acid)。仅举例而言，可以结合芳香族阳离子肽使用的MMP抑制剂的示例包括上述抑制剂中 的任一种抑制剂。
[0280] 也已显示，抗血管生成药物或抗VEGF药物的使用为患有黄斑变性和营养失调的 患者提供益处。可以与至少一种芳香族阳离子肽结合使用的合适的抗血管生成或抗VEGF 药物的实例包括 RhufabV2 (Lucentis?)、色氨酰-tRNA 合成酶（TrpRS)、EyeOOl (抗-VEGF 聚乙二醇化适体）、角藍胺、Retaane? 15mg(乙酸阿奈可他的药性持久的悬浮液；爱尔康公 司）、考布他丁六4前药(^4?)、]\&1〇1^111￥，]\^6。代1 1￥(米非司酮（1?11-486)、结膜下曲安奈德 (subtenon triamcinolone acetonide)、玻璃体内结晶曲安奈德、普啉司他（AG3340-合成 基体金属蛋白酶抑制剂，Pfizer)、肤轻松醋酸酯（包括氟轻松眼内植入物，Bausch&Lomb/ Control Delivery Systems)、VEGFR抑制剂（Sugen),和 VEGF_Trap(Regeneron/Aventis)〇
[0281] 已用来缓解视力障碍的其他药物治疗可以与至少一种芳香族阳离子肽结合使用。 这样的治疗包括但不限于比如以下的制剂：使用非热激光的Visudyne? ;PKC 412 ;恩多维 隆（Endovion) (NeuroSearch AJS);神经营养因子，仅举例而言，包括胶质细胞衍生的神经 营养因子和睫状神经营养因子；迪心赞（diatazem);杜塞酰胺；费托普（Phototrop)，9_顺 式视黄醛；眼药（包括Echo疗法），包括碘化磷或乙膦硫胆碱或者碳酸酐酶抑制剂； AE-941(AEterna Laboratories 公司）；西恩纳（Sirna-027)(Sirna Therapeutics 公 司）；哌加他尼（NeXstar药物/吉利德科技公司）；神经营养因子（仅举例而言，包括 NT_4/5，Genentech),坎德 5 (Cand5) (Acuity Pharmaceuticals);雷珠单抗（Genentech); INS-37217 (Inspire Pharmaceuticals);整合素诘抗剂（包括来自 Jerini AG 和 Abbott Laboratories 的整合素诘抗剂）；EG_33〇6 (Ark Therapeutics Ltd.) ;BDM_E(BioDiem Ltd.);萨力多胺（例如，EntreMed公司所使用的）；心肌营养-1 (Genentech), 2-甲氧基 雌二醇（Allergan/Oculex) ;DL_8234(Toray Industries) ;NTC-200(Neurotech);四硫钼 酸盐（University of Michigan) ;LYN_002(Lynkeus Biotech);微藻化合物（Aquasearch/ Albany, Mera Pharmaceuticals) ；D~9120 (Celltech Group pic) ；ATX-S10(Hamamatsu Photonics) ;TGF_0 2(Genzyme/Celtrix);酪氨酸激酶抑制剂（Allergan, SUGEN, Pfizer); NX_278_L(NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences) ;0pt_24(0PTIS France SA);视 网膜细胞神经节神经保护剂（Cogent Neurosciences) ;N_硝基吡唑衍生物（Texas A&M University System) ;KP_102 (Krenitsky Pharmaceuticals)和环抱霉素 A〇
[0282] 在任何情况下，多种治疗剂可以以任何顺序或甚至同时给药。如果同时地，所述多 种治疗剂可以提供为单一、统一的形式或者以多个形式（仅举例而言，作为单一的溶液或 者两种单独的溶液）。所述治疗剂中的一种治疗剂可以多剂量型提供，或者两者都可以作为 多剂量型提供。如果不同时地，则多次剂量之间的时间间隔可以从大于〇周到小于约4周、 小于约6周、小于约2个月、小于约4个月、小于约6个月或小于约1年的范围中变化。此 外，组合方法、组合物和制剂不限于仅使用两种药物。仅举例而言，芳香族阳离子肽可以与 至少一种抗氧化剂和至少一种带负电的磷脂一起提供；或者芳香族阳离子肽可以与至少一 种抗氧化剂和至少一种一氧化氮产生诱导剂一起提供；或者芳香族阳离子肽可以与至少一 种一氧化氮产生诱导剂和至少一种带负电的磷脂一起提供等。
