一种环二肽在制备治疗皮肤创伤的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明所属生物医药领域，特别涉及一种环二肽的应用。
【背景技术】
[0002] 皮肤创伤是人们在日常生产生活中的常见疾病，如不及时处理会导致感染，化 脓，留疤，甚至导致全身的脓毒症，危及生命。
[0003] 烧烫伤是战时及日常生活中常见的机体损伤。随着现代工农业生产技术的发展， 化学和电子烧伤亦呈增多的趋势。在森林火灾、易燃易爆物燃烧爆炸、公共场所失火等灾害 中很大的可能会造成大量的人员烧烫伤。
[0004] 深度烧烫伤局部组织的病理变化，按局部损伤程度的不同层次，将其划分为类似 同心园状的三个区带，即：1.中心为凝固坏死带；2.周围为毛细血管淤滞带；3.外围为充 血带。其中坏死带代表该处组织坏死，淤滞带和充血带的损伤组织主要改变的是毛细血管 通透性的增加和扩张，血流缓慢容易发生微血管栓塞，使局部组织缺氧并造成对全身的影 响。因此，要对烧烫伤进行治疗，首先需要阻止和改善淤滞带和充血带的病理生理变化及其 对全身的影响，使其尽快的恢复并达到生理的修复状态，而不是向更深或更坏的病理变化 发展。
[0005] 临床上常用的治疗烧烫伤的药物以中药的种类最多，西药其次。中药处方是以中 药材为原料，经过一定的工艺步骤制得的，但中药材中除了有效成分外还有其他的成分，这 些成分对受损伤的皮肤组织的作用不明，存在潜在的风险，而使用中药外用制剂对烧烫伤 的伤口进行处理后，大量的色素沉积，使得创面愈合后疤痕更为明显，影响美观。西药主要 以消炎和对症治疗为主，在治疗过程中副作用较大，如磺胺嘧啶银抗菌作用对控制创面感 染虽有显著效果，但对细胞的活性有一定的损害作用，对坏死组织的穿透性差。
【发明内容】
[0006] 针对上述中药与西药被用于治疗烧烫伤患者的过程中会出现的问题，发明人想到 利用生物学中的小分子物质能够直接穿透细胞膜这一特征，然后将其直接作用在创面上， 小分子物质就能够很快的进入到受损伤的组织细胞中，从而激活受伤细胞的自我修复能 力，从根本上来对创面进行治疗修复，这样就避免了外用药物对烧烫伤患者的不良反应的 出现。经过长期的实验研究，发明人也终于找到了具有对创面修复愈合能力的小分子物 质，该小分子物质属于环肽中的环二肽，分子结构简单。
[0007] 本发明提供了一种小分子物质在制备皮肤外伤的药物中应用，特别是一种环二 肽在烧烫伤中的应用。
[0008] 本发明所述的环二肽是环-L-脯-L-丙二肽，相对分子质量为168. 23,具体的分子 结构如下：
[0009] 本发明所述的环-L-脯-L-丙二肽可以由化学合成制得，也可从生物体中提取纯 化得到。
[0010] 所述的环-L-脯-L-丙二肽的化学合成的制备方法，其特征在于合成步骤包括缩 合、脱保护、环化三个阶段，具体技术方案如下：
[0011] 1.中和缩合：取进行Boc氨基保护的L-脯氨酸与丙氨酸甲酯盐酸盐在含有 THF(四氢呋喃）、吡啶、（Boc)20、DMAP (催化剂）的条件下进行中和缩合反应得到N-叔丁 氧羰基-脯氨酰丙氨酸甲酯；
[0012] 2.脱保护：在EtoAc (乙酸乙酯）和HC1的饱和溶液的作用下对步骤1中得到的 N-叔丁氧羰基-脯氨酰丙氨酸甲酯进行氨基脱保护处理，得到脯氨酰丙氨酸甲酯；
[0013] 3.环化：将步骤2中得到的脯氨酰丙氨酸甲酯与甲醇混合，用NaHC03调节pH后， 加热回流18小时，过滤，柱层析纯化，得到白色的环-L-脯-L-丙二肽。
[0014] 合成路线如下：
[0016] 本发明所述的环-L-脯-L-丙二肽分子量小，结构简单，人工合成简单，对烧烫伤 的治疗效果显著，在治疗过程中能很快透过损伤皮肤组织进入细胞，修复受损细胞，激活自 我修复能力，使得创面愈合速度加快，愈合复发率低，疤痕浅，并且避免了在使用中药和西 药治疗后的潜在副作用。
