一种延胡索块茎提取物及其医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明设及中药领域，具体设及一种延胡索块茎提取物、含有该提取物的药物制 剂及医药用途。
【背景技术】
[0002] 延胡索为磐粟科植物延胡索Co巧dalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎，是一味 古老的止痛良药，又称玄胡、元胡，为著名的浙八味之一，主产浙江省东阳、磐安一带。延胡 索具有显著的镇痛、镇静和催眠作用，对冠屯、病、屯、律失常、胃溃瘍等多种疾病有较好的临 床效果。正因为延胡索效果显著，临床应用广泛，在《中国药典》2010年版中，接近30%的复 方制剂中使用了延胡索。
[0003] 延胡索主要成分为生物碱，主要为叔胺、季胺类生物碱。叔胺类生物碱在原药材中 的量约为0.65%，季锭类生物碱(如延胡索甲素、乙素)约为0.3%。到目前为止，从延胡索中 分离得到的生物碱类成分约有30种。从延胡索的块茎中共提出生物碱10余种，其中经鉴定 的有紫堇碱（〔0巧(1曰1；[]16)、(11-四氨掌叶防己碱（(11-161：抑117(11'〇9曰11]1曰1：；[]16)、原阿片碱 (Protopine) a-四氨黄连碱、dl-四氨黄连碱a-四氨非洲防己碱、紫堇鱗茎碱 (Corybu化ine)、0-高白屈菜碱（0-Homoche-lidonine)、黄连碱（Coptisine)、去氨紫堇碱 (De-hy化OCOirdaline)，还有紫堇达明碱（Corydalmine即紫堇鱗茎碱）、去氨紫堇达明碱 等。除生物碱外，延胡索中尚含有大量淀粉，少量黏液质、树脂、挥发油，另含无机微量元素。 还含有多糖、径链霉素(reticulin)、豆酱醇、谷酱醇、油酸、亚油酸、亚麻酸、延胡索酸、10-二十九碳醇等。延胡索中的生物碱具有很强的镇痛、镇静、降压和抗屯、律失常作用。目前，很 多新的研究表明，延胡索还具有其他广泛的生理活性，如抗屯、肌缺血、抗实验性胃溃瘍、抗 肿瘤、抗氧化、保肝等。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种延胡索提取物，该提取物的制备方法和液相分析方 法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗胶质瘤的药物的用途。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0006] -种延胡索块茎提取物，该提取物由W下方法制备：
[0007] (a)将干燥的延胡索块茎粉碎；（b)用75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无 醇味得到浓缩液；（C)对步骤(b)浓缩液依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分 别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（d)正下醇萃取物用大孔树脂富 集，先用25 %乙醇冲洗8个柱体积除去多糖，再用60 %乙醇洗脱10个柱体积，收集60 %乙醇 洗
[000引脱液，减压浓缩，喷雾干燥。
[0009] 进一步地，步骤(d)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0010] 为了能够通过建立HPlX指纹图谱的方法控制不同产地、批次药材制备的延胡索提 取物批间差异，所述提取物的液相分析方法为：
[0011]色谱柱:Agilent ZORBAX SB C18柱(4.6mmX250mm，5皿）；
[001 ^ 流动化A为乙腊，B为0.1 %憐酸水溶液；
[0013] 梯度洗脱程序:0.01 ~15min，A 25%~35%;15~25min，A 35%~50%;
[0014] 25~32min，A 50%;32~35min，A 50%~25%;35~40min，A 25%
[0015] 流动相流速:1 .OmL ? min-i;
[0016] 检测波长:255nm;
[0017] 柱溫：30。。
[001引进样量：10化。
[0019] 药物制剂，含有治疗有效量的所述延胡索块茎提取物和药学上可接受的载体。
[0020] 所述的延胡索块茎提取物在制备保护肝脏的药物中的应用。
[0021] 所述的药物制剂在制备保护肝脏的药物中的应用。
[0022] 本发明提取物用作药物时，可W直接使用，或者W药物制剂的形式使用。
[0023] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明延胡索块茎提取物，其余为药物学上可接 受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0024] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂W单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0025] 本发明的优点：本发明通过对延胡索药材进行提取、除杂、富集处理，能得到促进 胶质瘤细胞调亡的提取物;本发明提供的液相分析方法可W用于建立该提取物的指纹图 谱，用于控制不同产地、批次药材制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0026] 图1为延胡索提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[00%]实施例1:延胡索块茎提取物制备
[0029] 将8kg干燥的延胡索块茎粉碎，用75 %乙醇热回流提取(2化X 3次），合并提取液， 浓缩至无醇味得到浓缩液(6L);对浓缩液依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和 水饱和的正下醇(化X3次)萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物 285g，正下醇萃取物用化蒸馈水溶解后用AB-8大孔树脂（2kg，柱体积1.化)富集，先用25 % 乙醇冲洗8个柱体积（1化），再用60%乙醇洗脱10个柱体积（1化），收集60%洗脱液，减压浓 缩，喷雾干燥得延胡索块茎提取物浸膏粉155g。
[0030] 实施例2:液相色谱分析
[0031] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物浸膏粉5mg至50mL栋色容量瓶中， 加30mL 25%乙腊水溶液超声溶解，冷却至室溫后，继续加25%乙腊水溶液定容。
[0032] 分析方法：
[0033] 高效液相色谱仪:Agilent 1100,二元累；
[0034] 色谱柱:Agilent ZORBAX SB C18柱(4.6mmX250mm，5皿）；
[0035] 流动相:A为乙腊，B为0.1 %憐酸水溶液；
[0036] 梯度洗脱程序:0.01 ~15min，A 25%~35%;15~25min，A 35%~50%;
[0037] 25~32min，A 50%;32~35min，A 50%~25%;35~40min，A 25%
[003引流动相流速：1. OmL ? min-i;
[0039] 检测波长:255nm;
[0040] 柱溫:30°C;
[0041 ] 进样量：10化。
[0042] 对用10批不同产地、批次延胡索制备的提取物进行分析，建立指纹图谱进行匹配， 结果1~11号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定11个峰为共有指纹峰，据此建立该提 取物的HPlX指纹图谱，结果见图1。
[0043] 实施例3:延胡索块茎提取物药理试验
[0044] 一、实验材料
[0045] U251胶质瘤细胞株;延胡索块茎提取物按实施例1方法制备，使用时用DMSO稀释成 所需浓度。人脑胶质瘤细胞株U251购自武汉博±德生物工程有限公司。DMBl高糖培养液、标 准胎牛血清(Fea化1 Bovine SerumJBS)、膜蛋白酶溶液(T巧psin)和细胞增殖及细胞毒性 检测试剂盒(Cel 1 Counting Kit-8,CCK-8)购自武汉博±德生物工程有限公司。细胞调亡 与坏死检测试剂盒(含化echst 33342染色液、舰化丙晚PI染色液、细胞染色