一种脂质体药物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种脂质体药物及其制备方法，属于治疗脑肿瘤药物研究领域。
【背景技术】
[0002] 脑胶质瘤作为恶性肿瘤，是中枢神经系统肿瘤中最为常见但也最致命的一种，已 经成为癌症死亡的十大因素之一，患者的平均存活时间只有14. 6个月，其中五年生存率不 超过5%，严重危及人们的生命和健康。对于脑胶质瘤的治疗临床上通常采用手术治疗、放 射治疗和化学药物治疗等方案，然而患者的预后效果普遍很差。脑胶质瘤具有强浸润性的 特点，可以快速地浸润和破坏正常脑组织结构，手术不能完全切除肿瘤组织，因而无法完全 治愈脑胶质瘤。放射治疗由于自身治疗精度的限制也不能完全清除脑胶质瘤细胞，并且该 方法副作用大，对正常细胞的损伤明显。化学药物治疗效果不理想的主要原因在于大部分 的化疗药物不能有效的透过血脑屏障一一血脑屏障（BBB)是一种高度选择性渗透屏障，由 大脑毛细血管内皮细胞的紧密连接形成，可以阻止溶质和化疗药物透过，因此临床上脑胶 质瘤患者化疗预后效果极差。
[0003] 在近年来的肿瘤相关研究和治疗中，越来越多的实验数据与临床资料表明很多肿 瘤在肿瘤发生发展上起源于为数不多的一小群细胞一一肿瘤干细胞。肿瘤干细胞，是肿瘤 中一小部分具有自我更新、无限增殖及多向分化潜能的特殊细胞群体，通过不均一分裂能 够产生与上一代完全相同的子代细胞及不同表型的肿瘤细胞，并在体内形成新的肿瘤，促 成肿瘤的异质性和多样性。由于传统的抗肿瘤药物都是作用于肿瘤干细胞下游不同分化程 度的肿瘤细胞，对于分化程度较低但具有无限增殖潜能的肿瘤干细胞非常不敏感，因而虽 然大多数肿瘤患者都可以达到临床缓解，但不难想象由于缺乏有效的干细胞靶向药物而导 致耐药和复发现象。因此，在肿瘤疾病的靶向治疗中，肿瘤干细胞已经成为备受关注的药物 设计与筛选的靶点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种脂质体药物及其制备方法。本发明采用修饰后的载药脂 质体前体或靶向脂质体制备治疗脑肿瘤药物，具有靶向血脑屏障的功能，并能穿过血脑屏 障的能力进而达到病灶部位；本发明将姜黄素和奎纳克林包载到靶向脂质体中，两药合用 在提高抗肿瘤作用的同时，增强其对肿瘤细胞及其干细胞的促凋亡作用。
[0005] 本发明提供的治疗脑肿瘤具有双重活性成分的脂质体药物，该药物的活性成分由 靶向脂质体包载脂溶性活性药物和水溶性活性药物组成；
[0006] 所述靶向脂质体为脂质体的表面上氨基被4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷修饰。
[0007] 上述脂质体药物中，所述脂溶性活性药物为姜黄素（Curcumin，⑶R);
[0008] 所述姜黄素与所述脂质体的质量比可为1 :35~45,具体可为1 :40 ;
[0009] 在所述靶向脂质体中，所述姜黄素的包封率可为94. 22~96. 28% ;
[0010] 所述水溶性活性药物为奎纳克林（Quinacrine，QC);
[0011] 所述奎纳克林与所述脂质体的质量比可为I:43~53,具体可为I:48 ;
[0012] 在所述靶向脂质体中，所述奎纳克林的包封率可为93. 28~93. 54% ;
[0013] 所述脂质体药物的粒径可为119. 53~119. 87nm;
[0014] 所述4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷与所述脂质体的质量比可为I:38. 7~ 39. 1 ；
[0015] 所述脂质体由下述质量份的原料制成：卵磷脂108~109份、胆固醇27~28份、聚 乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺29. 5~30. 5份和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨 基2. 5~3. 5份。
[0016] 上述的脂质体药物的制备方法，包括如下步骤：1)将所述脂质体包载所述脂溶性 活性药物；
[0017] 2)将步骤1)得到的脂质体用4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷修饰；
[0018] 3)将步骤2)得到的脂质体包载所述水溶性活性药物，即得到所述治疗脑肿瘤具 有双重活性成分的脂质体药物。
[0019] 本发明还提供了一种载药脂质体前体，该前体由靶向脂质体和其包载的脂溶性活 性药物组成；
[0020] 所述靶向脂质体为脂质体的表面上氨基被4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷修饰。
[0021] 上述的前体中，所述4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷与所述脂质体的质量比为1 : 38. 7 ~39. 1 ;
