包含接骨木提取物和鼠李糖乳杆菌菌株的组合的组合物的制作方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及包含接骨木提取物和至少一种鼠李糖乳杆菌（Lactobaci1lus rhamosus)菌株的组合的组合物，旨在刺激免疫力和/或促进抗感染和/或抗炎反应。
【背景技术】
[0002] 接骨木或黑接骨木（SambucusnigraL.)属于五福花科（Adoxaceae)。接骨木 属（Sambucus)包含分布在世界温带地区的25个种。黑接骨木（S.nigrassp.nigra)广 泛生长于欧洲（特别是丹麦、意大利和奥地利）、非洲北部地区和亚洲西部。加拿大接骨木 (S.nigrassp.Canadensis)尽管是在加拿大进行的选择（selection)，但其源自北美洲东 北部，并生长于俄勒冈州、宾夕法尼亚州和堪萨斯州。
[0003] 接骨木的不同器官：树皮、根、茎、花、叶和果实传统地用于各种领域，如医药、食品 工业以及工具和玩具的制造。目前最重要的工业产品涉及接骨木浆果提取物的产品，其用 于营养食品市场和染料工业。
[0004] 一些出版物报导了接骨木浆果提取物对细胞因子生成的作用（Barak等 人，EuropeanCytokinenetwork,Vol12 (2)，290-296, 2001)。所述作用已被接骨木提取物 对与由流感病毒（A和/或B和/或C)引起的流感感染相联系的症状的减轻所特别地证明， 以及被接骨木提取物对1型单纯疱疹病毒、呼吸道合胞病毒和流感病毒的抗病毒作用所特 别地证明（Zakay-Rones等人，TheJournalofInternationalMedicalResearch,vol 32, 132-140, 2004)。
[0005] 大量的科学研究已经证明存在于发酵食品，特别是乳制品中的一些微生物对健康 的有益作用。通常将这些微生物称为"益生菌"。根据目前普遍接受的定义，益生菌为：活 的微生物，当适量食用它们时，其对宿主的健康具有有益作用（针对食物中，包括含有活乳 酸菌的奶粉中的益生菌的健康和营养特性的评估的世界卫生组织报告，科尔多瓦，阿根廷， 2001年十月1-4日）。
[0006]在专利申请W096/20607、EP0794707、EP1283714 和FR292912657 中已经显示，特别 地通过重新平衡肠道菌群，提高对感染的抵抗力，以及调节免疫应答，食用含有益生菌的食 品能够对健康产生有利的作用。
[0007] 用于人类饮食中的益生菌微生物通常是乳酸杆菌，主要属于乳酸杆菌 属（Lactobacillus)和双歧杆菌属（Bifidobacterium)，特别是副干酪乳杆菌 (Lactobacillusparacasei)种。
[0008] 乳酸杆菌属是革兰氏阳性菌的属，不运动，有多变的形状和尺寸，任选地厌氧。由 于其大部分成员将乳糖和其他简单糖转化为乳酸而得名。在人类中，乳酸杆菌作为共生者 是非常普遍的宿主，通常是有益的，或甚至是必要的。它们构成肠道菌群的重要组成元素。
[0009] 鼠李糖乳杆菌是一种最初被视为干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei)的亚种的细 菌，但是遗传研究已经证明其是一个单独的种。通常，在胃和消化道中发现鼠李糖乳杆菌。 这种细菌具有对肠道有益的特性，但也具有对免疫系统，特别是在打击肠道和泌尿道的病 原体中有益的特性。
[0010]益生菌可以对食糜、菌群产生直接的作用，称为内腔作用（d'effetsluminaux)， 或者在肠细胞或Galt免疫活性细胞的水平，则称为表皮作用（d'effetspari6taux)。它们 也可以具有与生态系统或局部免疫系统的修饰相联系的间接的作用。
[0011] -些益生菌具有粘附于消化道上皮的能力。这种特性可以构成生态优势，有助于 与肠上皮细胞和局部免疫系统的密切相互联系的机会。研究表明，鼠李糖乳杆菌的粘附菌 株可以长时间地定殖在一些受试者的空肠和/或直肠黏膜上（Alander等人，Lettersin AppliedMicrobiology, 24(5),vol361-364, 1997)〇
[0012] 越来越多的工作证明多菌株的生物学作用，重要的是要注意这些作用似乎是菌株 依赖的。
