收缩：左心房收缩试验在Ricerca Biosciences进行，LLC(目录号407500 肾上腺素能0 1)，使用的左心房源自Dunkin Hartley豚鼠，体重为600+/-8(^(4代11.1111:. Pharmacodyn. 1971:191:133 - 141)。
[0377] 窦房结心率：采用静脉注射氯胺酮/甲苯噻嗪混合物的方法深度麻醉后，放血处 死新西兰白色雌兔。快速剥离心脏，置于Tyrode溶液中。向该溶液中连续充入95% 02、5% 〇)2并预先温热至约36±0.5°C。将右心房与心脏的其余部分分离。将制品置于组织浴中， 于37±0. 5°C保持至少1小时以稳定化。采用充满3M KC1的标准玻璃微电极记录细胞内动 作电位（AP)，所述电极与高输入阻抗-中和放大器（high input impedance-neutralizing amplifier) (VF-180微电极放大器，Bio-Logic)连接。AP显示在数字示波器（HM-407示 波器，HAMEG)上，通过高分辨率数据采集系统（Notocord software hem 4.2, Notocord SA, Croissy,法国）分析。稳定1小时后，将化合物以逐渐增加的浓度加至Tyrode溶液中， 每个浓度保持30分钟。两个浓度之间无需清洗。在30分钟灌注期结束时，通过分析试验 过程中的动作电位进行电生理学测定。通过记录每10秒心跳次数以表示每分钟心跳次数 (bpm)的结果从而评价SA自发频率。数据表示为均值土SEM。
[0378] 自律性：在离体Langendorff灌注兔心脏中研宄自律性，在Hondeghem Pharmaceuticals Consulting N.V.，B-84000ostende,比利时进行该研宄。该试验米用 重量为约2. 5kg、年龄约3个月的白化雌兔的心脏进行。在完全自动化模型中，采用根据 Langendorff技术灌注的离体兔心脏，测定化合物的作用。采用浓度逐渐增加的试验项目反 向灌注自发跳动的心脏。将一个电极小心地置于左心房以便于记录窦房结自律性的循环时 间。
[0379] 图2a和2b显示了对福莫特罗与本发明化合物（化合物A)进行比较所获得的结 果。
[0380] 与福莫特罗相比，多至10 y M的化合物A对左心房没有作用，对起搏器活动具有更 少的直接作用。
[0381]
[0382] 图2a和2b中的数值表示为均值土 SEM ;窦房结（n = 6)，离体心脏（n = 3)
[0383] 实施例9:福莫特罗和化合物A在体内对心率的作用
[0384] Wistar Han (W_H) IGS (International Genetic Standard)大鼠（Crl :WI (Han))购 自Charles River Laboratories。股动脉和静脉导管可以通过弹簧绳-旋转系统（spring tether-swivel system)长期地植入并取出，将其在特殊的笼子中饲养。将动脉导管与压力 传感器连接从而通过数字数据采集系统持续测定脉压、平均动脉压和心率，其源自血压信 号。化合物可以经由通过皮肤配件（skin buttun)植入的s.c导管给予。数值表示为均值 土 SEM(n = 3)。
[0385] 与福莫特罗相比，当采用s. c.推注给予时，给予多至0.3mg/kg剂量时，化合物A 对心率的增加影响很小，如图3a、3b和3c所示。
[0386] 实施例10 :福莫特罗和化合物A在体内对心率的作用
[0387] 体重约4 一 8kg的24只雌性猕猴随机分为4组（n = 6)。单次皮下给予化合物 后，将动物固定在椅子上至多4小时，然后将其送回围栏中。采用Surgivet V3304装置测 定心率。数值表示为均值土 SEM(n = 6)。
[0388] 与福莫特罗相比，当采用s. c.推注给予时，给予多至0. 03mg/kg剂量时，化合物A 对心率的增加影响很小，如图4a和4b所示。
[0389] 实施例11:化合物A、其对映体（化合物B)及其外消旋物（化合物A/B)对五羟色 胺5-HT2。受体的作用
[0390]采用人重组 hr5-HT2C CH0 细胞膜（Biosignal Packard, USA)和 3H_Mesulergine(NEN Life Science Products, USA, InM)测定化合物与人 5_HT2。受体的亲 和力。在lyM美舒麦角（Mesulergine)存在下评价非特异性结合。将总体积为250 yL的 50yL每个膜、配体和化合物在96-孔板中于22°C在缓冲液（含有50mM Tris，0. 1%抗坏血 酸，10 yM优降宁，pH 7. 7)中温育60分钟。将板过滤，在冰冷的50mM Tris中洗涤3次，干 燥，在Topcount中测定。
[0391] 将在没有抗生素存在的培养基中生长至对数中期的共表达线粒体原水母发光蛋 白（apoaequorin)、重组五羟色胺5_HT 2CnJP混杂G蛋白G al6的CH0-K1细胞采用PBS-EDTA 分离，离心并再悬浮于试验缓冲液（含有HEPES不含酚红的DMEM/HAM' s F12+0. 1 % BSA，不 含蛋白酶（DMEM/HAM's F12with HEPES, without phenol red+0.1 % BSA protease free))， 浓度为IX 106个细胞/ml。将细胞与腔肠素h-起于室温下培养至少4h。参比激动剂为 a-甲基-5-HT。为了进行激动剂试验，将50 y L细胞悬浮液与50 y L试验激动剂或参比激 动剂在96-孔板中混合。采用Hamamatsu功能性药物筛选系统6000 (FDSS 6000)光度计记 录产生的光发射。试验化合物的激动剂活性表示为作为其EC1TO浓度的参比激动剂活性的 百分比。
