质。 可以通过例如以下的方式来保持适当的流动性：利用比如卵磷脂的涂层；在分散质的情况 下，通过保持所需的颗粒尺寸；和通过利用表面活性剂。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂来 实现预防微生物的行为，例如尼泊金、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。可以包括谷胱甘 肽和其他的抗氧化剂以防止氧化。在很多情况下，可能期望在该组合物中包括等渗剂，比如 糖、多元醇（比如甘露醇、山梨醇）或氯化钠。可以通过在该组合物中包括延迟吸收的制剂 来引起可注射组合物的延长吸收，所述延迟吸收的制剂例如为单硬脂酸铝或药用胶。
[0247] 可以通过将所需量的活性化合物加入具有以上列出的一种成分或多种成分的组 合的适当的溶剂中、根据需要然后进行过滤灭菌来制备注射用无菌溶液。通常，通过将活性 化合物加入到包括基本分散介质以及以上列出的所需的其它成分的无菌媒介物中来制备 分散质。在用于制备注射用无菌溶液的无菌粉末的情况中，典型的制备方法包括真空干燥 和冷冻干燥，这可以产出活性成分以及来自于先前灭菌过滤的溶液中的任何其他所需成分 的粉末。
[0248] 为了眼科应用，治疗化合物被配制成适于用在眼睛中的溶液、悬浮液以及软 膏。关于眼用制剂，通常参见：Mitra(ed.)，Ophthalmic Drug Delivery Systems, Marcel Dekker, Inc.，纽约，N. Y. (1993);还有 Havener, W. H.，Ocular Pharmacology, CV. Mosby Co.，St. L〇Uis(1983)。眼用药物组合物可以适合于以溶液、悬浮液、软膏、乳液或固体插入 物的形式给药至眼睛。对于单剂量，可以将0. lng到5000 y g之间、lng到500 y g之间、或 者10ng到100 y g之间的芳香族阳离子肽施用于人眼。
[0249] 眼用制剂可以包括无毒的辅助物质，比如在使用上无害的抗菌成分，举例而言，硫 萊撒、氯化苯甲经铵、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯、苄基十二烷基溴化铵（benzyldodecinium bromide)、苄醇或苯基乙醇；缓冲成分，比如氯化钠、硼酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠或葡萄糖酸 盐缓冲剂；以及其他常规成分，比如脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺、聚氧乙烯脱水山梨 醇单棕榈酸酯、乙二胺四乙酸等。
[0250] 可以视需要经常地给药眼用溶液或眼用悬浮液来使眼睛中的芳香族阳离子肽保 持在可接受的水平。可以每天约一次或两次地来给药至哺乳动物眼睛。
[0251] 口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了 口服治疗给药，活性化合 物可以与赋形剂混合并以片剂、锭剂或胶囊（例如明胶胶囊）的形式使用。药学上相容的 粘合剂和/或辅助材料可以被包括为该组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊剂和锭剂等可以 包括具有相似性质的以下成分或化合物中的任一种：粘合剂，比如微晶纤维素、黄蓍胶或明 胶；赋形剂，比如淀粉或乳糖；崩解剂，比如褐藻酸、羧甲淀粉钠、或玉米淀粉；润滑剂，比如 硬脂酸镁或Sterotes ;助流剂，比如胶态二氧化硅；甜味剂，比如蔗糖或糖精；或者增味剂， 比如薄荷、水杨酸甲酯或桔子调味品。
[0252] 关于通过吸入法给药，所述化合物可以以喷雾剂的形式从包括合适的推进物（例 如，比如二氧化碳的气体）的加压容器或分配器或者喷雾器喷洒而递送。这样的方法包括 第6468798号美国专利中描述的方法。
[0253] 本文中描述的治疗化合物的全身给药还可以通过经粘膜方法或经皮肤方法来进 行。对于经粘膜给药或经皮肤给药，适合于待渗透的屏障的渗透剂用在该配方中。这样的 渗透剂通常是本技术领域已知的，例如，对于经粘膜给药而言，这样的渗透剂包括清洗剂、 胆汁盐类或梭链孢酸衍生物。可以通过使用鼻喷入法来完成经粘膜给药。对于经皮肤给药 而言，活性化合物配制成本领域普遍知道的药膏、软膏、凝胶或乳液。在一个实施方式中，经 皮肤给药可以通过电离子渗透法来进行。
