可将MAPCs辅助于对任何前述疾病的治疗进行给予。
[0287] 涉及免疫切除或缺损的治疗
[0288] 急性白血病往往难以通过对其它恶性肿瘤来说已有效的方法来治疗。这部分上是 因为细胞会从骨髓迀移，包括肿瘤的细胞。部分上是因为骨髓遍布骨骼分散分布。再部分 上无疑是因为细胞本身的特性和它们的转化。
[0289] 目前，血液恶性肿瘤的标准治疗法涉及将患者中的所有造血细胞进行切除。要这 样做同时又不切除掉患者的健康造血细胞，这是办不到的。通常，用化学放射疗法以足够高 的剂量来治疗患者，以杀死几乎所有的骨髓细胞，包括正常细胞和肿瘤细胞。该治疗的副作 用是严重的，它对患者的影响是不愉快的、痛苦的，在身体上和情绪上都会使人疲惫不堪。 该治疗不仅切除了患病的组织和细胞，它还除去了患者的造血系统和免疫系统。该治疗使 患者变得免疫缺损，要依赖输液，且如此高度易受感染，以至于即使是对传染原的本该轻微 的暴露也是致命的。
[0290] 正常的造血能力之后通过自体同源的或异基因的外周血或骨髓移植物得到恢复。 遗憾的是，患者的免疫系统不但因切除治疗而受到严重缺损，而且在异基因移植的情况中 还因有意的免疫抑制而受到严重缺损，该有意免疫抑制是为了防止移植物被排斥，和确保 会在患者骨髓中再繁殖和使患者造血和免疫细胞再生的新造血干细胞的移入和增殖。
[0291] 在进行这种移植以使免疫缺损宿主中的造血和免疫系统再生时碰到了许多并发 症。一种并发症是宿主中的残余免疫活性细胞和过程引起的排斥，在本文中称为HVG反应。 另一种并发症由移植物中的免疫活性细胞引起，本文中称为GVHD。
[0292] 这些并发症可通过使用同基因的或自体同源的供体材料来避免。但是，同基因的 供体通常是罕见的，而自体同源的移植具有很高的疾病复发风险。因此，移植通常是使用从 HLA相容供体获得的异基因细胞和组织。遗憾的是，这个程序会导致GVHD，在接受这种形式 的疗法的大部分患者当中或轻微或严重地出现。如果没有至少得到改善的话，这些免疫反 应会导致移植疗法的失败，且其本身对患者可能是致命的。
[0293] 已开发出多种药剂来抑制免疫应答，从而改善移植并发症如上文所述的HVG和 GVHD。在一些移植疗法如骨髓和外周血移植中，有一些药剂能足够有效地使不利免疫反应 降低到可应付的水平。这些药剂在一定程度上改进了移植患者的预后，但是它们没有一个 是完全有效的，而且它们全部都有相当大的缺点。
[0294] 已发现（这在本文别处更详细描述到），MAPCs不会在异基因宿主中引起免疫应 答。因此，MPCs相异基因宿主的移植不会产生异基因移植排斥（即HVG)。
[0295] 此外还发现，异基因 MAPCs能以高浓度给予宿主而对呼吸无不利影响。
[0296] 另外已发现（这在本文别处更详细描述到），MAPCs能调节免疫应答。在这点上 具体的说，已发现MAPCs能抑制免疫应答，包括但不限于涉及例如HVG反应和GVHD (仅举两 例）的免疫应答。在这点上更具体的说，已发现MAPCs甚至在强效T细胞刺激剂如伴刀豆 球蛋白A和异基因或异种的刺激细胞存在下，也能抑制T细胞的增殖。
[0297] 此外还发现，甚至相对较少量的MAPCs也能抑制这些应答。的确，在混合淋巴细胞 反应中仅仅3% MAPCs就足以减少体外T细胞应答达50%。
[0298] 因此，本发明的实施方案提供用于治疗如用于改善和/或整治或消除肿瘤如造血 细胞的肿瘤（特别是骨髓的肿瘤）的组合物和方法等。
[0299] 这些肿瘤有骨髓增殖性疾病（MPDs)如慢性髓细胞性白血病（也称"慢性粒细胞性 白血病"和〃CGL")、原因不明的骨髓纤维化、特发性血小板增多症、真性红细胞增多症；骨髓 增生异常综合征（MDSs)如难治性贫血、环形铁粒幼细胞性难治性贫血、伴过多原始细胞的 难治性贫血、伴过多转化中原始细胞的难治性贫血、慢性骨髓单核细胞性白血病；和明显恶 性的肿瘤--急性白血病如急性髓母细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病（CML)、急性前髓 细胞性白血病、B-急性淋巴母细胞性白血病、CLUB细胞淋巴瘤、毛细胞性白血病、骨髓瘤、 T-急性淋巴母细胞性白血病、外周型T细胞淋巴瘤和其它淋巴样白血病和淋巴瘤。
[0300] 可将MAPCs辅助于对任何前述疾病的治疗来给予。
[0301] 贫血和其它血液疾病