[0392]
[0393] 当与0 2AR激动剂活性（5. 6nM)相比时，化合物A对5-HT2^活性低50倍，而其 对映体化合物B对2AR的作用非常弱，EC5(I为950nM，但是对5-HT 2。的作用要强的多，EC 5Q 为9. 7nM，显示了对祀点的相反的选择性。
[0394] 当与外消旋物或（S)对映体相比时，化合物A对5_111^的活性高10倍，这说明该 化合物的副作用特性是有益的。
[0395] 实施例12 :硬胶囊
[0396] 表1 - (R)-7-(2-(l_(4- 丁氧基苯基）_2_甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙 基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮硬胶囊组合物
[0397]
[0398] 如下制备硬明胶胶囊，每粒胶囊含有作为活性成分的0. 5、5或10mg的 (R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻 唑-2 (3H)-酮（分别相当于 0? 60、5. 95 和 11. 90mg 的（R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲 基丙-2-基氨基）_1_羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮乙酸盐）以及表1中所 示组分：
[0399] 预混物的制备：
[0400] 将（R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙基）-5-羟 基苯并[d]噻唑_2(3H)_酮乙酸盐与部分Avicel PH101和Aerosil 200 -起通过适当的 筛，在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。
[0401] 终混物的制备：
[0402] 将上述预混物与剩余量的Avicel PH101、喷雾干燥乳糖和Ac-Di-Sol -起通过适 当的筛，在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。
[0403] 然后将该混合物通过约0. 5 - 1. 0mm网眼大小的筛，再次混合（约100 - 300转）。
[0404] 同样，将需要量的过筛的硬脂酸镁加至该批粉末中，然后在相同的混合容器中混 合，转速约30 - 150转。
[0405] 填充：
[0406] 采用自动化设备将终混物封装到胶囊中。胶囊填充物与空胶囊壳之间的重量比为 2:1〇
[0407] 实施例13:硬胶囊
[0408] 表2 - (R)-7-(2-(l_(4- 丁氧基苯基）_2_甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙 基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮硬胶囊组合物
[0409]
[0410] 含有表2所示成分的胶囊可以根据实施例12中所述方法制备。
[0411] 实施例14:硬胶囊
[0412] 表3 - (R)-7-(2-(l_(4- 丁氧基苯基）_2_甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙 基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮硬明胶胶囊组合物
[0413]
[0414] 含有表3所示成分的胶囊可以根据实施例12中所述方法制备。
[0415] 实施例15 :片剂
[0416] 实施例14(表3)中所示配方也可以根据下列方法转化为剂量规格为0. 5mg、5mg 和10mg的片剂。
[0417] 预混物的制备：
[0418] 将（R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙基）-5-羟 基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮乙酸盐与部分甘露醇DC和滑石粉一起通过适当的筛，在滚筒混 合机中混合（约100 - 300转）。
[0419] 终混物的制备：
[0420] 将上述预混物与剩余量的甘露醇DC、STA-RX 1500和低取代的羟丙基纤维素一起 通过适当的筛，在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。然后将该混合物通过约0. 5 - 1. 0mm网眼大小的筛，再次混合（约100 - 300转）。最后，将通过约0? 5 - 1. 0mm网眼大 小的手工筛过筛的硬脂酸镁与前述混合物在滚筒混合机中混合（约30 - 150转）。
[0421] 压片：
[0422] 采用剂量特定工具（例如约6mm，圆形，弧边），将上述终混物压制成约100mg片 芯。
[0423] 实施例16 :片剂
