源自亚麻蛋白质水解的亚麻提取物作为活性抗微生物剂的用图_2

文档序号:8908341阅读:来源:国知局
了进行提取,可以使用全植物或植物的具体部分(叶子、种子等)。
[0043] 根据本发明更具体的是,使用亚麻科家族亚麻属(亚麻子)中众多植物的一种。 亚麻属包括在北半球生长的超过200种亚麻。它们是具有纤维莖(fibrous stem)、单叶和 5瓣花的草本植物。根据本发明,优选地使用栽培种栽培亚麻(Linum usitatissimum L)。 本发明的亚麻子提取物(亚麻属)优选为从亚麻子种子(优选通过脱壳步骤而去除其外壳 的种子)提取的蛋白质水解获得的肽提取物。
[0044] 本领域技术人员已知的任何提取或纯化方法均可以用于制备本发明的亚麻子提 取物。
[0045] 优选地,所述亚麻子提取物是通过包括以下步骤的方法获得的:
[0046]-提取植物来源蛋白质的步骤,
[0047]-释放生物活性肽化合物的受控水解的步骤。
[0048] 在植物中发现许多蛋白质能够在它们的结构中含有生物活性肽化合物。受控水解 使去除这些肽化合物成为可能。为了实施本发明,可以(但不是必须)首先提取相关的蛋 白质然后将其水解,或者首先对粗提取物进行水解然后纯化肽化合物。
[0049] 用于获得本发明的亚麻子提取物的方法的具体实施方案在下文描述。
[0050] 在第一个步骤中,通过植物粉碎机粉碎植物。随后可以通过常规的有机溶剂(例 如乙醇、己烷或丙酮)将由此获得的粉末"脱脂"。
[0051] 在第二个步骤中,通过常规方法进行植物蛋白的提取。植物的粉碎物悬浮在含有 不溶性聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP) (0.01%至20%)型的吸附剂产物的碱性溶液中;事实上, 已经观察到通过该方法,为随后的水解和纯化操作提供了便利。与蛋白质相互作用的酚类 物质的浓度因此而降低。
[0052] 在离心和过滤步骤之后,收集可溶性部分,粗溶液随后构成含有蛋白质、碳水化合 物和可能存在的脂质的提取物的第一形式。
[0053] 根据所述方法的一个具体实施方案,可以随后通过酸化介质来改变离子强度,从 而将蛋白质沉淀,这使除去水溶性成分成为可能。然后用有机溶剂(例如乙醇或丁醇)洗 涤所述沉淀,接着通过真空干燥蒸发该溶剂。然后将富含蛋白质的沉淀再溶解在水或其它 溶剂中,然后构成水解产物的更为纯化的形式。
[0054] 从植物中提取蛋白质的步骤也可以在中性或酸性介质中,始终在聚乙烯聚吡咯烷 酮的存在下进行。在过滤步骤之后,可以通过使用常规的沉淀剂如盐类(氯化钠、硫酸铵) 或有机溶剂(乙醇、丙酮),以特定模式进行沉淀步骤。所获得的沉淀物可以在溶解于水或 其它溶剂中后通过透析与沉淀剂分离。
[0055] 在离心和过滤步骤后收集含有蛋白质、碳水化合物和可能存在的脂质的可溶性部 分。随后将粗溶液在受控条件下水解以生成肽化合物、多肽和可溶性肽。水解被定义为涉 及通过水裂解分子的一种化学反应,该反应能够在中性、酸性或碱性介质中进行。根据本发 明,经由蛋白水解酶而化学地和/或有利地进行水解。
[0056] 根据具体的特征,通过蛋白酶或蛋白酶的混合物和/或纤维素酶或纤维素酶的混 合物来进行水解。
[0057] 根据优选特征,使用包括以下的酶的混合物:
[0058] 植物来源(例如,木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶等)和/或来源于微生 物(曲霉菌属(Aspergillus)、根霉菌属(Rhizopus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、Alcalase) 等)的内切蛋白酶。
[0059] -和/或纤维素酶或纤维素酶混合物(例如Celluclast? CL)。
[0060] 有利地,纤维素酶使亚麻子的细胞壁能够更好地水解,这增加了蛋白质的易接受 性并且有助于过滤。实际上,纤维素酶使具有少量寡糖的细胞壁能够水解。随后纤维素酶 和蛋白酶的共同作用导致生成具有低分子量多肽(分子量低于5kDa,更具体的是分子量低 于2. 5kDa的大部分)。一旦已经进行了这些不同的水解,则需要热灭活步骤来灭活这些酶。
[0061] 为了与上述相同的原因(即,去除多酚物质),将一定量的聚乙烯聚吡咯烷酮添加 到该受控水解步骤的反应介质中。
[0062] 在过滤之后,所获得的溶液构成本发明的亚麻子肽提取物的第一有利形式。为了 选择所产生的肽的分子量和性质,可以再度纯化该亚麻子肽提取物。可以通过超滤和/或 通过色谱法有利地进行分级。
[0063] 肽提取物特别是低分子量肽提取物的使用在化妆品中具有众多优点。除了产生在 起始蛋白质混合物中不存在的肽化合物外,水解和纯化使获得更稳定的肽化合物的混合物 成为可能,并且可以更容易地重现组合物且不会引起化妆品过敏反应。
