包含透明质酸、毛蕊花糖苷和甘油磷酸肌醇的局部制剂的制作方法
【专利说明】包含透明质酸、毛蕊花糖苷和甘油磷酸肌醇的局部制剂
【背景技术】
[0001] 炎性过程期间，身体产生对炎性现象有修复和/或加剧作用的重要血浆和细胞衍 生的化学介质（组胺、白细胞介素等）。这些介质的释放和活性也产生氧自由基（R0S，活性 氧类）：这些高度活性的种类可以例如通过细胞膜的氧化和其生命机能的改变引起对宿主 细胞的损害；因此细胞结构损害了活化的嗜中性粒细胞和巨噬细胞，在活化的嗜中性粒细 胞和巨噬细胞的去除功能中，其还生成引起进一步损害和加剧炎性过程的氧自由基。氧自 由基可例如与疼痛辣椒素受体（vanilloidreceptorsofpain，TRVP1)相互作用，和有助 于神经源性炎性机制的活化和伤害性反应。
[0002] 因此，氧自由基的发展是炎性过程的重要部分；使用能遮蔽这种种类的物质（自 由基清除剂）一般是预防和治疗炎性病症所需的。
[0003] 大部分炎性疾病会影响皮肤和粘膜；其中，我们可引用皮炎、痤疮、牛皮癣、溃疡、 褥疮、静脉炎、痔疮、外阴痛、尿道炎等。
[0004] 具体而言，外阴痛是普通慢性外阴病症，在没有客观可见变化或特定临床可识别 神经紊乱的情况下，其特点是疼痛、灼热、刺激、发红或肿胀感，性交困难。自发的或由接触 引起的症状显著干扰了女性的生活质量。疼痛可以是持续性的或间歇性的，局部性的或弥 漫性的。问题的严重程度在轻度不适到严重致人衰弱的疼痛之间变化。外阴痛可以仅影响 阴道前庭（前庭痛，约80%的情况）、阴核区（阴核痛（clitoridynia))或外阴其他区域。 在广义形式中，紊乱影响大部分外阴区域（包括会阴和肛门区）。
[0005]被认为在外阴痛发病中更重要的三种生物因素是与肥大细胞超活化有关联的重 要外阴前庭炎性病症、肌原性类型的或对慢性外阴炎症和/或疼痛进行反应所获得的肛门 举肌的高张性、疼痛系统的过度活动。
[0006]触发原因可以是反复的细菌或病毒阴道感染（例如念珠菌、大肠杆菌、衣原体，脲 原体、乳头瘤病毒、疱疹病毒）、对环境抗原的速发型超敏性现象、自身免疫性疾病、生殖手 术影响、性交诱导的机械性微创、紧身服装、外阴药物治疗、物理因素（激光及外阴电凝固 治疗，生殖器、泌尿或肛门放疗）、化学因素（某些食物中含有的糖和酵母、尿中刺激物、侵 略性清洁剂的使用）、荷尔蒙性因素（经期，特别是月经前期的雌激素波动）、精神性欲的 (创伤，关系冲突）和神经性的因素（例如在压力条件下，诱导肥大细胞脱粒的刺激通过感 觉神经通路（way)向后传播）。
[0007]解剖病理学研究己表明在患有外阴痛的患者中，外阴和前庭组织具有T淋巴细胞 和肥大细胞的炎性细胞浸润。
[0008]肥大细胞脱粒释放引起血管扩张、发红、水肿、发热并因此引起疼痛和局部灼热的 炎性介质如缓激肽、IL-1e、INF-1a、血管活性因子、组胺、P物质。肥大细胞还释放血清素 (serotonin)(肥大细胞和神经纤维之间的一种重要神经介质），神经营养物质如NGF，其增 殖痛觉神经末梢，使痛觉过敏感觉更强烈。除了神经末梢增殖之外，在阴道痛中还发生致敏 作用，即前庭黏膜中温度感受体和伤害感受体的反应性增加。在来自患有外阴痛的女性的 组织样品中，发现可以与氧自由基相互作用的TRVP1受体增加（13)。
