使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的外消 旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为5. I ym。
[0183] 对比实施例2 (含有33% PLGA的外消旋托伐普坦SD粉末的制各）
[0184] 在二氯甲烷（IOOmL)和乙醇（20mL)中溶解托伐普坦（外消旋化合物）晶体（10g， 由日本大冢制药株式会社制造）以及DL乳酸和乙醇酸的共聚物（5g) (PLGA-5005,由日本和 光纯药工业株式会社（Wako Pure Chemical Industries)制造）。使用喷雾干燥器（Pulvis GB22,由日本大和科学株式会社制造），在0.1 MPa的喷射大气压、80°C的干燥温度、0. 44m3/ min的气流和40mL/min的液体发送速度下喷雾干燥所述溶液。所制备的喷雾干燥粉末在减 压条件下干燥。在所制备粉末的粉末X射线衍射中，仅观察到光晕峰。因此，确定所制备的 粉末为非晶态。
[0185] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的含有 33%PLGA的外消旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为5.Iym。
[0186] 对比实施例3(含有33% PVP-17PF的外消旋托伐普坦SD粉末的制各）
[0187] 在二氯甲烷（IOOmL)和乙醇（20mL)中溶解托伐普坦（外消旋化合物）晶体（10g， 由日本大冢制药株式会社制造）和聚乙烯吡咯烷酮（5g，PVP-17PF，由BASF有限公司制 造）。使用喷雾干燥器（Pulvis GB22,由日本大和科学株式会社制造），在0.1 MPa的喷射 大气压、80°C的干燥温度、0. 41m3/min的气流和7mL/min的液体发送速度下喷雾干燥所述溶 液。所制备的喷雾干燥粉末在减压条件下干燥。在所制备粉末的粉末X射线衍射中，仅观 察到光晕峰。因此，确定所制备的粉末为非晶态。
[0188] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的含有 33% PVP-17PF的外消旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为7. 2 ym。
[0189] 对比实施例4(含有33% HP-55的外消旋托伐普坦SD粉末的制各)
[0190] 在二氯甲烷（150mL)和乙醇（30mL)中溶解托伐普坦（外消旋化合物）晶体（10g， 由日本大冢制药株式会社制造）和羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯（5g)(由信越化学工业 株式会社（Shin-Etsu Chemical Co. ,Ltd.)制造的HP-55)。使用喷雾干燥器（Pulvis GB22， 由日本大和科学株式会社制造），在0.1 MPa的喷射大气压、80°C的干燥温度、0. 41m3/min的 气流和40mL/min的液体发送速度下喷雾干燥所述溶液。所制备的喷雾干燥粉末在减压条 件下干燥。在所制备粉末的粉末X射线衍射中，仅观察到光晕峰。因此，确定所制备的粉末 为非晶态。
[0191] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的含有 33% HP-55的外消旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为5. 5 ym。
[0192] 对比实施例5 (含有33% HPC-SL的外消旋托伐普坦SD粉末的制各）
[0193] 在二氯甲烷（IOOmL)和乙醇（30mL)中溶解托伐普坦（外消旋化合物）晶体 (l〇g，由日本大冢制药株式会社制造）和羟丙基纤维素（5g)(由日本曹达株式会社制造的 HPC-SL)。使用喷雾干燥器（Pulvis GB22,由日本大和科学株式会社制造），在0.1 MPa的喷 射大气压、80°C的干燥温度、0. 39m3/min的气流和7mL/min的液体发送速度下喷雾干燥所述 溶液。所制备的喷雾干燥粉末在减压条件下干燥。在所制备粉末的粉末X射线衍射中，仅 观察到光晕峰。因此，确定所制备的粉末为非晶态。