[0013] 专利申请US2006/0233895描述了包含接骨木提取物的组合物，所述提取物 可能与益生菌例如干酪乳杆菌组合。然而，这种组合物必须包含绒毛钩藤（Uncaria Tomentosa)、保德科（Paud'Arco)、黄零（Scrutellariabaicalensis)和青蒿素的混合物。 此外，这种组合物并非旨在刺激免疫力，而是用于治疗莱姆病，所述莱姆病是由细菌感染引 起的，因此其与流感型病毒引起的感染是非常不同的。
[0014] 专利申请W02010/043696公开了包含黑接骨木提取物和副干酪乳杆菌、干酪 乳杆菌、保加利亚乳杆菌（Lactobacillusbulgaricus)或嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus)的菌株的组合的组合物，旨在刺激免疫力。在该申请中，IL-10和干扰素-伽 马的生成证明了接骨木和副干酪乳杆菌之间的协同作用。然而，炎症反应的限制是未知的。 其他细胞因子和CXCL10类型的趋化因子的数据将消除在这种炎症反应中过于重要的增加 的风险。
【发明内容】
[0015] 因此，本发明涉及包含接骨木提取物和至少一种鼠李糖乳杆菌菌株的组合。
[0016] 有利地，这样的组合是协同组合。
[0017] 本发明还涉及包含这样的组合的组合物，并且有利地涉及包含接骨木提取物和至 少一种鼠李糖乳杆菌菌株的组合物。
[0018] 本发明还涉及包含接骨木提取物和至少一种鼠李糖乳杆菌菌株以及维生素和/ 或矿物盐的组合物。
[0019] 在一个特别的实施方案中，根据本发明的组合物可以通过包括以下步骤的方法制 备：
[0020] _组合的制备；
[0021] -将组合加入至根据本发明的组合物中。
[0022] 在这种情况下，因此，在将组合加入至组合物之前制备组合。然而，也可以通过以 单独的方式将组合的每个组分加入至组合物制备根据本发明的组合物，也就是说不事先制 备组合。
[0023] 优选地，根据本发明的组合物旨在用于通过口服途径施用。
[0024] 有利地，根据本发明的组合物为食品、食品补充剂、药物或0TC(非处方）产品。
[0025] 有利地，根据本发明的接骨木提取物是从接骨木浆果和/或花中获得的，优选从 接骨木浆果中获得。以有利的方式，根据本发明的接骨木提取物是水溶性提取物。
[0026] 在本发明的范围内使用的接骨木提取物一方面可以以其花青素含量为特征，另一 方面可以以大分子例如蛋白质（特别是凝集素）为特征。花青素是叶、花瓣和果实的天然 色素，位于细胞的液泡中，可溶于水，在可见光谱中为橙红色至紫蓝色。
[0027] 有利地，所述接骨木提取物包含花青素，以有利的方式包含花葵素 (pelargonidines)和矢车菊素（cyanidines)家族，与提取物的干物质相比，其具有以重量 计约0. 5 %至约25 %，以有利的方式约3 %至约25 %，以更加有利的方式约8 %至约16 %的 量。优选地，与提取物的干物质相比，花青素含量等于以重量计约12%。根据Wu等人描述 的HPLC方法（J.Agric.FoodChem. 52 (26)，7846-7856, 2004)，这些含量以矢车菊素-3-葡 萄糖苷表示。
[0028] 有利地，接骨木提取物包含以重量计2至10%的量的蛋白质，以相比于干物质 表不（NX6. 25 根据Kjeldahl方法：Prot6inesv6g6tales,Coord.B.Godon,Collection Sciencesettechniquesagro-alimentaires，TechniqueetDocumentation Lavoisier,Paris, 1985)〇
[0029] 在本发明的范围内，所述接骨木提取物是市售可得的，或者可以通过包括以下步 骤的方法获得：
[0030] 新鲜的或冷冻的接骨木浆果可以经历挤压以在过滤后获得果汁。其可以经历酶水 解步骤（果胶酶或果胶甲酯酶和聚半乳糖醛酸酶的混合物）以在过滤前使其澄清（Girard 和Fukumoto,Crit.Rev.FoodSci.Nutr. 40 (2)，91-157, 2000)。也可以对干燥且磨碎的衆果 进行水性提取，然后通过过滤进行固/液分离。由此获得的提取物可以原样使用或浓缩、或 干燥为粉末的形式使用。
[0031] 在这个阶段，与提取物的干物质相比，花青素含量为以重量计0.5%至3%，有利 地等于约1 % (HPLC测定，以矢车菊素-3-葡萄糖苷表示）。
[0032] 所述接骨木提取物可以富集特别是花青素和/或高分子量分子（蛋白质、多酚、多 糖）。为