[0009] 为了预防外阴痛的目的，经常组合地使用不同治疗方法，范围是使用药物、饮食变 化（减少草酸盐和钙）以及服装（使用棉内衣和舒适的服装）、心理治疗、手术治疗。
[0010] 疾病的药物治疗包括使用用于局部和/或全身使用的不同类别的药物。在局 部制剂中，使用局部麻醉剂（利多卡因（lidocaine))和皮质类固醇（例如甲泼尼龙 (methylprednisolone)和倍他米松（betamethasone))的霜剂和前庭渗透物。雌激素和三 环类抗抑郁药（例如阿米替林（amitriptyline)、地昔帕明（desipramine))、抗痉挛药（如 卡巴咪嗪（carbamazepine)、加巴喷丁（gabapentin)和普瑞巴林（pregabalin))、选择性血 清素再摄取抑制剂（SSRI如西酞普兰（citalopram)和帕罗西汀（paroxetine))、去甲肾上 腺素再摄取抑制剂（SNRI如万法拉新（venflaxine)和度洛西汀（duloxetine))和用于治 疗慢性神经痛的其他疗法可以以全身形式使用。
[0011] 外阴痛发病涉及的因素的分析指出对外阴区局部施用有效降低外阴-前庭炎性 病症和神经痛的制剂对患有该疾病的患者产生极大的益处。
[0012] 尿道炎是尿道的病理急性或慢性炎性过程。尿道炎可以影响雌性以及雄性；疾病 发生率在雄性中较高。常常，炎性过程也涉及膀胱，特别是在尿道管比男性的短的女性中。 尿道炎可具有感染性或非感染性病因。后者通常是由例如由于插管、经常使用自行车或摩 托车、肾结石的存在而引起的对尿道的创伤所导致。感染形式可细分为淋菌性尿道炎和非 淋菌性尿道炎。淋菌性尿道炎（称为淋病、脓性粘液溢）是尿道炎最熟知的形式。非淋菌 性尿道炎占所有尿道炎的约三分之二。可引起非淋菌性尿道炎的微生物体相当多，但绝大 多数情况（约80%)是由沙眼衣原体和较小程度上由血浆尿素脲原体引起。非淋菌性尿道 炎可引起不孕，且在怀孕的情况下，子宫颈水平的衣原体的存在会对新生儿造成一些问题。 一般而言，非淋菌性尿道炎的特点在于比淋病轻得多的症状，同时有轻微的尿道分泌物。
[0013] 患有尿道炎的人可能经历灼热、排尿问题、卡他性或脓性分泌物。在慢性感染性尿 道炎的情况下，主要并发症是感染可能传播至最接近的结构；在男性中，可能有膀胱炎、附 睾炎、睾丸炎、肾盂肾炎和前列腺炎。另一种并发症是尿道腔变窄，导致尿流阻塞。在女性 中，可能有宫颈炎、膀胱炎、宫外孕、流产、肾盂肾炎、输卵管炎等。在雄性中，尿道炎延伸至 睾丸可能引起不育。在女性中，这也是损害生殖系统和引起不孕的原因。
[0014] 感染性尿道炎的治疗以抗生素为基础。对于非感染性尿道炎，治疗必须除去或控 制引起刺激过程的源由。
[0015] 在预防和治疗炎性疾病的不同方法中，已知使用含有具有自由基清除活性的抗炎 物质（自由基清除剂）的局部制剂（包括霜剂、凝胶剂）；然而，对于这些产品中的一些，特 别是在植物来源的大分子的情况下，常常几乎没有可再生活性，且有效性随时间降低。该事 实代表与研发天然药物的有用性完全相反的重要限制。因此，需要高度有效且随时间保持 这种高活性的基于天然物质的抗炎药物。