[0302] 在本发明的在各个实施方案中，可将MAPCs用于治疗贫血或其它血液疾病，往往 是辅助性地治疗。在这点上的各个实施方案是其中MPCs被用来单独地或主要地或辅助地 治疗以下贫血和/或血液疾病的实施方案：血红蛋白病、地中海贫血、骨髓衰竭综合征、镰 状细胞性贫血、再生障碍性贫血或免疫性溶血性贫血。同时疾病还包括难治性贫血、环形铁 粒幼细胞性难治性贫血、伴过多原始细胞的难治性贫血、伴过多转化中原始细胞的难治性 贫血、慢性骨髓单核细胞性白血病或其它骨髓增生异常综合征，和在一些实施方案中范可 尼贫血。
[0303] 可将MAPCs辅助于对任何前述疾病的治疗来给予。
[0304] 免疫疾病
[0305] 本发明的实施方案涉及使用MPC免疫调节单独地或作为辅助疗法来治疗免疫 功能异常、紊乱或疾病。在这点上的实施方案涉及先天性免疫缺陷和自身免疫功能异常、 紊乱和疾病。在这点上的各个实施方案涉及使用MAPCs来单独地或辅助地治疗节段性回 肠炎、格林-巴利综合征、红斑狼疮（也称"SLE"和系统性红斑狼疮）、多发性硬化、重症 肌无力、视神经炎、牛皮癣、类风湿性关节炎、格雷夫斯氏病、桥本氏病、Ord甲状腺炎、糖 尿病（I型）、莱特尔氏综合征、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、抗磷脂抗体综合征 ("APS"）、眼阵挛-肌阵挛综合征（"0MS"）、颞动脉炎、急性播散性脑脊髓炎（"ADEM"和 "ADE"）、古德帕斯彻氏综合征、韦格纳肉芽肿、乳糜泻、天疱疮、多关节炎和温性自身免疫性 溶血性贫血。
[0306] 这些实施方案中的具体实施方案涉及节段性回肠炎、红斑狼疮（也称"SLE"和系 统性红斑狼疮）、多发性硬化、重症肌无力、牛皮癣、类风湿性关节炎、格雷夫斯氏病、桥本氏 病、糖尿病（I型）、莱特尔氏综合征、原发性胆汁性肝硬化、乳糜泻、多关节炎和温性自身免 疫性溶血性贫血。
[0307] 另外，在这点上在多个实施方案中MAPCs可单独地、主要地、辅助地用于治疗多种 据认为具有自身免疫因素的疾病，包括但不限于可用来治疗以下疾病的实施方案：子宫内 膜异位、间质性膀胱炎、神经性肌强直、硬皮病、进行性系统性硬皮病、白癫风、外阴部触觉 痛（vulvodynia)、恰加斯氏病、肉样瘤病、慢性疲劳综合症和自主神经机能异常。
[0308] 遗传性免疫系统疾病包括严重复合型免疫缺乏症（SCID)，包括但不限于SCID 伴腺苷脱氨酶缺乏症（ADA-SCID)、X联锁的SCID、无 T细胞和B细胞的SCID、无 T细胞 的SCID、正常B细胞、Omenn综合征、嗜中性白细胞减少症，包括但不限于Kostmann综合 征、Myelokathexis ;共济失调毛细血管扩张、裸淋巴细胞综合征、普通变异型免疫缺陷病、 DiGeorge综合征、白细胞粘附缺陷病；和吞噬细胞疾病（吞噬细胞是能吞没和杀灭外来生 物体的免疫系统细胞），包括但不限于Chediak-Higashi综合征、慢性肉芽肿病、中性白血 球肌动蛋白缺乏、网状组织发育不全。
[0309] 可将MAPCs辅助于对任何前述疾病的治疗来给予。
[0310] 炎性疾病
[0311] 另外，在本发明的多个实施方案中，可将MPCs作为唯一药剂或者辅助地用于治 疗炎性疾病。在许多这种实施方案中，可将MAPCs用于治疗严重的炎症状态，如因急性变态 反应引起的或者从属于其它疾病或治疗的炎症状态。MAPCs在这点上的用途目前主要限于 其中受试者有重大残疾或失去生命的危险的急性情况。
[0312] 可将MAPCs辅助于对任何前述疾病的治疗来给予。
[0313] 美国专利7, 015, 037中所沭的MAPCs
[0314] 人MAPCs在本领域中有描述。人和小鼠的MAPC分离方法是本领域公知的。因此现 在本领域技术人员可以获得骨髓吸出物、大脑或肝脏活组织切片及其它器官，并用本领域 技术人员可得到的阳性或阴性选择技术，依靠在这些细胞中被表达（或不被表达）的基因 (例如通过功能或形态测定，如以上引用的申请案中所公开的测定，这些申请案已通过引用 结合到本文中），来分离到这些细胞。这种方法描述于例如美国专利7, 015, 037,该专利就 其关于MPCs和制备方法的描述内容通过引用结合到本文中。
[0315] PCT/US00/21387中所描沭的MAPCs的分离和牛长
[0316] 人和小鼠的MPC分离方法是本领域公知的。它们描述于例如美国专利 7,015,037、PCT/US00/21387(WTO01/11011&W)*PCT/US02/04652(WW0 02/064748 公布），这些方法连同这些专利中所公开的MAPCs的表征通过引用结合到本文中。
