净的丝蛋白溶液，其质量浓度为6%。
[0104]将丝蛋白溶液在60 °C进行浓缩处理，浓缩时间为48小时，放入通风橱中浓缩48小时，丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为30%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.3%再进行60°C温度处理36h形成水凝胶。将丝蛋白新鲜溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2%的混合液，用1.5M盐酸调节混合液pH调至4，剧烈搅拌10分钟，搅拌速度为3000rmp/min ;快速加入模具中于_20°C下进行冷冻处理24小时，然后真空干燥72小时。
[0105]将得到的组织泡去剩余的酸溶液，再将组织于_20°C下进行冷冻处理24小时，然后真空干燥72小时，获得干态的丝蛋白支架材料。其孔隙率高达95%以上。
[0106]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定，测定结果为
7.25±1.12kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验，实验结果表明本发明实施例5制备的支架材料有利于血管的形成。
[0107]实施例6
[0108]将50g蚕丝在0.5%的Na2CO^液中100°C煮60min，以去除蚕丝外部的丝胶蛋白，使用去离子水冲洗，重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天，期间每两小时换一次水，去除溶液中的LiBr,从而得到纯净的丝蛋白溶液，其质量浓度为6%。
[0109]将丝蛋白溶液在60 °C进行浓缩处理，浓缩时间为48小时，放入通风橱中浓缩48小时，丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为30%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.5%再进行60°C温度处理36h形成水凝胶。将丝蛋白浓缩溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2%的混合液，用1.5M盐酸调节混合液pH调至4，剧烈搅拌10分钟，搅拌速度为2500rmp/min ;快速加入模具中于_20°C下进行冷冻处理24小时，然后真空干燥72小时。
[0110]将得到的组织泡去剩余的酸溶液，再将组织于_20°C下进行冷冻处理24小时，然后真空干燥72小时，获得干态的丝蛋白支架材料。其孔隙率高达95%以上。
[0111]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定，测定结果为
8.02±1.82kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验，实验结果表明本发明实施例6制备的支架材料有利于血管的形成。
[0112]实施例7
[0113]将50g蚕丝在0.5%的Na2CO^液中100°C煮60min，以去除蚕丝外部的丝胶蛋白，使用去离子水冲洗，重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天，期间每两小时换一次水，去除溶液中的LiBr，从而得到纯净的丝蛋白溶液，其质量浓度为6%。
[0114]将丝蛋白溶液在40 0C进行浓缩处理，浓缩时间为48小时，放入通风橱中浓缩48小时，丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为20%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.5%再进行60°C温度处理48h形成水凝胶。将丝蛋白浓缩溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2%的混合液，用1.0M甲酸调节混合液pH调至3，剧烈搅拌5分钟，搅拌速度为2500rmp/min ;快速加入模具中于_40°C下进行冷冻处理24小时，然后真空干燥72小时。
[0115]将得到的组织泡去剩余的酸溶液，再将组织于-50°C下进行冷冻处理30小时，然后真空干燥60小时，获得干态的丝蛋白支架材料，其孔隙率高达95%以上。
[0116]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定，测定结果为6.59±1.62kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验，实验结果表明本发明实施例7制备的支架材料有利于血管的形成。
[0117]实施例8
[0118]将50g蚕丝在0.5%的Na2CO^液中100°C煮60min，以去除蚕丝外部的丝胶蛋白，使用去离子水冲洗，重复以上操作3次后将蚕丝60°C下烘干。称取上述处理后的脱胶蚕丝15g溶解于10mL质量浓度为9.3mol/L LiBr溶液中，60°C下溶解处理4小时。然后用截留分子量3500的透析袋浸在去离子水中透析3天，期间每两小时换一次水，去除溶液中的LiBr，从而得到纯净的丝蛋白溶液，其质量浓度为6%。
[0119]将丝蛋白溶液在70°C进行浓缩处理，浓缩时间为48小时，放入通风橱中浓缩100小时，丝蛋白浓缩后溶液质量浓度为25%。然后将丝蛋白水溶液的质量分数调整为0.3%再进行60°C温度处理24h形成水凝胶。将丝蛋白浓缩溶液与丝蛋白水凝胶按丝蛋白质量分数比15:1混合成丝蛋白质量分数为2%的混合液，调节混合液pH调至6，剧烈搅拌5分钟，搅拌速度为2500rmp/min ;快速加入模具中于_70°C下进行冷冻处理14小时，然后真空干燥48小时。
[0120]将得到的组织泡去剩余的酸溶液，再将组织于_40°C下进行冷冻处理24小时，然后真空干燥50小时，获得干态的丝蛋白支架材料，其孔隙率高达95%以上。
[0121]按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行压缩性能测定，测定结果为6.43±1.82kPa。按照本发明所述方法对本实施例制备得到的支架进行血管的形成实验，实验结果表明本发明实施例8制备的支架材料有利于血管的形成。
[0122]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种丝蛋白支架材料的制备方法，包括: A)将丝蛋白溶液浓缩，得到浓缩后溶液，所述浓缩后溶液中丝蛋白的质量浓度为15%?35% ； B)将步骤A)得到的浓缩后溶液稀释、热处理得到水凝胶，所述水凝胶中丝蛋白的质量浓度为0.2%?0.6% ； C)将步骤A)得到的浓缩后溶液和步骤B)得到的水凝胶混合，得到混合液；调节混合液PH值、搅拌、冷冻、干燥、得到支架材料；所述pH值为3?4。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A)浓缩温度为O?90°C。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤A)浓缩时间为I?168h。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤B)热处理温度为50°C?70。。。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤C)混合液中丝蛋白的质量浓度为1%?4%。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤C)调节pH值为用酸调节PH值，所述酸选自盐酸和甲酸中的一种。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤C)搅拌时间为I?lOmin。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤C)冷冻温度为-10°C?_80°C，冷冻时间为I?48h，真空干燥时间为I?96h。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤C)后还包括将得到的支架材料浸泡、冷冻、干燥得到干态丝蛋白支架材料。10.一种丝蛋白支架材料，其特征在于，由权利要求1?8任意一项所述的制备方法制备得到。
【专利摘要】本发明提供了一种丝蛋白支架材料的制备方法，包括：A)将丝蛋白溶液浓缩，得到浓缩后溶液，所述浓缩后溶液中丝蛋白的质量浓度为15％～35％；B)将步骤A)得到的浓缩后溶液稀释、热处理得到水凝胶，所述水凝胶中丝蛋白的质量浓度为0.2％～0.6％；C)将步骤A)得到的浓缩后溶液和步骤B)得到的水凝胶混合，得到混合液；调节混合液pH值、搅拌、冷冻、干燥、得到支架材料；所述pH值为3～6。本发明通过浓缩后溶液和水凝胶混合，利用丝蛋白的自组装行为改变丝蛋白的二级结构，使得孔隙率高；选用丝蛋白溶液，生物降解性好；通过调节pH值，破坏疏水作用力；本发明的丝蛋白支架材料力学性能低，结晶度低，更适合血管的生成。
【IPC分类】A61L31/14, A61L31/04
【公开号】CN104971386
【申请号】CN201510092836
【发明人】吕强, 宁洪艳
【申请人】丝纳特（苏州）生物科技有限公司
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2015年3月2日