[0016] 多年来在泌尿生殖系统疾病治疗中活跃的申请人己对天然来源的特定物质包括 透明质酸、毛蕊花糖苷和磷酸甘油肌醇（inositolglycerophosphate)进行了广泛的研究。 [0017]透明质酸钠盐（HANa)是结缔组织的主要成分中的糖胺聚糖，其由葡萄糖醛酸和 N-乙酰葡糖胺组成的二糖的线性聚合物链组成。分子的特点在于高极性以及多亏其在含水 环境中的高溶解性，确保了组织的水化同时保护其免受张力和应力。透明质酸的粘弹性性 质向组织提供了可塑性。报道了HANa的抗炎和愈合性质（1，2)。在各种应用中，已知在间 质性膀胱炎治疗中使用HANa。
[0018] 甘油磷酸肌醇（GPI)在本文中又称为甘油-磷酸-肌醇 (glycerol-phospho-inositol)，是具有类可的松活性的细胞溶质磷脂酶-A2的抑制剂。 GPI诱导对花生四烯酸释放的抑制，并因此降低了促炎分子的产生（5)。
[0019] 毛蕊花糖苷（VB)是含在唇形目（Lamialeorder)植物种类（玄参科家族 (Scrofulariaceaefamily))如抱莖毛蕊花(Verbascumphlomoides)和Verbascum mallophorum中的天然多酸化合物咖啡酸的酯。毛蕊花糖苷也工业规模地提取自生物发酵 罐中生长的VerbenaOdorous(朽1檬马鞭草，LippiaCitriodora)和大叶醉鱼草（Buddieja davidii)的植物干细胞。毛蕊花糖苷的特点在于抗微生物活性，特别是抗金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)的活性（6)，并具有抗炎性质（7,8)。
[0020] 毛蕊花糖苷抑制iNOS(诱生型一氧化氮合酶）酶，和作为具有对活性氧类（R0S) 的自由基清除剂性质的抗氧化剂（9, 10)。对其中过表达了iNOS活性的用促炎刺激物（例 如LPS和IFN-y)刺激的人THP-1白血病细胞的毛蕊花糖苷治疗引起iNOS和超氧自由基 的表达和活性的显著降低（7)。在用TNFa或IFN-y刺激的人角质细胞的初代培养物中， 毛蕊花糖苷以剂量依赖型方式降低了炎性趋化因子如GM-GCSF、IL-8、IP-10和MCP-1。在体 内，毛蕊花糖苷示出大鼠牙周炎模型中显著的抗炎效果（8)。毛蕊花糖苷的口服给药（2mg/ kg/天，8天）显著降低了炎症的各种参数和改善了组织损害。还报道了毛蕊花糖苷在神经 痛中的镇痛活性（11)。
【发明内容】
[0021] 申请人己惊喜地注意到当与VB联合（associate)时，本身没有抗自由基活性的物 质HANa和GPI以预想不到的方式增加了其抗自由基活性，因此获得提高的抗炎症保护效 果。因此认为使用作为具有高活性的药物制剂的HANa、GPI或其盐、和VB的三元组合物能 治疗皮肤和粘膜的炎症，特别是外阴痛和阴道炎：申请人进行的临床研究中发现抗炎和镇 痛功效。优选的三元药物形式是干燥形式的那些（如喷粉剂），或可以在使用前通过向剩余 组分中加入干毛蕊花糖苷而制备的液体或半固体形式的那些（霜剂、凝胶剂）。
【附图说明】
[0022] 图1 :用于保持彼此分开的两种半固体形式的同时传递的单剂量双室容器的实 例。
[0023] 图2:用于保持彼此分开的两种制剂的同时传递的多剂量双室容器的实例。
[0024] 图3:用于粘膜粘着性溶液的分配器（dispenser)的实例。1 :VB粉末；2:储库 (reservoir) ;3 箱（tank) ;4:螺口封闭；5:环形螺母口封闭；6:分配器；7 :HA和GPI的 溶液