[0194] 将含有33% HPC-SL的外消旋托伐普坦SD粉末（300mg)装入注射器中，并且将所 述实施例1的介质溶液（〇. 76g)(表1)装入另一个注射器中。所述两个注射器经连接器连 接。重复进行抽吸来制备200mg/mL的均质非晶态外消旋托伐普坦水悬浮液。
[0195] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的含有 33% HPC-SL的外消旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为6. 6 ym。
[0196] 对比实施例6 (外消旋托伐普坦SD粉末的制各）
[0197] 在二氯甲烷（IOOmL)和乙醇（20mL)中溶解托伐普坦（外消旋化合物）晶体（10g， 由日本大冢制药株式会社制造）。使用喷雾干燥器（0DT-8喷雾干燥器，由日本大川原化 工机株式会社（Ohkawara Kakohki Co. ,Ltd.)制造）喷雾干燥所述溶液（转盘喷雾器、 13000rpm的转速、0/1kg/cm2的吹扫气压、90 °C热空气进口温度、180g/min的液体发送速 度）。所制备的喷雾干燥粉末在减压条件下干燥。在所制备粉末的粉末X射线衍射中，仅观 察到光晕峰。因此，确定所制备的粉末为非晶态。
[0198] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的外消 旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为32. 5 y m。
[0199] 对比实施例7 (外消旋托伐普坦晶体的喷磨粉末的制各）
[0200] 在5kgf/cm2的气压和20rpm的发送速度下，使用喷磨机（PJM-100SP，由Nippon Pneumatic Mfg. Co.，Ltd?制造）粉碎托伐普坦（外消旋化合物）晶体（由日本大冢制药株 式会社制造）。进行所制备粉末的粉末X射线衍射，并且确定所述托伐普坦晶体被保持。
[0201] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）测量的外消 旋托伐普坦SD粉末的平均粒度为2. 4 y m。
[0202] 对比实施例8 (外消旋托伐普坦晶体颗粒的制各）
[0203] 在实施例1的介质溶液（8. 3g)(等于IOmL)(表1)中悬浮托伐普坦（外消旋化合 物）晶体（2. Og)。向所述悬浮液中加入直径为I. 5mm的氧化锆珠粒（IOg)。将搅拌棒引入 容器中，并且使用搅拌器进行搅拌来进行珠粒粉碎（湿粉碎），由此制备200mg/mL的均质外 消旋托伐普坦晶体水悬浮液。
[0204] 根据湿法使用激光衍射粒度分布仪（SALD-3000J，由岛津公司制造）在超声照射 期间测量的外消旋托伐普坦晶体颗粒的平均粒度为2. 4 y m。
[0205] 试骀实施例1
[0206] 使用人和大鼠肝脏匀浆（S9部分），进行托伐普坦（外消旋化合物）、R_托伐普 坦和S-托伐普坦的体外代谢稳定性试验。将各评估的化合物的浓度设置为100nM，并且在 反应混合物中各化合物的浓度取样随时间进行，即，加入后5、10、30和60分钟，并且通过 LC-MS/MS来测量（图I (1)和⑵）。
[0207] 结果显示，在人体中，与托伐普坦（外消旋化合物）或R-托伐普坦相比较，S-托 伐普坦缓慢消失，并且具有高代谢稳定性（图1(1));以及在大鼠中，与托伐普坦（外消旋 化合物）或S-托伐普坦相比较，R-托伐普坦缓慢消失（图1 (2))。
[0208] 试骀实施例2