[0283] 此外，芳香族阳离子肽还可与可以向患者提供其他益处或协同益处的方法结合 使用。已知的、提出的或认为的用来缓解视力障碍的方法包括但不限于"有限视网膜移 位"、光动力疗法（仅举例而言，包括受体靶向的roT，百时美施贵宝公司；用于注射的卟吩 姆钠与roT ;维替泊芬，QLT有限公司；罗培泊芬（rostaporfin)与TOT，米拉维特医药技 术公司（Miravent Medical Technologies);他拉泊芬钠（talaporfin sodium)与]^T, 新日石油公司（Nippon Petroleum);莫特沙芬镥（motexafm lutetium)，法玛赛力克有 限公司（?1^1'1]^〇5^1；[08，1110.))、反义寡聚核苷酸（仅举例而言，包括1'10￥38311?1^；?^ SA公司测试的产品和ISIS-13650 (Isis Pharmaceuticals))、激光凝固、玻璃膜疣激光、 黄斑裂孔手术、黄斑易位手术、可植入式微型望远镜、高速循环血管造影术（Phi-Motion Angiograophy)(也称为微激光治疗和供养血管治疗）、质子束疗法、微电流刺激疗法、视网 膜脱离和玻璃体手术、巩膜扣带术、黄斑下手术、经瞳孔温热疗法、光系统I疗法、使用干扰 RNA(RNAi)、体外净化疗法（也称为膜差异过滤和流变疗法）、微型芯片植入、干细胞疗法、 基因置换疗法、核糖基因疗法（包括针对缺氧反应元件的基因疗法，Oxford Biomedica; 兰提帕克（Lentipak)，Genetix公司；F>DEF基因疗法，GenVec公司）、光感受器/视网 膜细胞移植（包括可移植视网膜上皮细胞，Diacrin，Inc.公司；视网膜细胞移植，Cell Genesys, Inc?公司）和针刺疗法。
[0284] 可以用来使个体受益的其它组合包括利用基因测试来测定该个体是否是与某 眼科病症有关的突变基因的携带者。仅举例而言，人类ABCA4基因中的缺陷被认为是与 五种不同的视网膜表型有关，包括斯特格氏病、锥-杆细胞营养不良、年龄相关的黄斑变 性、色素性视网膜炎。例如，参见：Allikmets 等，Science, 277:1805-07(1997) ;Lewis 等，Am. J. Hum. Genet. ,64:422-34 (1999) ;Stone 等，Nature Genetics, 20:328-29 (1998); Allikmets，Am.J Hum.Gen. ,67:793-799 (2000) ;Klevering 等，Ophthalmolo gy，111:546-553(2004)。此外，常染色体显性斯特格氏病是由EL0V4基因突变引起。参见： Karan等，Proc. Natl. Acad. Sci. (2005)。预期具有任何这些突变的患者都能从本文描述方 法中获得治疗和/或预防益处。
[0285] 实施例
[0286] 通过以下实施例进一步说明本发明，所述实施例不应当看作以任何方式限制本发 明。
[0287] 实施例1-预防人视网腊h皮细朐的高葡萄糖诱导件损伤
[0288] 本发明的芳香族阳离子肽在预防人视网膜上皮细胞（HREC)中的高葡葡糖诱导性 损伤的效果是在培养的HREC中进行研究的。
[0289] 用在本发明的研究中的HREC的培养方法是已知的。通常参见：Li B、Tang SB、Zhang G、Chen JH、Li BJ 的 "Culture and characterization of human retinal capillary endothelial cell'，，Chin Ophthal Res 2005 ;23:20-2 ;Premanand C、Rema M、 Sameer MZ、 Sujatha M、 Balasubramanyam M 的"Effect of curcumin on proliferation of human retinal endothelial cells under in vitro conditions'，，Invest Ophthalmol Vis Sci 2006 ;47:2179-84。
[0290] 简言之，HREC细胞分成三组：正常对照组；30mM葡萄糖给药组；以及30mM葡 萄糖+SS-31给药组。利用Annexin V+PI实验和流式细胞仪来测定HREC在高葡萄 糖与不同浓度的SS-31 (10nM、100nM、1 y M、10 y M)共处理的存活情况。通常参见： Koopman, G. , Reutelingsperger, C. P. , Kui jten, G. A. M. , Keehnen, R. M. J. , Pals, S. T.,和 van Oers, M. H. J. 1994,"Annexin V for flow cytometric detection of phosphatidyl serine expression on B cells undergoing apoptosis'，，Blood84:1415 ; Homburg, C. H. , de Haas, M. , von dem Borne, A. E. , Verhoeven, A. J. , Reutelingsperger, C. P.和 Roos, D. 1995,"Human neutrophils lose their surface Fc gamma RIII and acquire Annexin V binding sites during apoptosis in vitro'，，Blood 85:532 ;Verme s, L, Haanen, C, Steffens-Nakken, H.,和 Reutelingsperger, C. 1995,"A novel assay for apoptosis-flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V"，J. Immunol. Meth. 184:39 ; Fadok, V. A. , Voelker, D. R. , Campbell, P. A. , Cohen, J. J. , Bratton, D. L.,和 Henson, P. M.1992，''Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages'，，J. Immunol. 148:2207。