[0424] 表4-(R)-7-(2-(l_(4- 丁氧基苯基）_2_甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙 基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮片剂组合物
[0425]
[0427] 每片含有作为活性成分的0.5、5或1〇11^的〇〇-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲 基丙-2-基氨基）-1_羟基乙基）-5_羟基苯并[d]噻唑-2(3H)_酮（分别相当于0. 60、5. 95 和11. 90mg的（R) -7- (2- (1- (4- 丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟 基苯并[d]噻唑-2(3H)_酮乙酸盐）以及表4中所示成分的片剂可以如下制备：
[0428] 预混物的制备：
[0429] 将（R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙基）-5-羟 基苯并[d]噻唑-2(3H)_酮乙酸盐与部分喷雾干燥乳糖和Aerosil 200(例如约0. 5% ) - 起通过适当的筛，在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。
[0430] 将上述预混物与剩余量的喷雾干燥乳糖、Avicel PH101、HP-Cellulose 100和 Ac-DI-Sol (例如约4. 0% ) -起通过适当的筛，在滚筒混合机中混合（约100-300转）。
[0431] 将该混合物通过约0. 5 - 1. 0mm网眼大小的筛，再次混合（约100 - 300转）。
[0432] 同样，将需要量的过筛的硬脂酸镁（例如约0. 5%)加至该批粉末中，然后在相同 的混合桶中混合（约30 - 150转）。
[0433] 碾压：
[0434] 采用压实器设备将上述混合物滚压压紧。将压实的材料采用研磨设备通过约 0. 5 - 1. 0mm网眼大小的筛磨碎。
[0435] 终混物的制备：
[0436] 将上述预混物与一定量的Ac-Di_Sol(例如约4.0% )和Aerosil 200(例如约 0. 5% ) -起通过适当的筛并在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。
[0437] 将剩余的通过约0. 5 - 1. 0mm网眼大小的手工筛过筛的硬脂酸镁与终混物在滚筒 混合机中混合（约30 - 150转）。
[0438] 压片：
[0439] 采用剂量特定工具（例如约6mm，圆形，弧边），将上述终混物在旋转压片机上压制 成适当重量（例如l〇〇mg)的片芯。
[0440] 实施例17:片剂
[0441] 表5 - (R)-7-(2-(l_(4- 丁氧基苯基）_2_甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙 基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮片剂组合物
[0442]
[0443] 制备方法：
[0444] 预混物的制备：
[0445] 将（R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）_1_羟基乙基）-5-羟 基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮乙酸盐与部分甘露醇DC和滑石粉（例如约0. 5% ) -起通过适 当的筛，在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。
[0446] 将上述预混物与剩余量的甘露醇DC、STA-RX 1500、Kollidon VA64和部分低取代 的HP-纤维素（例如约5. 0% ) -起通过适当的筛，在滚筒混合机中混合（约100 - 300 转）。
[0447] 将该混合物通过约0. 5 - 1. 0mm网眼大小的筛，再次混合（约100 - 300转）。
[0448] 同样，将需要量的过筛的硬脂酸镁（例如约0. 5%)加至该批粉末中，然后在相同 的混合桶中混合（约30 - 150转）。
[0449] 碾压：
[0450] 采用压实器设备将上述混合物滚压压紧。将压实的材料采用研磨设备通过约 0. 5 - 1. 0mm网眼大小的筛磨碎。
[0451] 终混物的制备：
[0452] 将上述混合物与剩余量的低取代的羟基丙基纤维素（例如约5. 0%)和滑石粉 (例如约〇? 5% ) -起通过适当的筛并在滚筒混合机中混合（约100 - 300转）。
[0453] 将剩余的通过约0. 5 - 1. 0mm网眼大小的手工筛过筛的硬脂酸镁与终混物在滚筒 混合机中混合（约30 - 150转）。
[0454] 压片：
[0455] 采用剂量特定工具（例如约6mm，圆形，弧边），将上述终混物在旋转压片机上压制 成适当重量（例如l〇〇mg)的片芯。
【主权项】
