维持尺寸和生物学活性的冷冻干燥的聚电解质复合物的制作方法
【专利说明】
[0001] 相关申请的参考
[0002] 本申请要求要求于2013年6月10日提交的美国临时专利申请号61/833,010的权益 和优先权，其内容W其全部内容通过引用结合于此。
技术领域
[0003] 本发明设及在溶液中具有提高稳定性并对长期存储中的物理或化学降解具有改 善的抗性的聚电解质复合组合物;用于获得运种聚电解质复合组合物的方法W及运些聚电 解质复合组合物用于递送核酸的用途。
【背景技术】
[0004] 近年来已经付诸了大量努力W开发用于递送治疗药物的纳米颗粒组合物，治疗药 物如但不限于蛋白质、肤、脱氧核糖核酸(DNA)、如质粒(pDNA)和寡脱氧核巧酸(0DN)、W及 核糖核酸如小干扰核糖核酸(SiRNA)和小发夹核糖核酸(ShRNA)。然而，显示运些胶态组合 物在溶液中具有有限的稳定性，并长期储存容易发生物理或化学降解[1]。
[000引通过冷冻干燥(freeze-化ying)，也称为冻干Qyo地iIization)，运些组合物的脱 水被用于提高它们的长期稳定性[2-4]。运个过程由3个主要步骤组成:冷冻、初级干燥和二 级干燥。它提供了在减少的体积中使干燥的组合物再水化W增加活性剂的浓度并达到治疗 剂量的可能性。运在自组装聚阳离子和核酸(NA)之间的聚电解质复合组合物的情况下是特 别令人感兴趣的，上述自组装需要在稀释条件下制备W产生小而尺寸均匀的纳米颗粒[1]。
[0006] -般需要向组合物中加入冻干保护剂W防止冻干时不可逆的聚结和溶液中纳米 颗粒的官能度的损失[4,5]。冻融研究允许识别待用于给定的组合物的潜在的冻干保护剂 [6,7]。二糖(如薦糖、海藻糖、乳糖等），寡糖/多糖(如纤维素、葡聚糖等），聚合物(如PEG、 PVP等)等已经用作冻干保护剂W稳定长期存储的组合物[3,4]。海藻糖也将是一个极好的 纳米颗粒冻干保护剂[4,11-13]。然而，据发现在高溫下储存时，冷冻干燥的无定形二糖会 比多糖更容易结晶，增加复合物聚结的风险[14]，但是多糖却被发现由于其蓬松是低效率 的冻干保护剂[15，16]。寡糖可能是优越的稳定剂，因为它们具有二糖和多糖对于复合物最 佳稳定都具有的有利性质[17]。已证明低分子量葡聚糖在冻干和再水化时保留阳离子多聚 物(polyplex)物理化学性质和功能方面是有效的，同时在体内和体外研究中与薦糖相比保 持了更高的细胞活力[1引。
[0007] 缓冲剂可W用于稳定抑和防止在通过冻干过程的冷冻阶段时发生的溶质的低溫 浓缩期间纳米颗粒酸解[2]。必须谨慎选择冻干期间使用的缓冲剂，因为在冷冻期间某些会 结晶或沉淀(憐酸盐、班巧酸盐或酒石酸盐），引起pH值变化最高达4个单位[2，20-23] DTg'， 指的是最大低溫浓缩的溶液的玻璃化转变溫度，是选择用于冷冻干燥的赋形剂时要考虑的 重要参数;它是能够实施初级干燥而不会影响最终产品的最高溫度的良好估计。巧樣酸钢 是非结晶性缓冲剂，因为其在不同pH值的较高1旨'[22]及其接近中性的口1(3(口1(33 = 6.4)
[24]，其适用于冻干的可注射组合物。心组氨酸也能够是适用的，因为它的S个地a值之一 为6.1，它在冷冻干燥时在pH 5.5至6.5下几乎不表现出结晶，并且它具有高的Tg'（-33°C) [12,25]。使用赋形剂，主要是冻干保护剂和一些缓冲剂，对于用聚(D，!^-乳酸-共-乙醇酸） (化GA) (U.S. 2011/262490) [26-28]、聚（1-赖氨酸）。化）[29]、聚乳酸（PLA) (U.S. 2011/ 0275704) [30]、明胶[31]、聚乙締亚胺(PEI) [7,15,17,32-37]形成的冷冻干燥的聚电解质 复合组合物的开发，已经被表征。
