。
[0025] 发明详述
[0026]本发明基于HANa、GPI和VB的三元联合物（association)，可选地在药学上可接 受的赋形剂的存在下含有所述三元联合物的药物组合物和试剂盒，其制备方法及其在治疗 中的用途。
[0027] 具体而言，提出该联合物用在皮肤和/或粘膜的炎性病症，特别是外阴痛和其他 外阴炎性病症（例如前庭炎），以及雄性或雌性尿道炎，特别是外伤来源的那些尿道炎的预 防或治疗中。本发明还包括对影响粘膜和皮肤的其他炎性病症，如皮炎、痤疮、牛皮癣、溃 疡、褥疮、静脉炎、痔疮等的治疗。
[0028] 本发明中使用的透明质酸钠盐（HANa)的平均分子量的值可以广泛地变化。平均 分子量的优选范围为10和l〇〇〇kDa之间，更优选为10和500kDa之间，以及最优为20和 250kDa之间。
[0029] 毛蕊花糖苷的所有可用形式均可用。例如，其可以纯的形式或以由工业规模生长 的含有其的植物如抱莖毛蕊花（PhlomoidesVerbascum)、Verbascummallophorum、梓樣马 鞭草（LippiaCitriodora)、大叶醉鱼草（Buddlejadavidii)等或从相同植物的植物干细 胞获得的植物提取物的形式来使用。也可使用与适合的载体如麦芽糊精混合的毛蕊花糖苷 组合物。优选的商业产品是Dermasyr50和10。
[0030]GPI可以像这样以盐例如胆碱盐的形式使用；其可以以固体形式使用或用作以重 量计例如5%和20%之间的浓度的溶液。
[0031] 上面提到的三种活性成分可以按可变的比例使用。通过非限制性实施例，以HANa、 VB和GPI的总量为100%计（指在纯状态中，即排除了可能的液体或固体载体的重量），其 按以下百分比范围存在：20-50%HANa、40-60GPI、l-10%VB。
[0032] 根据所制造的特定药物形式以及所需用途，制剂也可含有常规赋形剂。其中，我们 可提及如药物领域中目前可用的缓冲剂、防腐剂、胶凝剂、用于霜剂的基质、乳化剂等。
[0033] 本发明考虑的药物形式是所有适用于局部施用药物的那些形式、或液体、半固体 或固体形式。其中，液体形式是溶液、乳液、胶体和悬浮液；其中，半固体形式是霜剂、软膏 剂、凝胶剂；其中，固体形式是冻干产物和喷粉剂（aspersionpowder)。
[0034] 申请人己另外观察到当在没有水的存在下储存时，毛蕊花糖苷储存时是特别稳定 的。因此，在一个更优选的实施方案中，本发明的三元联合物被配制为干燥形式或具有液体 或半固体无水成分。如果最终制剂需要一种或多种含水成分，优选地将毛蕊花糖苷分开包 装在没有水的条件中（或在干燥状态中或具有半固体/液体无水成分）和以该形式储存； 一种优选的半固体形式的代表为甘油，或具有甘油基（glycerinbase)的胶凝半固体和非 水化形式；使用时，毛蕊花糖苷与含水组分联用，获得最终含水制剂，随时可用于给药。通过 一般已知的手段例如双室袋、双连双室分配器（twin-bagdoublechamberdispenser)等 可实现上述成分的分开包装。
[0035] 因此本发明包括固体组合物，该固体组合物包含优选在没有水的存在下互相物理 混合的本发明的三种活性成分。其还包括含水组合物，该含水组合物包含在使用前要混合 在一起的两种分离的预制剂，其中两种制剂各由毛蕊花糖苷制剂和成分制剂水溶液组成。 所有临时制剂可以以多组分试剂盒的形式方便地供给使用者；这种试剂盒可包括有利于在 使用时进行制剂混合的装置和关于如何使用其的说明书。临时混合可以由使用者手动的进 行，或可以机械地发生。
[0036] 实施例中详述的用于本发明的目的的特别优选的形式如下：
[0037] 1)可复配（重构）的冻干形式
[0038] 2)双组分半固体形式
[0039] 3)粘膜粘着性溶液
[0040] 4)喷粉剂
[0041] 实施方案2)的双组分组合物指的是VB和含水组分之间的上述分开。实施方案3) 的粘膜粘着性通过HANa和任何其他粘膜粘着性赋形剂的存在来保证。实施方案4)的喷粉 剂特征通过本身已知的技术获得，包括粉剂的足够微粉化，提高平滑性的适合赋形剂的使 用，抗小血板物质，适合的喷粉装置的使用等。
[0042] 本发明的所有组合物可以是单剂量的或多剂量的。其可以用适合的分配装置如注 射器、栗、导管、常规的和倒置的喷雾分配器等来提供。
[0043] 优选的组合物是单剂量双组分半固体形式，其中优选被配制为甘油凝胶的毛蕊花 糖苷与含有透明质酸钠盐和甘油-磷酸-肌醇的含水霜剂分开包装，使用时可复配。
[0044] 进一步优选的组合物是一种形式，其中通过使用单剂量双室袋来确保优选被配制 为甘油凝胶的毛蕊花糖苷和霜剂的物理分离。使用时，同时从容器的各室分配毛蕊花糖苷 和霜剂，并手动使其均匀。然后将pH范围为3至7的所得半固体混合物施用在受影响部位。
