-10。经测试的所有供体响应于 益生菌生成IL-10。6个供体用接骨木+益生菌获得的IL-10的浓度显著大于用接骨木获 得的和用益生菌获得的IL-10的浓度。此外，用接骨木益生菌组合获得的IL-10的浓度大 于通过益生菌获得的和通过接骨木获得的之和，因此，对于IL-10的生成2种活性成分具有 协同作用。
[0167] 没有一个经测试的供体通过IL_12p70的生成响应于接骨木。另一方面，所有供体 响应于益生菌生成IL-12p70。接骨木和益生菌的组合没有增加（potentialis6)IL-12p70 的生成。
[0168] 没有一个经测试的供体通过IL-15的生成响应于接骨木。类似地，没有一个经测 试的供体通过IL-15的生成响应于益生菌。2种活性成分的组合对IL-15的生成没有影响。
[0169] 没有一个经测试的供体通过IL-17A的生成响应于接骨木。对于对益生菌的响应 同样是如此：在任何供体中其不诱导IL-17A的生成。2种活性成分的组合对IL-17A的生 成没有影响。
[0170] 经测试的所有供体通过CCL2的生成响应于接骨木。6个供体中的五个响应于益生 菌，应当注意的是，无响应者具有最高的CCL2基础率，相比于接骨木益生菌触发更强的响 应。2种活性成分的组合刺激CCL2的高分泌，其显著大于接骨木但不大于益生菌。
[0171] 经测试的全部供体通过CCL3的生成响应于接骨木。6个供体中的五个响应于益生 菌，应当注意的是，无响应者具有最高的CCL3基础率，相比于接骨木益生菌触发更强的响 应。6个供体用接骨木+益生菌获得的CCL3的浓度显著大于用接骨木获得的和用益生菌获 得的CCL3的浓度。此外，用接骨木益生菌组合获得的CCL3的浓度大于通过益生菌获得的 和通过接骨木获得的之和，因此，对于CCL3的生成2种活性成分具有协同作用。
[0172] 经测试的全部供体通过CCL4的生成响应于接骨木。除了一个具有高CCL4基础率 的供体，经测试的所有供体响应于益生菌生成CCL4,相比于接骨木益生菌触发更强的响应。 6个供体用接骨木+益生菌获得的CCL4的浓度显著大于用接骨木获得的和用益生菌获得 的CCL4的浓度。此外，用接骨木益生菌组合获得的CCL4的浓度大于通过益生菌获得的和 通过接骨木获得的之和，因此，对于CCL4的生成2种活性成分具有协同作用。
[0173] 没有一个经测试的供体通过CCL5的生成响应于接骨木。6个供体中的单独一个响 应于益生菌生成CCL5。接骨木和益生菌的组合对CCL5没有作用。
[0174] 经测试的6个供体中仅2个响应于接骨木生成CCL22。经测试的全部供体响应于 益生菌生成CCL22。2种活性成分的组合对CCL22没有协同作用。
[0175] 经测试的全部供体响应于接骨木生成CXCL8。6个供体中的五个响应于益生菌，应 当注意的是，无响应者具有最高的CXCL8基础率，相比于接骨木益生菌触发更强的响应。2 种活性成分的组合引起CXCL8的协同生成。
[0176] 没有一个经测试的供体响应于接骨木生成CXCL10,反之，接骨木显著抑制CXCL10 的组成性生成（productionconstitutive)。6个供体中的五个响应于益生菌。2种活性成 分的组合显示接骨木显著抑制由益生菌诱导的生成。
[0177] 经测试的全部供体响应于接骨木生成TNFa。经测试的全部供体响应于益生菌生 成TNFa。相比于接骨木触发的，这种生成更加强烈。接骨木和益生菌的组合对TNFa的生 成没有影响。
[0178] 没有一个经测试的供体响应于接骨木生成IFNy，另一方面，经测试的全部供体响 应于益生菌生成IFNy。接骨木和益生菌的组合对IFNy的生成没有影响。
[0179] 没有一个经测试的供体响应于接骨木生成GM-CSF。另一方面，6个供体中的5个 响应于益生菌生成GM-CSF。6个供体用接骨木+益生菌获得的GM-CSF的浓度显著大于用 接骨木获得的和用益生菌获得的GM-CSF的浓度。此外，用接骨木益生菌组合获得的GM-CSF 的浓度大于通过益生菌获得的和通过接骨木获得的之和，因此，对于GM-CSF的生成2种活 性成分具有协同作用。
[0180] 刺激T细胞增殖的细胞因子IL-2、IL-5和IL-9生成的缺乏，表明所述组合应该不 会激活T淋巴细胞的克隆扩增。
[0181]IFNy和E-12p70的生成，典型的1型应答，归因于鼠李糖乳杆菌，而E-4的适度 生成，典型的2型应答，与接骨木提取物有关。通过IFNy/IL-4的比例评估应答的类型：对 于大于100的比例为1型应答，当该比例在0. 01至100之间时为0型，如果比例小于0. 01 则为2型。对于鼠李糖乳杆菌该比例为600,对于接骨木提取物其为3,对于接骨木+鼠李 糖乳杆菌组合其为119,因此其为1型。因此，益生菌诱导的强烈1型应答被由接骨木触发 的IL-4的生成充分地抵消。