[0017] 本发明所述的环-L-脯-L-丙二肽可以直接作为外用药物直接涂抹在经过处理的 烧烫伤伤口上，有靶向性的对症治疗，副作用小，疗效显著；也可作为内服制剂，服用后可以 提高机体免疫功能，增强对抗外界细菌病毒感染的能力。
【具体实施方式】
[0018] 以下是结合具体试验对本发明的说明，并不是对本发明保护范围的限制。
[0019] 实施例1本发明中所述的环-L-脯-L-丙二肽的制备方法
[0020] 主要药品试剂：L_丙氨酸、经Boc氨基保护的脯氨酸
[0021] 制备环-L-脯-L-丙二肽的过程：
[0022] (1)丙氨酸甲酯盐酸盐的制备：向适量甲醇与二氯亚砜的混合液中加入L-丙氨酸 l〇g，在室温下搅拌24h。TLC跟踪反应完成，减压旋干溶剂，得到白色的丙氨酸甲酯盐酸盐 14. 78g。
[0023] (2)中和缩合反应：向100ml无水四氢呋喃中加入步骤（1)中得到的丙氨酸甲酯 盐酸盐、经Boc氨基保护的脯氨酸20g、吡啶20ml、DMAP，待全部混合后，在氩气的保护下 加入溶于无水四氢呋喃的（Boc)20,室温下搅拌10小时。TLC跟踪反应完成，柱层析纯化 (石油醚：乙酸乙酯=4:1)，旋干溶剂得到黄色的N-叔丁氧羰基-脯氨酰丙氨酸甲酯固体 28.32g〇
[0024] (3)Boc保护氨基脱保护处理：取步骤（2)中得到的N-叔丁氧羰基-脯氨酰丙氨 酸甲酯，加入乙酸乙酯盐酸（HCl/EtOAc)的饱和溶液2. 6L，冰水浴下搅拌2h，冰水浴中减压 蒸掉溶剂，以甲醇-乙醚重结晶得白色的脯氨酰丙氨酸甲酯固体22. 31g。
[0025] (4)环-L-脯-L-丙二肽的制备：将步骤（3)中得到的脯氨酰丙氨酸甲酯加入到 0. 9L甲醇中，用NaHC03调节pH为7-8,加热回流18h，过滤，柱层析纯化（乙酸乙酯：甲醇 =2:1)，最后得到白色固体环-L-脑-L-丙二肤16. 45g。
[0026] 实施例2环-L-脯-L-丙二肽在烧烫伤中的应用
[0027] 本实施例的目的在于对本发明中所述的环-L-脯-L-丙二肽在制备治疗烧烫伤药 物中的应用，以小鼠实验性烧烫伤的结果做进一步的说明。
[0028] 1、实验材料
[0029] 1. 1样品：按实施例1制得样品：环-L-脯-L-丙二肽
[0030] 1. 2实验动物：18_22g健康昆明种小鼠，180只
[0031] 1. 3实验试剂：10%硫化钠溶液、乙醚、湿润烧伤膏（汕头市美宝制药有限公司）
[0032] 2、对环-L-脯-L-丙二肽治疗小鼠烧烫伤功能效果的评价方法
[0033] 2. 1对小鼠实验性烫伤的影响
[0034] 健康昆明种小鼠30只，随机分为3组，每组10只，实验前24h用10 %硫化钠脱毛剂 脱去小鼠背部的毛，乙醚麻醉后，用熔化至150°C的石蜡液0. 5mL滴至脱毛部位，造成ΙΙΓ 烫伤，然后按表1分组并在烫伤部位涂抹给药，3个分组给药方法都为早晚给药2次，观察烫 伤部位愈合时间，烫伤部位用数码相机拍照，用IPP5. 1图像分析软件包测量各组小鼠背部 烫伤面积。用所测结果进行统计学分析，结果见表1。
[0035] 由表1可以看出，环-L-脯-L-丙二肽剂量组可明显缩短烫伤后的创面愈合时间， 同时亦能使烫伤创面面积明显缩小，与生理盐水组比较差异具有统计学意义（P < 〇. 05, P < 0. 01)，在涂药后期的治疗过程中，环-L-脯-L-丙二肽在对小鼠烫伤的修复效果明显高 于湿润烧伤膏组。重复实验3次，每次实验结果趋势同表1中结果趋势相同。
[0036] 表1环-L-脯-L-丙二肽对小鼠实验性烫伤的影响结果U 土S)
[0038] 注#表示与生理盐水组比较，ρ〈0·05
[0039] 2. 2对小鼠实验性烧伤的影响
[0040] 健康昆明种小鼠30只，随机分为3组，每组10只，于实验前24h用10%硫化钠脱 毛剂脱去小鼠背部的毛，乙醚麻醉后，用石棉纸板一小块，中间挖空3cm32cm，置于小鼠背 上，用吸管取0.