[0254] 治疗性蛋白质或肽可以在载体体系中配制而成。该载体可以是胶态体系。该胶 态体系可以是脂质体、磷脂双分子层媒介物。在一个实施方式中，在脂质体中该治疗肽被 胶囊化，同时保持肽完整性。本领域的本领域技术人员理解，有各种方法来制备脂质体。 (参见：Lichtenberg 等的 Methods Biochem. Anal.，33:337_462(1988) ;Anselem 等的 Liposome Technology, CRC Press (1993))。脂质体制剂可以延迟排出并增强细胞摄取（参 见 Reddy, Ann. Pharmacother.，34 (7-8) : 915-923 (2000))。活性剂还可以载入到由医学上可 接受的成分制备成的颗粒中，所述医学上可接受的成分包括但不限于可溶解的、不可溶解 的、可渗透的、不可渗透的、可生物降解的或胃内滞留的聚合物或脂质体。这样的颗粒包括 但不限于纳米颗粒、可生物降解的纳米颗粒、微颗粒、可生物降解的微颗粒、纳米球、可生物 降解的纳米球、微球、可生物降解的微球、胶囊剂、乳剂、脂质体、胶粒以及病毒载体体系。
[0255] 该载体还可以是聚合物，比如可生物降解的、可生物相容的聚合物基质。在一 个实施方式中，治疗性肽可以嵌入到聚合物基质中，同时保持蛋白质完整性。所述聚合 物可以是天然的，比如多肽、蛋白质或多糖；或者可以是合成的，比如聚a-羟酸。示例 包括由例如以下物质制成的载体：胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、乙酸纤维素、硝酸纤维 素、多糖、纤维蛋白、明胶及其组合。在一个实施方式中，所述聚合物是聚乳酸（PLA)或乳 酸羟基乙酸共聚物（PGLA)。可以以各种形式和尺寸来制备并分离聚合物基体，包括微球 和纳米球。聚合物制剂可以引起治疗作用的期间的延长（参见：Reddy, Ann. Pharmacoth er.，34(7-8) :915-923(2000))。用于人类生长激素（hGH)的聚合物制剂已用在临床试验中 (参见：Kozarich 和 Rich, Chemical Biology, 2:548-552 (1998)) 〇
[0256] 高分子微球持续释放剂的示例在PCT公布W0 99/15144 (Tracy等）、第5674534号 美国专利以及第5716644号美国专利（都属于Zale等）中予以描述。第5674534号美国 专利以及第5716644号美国专利以及PCT公布W0 96/40073描述了包括含红细胞生成素的 颗粒的聚合物基体，所述红细胞生成素的颗粒用盐来防止凝聚而稳定。
[0257] 在一些实施方式中，治疗性化合物与将保护所述治疗化合物以防止其从身体中快 速排出的载体一起制备，所述载体比如控释剂，包括植入体和微胶囊化的输送体系。可以使 用可生物降解的、生物相容的聚合物，比如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原质、聚原 酸酯和聚乳酸。可以利用已知的技术来制备这样的制剂。还可以在市场上获得所述材料， 例如从Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals, Inc买到。脂质体悬浮液（包括针对 具有细胞特异性抗原的单细胞克隆抗体的特定细胞的脂质体）也可用作医学上可以接受 的载体。所述胶质体悬浮液可以利用本领域的本领域技术人员知道的方法来制备，比如，第 4522811号美国专利中描述的方法。
[0258] 还可以配制所述治疗性化合物以增强细胞内传递。例如，本领域已知脂质体传 递系统例如，参见：Chonn 和 Cullis 的"Recent Advances in Liposome Drug Delivery Systems'，，Current Opinion in Biotechnology 6:698-708 (1995) ;Weiner 的 "Liposomes for Protein Delivery: Selecting Manufacture and Development Processes'，， Immunomethods 4(3)201-9 (1994);和 Gregoriadis 的"Engineering Liposomes for Drug Delivery:Progress and Problems" Trends Biotechnol. 13(12):527-37 (1995)。以下 文献描述了利用融合脂质体在体内或在体外将蛋白质传递至细胞:Mizguchi等的Cancer Lett.100:63-69(1996)〇