[0291] 在24小时和48小时测定用高葡萄糖与SS-31共处理过的HREC的存活率。结果 显示在图1A-图1B中，并表明经给药SS-31，HREC存活率得到显著改善，凋亡和坏死的细胞 减少。用SS-31处理还降低了 R0S的产生（图2A-图2F)。
[0292] 对SS-31作为防止高葡萄糖处理的HREC线粒体潜在损失的保护剂进行了研究评 价。为了确定线粒体介导的通路在SS31的防止高葡萄糖诱导的细胞死亡的保护性作用中 是否重要，通过流式细胞仪测定了 A Wm。在利用不含SS31的高葡萄糖处理HREC 24小时 或48小时后，如在高葡萄糖组中观察到的红色荧光与绿色荧光的比率的显著降低所表明， 通过JC-1荧光探针检测到线粒体膜电位的快速降低。相反，在100nM的SS31共处理过的 组中的A Wm保持基本不变，且与正常葡萄糖对照组类似（图3A-图3B)。这些数据表明 SS31防止了由于暴露至高葡萄糖环境而导致的线粒体膜电位降低。
[0293] 葡萄糖（30mmol/L)引起细胞色素c从HREC的线粒体释放。以细胞色素c抗体和 线粒体特异性蛋白抗体（HSP60)免疫标记固定的HREC。共焦显微分析显示正常培养中的 HREC和SS-31与葡萄糖共处理中的的HREC具有重叠的细胞色素c染色和线粒体染色，表明 细胞色素c和线粒体的共定位（图4A-图4F)。在利用30mmol/L的葡葡萄处理24小时或 48小时后，可以在HREC的细胞质中观察到一些细胞色素c，表明葡萄糖引起细胞色素c从 线粒体释放到HREC细胞的细胞质中，但SS-31可以降低在线粒体和细胞质之间的这样的易 位。
[0294] 防止细胞色素c从线粒体释放导致半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活性降低。如图 5A-图5E中所示，SS-31降低了半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3在高葡萄糖处理的HREC中的 蛋白质表达。通过免疫印迹法测定切断的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3蛋白质表达的水平 (图5A)。当将HREC暴露于30mM的葡萄糖24小时和48小时时，大幅度地提高了半胱氨酸 天冬氨酸蛋白酶-3表达的水平。在同时，在SS-31共处理组中，显示半胱氨酸天冬氨酸蛋 白酶-3的蛋白质表达水平的显著降低（*p〈0. 05)。图5B显示了高葡萄糖与SS-31共处理 24小时和48小时的HREC的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达水平的定量分析。
[0295] SS-31提高了高葡萄糖处理的HREC中的Trx2的表达。图5C显示了暴露于30mM 葡萄糖与SS-31共处理24小时和48小时的HREC中的Trx2的mRNA水平。通过实时定量 PCR来测定Trx2的mRNA表达水平。通过18S mRNA水平来标准化Trx2的相对mRNA水平 (*p〈0. 05相对于正常葡萄糖培养基组和30mM高葡萄糖处理组）。对于每一时间点，使用了 三个独立的样本。图f5D显示了通过免疫印迹法测定的Trx2蛋白质表达水平。相比于正常 葡萄糖组，高葡萄糖与SS-31共处理的组中的Trx2的蛋白质表达显著增加（*p〈0. 05)。图 5E显示了高葡萄糖与SS-31共处理或高葡萄糖不与SS-31共处理的24小时和48小时的 HREC中的Trx2蛋白质水平的定量分析。
[0296] 这些结果表明，SS-31能够提高HREC细胞在高葡萄糖环境中的存活率。因此， SS-31和其他的芳香族阳离子肽可以用在预防糖尿病性视网膜病变的方法中。
[0297] 实施例2-给畲高脂肪膳畲的大鼠的糖尿病件视网腊病夺的预防
[0298] 在Sprague-Dawley大鼠模型中研究了本发明的芳香族阳离子肽在预防糖尿病性 视网膜病变的发展中的作用。该实施例描述了这些实验的结果。
[0299] 通过在SD大鼠中进行为期6周的HFD和低剂量STZ (30mg/kg)注射的结合或 者单独的高剂量STZ(65mg/kg)来建立糖尿病的大鼠模型。通常参见：K. Srinivasan，B. Viswanad, Lydia Asrat, CL. Kaul 和 P. Ramarao, "Combination of high-fat diet-fed and low-dose streptozotoein-treated rat:A model for type 2diabetes and pharmacological screening", Pharmacological Research, 52(4) : 313-320, 2005。将喂食 正常的食物的同一批大鼠（NRC)用作对照。表7-10显示了治疗时间表和试验方案。