[0182]通过接骨木和鼠李糖乳杆菌组合的IL-1 0、IL-6、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL22、 CXCL8、TNFa和GM-CSF的生成表明在炎症位点有细胞的募集和活化的炎症活动。鉴于所涉 及的趋化因子（CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL22、CXCL8)，优选将吸引具有先天免疫的细胞，粒 细胞和单核/巨噬细胞类型，以及淋巴细胞。这种促炎性活性将通过抗炎细胞因子IL-1RA 生成调节，IL-1RA将自身连接于与IL-1相同的膜受体，防止其向细胞发送其信号。此外， 接骨木对趋化因子CXCL10 (其吸引活化的淋巴细胞、NK细胞以及嗜酸性粒细胞）的组成性 和诱导生成的抑制作用，以同样的意义进行。因此，益生菌的促炎性活性似乎被接骨木的抗 炎作用所抵消。
[0183]总结
[0184] 在测试条件下，本发明人显示接骨木提取物和鼠李糖乳杆菌的组合在IL-1RA、 IL-6、IL-10、CCL3、CCL4、CXCL8、GM-CSF的诱导方面起到协同作用。该组合诱导IL-1 0、 IL-1RA、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12p70、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL22、CXCL8、IFN丫、TNFa 和GM-CSF的生成。这种模式表明通过在炎症位点募集单核细胞、粒细胞和淋巴细胞，接骨 木+鼠李糖乳杆菌的组合刺激免疫防御。然后，1型模式将促进细胞型应答的发展，特别地 伴有单核细胞/巨噬细胞和嗜中性粒细胞的活化，但没有淋巴组织增生作用。炎症反应将 受制（contenue)于IL-1RA和IL-10的生成，并且受制于特别地与接骨木相联系的CXCL10 生成的抑制。
【主权项】
1. 包含接骨木提取物和至少一种鼠李糖乳杆菌Lactobacillusrhamnosus菌株的组 合的组合物，其特征在于，所述接骨木提取物包含与提取物的干物质相比以重量计0. 5至 25%的花青素含量，以及与提取物的干物质相比以重量计2至10%的蛋白质含量。2. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，其包含1. 10 7至1. 10 11UFC/单位剂量的 鼠李糖乳杆菌的量。3. 根据权利要求1或2中任一项所述的组合物，其特征在于，其为食品、食品补充剂或 药物。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其特征在于，其为选自胶囊剂、吞服片 剂、咀嚼片剂、泡腾片剂、锭剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、口服溶液或混悬剂、和舌下和颊内施用 形式的剂型的食品补充剂。5. 根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其特征在于，其包含每单位剂量20mg 至200mg的接骨木干提取物，优选每单位剂量20mg至IOOmg的接骨木干提取物，以及每单 位剂量I.IO7至1. 1011UFC的鼠李糖乳杆菌，优选每单位剂量I.IO8至1. 109UFC的鼠李糖乳 杆菌。6. 根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其特征在于，其进一步包含维生素和/ 或矿物盐。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其用于刺激免疫力和/或增强免疫防 御和/或促进抗感染和/或抗炎反应和/或帮助保持活力。8. 根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其用于治疗和/或预防尤其由流感病 毒感染引起的流感样状态的症状。
【专利摘要】本发明涉及接骨木(黑接骨木)提取物和鼠李糖乳杆菌菌株的组合，旨在刺激免疫力和/或增强免疫防御和/或促进抗感染和/或抗炎免疫反应和/或帮助保持活力。
【IPC分类】A61K36/35, A61P37/04, A61P31/16, A61P31/00, A61K35/747, A61P29/00
【公开号】CN105228637
【申请号】CN201480028624
【发明人】C·J·拉泰格, C·利博
【申请人】皮埃尔法布雷医药公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2014年4月8日
【公告号】EP2983685A1, US20160082055, WO2014166960A1