相对应的纯化级分因此将在单克隆抗体治疗的病理范围内借助 CD16 (ADCC，细胞因子的分泌）引起效应子特性进一步增加，在所述病理内ADCC或CDC反应 发挥重要作用，如预防同种异体免疫或治疗癌症、感染性疾病和自身免疫疾病。
[0302] 参考文献
[030引Ahmad等人，FA沈BJ. 1996. 10:258 - 266.
[0304] A化rechtMT等人，INFECTIONANDIMMUN口Y,Nov. 2007,P. 5425 - 5433.
[030引 Almagro等人，RrontiersinBioscience13, 1619 - 1633,January1, 2008.
[030引 AntesB等人，JQiromatogrBAnalytTechnolBiomedLifeSci. 2007Jun1 ; 852(1 -^:250 - 6.
[0307]BeliardR等人，BrJHaematol. 2008Apr; 141 (1) : 109 - 19.
[030引 I^ruggermann等人，YearinImmuno. , 7:33 (1993);
[0309]Cardarelli等人，ClinCancerRes2009April28 ; 15:3376 - 3383,
[0310] Cardarelli等人，Cancer Immunol Immuno化er. 2010. 59. 257 - 265，
[0311] Cartron G等人，Blood. 2002 Feb 1 ;99(3) :754 - 8.
[031引Casadevall A.等人，Emerg Infect Dis. 2002 Aug ;8 (8) :833 - 41 ;
[0引引 Chan AC等人，Nat 民ev Immunol. 2010 May ; 10巧）：301 - 16.
[0314] Qievreux G等人，Anal Biochem. 2011 Aug 15 ;415 (2) : 212 - 4 ;
[0315] Cibelli等人，1998 Science, 280:1256 - 1258
[031 引 Dali'Acqua等人，2002, J Immunol.;169:5171-80.
[0317] Dali'Acqua等人，2006, J. Biol. Chem. ;281:23514 - 24. (a)
[031引Dali'Acqua等人，J Immunol 2006 ;177:1129 - 1138. (b)
[0319] Duchosal 等人，Na化re 355:258(1992)
[0320] Edelman, G. M.等人，Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78 - 85 (1969).
[0321]Edwards JC等人，Nat Rev Immunol. 2006 May ;6巧）：394 - 403.
[032引 EP 1 176 195 Al，
[032引 EP 1 308 456，
[0324] EP 1 829 961，
[032引 Farnan D, Moreno GT. Anal Qiem. 2009 Nov 1 ;81 (21) : 8846 - 57.
[0326] Fisher R等人，Vaccine 21 (2003) 820 - 825.
[0327] Forthal等人，J Immunol 2010 ; 185 ;6876 - 6882，
[032引 Gandhi S等人，Pharm Res. 2012 Jan ;29 (1) : 209 - 24.
[0329] Gene Targeting, A Practical Approach, I民L Press at Oxford University Press(1993)
[0330] Gordon等人，1980 Proc Natl Acad Sci U S A. ;77:7380 - 4
[0331] Herbst R.等人，J Pharmacol E邱Ther. 2010 Oct ;335 (1) : 213 - 22，
[0332] Hinton等人，2004, J Biol Chem. ;279:6213 - 6.
[033引 Hoogenboom等人，J. Mol. Biol.，227:381 (1"1);
[0334] lanello A等人，Cancer and Metastasis Reviews 24:487 - 499, 2005.
[0335] Idusogie邸等人，J Immunol. 2001 ; 166:2571 - 5.
[033引 Imai-Nishiya等人，BMC Biotechnology 2007, 7:84;
[0337]Jakobovits等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 90:2551 (1993) (a);
[033引 Jakobovits等人，Na化re, 362:255 - 258 (1993) (b);
[0339] Jones等人，Na化re, 321:522 - 525, 1986 ;
[0340] Rabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991).
[0341] KandaY等人，Journal of Biotechnology 130 (2007) 300 - 310，
[0342]陆awli LA等人，MAbs.2010 Nov-Dec;2(6):613-24.