[0045] 进一步优选的组合物是多剂量双组分半固体形式，其中优选被配制为甘油凝胶的 毛蕊花糖苷与含有透明质酸钠盐和甘油-磷酸-肌醇的含水霜剂分开包装，使用时可复配。 可以通过使用多剂量双室分配器确保毛蕊花糖苷和霜剂的物理分离。使用时，同时从容器 的各室分配毛蕊花糖苷和霜剂，并手动使其均匀。然后将pH范围为3至7的所得半固体混 合物施用在受影响部位。
[0046] 进一步优选的组合物是多剂量粘膜粘着性溶液。其可装在设有盖-贮箱的塑料或 玻璃瓶中，所述盖-贮箱装有固体形式的毛蕊花糖苷。这确保了不相容组分的物理分离，直 到使用。通过在盖上施加轻微压力允许破坏隔板和允许毛蕊花糖苷粉落入透明质酸钠盐和 甘油-磷酸-肌醇的溶液中将组合物复配。之后的短暂混合使粉末快速溶解，生成随时可 用的pH范围为3至5的溶液。在有或没有插管的情况下，溶液可以通过栗装置（半固体分 配器或常规的或颠倒的喷雾器）分配用于制剂的现场（on-site)使用。
[0047] 进一步优选的组合物是通过透明质酸钠盐、毛蕊花糖苷和甘油-磷酸-肌醇的粉 末的直接混合或通过研磨/微粉化对应冻干产物而获得的粉剂形式的制剂，通过适合的装 置可分配。
[0048] 本发明扩展至上述组合物或试剂盒的制备方法，其特点在于如上所述的，根据所 需最终制剂，一起或分开地使用被配制为固体、半固体或液体形式的上述三种活性成分。
[0049] 以下实验部分以非限制性的方式示出结合本发明的组合获得的生物和临床结果， 以及有利于进行所提出治疗的药物组合物的制备。
[0050]基于HANa、VB和GPI的制剂的自由基清除活件
[0051] 用体外试验获得所制备制剂的主要成分VB、HANa、GPI的自由基清除活性的证据。
[0052] 通过用2, 2-二苯基-1-苦味酰基苯肼（DPPH)的分光光度法测试分析单独使用和 与HANa和GPI联用的VB的抗自由基活性。根据制剂中提供的比例制备样品。表1和2中 示出正讨论的化合物的活性：
[0053]表1 [00^41
[0058] 单独使用时VB的自由基清除活性很清楚。单独使用时HANa和GPI基本示出没 有活性。然而，与VB联用时，这些组分提高了VB的自由基清除效果。应注意到，氧自由基 (R0S，活性氧类）可与疼痛辣椒素受体（TRVP1)相互作用，和有助于神经源性炎性机制的活 化和伤害性反应（12)。来自患有外阴痛的女性的组织样品中观察到TRVP1受体增加（13)。 因此，VB、HANa和GPI的原位（insitu)共存为导致患有外阴痛的患者中发生的神经病变 和疼痛降低的协同作用创造了条件。获得的稳定制剂己确定了患有外阴痛的患者的初步研 究中的制剂的镇痛活性。
[0059] 用于外阴痛治疗的初步临床研究
[0060] 在患有急性外阴痛和性交困难，有皮肤感觉迟钝，有灼热感和阴道周围-内部和 生殖器瘙痒的10例患者中进行功效和容忍度的初步临床研究。己报道用下面描述的实施 例9中示出的制剂一天治疗3次的受试者在5-7天内症状缓解。治疗的受试者经历即刻局 部减感作用，疼痛、灼热、发干和瘙痒感消失。各患者报道立即良好的舒适、水化和润滑感。 舒适感，最初为4-5小时，然后延长至12小时。一周后，所有患者给药减少到2次，早上和 晚上，然后逐渐停止治疗。
[0061] 局部观察到发红和裂纹消失。裂纹，若有的话，在10天内消失，同时正常组织恢 复，即本发明组合物目标的三种特征组分的联合物愈合作用的证据。
[0062] 可复配冻干形式的制备
[0063] 在该制备中，三种组分VB、HANa和GPI结合为单一固相。在适合的瓶子中将含VB、 HANa、GPI、赋形剂和防腐剂的新鲜溶液冻干，过程结束时密封。用净化的或较高级别的水复 配（或复水，reconstitution)后，除去环形螺母和盖，将分配器栗引入瓶中，以及制剂是随 时可用的。可以使用I型白玻璃瓶，在黑玻璃中或使用由透明塑料（C0C-环烯烃共聚物型） 制成的现代瓶（modernbottle)包装产物。通过将瓶子和可由压力（或可能旋转）施用的 标准水平锥型喷雾器栗联接制备最终包装；为了更方便施用的目的，可使用具有"颠倒"技 术以及可调节的栗，具有通常可转动套管允许甚至用颠倒分配器分配产物；然而，栗的分配 能力可以是例如根据剂量选择的100yL/喷。
[0064] 实施例1-3以非限制性的方式描述了这种制剂的制备方法。
[0065] 实施例1
[0066] 冻干形式由以下物质制得：HANa平均分子量（Mff)50_250kDa(0. 21% )、10%的GPI 胆碱盐的水溶液（2. 5% )、Dermasyr50(VB:麦芽糊精，1:1) (0. 1% )、对羟基苯甲酸甲酯 (Nipagin) (0? 2% )、对羟基苯甲酸丙酯（Nipasol) (0? 02% )、二水合磷酸二氢钠（0? 78% )、 磷酸（0. 093% )、抗坏血酸（0. 10% )、水（根据100%的需要）。
[0067] 为此，将479. 985g水倒入玻璃烧杯中。于室温下，按顺序并在速度为400RPM