具有抑制作用。
[0118] 或者，可以使用基于细胞的血清素受体分析来筛选5_HT3a受体的抑制剂。通 过使用激动剂血清素以及共转染以过表达5-HT3a受体和发光水母素钙敏感报告子 (luminescent aequorin calcium sensitive reporter)的细胞，可进行该分析，以鉴定出 以高敏感性、可量测性和特异性靶向5-HT3a受体的适合的新型活性物。
[0119] 水母素（Aequorin)是来源于维多利亚发光水母（Jellyfish Aequorea Victoria) 的光蛋白。最初翻译为脱辅酶蛋白（apo-enzyme)，其需要疏水基腔肠素以开始向水母素转 化。在结合妈后，通过水母素将腔肠素氧化成腔肠素酰胺（coelenteramide，BFP)，导致发 射出蓝光并排放CO 2。因此，其对于观察或检测内流Ca+2信号尤其有利。
[0120] 可用以下步骤进行水母素辅助的血清素受体分析。解冻共表达血清素5HT3a受体 和水母素钙传感器的经γ -射线照射的冷冻保藏的人类细胞（HEK293亲本）（珀金-埃尔 默（Perkin Elmer)，目录编号ES-402-AF)，并在含H印es缓冲液、无酚红+10% FBS的无抗 生素 DMEM/F12(Invitrogen,目录编号11039-021)中培养18-24小时。在培养18-24小时 后，通过用其细胞培养基冲洗而轻轻使细胞脱附。用额外的IOmL细胞培养基洗涤将确保捕 获最佳数目的细胞。然后以150x g将细胞离心，计数并在福尔肯（Falcon)管中以lx IO6 个细胞/mL重悬于BSA培养基[DMEM/Ham' s F12 (含15mM HEPES、L-谷氨酰胺，无酚红） 培养基（Invitrogen，目录编号11039-021)+10 %无蛋白酶BSA (西格玛奥德里奇（Sigma Aldrich)，目录编号A9205)于水中，BSA终浓度为0. 1 % ]。以5 μ M的终浓度将腔肠素加 入分析培养基中。由于腔肠素储备溶液是在甲醇中，其得到良好地混合，同时将腔肠素溶液 加入细胞悬液中以避免损坏细胞。然后用铝箱包裹IOmL Falcon管，并放置在回转轮（约 45°角和7rpm)上。随后在约20°C下（温度应保持在25°C以下），将细胞孵育4小时至18 小时。在分析当天，在BSA培养基中将细胞稀释至终浓度为2. Ox IO5个细胞/mL。在室温 下再将细胞孵育至少1小时。然后准备筛选板。以2x浓度将拮抗剂稀释于上面引用的BSA 培养基中，每个孔分配50 μ 1。
[0121] 将50微升的细胞悬液（对于终浓度1.0 xlO4/孔，为2. OxioVml)加入拮抗剂孔 中，然后在室温下于黑暗中孵育15分钟。在指定时间（at time)仅制备一个板。使用读板 器的注射器将50微升的血清素（3x EC80 (EC是有效浓度的简称）浓度（30 μ M)以获得Ix EC80 (10 μ Μ)的终浓度）注射至细胞与拮抗剂的混合物中，记录发射光10s。使用激动剂血 清素完成8个点的剂量曲线，以确定对于该系统的EC50。剂量范围为3. 9E-7至5E-5[M]。 所得 EC50 确定为 L 925Ε-6±3· 715E-6[M]。
[0122] 图1至图39示出具有高5_HT3a抑制作用的如上所述的植物材料和提取物的 5-HT3a剂量反应曲线。具体而言，图1示出柠檬茶树叶提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图 2示出茶树油的水溶性级分的5-HT3a剂量反应曲线。图3示出大黄的5-HT3a剂量反应曲 线。图4示出薰衣草茶树提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图5示出澳洲檀香木提取物的 5-HT3a剂量反应曲线。图6示出檀香木油的5-HT3a剂量反应曲线。图7示出吴茱萸果实 的5-HT3a剂量反应曲线。图8示出黄连根茎的5-HT3a剂量反应曲线。图9示出来自紫藤 的油的5-HT3a剂量反应曲线。图10示出桃金娘提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图11示 出野樱桃树皮的5-HT3a剂量反应曲线。图12示出中国沉香木树脂心材提取物的5-HT3a 剂量反应曲线。图13示出生姜根的5-HT3a剂量反应曲线。图14示出万寿菊的5-HT3a剂 量反应曲线。图15示出乳香的5-HT3a剂量反应曲线。图16示出乳香油的5-HT3a剂量反 应曲线。图17示出花椒果实提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图18示出海岸松树皮提取 物的5-HT3a剂量反应曲线。图19示出苦薄荷的5-HT3a剂量反应曲线。图20示出苦橙果 实的5-HT3a剂量反应曲线。图21示出当归的5-HT3a剂量反应曲线。图22示出椰子油 的5-HT3a剂量反应曲线。