[0317] MAPCs最初是从骨髓分离，但后来是从其它组织建系（established)，包括大脑和 肌肉（Jiang，Y.et al.，2002)。因此，MAPCs可从多个来源分离获得，包括骨髓、胎盘、脐带 和脐带血、肌肉、大脑、肝脏、脊髓、血液或皮肤。例如，MAPCs可衍自骨髓吸出物，而骨髓吸 出物是可通过本领域技术人员可得到的标准方法来获得的（参见例如Muschler，G. F.，et al.，1997 ;Batinic，D.，et al.，1990)。
[0318] 人MAPCs在美国专利7, 015, 037中所沭的备件下的表塑
[0319] 用FACS对经过22-25次细胞倍增获得的人MAPCs所作的免疫表型分析表明，细胞 不能表达 CD31、CD34、CD36、CD38、CD45、CD50、CD62E 和-P、HLA-DR、Mucl8、STR0-1、cKit、 Tie/Tek ;能表达低水平的CD44、I类HLA和β 2-微球蛋白，但能表达CD10、CD13、CD49b、 CD49e、CDw90、Flkl (N > 10)。
[0320] 一旦细胞在以约2x 103/cm2再接种的培养物中进行了超过40次倍增，表型变得更 加同质，没有细胞表达I类HLA或⑶44(n = 6)。当细胞以更高的铺满度（confluence)生 长时，它们表达高水平的Mucl8、⑶44、I类HLA和β 2-微球蛋白，这与对MSC (N = 8)所述 的表型（Pittenger，1999)相似。
[0321] 免疫组织化学显示，以约2x IOVcm2接种密度生长的人MAPCs表达EGF-R、TGF-R1 和-2、BMP-R1A、PDGF-Rla 和-B，且有一小群（1-10 % )的 MAPCs 被抗 SSEA4 抗体染色 (Kannagi，R，1983) 〇
[0322] 使用Clontech cDNA阵列，测定了以约2x IO3个细胞/cm2的接种密度培养22-26 次细胞倍增的人MAPCs的基因表达谱：
[0323] A. MAPCs 不表达 CD31、CD36、CD62E、CD62P、CD44-H、cKit、Tie、ILl 受体、IL3 受体、 IL6 受体、ILll 受体、G CSF、GM-CSF、Epo、Flt3-L 或 CNTF，表达低水平的 I 类 HLA、CD44-E 和 Muc-18mRNA。
[0324] Β· MAPCs 表达细胞因子 BMPl、BMP5、VEGF、HGF、KGF、MCPl 的 mRNA ;细胞因子受体 Flkl、EGF-R、PDGF-Rl a、gpl30、LIF-R、激活蛋白-Rl 和-R2、TGFR-2、BMP-RlA ;粘附受体 CD49c、CD49d、CD29 和 CD10。
[0325] MAPCs 表达 hTRT 和 TRFl 的 mRNA ;P0U 结构域转录因子 oct-4、sox-2 (oct-4 需要它 来维持ES/Ec的未分化状态，Uwanogho D.，1995)、sox 11 (神经发育）、sox 9 (软骨发生） (Lefebvre V.，1998);同源异型域转录因子：H〇x-a4和_a5 (颈胸骨骼特化；呼吸道的器官 发生）（Packer AI，2000)、Hox_a9(骨髓组织生成）（Lawrence H，1997)、Dlx4(头的前脑和 周围结构的特化）（Akimenko MA，1994)、MSX1 (胚胎中胚层、成体心脏和肌肉、软骨发生和骨 发生）（Foerst-Potts L. I"7)、PDXl (胰腺）（Offield MF，I"6)。
[0326] D. RT-PCR 确证了 oct-4、LIF-R 和 hTRT mRNA 的存在。
[0327] 另外，RT-PCR 显示 rex-lmRNA 和 rox-lmRNA 在 MAPCs 中表达。
[0328] Oct-4、rex-Ι和rox-Ι在衍自人和鼠骨髓的MAPCs和衍自鼠肝脏和大脑的MAPCs 中表达。人MAPCs表达LIF-R且SSEA-4染色阳性。最后发现，被培养超过30次细胞倍增 的人MAPCs中oct-4、LIF-R、rex-Ι和rox-lmRNA水平提高，这这导致产生表型上更加同质 的细胞。与此对比，在高密度下培养的MAPCs失去这些标志的表达。这与40次细胞倍增之 前就发生衰老和失去分化为成软骨细胞、造骨细胞和脂肪细胞之外的细胞的能力有关。因 此，oct-4