[0300] 表7.治疗组-HFD/STZ模型
[0301]
[0308] 根据刚描述的试验方案，证明了芳香族阳离子肽在治疗SD大鼠模型中的与糖尿 病相关的病症中的作用。SS-20和SS-31的给药导致预防或逆转了患有糖尿病的大鼠的晶 状体中的白内障形成（图6和图7,表11和表12)。
[0309]表 11. HFD/STZ 大鼠模型
[0310]
[0311] 透明；
[0312] +:轻度透明；
[0313] ++:不透明：
[0314] +++:中度不透明；
[0315] ++++:严重不透明
[0316] 表12. STZ大鼠模型
[0317]
[0318] 研究了芳香族阳离子肽对SD大鼠模型中的晶状体上皮的作用。给药SS-31降低 了 STZ大鼠模型（图8)和HFD/STZ大鼠模型（图9)中的上皮细胞变化。
[0319] 研究了芳香族阳离子肽对SD大鼠模型中的内层血视网膜屏障功能的作用。相比 于未给药SS-20或SS-31的HFD大鼠，SS-20和SS-31的给药导致内层血视网膜屏障功能 得到改善（图10)。
[0320] 研究了芳香族阳离子肽对SD大鼠模型中的视网膜微血管的作用（图11-12)。 SS-31的给药降低了在STZ或HFD/STZ大鼠中观察到的视网膜微血管变化。
[0321] 研究了芳香族阳离子肽对SD大鼠模型中的视网膜微血管中的紧密连接蛋白 claudin-5的分布的作用。在共焦显微镜下检测紧密连接蛋白claudin-5的分布（图 13A-图13D)。在正常的大鼠（A)中，claudin-5沿着视网膜血管平整地、线性地且均匀地分 布，而在STZ大鼠（B，箭头）中，线性形状被破坏。以SS-20(10mg/kg)或SS-31(10mg/kg) 治疗的STZ大鼠中的视网膜血管上的claudin-5的分布与正常大鼠的claudin-5的分布相 似（分别为C和D)。
[0322] 概括来讲，这些发现共同地表明了芳香族阳离子肽预防或弥补糖尿病对眼睛（例 如白内障和微血管）的负面作用。因此，根据本发明的芳香族阳离子肽的给药在预防或治 疗与人类对象中的糖尿病相关的眼科病症的方法中是有用的。
[0323]实施例3-SS-31预防青光眼小梁网细朐中的氣化压力
[0324] 通过研究肽对青光眼小梁网细胞的作用，研究本发明的芳香族阳离子肽在预防或 治疗青光眼中的作用。青光眼是世界上不可逆性失明的第二主要原因。原发性开角型青光 眼（P0AG)是青光眼的主要亚型。在P0AG中，小梁网状结构中没有可视异常。但是，确信小 梁网状结构中的细胞执行其正常功能的能力受到损害。
[0325] 在该实施例中，在来自P0AG患者的小梁网细胞（GTM)和来自未患病个体的小 梁网细胞（HTM)之间进行比较本发明的芳香族阳离子肽的作用。已描述了用在本发明 的研究中的方法。通常参见：He Y，Ge J，Tombran_Tink J.，"Mitochondrial defects and dysfunction in calcium regulation in glaucomatous trabecular meshwork cells^. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008, 49(11) :4912-22 ；He Y,Leung Kff, Zhang YH，Duan S,Zhong XF,Jiang RZ, Peng Z，Tombran-Tink J，Ge J. "Mitochondrial complex I defect induces R0S release and degeneration in trabecular meshwork cells of P0AG patients:protection by antioxidants" ? Invest Ophthalmol Vis Sci.2008,49(4):1447-58。相比于HTM细胞，GTM细胞显示出线粒体膜电位受到明显损害 (图 18)。
[0326] 将细胞分成三组："组A"细胞在给药SS-31之前暴露于双氧水。"组B"细胞在给 药双氧水之前暴露SS-31。"组C"细胞被同时给药SS-31和双氧水。
[0327] 为了评定SS-31对HTM细胞或GTM细胞是否有细胞毒作用，将各种浓度的SS-31 给药至细胞并利用LDH分析来测定细胞毒性。LDH细胞毒性分析是评定细胞毒性的比色法。 该分析定量地测定从损伤的细胞中释放出的稳定的、细胞溶质的、乳酸脱氢酶（LDH)。通过 偶联酶促反应测定释放出的LDH，该反应引起四唑盐（碘硝基四唑（INT))通过心肌黄酶转 化为红色的甲簪（formazan)。可用在本发明的研究中的用以检测来自细胞的LDH的方法 是已知的。通常参见：Haslam，G?等（2005)Anal.Biochem.336:187;Tarnawski，A. (2005) Biochem. Biophys. Res.