天然聚合物类型的水溶性聚合物，如多糖或多肽、甲基纤维素或羟 丙基纤维素类的纤维素衍生物；或者合成聚合物泊洛沙姆、卡波姆、硅氧烷、PVA或PVP ;特 别地由Ashland公司销售的聚合物。在任何情况下，本领域技术人员会确保这些辅剂及其 比例的选择使得不会不利地影响本发明的组合物的有利性质。这些辅剂可以例如相当于组 合物总重量的0. 01至20 %。当本发明的组合物是乳剂时，脂肪相可以占所述组合物总重量 的5-80重量％，优选5-30重量％。用于所述组合物的乳化剂和助乳化剂（co-emulsifier) 选自在所关注领域中常规使用的那些乳化剂和助乳化剂。例如，它们可以以组合物总重量 的0. 3-10重量％的比例使用。
[0083] 可以理解的是，在化妆品组合物中，本发明的活性成分可以单独使用或者与至少 一个其它活性成分组合使用。
[0084] 有利地，根据本发明能够使用的组合物还可以包含旨在提高本发明的活性剂的作 用的多种活性成分，特别是用于预防和/或治疗与皮肤屏障功能相关的病症或用于舒缓皮 肤的活性成分。
[0085] 以非限定的方式，可以引用下列类型的组分：其它肽类活性成分、植物提取物、 愈合剂、抗老化剂、抗皱剂、舒缓剂、抗自由基剂、抗紫外线剂、刺激真皮大分子合成或能量 代谢的物质、水化剂、抗菌剂、抗真菌剂、抗炎剂、麻醉剂、分化调节剂（di fferent iat ion modulating agent)、皮肤色素沉着或色素脱失剂、指甲或头发生长刺激剂等。优选地，使用 具有舒缓活性的物质或刺激真皮大分子合成的物质、或刺激能量代谢的物质。更具体地，所 述活性成分选自生物活性肽活性成分、维生素、植物留醇、类黄酮、DHEA和/或一种它的前 体或一种它的化学或生物学衍生物、金属蛋白酶抑制剂、或类视黄醇。
[0086] 根据第三个方面，本发明还包括用于意图保护共生微生物菌群和/或限制共生微 生物菌群的失衡的美容治疗方法，其特征在于将包含亚麻子提取物的组合物局部施用到待 治疗的皮肤或皮肤附件上。
[0087] 这种美容治疗方法的具体实施方案也参见上文所述。参考示例性实施例和非限制 性实施例，本发明的其它优点和特征会变得更清晰。
[0088] 图1以直方图的形式显示用或不用1 %亚麻子提取物治疗24h的离体皮肤中的抗 微生物蛋白DEFBl和LL-37的表达水平的免疫组织化学检测。
[0089] 实施例1 :来自亚麻子（Linum usitatissmm L )的活性成分的制备
[0090] 在第一个步骤中，将Ikg亚麻子的种子在谷物研磨机上研磨。将所获得的碎粉 (Ikg)放置在10升己烷中。随后将混合物在室温下搅拌2小时以进行原料的脱脂。在过滤 和真空干燥之后，将所获得的粉末悬浮在800ml含1%聚乙烯吡咯烷酮（Polyclar V ISP) 的pH 10的碱性水溶液（I : 10稀释）中。将混合物在室温下搅拌2小时以使可溶性部分 溶解。在该提取阶段之后，通过离心来澄清介质，然后在平板上过滤。随后通过在中性或酸 性介质中改变离子强度来对包含亚麻子的可溶性部分的滤液进行蛋白质沉淀，使去除可溶 性碳水化合物组分、脂质和核酸成为可能。调节介质到PH 3.5。去除上清液并且随后用乙 醇洗涤沉淀，接着经由真空干燥蒸除溶剂。
[0091] 在该阶段中，获得约50g的浅黄色粉末状粗蛋白提取物，其包含：
[0092] -蛋白质：78%
[0093] -碳水化合物：20%
[0094] -脂质 <2%
[0095] 将该富含蛋白质的沉淀物溶解在500g水中。
[0096] 随后在0. 5% PVPP(Polyclar V)和半胱氨酸内肽酶（2g/l的菠萝蛋白酶和2g/l 的碱性蛋白酶（alcalase))的存在下，对该粗蛋白提取物进行一系列受控的选择性酶法水 解。在50°C下反应2小时，然后在80°C下持续2小时使酶混合物（enzymatic cocktail) 失活，将水解产物在具有减小孔隙的平板上过滤，然后在灭菌管（sterilizing cartridge， 0· 2 μπι)中过滤。
[0097] 然后获得一种浅色水解产物，称量为15-30g/l的干提取物，随后将其稀释，使得 通过Lowry法测定的肽化合物的浓度为0. l-5g/l，优选I. 5-3. 5g/l。对构成活性成分的 植物水解产物的物理化学分析表明其pH为4-5,优选4-4. 5。本发明的亚麻子提取物的干 提取物含量为l_8g/l，优选0. l_5g/l，并且所述亚麻子提取物包含按照干提取物的重量计 〇. l_5g/l的肽化合物和按照干提取物的重量计0. l_2g/l的糖，优选地，将本发明的亚麻子 提取物稀释，使得其包含按照干提取物的重量计I. 5-3. 5g/l的肽化合物和按照干提取物 的重量计0. l-o. 3g/l的糖。