[0209] 进行实施例1和2的R-和S-托伐普坦SD粉末、对比实施例1至6的托伐普坦 (外消旋化合物）SD粉末和对比实施例7的托伐普坦（外消旋化合物）晶体粉末中的每一 个的溶解试验（图2至4)。在所述溶解试验方法中，以0.1 g的单个量称出所述R-和S-托 伐普坦SD粉末、托伐普坦（外消旋化合物）SD粉末和托伐普坦（外消旋化合物）晶体粉末， 然后加入至表2中显示的用于溶解试验的溶液（500mL)中。以上称重的量的托伐普坦都没 有溶解在所述用于溶解试验的溶液中，并且完全悬浮。在加入后〇. 〇83、0. 167、0. 5、1、2、4、 6、8、12、24、48和144小时进行顺序取样。
[0210] 表2用于溶解试验的溶液的组成
[0212] 结果显示，对比实施例7的托伐普坦（外消旋化合物）晶体的溶解量自开始就显 著低。对比实施例1至6的非晶态托伐普坦（外消旋化合物）在溶解试验开始后数小时显 示高浓度。此后，所述溶解量在10小时内突然下降，然后降低至与所述托伐普坦（外消旋 化合物）晶体的溶解量相同的水平。实施例1和2的R-托伐普坦SD粉末和S-托伐普坦 SD粉末在溶解试验开始之后的至少144小时之内未显示溶解量的显著下降。
[0213] 试骀实施例3
[0214] 进行R-和S-托伐普坦晶体粉末中每一个的溶解试验（图5)。作为对照，标绘在以 上试验实施例2中的对比实施例7的结果。在所述溶解试验方法中，以0.1 g的量称重R-托 伐普坦晶体粉末（平均粒度：34. 0 y m)或S-托伐普坦晶体粉末（平均粒度：35. 8 y m)，然 后加入到以上在表2中显示的用于溶解试验的溶液（500mL)中。以上称重的量的托伐普坦 都没有溶解在所述用于溶解试验的溶液中，并且完全悬浮。在加入后〇. 〇83、0. 167、0. 5、1、 2、4、6、8、12、24和48小时进行顺序取样。
[0215] 结果显示，尽管对比实施例7的托伐普坦（外消旋化合物）晶体的溶解量在试验 开始之后即刻稍微高，但此后，溶解速率立即减小。2小时后，R-托伐普坦晶体和S-托伐普 坦晶体的溶解量稍高于对比实施例7的托伐普坦（外消旋化合物）晶体的溶解量，并且保 持相当稳定。在溶解试验开始之后的至少48小时之内没有观察到如在对比实施例7中的 溶解量的下降。
[0216] 试骀实施例4
[0217] 使用装配有24G针头的注射器，在用乙醚轻度麻醉的情况下，将实施例1、2、3和4 的光学活性托伐普坦水悬浮液和实施例5和8的外消旋托伐普坦水悬浮液各以100mg/kg 的剂量肌内施用至各个SD雌性大鼠的大腿肌肉（n = 4)。在各制剂（水悬浮液）施用后1 小时、6小时、1天、3天、7天、14天、21天和28天，在用乙醚轻度麻醉的情况下，从颈静脉中 收集大约0. 5mL的血液。将所收集的血液分别引入到各个S印arapid管中，在室温下静置 大约30分钟，然后在ISOOxg离心10分钟来获得血清。所得血清在-20°C或更低温度下保 存直到测量。各血清的托伐普坦浓度通过LC-MS/MS法测量（n = 4)。
[0218] (1)晶态光学活性托伐普坦和晶态外消旋托伐普坦之间的比较
[0219] 实施例3的R-托伐普坦晶体水悬浮液、实施例4的S-托伐普坦晶体水悬浮液和 对比实施例8的托伐普坦（外消旋化合物）晶体水悬浮液各自向各个雌性SD大鼠施用。
[0220] 作为施用部位的大腿在施用后28天切开以确认剩余的托伐普坦。从各个囊肿中 提取所述托伐普坦。所述囊肿中的托伐普坦用乙腈提取，用乙腈和甲醇稀释，并且使用过滤 器（孔径：〇. 2 ym)过滤。然后通过HPLC测量托伐普坦的剩余率（n = 3)。
[0221] 结果显示，对比实施例8的托伐普坦（外消旋化合物）晶体的剩余率为大约70%; 作为每四周施用的制剂，所述吸收速率过慢；实施例3 (R-托伐普坦晶体）和实施例4 (S-托 伐普坦晶体）各自的剩余率为大约50% ;并且在所有实施例中，在四周内以适合于每四周 施用的制剂的量吸收了托伐普坦（表3)。
[0222] 表3在施用部位处的制剂的剩余率
[0224] 进一步地，图6显示实施例3的R-托伐普坦晶体水悬浮液和对比实施例8的托伐 普坦（外消旋化合物）晶体水悬浮液的肌内施用后28天的血清托伐普坦浓度曲线的结果 (n = 4)。与对比实施例8的托伐普坦（外消旋化合物）晶体相比较，实施例3的R-托伐 普坦晶体显示施用后4周显著高的血清浓度曲线。
[0225] (2)非晶态光学活性托伐普坦和非晶态外消旋托伐普坦之间的比较
[0226] 实施例1的非晶态R-托伐普坦水