[0064] 根据具体的特征,本发明的亚麻子提取物基本上包含具有低分子量的肽化合物。 优选地,本发明的亚麻子肽提取物基本上包含分子量低于2. 5KDa的肽化合物。
[0065] 随后将任一种水解产物的粗略纯化形式在水中或含有水的任意混合物中溶解,然 后通过超滤进行灭菌。
[0066] 定性和定量分析根据本发明获得的亚麻子提取物的物理化学特性及其肽化合物 含量。术语肽化合物指存在于混合物中的蛋白质片段、肽游离氨基酸。所述肽、氨基酸和蛋 白质片段通过本领域技术人员公知的常规技术进行测定。
[0067] 因此,根据本发明一个有利的实施方案,所述亚麻子提取物的pH为4-5,优选 4-4.5。有利地,这种酸性pH促进蛋白质在水中的溶解并使蛋白质稳定。本发明的亚麻子 提取物的干重为〇. l_8g/l,优选0. l_5g/l,并且所述亚麻子提取物包含:
[0068] -按照干提取物的重量计,0. l_5g/l的肽化合物,
[0069] -按照干提取物的重量计,0· l_2g/l的糖。
[0070] 随后将提取物在水中或含有水的任何溶剂混合物中稀释,然后通过无菌过滤 (sterilizing filtration) (0· 2 μm)灭菌。
[0071] 根据具体的特征,将提取物在一种或多种生理学可接受的溶剂(如水、甘油、乙 醇、丙二醇、丁二醇、二丙二醇、乙氧基化二甘醇或丙氧基化二甘醇、环状多元醇、或这些溶 剂的任意混合物)中稀释。"生理学可接受"意味着所选择的溶剂适合与皮肤接触而不会引 起毒性或不耐受反应。
[0072] 优选地,在稀释之后,所述亚麻子提取物包含:
[0073] -按照干提取物的重量计,I. 5-3. 5g/l的肽化合物,
[0074] -和按照干提取物的重量计,约0. 3g/l的糖。
[0075] 在本发明的亚麻子提取物中,糖的含量更优选低于0. 3g/l。
[0076] 在该稀释步骤之后,可以将提取物包封或包含在化妆品或药物载体(如在化妆品 领域使用的脂质体或任意其它微囊)中,或者吸附在粉状有机聚合物、矿物支持物(如滑石 和膨润土)上,更普遍地溶解在任意生理学可接受的载体中或固定在任意生理学可接受的 载体上。
[0077] 本发明的亚麻子提取物可以应用于化妆品组合物或药物组合物中。所述组合物可 以包含为了获得期望结果所必需的量的亚麻子提取物,所述结果为:保护皮肤和皮肤附件 以免微生物侵袭、保护皮肤和皮肤附件的菌群、刺激皮肤的免疫防御和刺激AMP的表达。
[0078] 根据本发明的一个有利的实施方案,相对于最终组合物的总重量,本发明的亚麻 子提取物以〇. 〇〇〇 1 %至约20 %的浓度,优选以0. 05 %至约5 %的浓度,甚至更优选以1 %至 约3%的浓度存在于组合物中。
[0079] 本发明的组合物可以通过任何适宜的途径(特别是口服、肠胃外或局部外用)施 用,并且由本领域技术人员使它们的制剂适应特别是化妆品组合物或药物组合物。
[0080] 有利地,本发明的组合物意图在至少一部分面部或身体皮肤上局部皮肤给药。本 发明的化妆品组合物可以用作护理产品和/或皮肤化妆产品。因此这些组合物必须包含本 发明的生理学可接受的介质,即,适用于与人体皮肤或皮肤附件相接触且没有毒性、不相容 性或甚至过敏反应的风险的介质。
[0081] 优选地,意图被局部施用到至少一部分面部或身体皮肤上的本发明的组合物是水 溶液剂、水-醇(hydro-alcoholic)溶液剂或油溶液剂、水包油或油包水乳剂(emulsion) 或复合型乳剂、溶液剂、混悬剂、微乳剂、含水或无水凝胶剂、浆液(serum)或雾滴分散体或 胶态分散体的形式。这些组合物也可以是适于施用到皮肤、粘膜、嘴唇和/或皮肤附件上的 乳膏剂、混悬剂或粉末的形式。这些组合物可以具有或多或少的流动性,并且为乳膏剂、洗 剂、乳液(milk)、衆液、香膏剂(pomade)、乳膏剂、糊剂、软膏剂或泡沫剂的形式。它们也可 以是固体形式,如棒(stick)、贴剂,或者可以以气雾剂或喷雾剂形式施用到皮肤上。它们可 以用作皮肤护理产品和/或皮肤化妆产品。这些组合物也可以适用于施用到头皮和/或头 发上,特别为洗发水、护发素、定型液(styling lotion)、护理液(treatment lotion)、乳膏 或定型凝胶、用于头发的洗剂、发膜等。本发明的化妆品组合物尤其可用于涉及施用后漂洗 或不漂洗的处理,或者以洗发水形式使用。其也可以是用刷子或梳子特别施加到睫毛、眉毛 或头发上的染料或睫毛膏的形式。
[0082] 这些组合物还包括为了它们的配制所必需的在预期使用的领域中常用的任何添 加剂和辅剂,如助溶剂(乙醇、甘油、苯甲醇、保湿剂……)、增稠剂、稀释剂、乳化剂、抗氧化 剂、着色剂、遮光剂、色素、填料、防腐剂、香料、气味吸收剂、精油、微量元素、必需脂肪酸、表 面活性剂、成膜聚合物、化学或矿物过滤器、水化剂(hydrating agent)或热水(thermal water)等。例如,可引用
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