[0098] 实施例2 :证明实施例1的亚麻子提取物对角质形成细朐中的DEFBl和LL37信伸 RNA的表汰7k平的活化作用
[0099] 此项研宄的目的是确定实施例1的亚麻子提取物对DEFBl转录表达和对LL-37转 录表达的影响。为了评估DEFBl信使RNA的表达水平和LL-37信使RNA的表达水平，进行 实时聚合酶链式反应（PCR)定量。
[0100] 7f#
[0101] 用或不用（对照）1 %的实施例1的亚麻子提取物处理NHK细胞（正常原代人角质 形成细胞），每天两次，持续48小时。
[0102] 为了评估DEFBl信使RNA的表达水平和LL-37信使RNA的表达水平，需要从用实施 例1的亚麻子提取物处理的或未处理的培养的角质形成细胞中分离总RNA。然后将总RNA 通过逆转录酶的作用而转变成互补DNA。接着通过使用StepOnePlus?热循环仪（Applied Biosystems)进行实时PCR，从而进行互补DNA的定量。这种定量使确定DEFBl信使RNA的 表达水平和LL-37信使RNA的表达水平成为可能。
[0103] MM
[0104] 与未处理的细胞相比，在用实施例1的亚麻子提取物处理48小时之后，观察到细 胞中的DEFBl信使RNA的表达水平提高了 31 %和LL-37信使RNA的表达水平提高了 23%。 [0105]
[0106] 实施例1的亚麻子提取物提高了在正常的人类角质形成细胞中编码DEFBl的信使 RNA的表达水平和编码LL-37的信使RNA的表达水平。
[0107] 实施例3 :证明实施例1的亚麻子提取物对角质形成细朐中的抗微牛物蛋白DEFBl 的表汰和抗微牛物蛋白LL-37的表汰的活化作用
[0108] 此项研宄的目的是确定实施例1的亚麻子提取物对抗微生物蛋白DEFBl的表达和 抗微生物蛋白LL-37的表达的影响。为此，通过对用或不用（对照）1%的实施例1的亚麻 子提取物处理24小时并且嵌入到石蜡中的角质形成细胞进行免疫细胞化学分析，从而评 估DEFBl蛋白的表达水平和LL-37蛋白的表达水平。
[0109] 7f#
[0110] 培养NHK细胞（正常原代人角质形成细胞）。随后用10%的福尔马林固定这些细 胞，然后包埋入石蜡中。然后将细胞块用切片刀切成4 μ m厚的切片，接着转移到载玻片上。
[0111] 用100%的二甲苯从石蜡中移除这些切片，接着在连续醇浴中再水化：2个100% 乙醇浴（EtOH)进行2分钟，1个95%乙醇浴进行2分钟，1个90%乙醇浴进行2分钟，和1 个水浴进行5分钟。将载玻片浸没在pH6的0.0 lM柠檬酸缓冲液中并且加热至轻微沸腾， 以促进抗体进入所关注的蛋白质。将切片用5% BSA孵育30分钟，然后用在PBS中稀释至 1/500的第一抗体（抗"DEFB1"多克隆兔抗体abl4425 (Abeam，Cambridge，UK))或者用在 PBS 中稀释至 1/75 的抗"LL-37"单克隆小鼠抗体 sc-166770(Tebu Santa Cruz，CA，USA) 孵育I. 5小时，同时在室温下搅拌。用PBS洗涤几次之后，将这些切片用在PBS中稀释至 1/1000 的第二焚光抗体（抗兔抗体 Alexa Flour 488A21206(Invitrogen，Fisher))在室 温下孵育1小时。用〇. 3 μΜ V，6;-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI)(分子探针）标记细 胞核。用PBS漂洗该切片5分钟。通过使用荧光显微镜（40Χ物镜）检测抗微生物蛋白 DEFBl和抗微生物蛋白LL-37的表达。
[0112] MM.
[0113] 结果表明，与未处理的角质形成细胞相比，在用1 %的实施例1的亚麻子提取物处 理24小时之后，抗微生物蛋白DEFBl的表达提高了 118 %，并且抗微生物蛋白LL-37的表达 提尚了 136 %。
[0114] 结论
[0115] 实施例1的亚麻子提取物刺激了角质形成细胞中抗微生物蛋白DEFBl的表达和抗 微生物蛋白LL-37的表达。
[0116] 实施例4 :证明实施例1的亚麻子提取物对离体皮肤中抗微牛物蛋白DEFBl的表 汰和抗微牛物蛋白LL-37的表汰的活化作用
[0117] 此项研宄的目的是确定实施例1的亚麻子提取物对DEFBl的表达和LL-37的表达 的影响。为了评估DEFBl和LL-37的表达水平，对离体皮肤切片进行DEFBl和LL-37的免 疫标记。
[0118] 7f#
[0119] 将人皮肤活组织离体培养，然后通过局部施用20 μ 1 1%的实施例1的亚麻子提 取物进行处理或不进行处理，每天2次，持续24小时。
[0120] 然后固定该皮肤活组织，接着通过Shandon Hypercenter XP自动设