[034引 Lazar, G. A.等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (11):4005-10.
[0344] Ma JK等人，Nat Rev Genet. 2003 Oct ;4 (10) : 794 - 805.
[0345] Manipulating the Mouse Embryo, A Laboratory Manual, Second edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press (1994)；
[0346] Marks等人，J. Mol. Biol. ,222:581-5 597(1991);
[0347] McAtee CP等人，Curr Protoc Protein Sci. 2012 Aug ;Qiapter 8:Unit 8. 10，
[034引 Miao C等人，Journal of General Virology (2009)，90, 1119 - 1123.
[0349] Moore GL等人，mAbs 2:2, 181 - 189 ;March/April, 2010 ;
[0350] Mori K等人，Biotechnol Bioeng. 2004 Dec 30 ;88 (7) :901 - 8，
[0351] Olivier S.等人，MAbs.2010化1-Aug;2(4):405 - 415，
[035引Presta LG. Adv Drug Deliv Rev. 2006 Aug 7 ;58巧-6) :640 - 56.
[035引 民ea JC等人，J Pharm Biomed Anal. 2011 Jan 25 ;54口）：317-23.
[0354]Rea Jennifer C. Innovations in Biotechnology. InTech. February 17, 2012. Chapter 19.
[03日引 Riechmann等人，Nature, 332:323 - 327, 1988，
[0356] Ryan等人，1997 Science ;278:873-876 ;
[0357] Satoh M等人，E邱ert Opin Biol Ther. 2006 Nov ;6 (11) : 1161 - 73.
[035引 Schil化erg S等人，Vaccine 23口005) 1764 - 1769.
[0359] Shields化等人，J Biol Chem. 2001 Mar 2 ;276巧）：6591 - 604.
[0360] Stoger E等人，Molecular Breeding 9:149 - 158, 2002.
[0361] Suzuki等人，Clin Cancer Res 2007 March 15 ; 13:1875 - 1882，
[036引Umana等人，Nat Biotechnol. 1999 Feb ; 17 (2) : 176 - 80，
[036引 US 5, 591，669，
[0364] US 5, 598, 369，
[036引 US 5, 545, 806，
[036引 US 5, 545, 807，
[0367] US 6, 150, 584
[036引 Vau組an等人，Na化re Biotech 14:309(1996)
[0369] Velders MP等人，Br J Cancer. 1998 Aug ;78 (4) : 478 - 83.
[0370] Verhoeyn等人，BioEssays, 8:74, 1988，
[0371] Verhoeyen等人，Science, 239:1534 - 1536, 1988 ;
[0372] Vlasak J, lonescu R. Curr Pharm Biotechnol. 2008 Dec ;9 (6) : 468 - 81.
[0373] Wallace PK等人，J Leukoc Biol. 1994化n ;55(6) :816 - 26.
[0374]Weiner LM等人，Nat Rev Immunol. 2010 May;10巧）：317-27.
[037引 WO 9004036 Al，
[037引 WO 9517085 Al，
[0377] WO 9951642，
[037引 WO 0026357 A2，
[0379] WO 00/42072，
[0380] WO 01/77181，
[0381] WO 01/26455 Al，
[038引 WO 02/060919 A2，
[038引 WO 2004/024768，
[0384] WO 2004/024866,
[038引 WO 2004/029207，
[038引WO2004/050847 A2，
[0387] WO 2004/063351
[038引 WO 2004/074455
[0389] WO2005/033281 A2,
[0390] WO2007/048077 A2
[03川 WO2007/106078 A2，
[039引 WO 2010/045193，
[0393] WO 2010/106180 A2,
[0394] WO 2011/009623,
[039引 WO 2012/041768 A1
[039引 Wri曲t A, Morrison S L. J Exp Med. 1994S巧1 ; 180 (3) : 1087 - 96,
[0397]Yamane - OhnukiN.等人，Biotechnol Bioeng. 2004Sep 5 ;87巧）：614 - 22,[039引Zeitlin L.等人，Microbes Infect. 2000May ;2 (6):701 - 8,
[0399]ZhangT.等人，J Qiromatogr A. 2011Aug 5 ;1218(31) :5079 - 86.