1. 固体口服剂型的药用组合物，其含有0.01 - 15% (w/w)的（R)-7-(2-(l-(4-丁氧 基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮和一或 多种可药用的赋形剂，其中（R) -7- (2- (1- (4- 丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟 基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮为乙酸盐形式。2. 权利要求1的药用组合物，其含有0.01 - 5% (w/w)的（R)-7-(2-(l-(4-丁氧基苯 基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮。3. 权利要求1或2的药用组合物，其含有0. 1 - 1% (w/w)的（R)-7-(2-(1-(4-丁氧 基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮。4. 前述权利要求中任一项的药用组合物，其为片剂或胶囊的形式。5. 前述权利要求中任一项的药用组合物，其中所述一或多种赋形剂选自填充剂、润滑 剂、助流剂、崩解剂和粘合剂。6. 权利要求5的药用组合物，其中所述填充剂的量为15 - 90% (w/w)。7. 权利要求5或6的药用组合物，其中所述润滑剂的量为0. 1 - 1% (w/w)。8. 权利要求5 - 7中任一项的药用组合物，其中所述助流剂的量为0. 1 - 1% (w/w)。9. 权利要求5 - 8中任一项的药用组合物，其中所述粘合剂的量为1 一 20% (w/w)。10. 权利要求5 - 9中任一项的药用组合物，其中所述崩解剂的量为1 - 20% (w/w)。11. 用于生产适合于口服给药的含有（R) -7- (2- (1- (4- 丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基 氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)_酮的药用组合物的方法，所述方法包 括下列步骤： a) 将（R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基 苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮乙酸盐与填充剂和助流剂混合形成预混物； b) 将步骤a)中获得的预混物与其它填充剂和崩解剂混合获得粉末； c) 向步骤b)中获得的粉末中加入润滑剂获得终混物，和 d) 将步骤c)中获得的终混物加工成适合于口服给药的药用组合物。12. 权利要求11的方法，其中（R)-7-(2-(l-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨 基）-1_羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)_酮乙酸盐使用的量应当足以在药用组 合物中提供0.01 - 15% (w/w)的（R)-7-(2-(l-(4-丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨 基）-1_羟基乙基）-5_羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮。13. 固体口服剂型的药用组合物，其含有0.01 - 15% (w/w)的（R)-7-(2-(l-(4-丁氧 基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮和一或 多种可药用的赋形剂，其中（R) -7- (2- (1- (4- 丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟 基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮为乙酸盐形式，用作药物。14. 固体口服剂型的药用组合物，其含有0.01 - 15% (w/w)的（R)-7-(2-(1-(4-丁氧 基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮和一或 多种可药用的赋形剂，其中（R) -7- (2- (1- (4- 丁氧基苯基）-2-甲基丙-2-基氨基）-1-羟 基乙基）-5-羟基苯并[d]噻唑-2 (3H)-酮为乙酸盐形式，用于治疗或预防肌肉萎缩症、废 用性萎缩、恶病质或肌肉减少症。15. 治疗或预防肌肉萎缩症、废用性萎缩、恶病质或肌肉减少症的方法，所述方法包括 口服给予需要的患者权利要求1 一 10任一项中的药用组合物。
【专利摘要】本发明涉及固体口服剂型的药用组合物，其含有(R)-7-(2-(1-(4-丁氧基苯基)-2-甲基丙-2-基氨基)-1-羟基乙基)-5-羟基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮乙酸盐。
【IPC分类】A61K9/48, A61K31/428, A61K9/20
【公开号】CN104968337
【申请号】CN201480007164
【发明人】M·安舒尔, R·A·费尔赫斯特, A·格朗德里, 畠山伸二, M·科奇扎克-霍尔布鲁, N·图菲利, T·乌尔里奇
【申请人】诺华股份有限公司
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2014年2月26日
【公告号】CA2897565A1, WO2014132205A1