[0022] 所述脂质体由下述质量份的原料制成：卵磷脂108~109份、胆固醇27~28份、聚 乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺29. 5~30. 5份和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨 基2. 5~3. 5份；
[0023] 所述脂溶性活性药物为姜黄素；
[0024] 所述姜黄素与所述脂质体的质量比为1 :35~45 ;
[0025] 在所述靶向脂质体中，所述姜黄素的包封率为94. 22~96. 28%。
[0026] 本发明所述载药脂质体前体应用于制备治疗脑肿瘤药物和/或脑肿瘤药物载体。
[0027] 本发明还提供了一种靶向脂质体，它为所述脂质体的表面上氨基被4-氨基 苯-a-D-吡喃甘露糖苷修饰。
[0028] 上述靶向脂质体中，所述4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷与所述脂质体的质量比 可为I:38. 7 ~39. 1 ;
[0029] 所述脂质体由下述质量份的原料制成：卵磷脂108~109份、胆固醇27~28份、聚 乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺29. 5~30. 5份和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨 基2. 5~3. 5份。
[0030] 本发明中，所述脂质体表面的氨基被4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷修饰，机理具 体可为所述脂质体中氨基通过戊二醛与所述4-氨基苯-a-D-吡喃甘露糖苷发生化学反应 连接，即所述脂质体中氨基与戊二醛中一个醛基发生反应，所述4-氨基苯-a-D-吡喃甘露 糖苷中的氨基与戊二醛中的另一个醛基发生反应。
[0031] 本发明所述靶向脂质体应用于制备治疗脑肿瘤药物载体。
[0032] 本发明进一步提供了一种治疗脑肿瘤的载药脂质体，它由所述靶向脂质体包载水 溶性活性药物组成。
[0033] 上述载药脂质体中，所述水溶性活性药物为奎纳克林；
[0034] 所述奎纳克林与所述脂质体的质量比可为1 :43~53 ;
[0035] 在所述靶向脂质体中，所述奎纳克林的包封率可为93. 28~93. 54%。
[0036] 本发明中，所述载药脂质体或所述治疗脑肿瘤的药物能用于治疗脑肿瘤，可为用 于治疗脑胶质瘤，具体可用于治疗C6胶质瘤；不仅能用于治疗脑肿瘤还能诱导脑肿瘤干细 胞凋亡。
[0037] 本发明具有以下优点：
[0038] 本发明靶向脂质体的靶向能力更强，本发明载药脂质体的稳定性良好，达到靶向 位置后释放缓慢。本发明MN修饰到脂质体表面包载活性药物，靶向脂质体包载的用于治 疗脑肿瘤的药物，能增强药物跨血脑屏障的能力，同时具有靶向肿瘤细胞的作用；将姜黄素 和奎纳克林包载到脂质体中，得到多功能的靶向脑肿瘤干细胞复方脂质体，改变了奎纳克 林生物利用度低的缺点，能够使药物在跨过BBB后，到达病灶部位，两药联合杀死肿瘤细胞 并诱导肿瘤干细胞凋亡，大大提高化疗药物的效果，预期能有效防止肿瘤复发。
【附图说明】
[0039] 图1为透射电镜下多功能靶向脂质体的形态。
[0040] 图2为载药脂质体的药物释放曲线；其中图2A为姜黄素的释放曲线，图2B为奎纳 克林的释放曲线。
[0041] 图3为C6脑胶质瘤细胞及肿瘤干细胞球形态；其中图3A为C6胶质瘤细胞，图3B 为C6胶质瘤干细胞球。
[0042] 图4为C6脑胶质瘤干细胞鉴定结果；其中图4A为C6胶质瘤细胞，图4B为C6胶 质瘤干细胞。
[0043] 图5为不同载药脂质体对C6脑胶质瘤细胞的抑制作用，图中标记如下：IP〈0. 05， 对游离奎纳克林；2P〈0. 05,对游离姜黄素；3P〈0. 05,对游离姜黄素和奎纳克林；4 P〈0. 05,对姜黄素脂质体；5P〈0. 05,对包载姜黄素和奎纳克林脂质体。
[0044] 图6为不同载药脂质体对C6脑胶质瘤干细胞的抑制作用，图中标记如下：1 P〈0. 05,对游离奎纳克林；2P〈0. 05,对游离姜黄素；3P〈0. 05,对游离姜黄素和奎纳克林；4 P〈0. 05,对姜黄素脂质体；5P〈0. 05,对包载姜黄素和奎纳克林脂质体。
[0045] 图7为不同载药脂质体对C6胶质瘤细胞的凋亡作用。
[0046] 图8为不同载药脂质体对C6胶质瘤干细胞的凋亡作用。
[0047] 图9为对C6胶质瘤细胞以及C6胶质瘤干细胞凋亡率对比。
[0048] 图10为激光共聚焦法检测细胞对不同载药脂质体的摄取及其在细胞内的分布行 为。
[0049] 图11为C6胶质瘤细胞及其干细胞对不同载药脂质体的摄取能力，其中，a和1， P〈0. 05,对游离姜黄素；b和2,P〈0. 05,对游离姜黄素和奎纳克林；c和3,P〈0. 05,对姜黄素 脂质体；d和4,P〈0. 05,对包载姜黄素和奎纳克林脂质。
[0050] 图12为不同载药脂质体体外跨血脑屏障的转运率，其中，a，P〈0. 05,对游离姜黄 素；b，P〈0. 05,对游离姜黄素和奎纳克林；c，P〈0. 05,对姜黄素脂质体；d，P〈0. 05,对包载