【主权项】
1. 一种可以通过以下方法获得的单克隆抗体组合物作为药物使用，所述方法包括： a) 从细胞克隆、非人类转基因动物或转基因植物产生单克隆抗体组合物， b) 通过层析将步骤（a)中获得的组合物分级分离，和 c) 合并步骤b)中获得的与层析图主峰相对应的一个或几个层析级分，因而获得的单 克隆抗体组合物富含所述主峰，所述主峰占步骤c)中获得的组合物的层析图的至少85%。2. 根据权利要求1所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1作为药物使用，特征在 于通过离子交换层析、通过层析聚焦或通过疏水相互作用层析实现步骤b)的分级分离。3. 根据权利要求2所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求2作为药物使用，特征在 于离子交换层析使用以下洗脱手段之一： ?离子力梯度；和/或 ? pH梯度；或 ?置换分子。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至3中 任一项所述作为药物使用，特征在于在组合物中存在的抗体的至少95%的重链不包含任何 C末端赖氨酸残基。5. 单克隆抗体组合物，其中在该组合物中存在的抗体的至少95%的重链不包含任何C 末端赖氨酸残基，所述组合物作为药物使用。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至5中 任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体针对健康供体细胞上存在的非遍在抗原、癌 细胞抗原、病原体感染的细胞的抗原或免疫细胞的抗原。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至6中 任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体是抗RhesusD抗体并且所述组合物意在预防 Rhesus阴性个体中的同种异体免疫。8. 根据权利要求1至6中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至6中 任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体针对癌细胞的抗原并且所述组合物意在治疗 癌症。9. 根据权利要求1至6中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至6中 任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体针对病原体感染的细胞的抗原并且所述组合 物意在治疗所述病原体所致的感染。10. 根据权利要求1至6中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至6中 任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体针对免疫细胞的抗原并且所述组合物意在治 疗自身免疫疾病。11. 根据权利要求1至10中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至10 中任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体包含Fc片段修饰，所述修饰增强所述抗体 与Fe y RIII受体的结合和所述抗体的借助Fe y RIII受体的效应子特性。12. 根据权利要求11所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求11所述作为药物使 用，特征在于所述抗体在Fc片段的某些氨基酸残基处包含至少一个突变。13. 根据权利要求11或权利要求12所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求11或 权利要求12所述作为药物使用，其特征在于它包含小于或等于65 %的岩藻糖含量。14. 根据权利要求1至10中任一项所述的单克隆抗体组合物，其根据权利要求1至10 中任一项所述作为药物使用，特征在于所述抗体包含Fc片段的修饰，所述修饰增强所述抗 体与蛋白质Clq的结合和所述抗体借助补体的效应子特性。15. 层析分级分离步骤的用途，用于增加针对给定抗体的单克隆抗体组合物通过表达 Fe y RIII (CD16)受体的免疫系统的效应细胞诱导表达所述抗原的靶细胞的抗体依赖性细 胞毒性（ADCC)的能力。16. 层析分级分离步骤的用途，用于增加针对给定抗体的单克隆抗体组合物通过补体 诱导表达所述抗原的靶细胞的补体依赖性细胞毒性（CDC)的能力。
【专利摘要】本发明属于抗体疗法技术领域，涉及通过ADCC的靶细胞破坏机理。本发明涉及经纯化的抗体组合物，其用做药物，通过层析分级分离抗体组合物中天然存在的多种电荷同工型，并组合对应于层析图的主峰的一个或多个层析级分得到所述抗体组合物，所得的单克隆抗体组合物富含所述主峰，所述峰占所得组合物的层析图的至少85％。
【IPC分类】C07K1/16, A61K39/395
【公开号】CN105163758
【申请号】CN201480024699
【发明人】G·谢弗勒, N·比霍罗
【申请人】法国血液分割暨生化制品实验室
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2014年3月14日
【公告号】CA2907358A1, WO2014140322A1