图23示出中国月季的5-HT3a剂量反应曲线。图24示出桂皮 的5-HT3a剂量反应曲线。图25示出越橘的5-HT3a剂量反应曲线。图26示出蓝莓叶的 5-HT3a剂量反应曲线。图27示出胡萝卜提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图28示出洋甘 菊的5-HT3a剂量反应曲线。图29示出姜黄的5-HT3a剂量反应曲线。图30示出蔓越莓的 5-HT3a剂量反应曲线。图31示出胡麻油粉的5-HT3a剂量反应曲线。图32示出枳犋子籽 提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图33示出穿心莲的5-HT3a剂量反应曲线。图34示出蜂 花粉的5-HT3a剂量反应曲线。图35示出澳洲桉树提取物的5-HT3a剂量反应曲线。图36 示出北美圣草的5-HT3a剂量反应曲线。图37示出黑胡椒油的5-HT3a剂量反应曲线。图 38示出银杏的5-HT3a剂量反应曲线。图39示出辣椒的5-HT3a剂量反应曲线。
[0123] 并且，图40-44是示出由本文上述的植物材料或提取物的某些组合获得的协同 5-HT3a抑制作用的图。具体而言，图40示出由姜黄（T)和甘草（L)的组合获得的5-HR3a 联合抑制作用，其大于由姜黄和甘草分别获得的5-HR3a抑制作用的总和。图41示出由姜 黄⑴、甘草（L)和生姜（G)的组合获得的5-HR3a联合抑制作用，其大于由姜黄、甘草和生 姜分别获得的5-HR3a抑制作用的总和。图42示出由姜黄（T)和生姜（G)的组合获得的 5-HR3a联合抑制作用，其大于由姜黄和生姜分别获得的5-HR3a抑制作用的总和。图43示 出由姜黄（T)和大黄（R)的组合获得的5-HR3a联合抑制作用，其大于由姜黄和大黄分别获 得的5-HR3a抑制作用的总和。图44示出由甘草（L)、生姜（G)和大黄（R)的组合获得的 5-HR3a联合抑制作用，其大于由甘草、生姜和大黄分别获得的5-HR3a抑制作用的总和。
[0124] 筛诜NK-I夸体抑制剂的试验
[0125] 各种已知的高通量筛选试验也可用于确定材料对NK-I受体的抑制作用。
[0126] -种示例性试验为英杰（Invitrogen)公司的Tango? G蛋白偶联受体（GPCR)细 胞水平测定（cell-based assay)。首先，在McCoy' s培养基中培养TACRl-bla U20S细胞 (来自Invitrogen)。然后将培养的细胞在DMEM中铺入96-孔板（15125个细胞/孔，以 90 μ L/孔）。在16-24小时后，用测试材料或阳性对照拮抗剂（其为IOOnM阿瑞匹坦）处 理细胞，然后在37°C与5% CO2下孵育30-60分钟。随后，用InM SAR9 P物质激动剂处理细 胞，并在37°C与5% 0)2下再孵育5小时。从培养箱取出板，并在室温下平衡15分钟。在 平衡步骤期间，制备LiveBlazer底物检测溶液（来自Invitrogen)。将6倍的底物混合物 加入每个孔，随后在室温下于黑暗中将板孵育2小时。使用"Geneblazer 451"方法，通过2 通道易美逊（Envision)微板读板器读板，2通道包括蓝色通道（在405处激发并在460处 发射）和绿色通道（在405处激发并在535处发射）。
[0127] 图45-64示出具有高NK-I抑制作用的上文所述的植物材料和提取物的NK-I剂量 反应曲线。具体而言，图45示出鬼臼脂的NK-I剂量反应曲线。图46示出红景天的NK-I 剂量反应曲线。图47示出野甘菊的NK-I剂量反应曲线。图48示出松树皮的NK-I剂量反 应曲线。图49示出乳香的NK-I剂量反应曲线。图50示出龙血树的NK-I剂量反应曲线。 图51示出椴的NK-I剂量反应曲线。图52示出瓜拉那的NK-I剂量反应曲线。图53示出 猫爪藤的NK-I剂量反应曲线。图54示出圣约翰草的NK-I剂量反应曲线。图55示出金蓋 花（calendula)的NK-I剂量反应曲线。图56示出绿茶的NK-I剂量反应曲线。图57示出 葡萄提取物的NK-I剂量反应曲线。图58示出桂皮的NK-I剂量反应曲线。图59示出姜黄 的NK-I剂量反应曲线。图60示出连翘果实的NK-I剂量反应曲线。图61示出甘草的NK-I 剂量反应曲线。图62示出山苍子油的NK-I剂量反应曲线。图63示出茶树油的NK-I剂量 反应曲线。图64示出印度醋栗的NK-I剂量反应曲线。
[0128] 并且，图65示出由本文上述的植物材料或提取物的某些组合获得的协同NK-I抑 制作用。具体而言，图65示出由姜黄（T)和甘草（L)的组合获得的NK-I联合抑制作用，其 大于由姜黄和甘草分别获得的NK-I抑制作用的总和。
[0129] 包括任何交叉引用的或相关的专利或申请在内的本文所引用的每个文件的全部 内容通过引用并入本文，除非明确地排除在外或另有限定。任何文件的引用并不是承认其 相对于本文所公开或请求保护的任何发明而言是现有技术，或者承认其单独或与其它任何