[0259] 可以通过细胞培养或试验动物中的标准药学过程来确定治疗性药物的用量、毒性 和治疗效率，例如，用于确定LD50 (总数50 %的致命剂量）和ED50 (总数50 %中有效治疗的 剂量）。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，且其可以表示为比率LD50/ED 50。表 现出高治疗指数的化合物是优选的。尽管具有毒性副作用的化合物可以使用，但应当考虑 设计传递系统，该传递系统将这样的化合物靶向组织的受影响的位置，以将对未感染的细 胞的可能损伤最小化，且由此降低副作用。
[0260] 从细胞培养试验和动物研究获取的数据可以用在配制人类中使用的剂量范围中。 这样的化合物的剂量优选地位于包括毒性很小或无毒的H)50的循环浓度的范围中。根据 使用的剂量类型和利用的给药途径，剂量可以在该范围内变化。对于该方法中使用的任何 化合物而言，可以最初根据细胞培养试验来计算出治疗有效的剂量。可以在动物模型中制 定一剂量来获得包括细菌培养中确定的IC50(即，测试化合物的获得最大抑制病症的一半 的浓度）的循环血药浓度范围。这样的制剂可以用来更准确地确定人类中的有用剂量。可 以例如通过高效液相色谱法测定血药浓度。
[0261] 通常，芳香族阳离子肽的足以获得治疗效果或预防效果的有效量的范围为约 0. 000001毫克/千克体重/天到约10000毫克/千克体重/天。优选地，剂量范围从约 0. 0001毫克/千克体重/天到约100毫克/千克体重/天。例如，剂量可以是每天、每两天 或每三天1毫克/千克体重或者10毫克/千克体重，或者在每周、每两周或每三周的1毫克 /千克体重到10毫克/千克体重的范围中。在一个实施方式中，肽的单剂量的范围从0. 1 毫克/千克体重到10000毫克/千克体重。在一个实施方式中，芳香族阳离子肽在载体中 的浓度的范围从0. 2毫克/每毫升到2000毫克/每毫升。示例性的治疗方法每天或每周 提供一次给药。间隔也可以是不规则的，这通过测定对象中的葡萄糖或胰岛素的血液含量 并相应地调整剂量或给药表明。在治疗应用中，在相对短的时间间隔中有相对高的剂量有 时是需要的，直到疾病的进程减缓或终止为止，且优选地直到对象显示出部分或完全地改 善了疾病的病症。其后，可以对患者实行预防性的给药方式。
[0262] 在一些实施方式中，芳香族阳离子肽的治疗有效的量可以限定为目标组织中的肽 的浓度为10 11摩尔到10 6摩尔，例如约10 7摩尔。可以以0.001毫克/千克到100毫克/ 千克的全身剂量或身体表面面积的等效剂量来给予前述浓度。优化剂量的时间表，以保持 目标组织的治疗浓度，最优选地通过每天或每周给药，但也包括连续给药（例如，输液或经 皮肤施药）来进行。
[0263] 在一些实施方式中，芳香族阳离子肽的剂量提供为"低"、"中"或"高"剂量水平。在 一个实施方式中，低剂量提供为从约0. 〇〇〇lmg/kg/h到约0. 5mg/kg/h、合适地从约0.0 lmg/ kg/h到约0. lmg/kg/h。在一个实施方式中，中剂量提供为从约0. lmg/kg/h到约1. Omg/kg/ h，合适地从约0. lmg/kg/h到约0. 5mg/kg/h。在一个实施方式中，高剂量提供为从约0. 5mg/ kg/h 到约 10mg/kg/h，合适地从约 0? 5mg/kg/h 到约 2mg/kg/h。
[0264] 本领域技术人员将认识到，某些因素可以影响有效地治疗一对象的剂量和时间， 包括但不限于疾病或失调的严重程度、先前的治疗、健康情况和/或对象的年龄以及存在 的其它疾病。而且，利用本文描述的治疗有效量的治疗组合物来治疗一对象可以包括单次 治疗或一系列治疗。
[0265] 本领域技术人员将认识到，某些因素可以影响有效地治疗一对象的剂量和时间， 包括但不限于疾病或失调的严重程度、先前的治疗、健康情况和/或对象的年龄以及存在 的其它疾病。而且，利用本文描述的治疗有效量的治疗组合物来治疗对象可以包括单次治 疗或系列治疗。
[0266] 根据本发明的方法治疗的哺乳动物可以是任何动物，例如，包括农场动物，如羊、 猪、牛和马；宠物动物，如狗和猫；实验室里的动物，如小鼠、大鼠和兔。在优选的实施方式 中，所述哺乳动物是人。
