一种兔儿伞总黄酮的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种兔儿伞总黄酮的提取方法，尤其涉及一种利用生物酶协同超声波提取兔儿伞总黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]兔儿伞为菊科兔儿伞属多年生草本植物，其幼苗嫩叶均可食用，根和全草均可入药，既有药用价值又有经济价值。兔儿伞治疗风湿麻木、关节疼痛、痈疽疮肿、跌打损伤、月经失调等症效果显著，是我国民间习用药材之一。兔儿伞中黄酮类化合物及生物碱含量较高，经研宄表明，兔儿伞总黄酮具有显著的抗炎、镇痛及消肿的作用。
[0003]目前关于兔儿伞总黄酮的提取的专利和文献较少，通常采用溶剂萃取法、或微波提取法等，其工艺复杂、收率低并采用多种溶剂，生产成本高。如文献“兔儿伞总黄酮的微波提取工艺”(作者，吴素珍、李加林等)，取兔儿伞干燥粉末直接置于微波反应釜，以乙醇为溶剂的条件下提取lOmin，其得率达到11%，但微波产能较高，易破坏热不稳定成分，从而影响兔儿伞总黄酮的提取。
[0004]本发明利用酶解破坏细胞壁和超声波的空化效应，在低温下即可得到高的提取率，为热不稳定物质的提取提供了一种新的强化方法。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种兔儿伞总黄酮的提取方法，该方法具有工艺简单、易操作、提取时间短、提取率高、对环境友好的优点。
[0006]本发明包括以下步骤:
a.将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；
b.向上述原料中加入1~2倍的蒸馏水，再加入原料重量2~5%的生物酶，控温在45-55 0C，搅拌，酶解时间为2~3h ；
c.将酶转化后的物料再加入6~8倍的60~70%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于60~70 °C的条件下提取2~4h，离心，取出上清液；
d.将步骤c中的上清液浓缩后，上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5~7BV的50-70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮。
[0007]步骤b中所述的生物酶为质量比2:1的纤维素酶和半纤维素酶的混合物。
[0008]步骤d中所述的大孔吸附树脂型号为NKA-9、H1020、D-1Ol中的任意一种。
[0009]本发明选用生物酶(纤维素酶和半纤维素酶为主体的复合酶)在适宜温度下酶解兔儿伞。由于纤维素酶和半纤维素酶能水解结构致密的植物细胞壁，使其疏松、膨胀、崩溃，从而增大了有效成分的扩散面积，减小了阻力，提高了有效成分的得率。再结合超声波的空化效应，加剧运动，使胞外液容易进入细胞内，溶解并释放胞内产物，具有强力、瞬时、高效的特点。该方法工艺简单、成本低、萃取效率高、对环境友好，同时也保证了兔儿伞总黄酮的生物活性。
[0010]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0011]【具体实施方式】:
实施例1:
将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；向上述原料中加入I倍的蒸馏水，再加入原料重量2%的生物酶(纤维素酶与半纤维素酶的质量比为2:1)，控温在45°C，搅拌，酶解时间为2h;将酶转化后的物料再加入6倍的60%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于60°C的条件下提取2h，离心，取出上清液，浓缩后，上D-101大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5BV的50%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮，其得率为12.8%，经UV检测，总黄酮含量为93.4%。
[0012]实施例2:
将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；向上述原料中加入2倍的蒸馏水，再加入原料重量4%的生物酶(纤维素酶与半纤维素酶的质量比为2:1)，控温在50°C，搅拌，酶解时间为3h;将酶转化后的物料再加入7倍的65%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于65°C的条件下提取3h，离心，取出上清液，浓缩后，上NKA-9大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用6BV的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮，其得率为14.1%，经UV检测，总黄酮含量为95.8%。
[0013]实施例3:
将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛；向上述原料中加入2倍的蒸馏水，再加入原料重量5%的生物酶(纤维素酶与半纤维素酶的质量比为2:1)，控温在55°C，搅拌，酶解时间为4h;将酶转化后的物料再加入8倍的70%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于70°C的条件下提取4h，离心，取出上清液，浓缩后，上H1020大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用7BV的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮，其得率为14.2%，经UV检测，总黄酮含量为90.2%。
【主权项】
1.一种兔儿伞总黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤: a.将兔儿伞烘干，粉碎，过20目筛； b.向上述原料中加入1~2倍的蒸馏水，再加入原料重量2~5%的生物酶，控温在45-55 0C，搅拌，酶解时间为2~3h ； c.将酶转化后的物料再加入6~8倍的60~70%的乙醇，置于频率为40KHz的超声波提取器中，于60~70 °C的条件下提取2~4h，离心，取出上清液； d.将步骤c中的上清液浓缩后，上大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水除杂，再用5~7BV的50-70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得兔儿伞总黄酮。2.根据权利要求1所述的一种兔儿伞总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤b中所述的生物酶为质量比2:1的纤维素酶和半纤维素酶的混合物。3.根据权利要求1所述的一种兔儿伞总黄酮的提取方法，其特征在于，步骤d中所述的大孔吸附树脂型号为NKA-9、H1020、D-101中的任意一种。
【专利摘要】本发明涉及一种兔儿伞总黄酮的提取方法，其处理步骤包括：a.兔儿伞干燥、粉碎，过20目筛；b.生物酶酶解；c.超声波辅助提取；d.大孔吸附树脂纯化，浓缩干燥即得兔儿伞总黄酮。本发明以兔儿伞为原料，充分利用酶解和超声波的叠加效果，最大限度的溶出兔儿伞中的兔儿伞总黄酮，提高了兔儿伞总黄酮的得率。本发明具有工艺简单、提取时间短、提取率高、反应条件温和的优点，对环境友好，同时也保证了兔儿伞总黄酮的生物活性。
【IPC分类】A61K36/28, A61P29/00
【公开号】CN104922175
【申请号】CN201510262611
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月22日