[0267] 芳香族阳离子肽和其他治疗药物的联合疗法
[0268] 在某些情况下，可能适合将本文描述的至少一种芳香族阳离子肽（或者药学上可 接受的盐、酯、酰胺、前体药物或溶剂化物）与另一种治疗药物结合给药。仅举例而言，如果 在接受本文中的一种芳香族阳离子肽时，患者经历的一种副作用是发炎，则可能适合地将 抗发炎的药物与该最初的治疗药物结合给药。或者，仅举例而言，本文中描述的所述化合物 中的一种化合物的治疗效果可以通过辅助剂的给药而增强（即，该辅助剂本身可能仅具有 最小的治疗益处，但与另一种治疗药物结合时，增强了对患者的总体治疗益处）。或者，仅举 例而言，患者经历的益处可以通过将本文描述的化合物中的一种与同样具有预防或治疗眼 科病症的治疗益处的另一种治疗药物（其也包括最佳治疗法）一起给药而增强。仅举例而 言，在涉及给药本文中描述的一种芳香族阳离子肽的对黄斑变性的治疗中，也可通过向患 者提供用于黄斑变性的其它治疗剂或治疗方法来引起治疗效果增强。在任何情况下，无论 治疗的何种眼科疾病、失调或病症，患者经历的总体受益可以仅仅是添加两种治疗药物，或 者患者可以经历协同受益。
[0269] 可能的组合治疗方法的特定的非限制性实施例包括使用至少一种芳香族阳离子 肽与一氧化氮（N0)诱导剂、抑制素、带负电荷的磷脂、抗氧化剂、矿物质、消炎剂、抗血管生 成剂、基质金属蛋白酶抑制剂和类胡萝卜素。在若干情况下，合适的组合剂可以落入多种类 别中（仅举例而言，叶黄素是抗氧化剂和类胡萝卜素）。而且，芳香族阳离子肽还可以与向 患者提供益处的其他药物一起给药，仅举例而言，其它药物例如包括环孢菌素A。
[0270] 此外，芳香族阳离子肽还可以与可以向患者提供另外的或协同的益处的方法结合 使用，仅举例而言，包括使用体外净化疗法（extracorporeal rheopheresis)(也称为膜差 异过滤）、使用可植入式微型望远镜、玻璃膜疣激光凝固法以及微刺激疗法。
[0271] 已显示使用抗氧化剂有益于患有黄斑变性和营养失调的患者。例如，参见：Arch. Ophthalmol.，119:1417-36(2001);Sparrow等，J. Biol. Chem.,278:18207-13 (2003)。可 以与至少一种芳香族阳离子肽结合使用的合适的抗氧化剂的示例包括维生素C、维生素E、 胡萝卜素和其他的类胡萝卜素、辅酶Q、4-羟基-2, 2, 6, 6-四甲基哌啶-N-氧自由基（也 称为Tempol)、叶黄素、二叔丁对甲酚、白藜芦醇、衍生类似物（PNU-83836-E)和山桑子萃取 物。
[0272] 已显示了使用某些矿物质有益于患有黄斑变性和营养失调的患者。例如，参见： Arch. Ophthalmol.，119:1417-36(2001)。可以与至少一种芳香族阳离子肽结合使用的合适 的矿物质的示例包括：含铜的矿物质，比如铜氧化物；含锌的矿物质，比如锌氧化物；以及 含硒的化合物。
[0273] 还已显示了使用某些带负电的磷脂有益于患有黄斑变性和营养失调的患者。例 如，参见：Shaban&Richter，Biol.Chem.，383:537_45(2002);Shaban,等，Exp.Eye Res.， 75:99-108(2002)。可以与至少一种芳香族阳离子肽结合使用的合适的带负电的磷脂的示 例包括心肌磷脂和磷脂酰甘油。带正电的和/或中性的磷脂也可为患有黄斑变性和营养失 调的患者提供益处。
[0274] 某些类胡萝卜素的使用与感光细胞中所需的光保护的保持相关。类胡萝卜素是类 萜组的天然存在的黄色到绿色的色素，可以在植物、藻类、细菌和诸如鸟类和贝类水生动物 的某些动物中找到。类胡萝卜素是一大类分子，其中已经识别出超过600种天然存在的类 胡萝卜素。类胡萝卜素包括碳氢化合物（胡萝卜素）及其氧化的、醇类衍生物（叶黄素）。 类胡萝卜素包括黄体色素、虾青素、角黄素、辣椒红、辣椒红素、0 _8' _阿朴-胡萝卜醛（阿 朴-胡萝卜醛）、阿朴-胡萝卜醛、a-胡萝卜素、胡萝卜素、"胡萝卜素"（、 a-胡萝卜素和胡萝卜素的混合物）、y-胡萝卜素、隐黄质、叶黄素、番茄红素、 violerythrin、玉米黄质、及其羟基酯或其含羧基的成员的酯。很多天然中的类胡萝卜素是 以顺异构形式和反异构形式存在，而合成化合物常常为外消旋混合物。
[0275] 在人中，视网膜选择性地积累主要两种类胡萝卜素：玉米黄质和叶黄素。认为这两 种类胡萝卜素有助于保护视网膜，因为它们是强大的抗氧化剂且吸收蓝光。关于鹌鹑的研 究表明，以类胡萝卜素不足的饮食饲养的组的视网膜具有低浓度的玉米黄质且视网膜经受 严重的光损伤，这通过非常多的凋亡的感光细胞得到证实，而具有高玉米黄质浓度的组具 有最小的损伤。用于与至少一种芳香族阳离子肽结合的合适的类胡萝卜素的示例包括叶黄 素和玉米黄质以及以上提及的任一种类胡萝卜素。
[0276] 合适的一氧化氮诱导剂包括刺激内源的N0或者提高体内的内源的内皮细胞衍生 舒张因子（EDRF)的含量的化合物，或者是用于一氧化氮合成酶的基质。例如，这样的化合 物包括左旋精氨酸、左旋高精氨酸和N-羟基-L-精氨酸，包括它们的硝基化和亚硝基化的 类似物（例如，硝基化的左旋精氨酸、亚硝基化的左旋精氨酸、硝基化的N-羟基-L-精氨 酸，亚硝基化的N-羟基-L-精氨酸、硝基化的左旋高精氨酸和亚硝基化的左旋高精氨酸）、 左旋精氨酸的前体和/或它们的生理学上可接受的盐，例如包括瓜氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺 和赖氨酸、包括这些氨基酸中的至少一种氨基酸的多肽、精氨酸酶（例如，N-羟基-L-精 氨酸和2 (S)-氨基-6-硼己烷酸）的抑制剂以及一氧化氮合成酶的基质、细胞激素、腺苷、 舒缓激肽、钙网蛋白、比沙可啶和酚酞。H)RF是由内皮细胞分泌的血管舒张因子，且已确 定为一氧化氮或其紧密相关的衍生物（Palmer等，Nature, 327:524-526 (1987) ;Ignarro 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84:9265-9269 (1987)) 〇
[0277] 他汀类药物用作降脂剂和/或合适的一氧化氮诱导剂。此外，已证明，他汀类 的使用和黄斑变性发病或发展的延迟之间有关系。G.McGwin等，British Journal of Ophthalmology, 87:1121-25 (2003)。因此，当他汀类与芳香族阳离子肽结合给药时，他汀类 向患有眼科病症（例如，黄斑变性和营养失调以及视网膜营养失调）的患者提供益处。仅 举例而言，合适的他汀类包括瑞舒伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美 伐他汀、韦罗他汀、氟伐他汀、康百汀、洛伐他汀、达伐他汀、氟吲哚他汀、阿托伐他汀、阿托 伐他汀钙（其是阿托伐他汀的半钙盐）和二氢康百汀。
[0278] 仅举例而言，可以与芳香族阳离子肽一起使用的合适的消炎剂包括阿西匹林和其 他水杨酸盐、可玛林、奈多罗米、茶碱、齐留通、扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、茚甲新和脂 肪氧合酶抑制剂；非留体抗炎药（NSAID)(比如布洛芬和萘普生）；泼尼松、氟美松、环氧酶 抑制剂（即，C0X-I和/或C0X-2抑制剂，比如Naproxen?或Celebrex ?);他汀类（仅举例 而言：瑞舒伐他汀，匹伐他汀，辛伐他汀，普伐他汀，西立伐他汀，美伐他汀，韦罗他汀，氟 伐他汀，康百汀，洛伐他汀，达伐他汀，氟吲哚他汀，阿托伐他汀，阿托伐他汀钙（其是阿托 伐他汀的半钙盐）和二氢康百汀）；以及分离的类固醇。
[0279] 合适的基质金属蛋白酶（MMP)抑制剂也可与芳香族阳离子肽结合给药，以治疗与 黄斑变性或视网膜变性相关的眼科病症或症状。已知，MMP水解细胞外基质的大多数成分。 这些蛋白酶在很多生物过程中起到核心作用，比如正常组织重构、胚胎形成、伤口愈合和血 管生成。然而，在很多疾病状态中（包括黄斑变性）观察到MMP的过度表达。已识别出很 多MMP，大多数是多结构域锌内肽酶。已知很多金属蛋白酶抑制剂（例如，参见Whittaker M?等的 the review of MMP inhibitors, Chemical Reviews 99 (9): 2735-2776 (1999))〇 MMP抑制剂的代表性示例包括金属蛋白酶的组织抑制剂CHMP)(例如，HMP-1、HMP-2、 TIMP-3或TIMP-4)、a -2-巨球蛋白、四环素（例如，四环素、米诺环素和多西环素）、羟肟酸 盐（例如，巴马司他、马立马司他和曲卡德）、螯合剂（例如，EDTA、半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、 D-青霉胺和金盐）、合成MMP片段、琥泊酰基疏基噪呤、氨基磷酸酯和轻氨酸（hydroxaminic