[0008] 基于PEI的纳米颗粒系统在冷冻干燥中是最特征化的。已经证实几种二糖在冷冻 干燥期间对于冻干保护PEI/NA纳米颗粒是有效的。现有的冻干保护剂筛选研究表明，需要 相对高浓度的薦糖(对于包含50iig DNA/mL的组合物相当于37.5% (wt/v)) W在冻融时保持 70kDa(重均分子量(Mw))支化PEI/DNA的粒径，但是会尽管导致在C(zeta)电位和转染效率 方面的急剧下降[32]。更近期的工作表明，可W在浓度低得多的薦糖、乳糖或海藻糖(对于 包含50yg DNA/mL的组合物相当于1.25%(巧1八））中冷冻干燥2540曰(1^支化阳1/0魁复合 物而无颗粒聚结或体外转染损失，可接受的C电位增加（10~20mV)，和用乳糖组合物的最高 体内转染效率[33]。甘露醇，W及薦糖或海藻糖，也可W用于防止干燥时PEI/DNA复合物的 聚结和冷冻效率的损失，但对于PEI/0DN或核酶复合物不需待冷冻干燥保护剂[34]。
[0009] 先前的研究证实，需要高薦糖/DNA重量比W在冷冻干燥时稳定纳米颗粒，导致组 合物与用于典型的质粒DM剂量的皮下（SC)或肌内（IM)注射不相容的同渗重摩 (osmolality)[32]。
[0010] 研究了使用葡聚糖（多糖）作为二糖的替代物来稳定冻干的70kDa(Mw)支化PEI/ DNA复合物的可能性。葡聚糖3kDa在保持复合物完整性方面与薦糖一样有效，同时降低了重 构溶液的同渗重摩约40% [15]。葡聚糖3W)a的/薦糖组合物能够浓缩高达10倍再水化到近 同渗重摩时的浓度，提供更适合体内注射的剂量(例如，lmg/mL)，如通过测定时不存在浊度 的变化确定的，在浓缩时不会改变粒径。然而，为了达到十倍浓度之后的那个最终浓度，在 加入冻干保护剂之前，必须W20化g/mL的初始DNA浓度制备颗粒[1引，运超过确保生产小而 尺寸均匀的纳米颗粒的典型最大浓度（IOOyg DNA/mL) [ 1 ]，提示在运些组合物中的颗粒尺 寸和多分散性可W-直较高。
[0011]此外，使用葡聚糖的主要缺点是它们已知的与PEG的不相容性，其稳定效果随着脂 质复合物（Iipoplexes)的PEG化的程度增加而降低[17]。葡聚糖化Da防止聚乙二醇化的 阳I/DNA复合物完全聚结，但是粒径仍会增加170%至240% [7]。菊粉，另一种寡糖，是用于 聚乙二醇化的脂质复合物或阳离子多聚物的有效的冻干保护剂[7]。
[001引最近，向线性PEI/DNA复合物中加入缓冲剂（IOmM k组氨酸pH 6)，W6的氨基/憐 酸醋(N/P)比制备，会引起颗粒流体动力学直径降低(从176至118nm)和多分散性指数(PDI) 减小(从0.18至0.13)，引起C电位增加(从29.6至36.3mV)，但对其体外代谢活性和基因表达 无显著影响[36]。据发现葡聚糖是用于运些复合物的一种很差的冻干保护剂，而薦糖，在至 少2000的冻干保护剂/DNA重量比（对于含50yg DNA/mL的组合物相当于10%(w/v))下，在冷 冻干燥时会对其产生稳定作用。含14 %的乳果糖（Iactosucrose)、10 %径丙基0环糊精/ 6.5%薦糖或10%聚维酬/6.3%薦糖的等渗组合物在40°C下储存6个周的时间是稳定的，其 中颗粒小于170nm。乳果糖或径丙基0环糊精/薦糖组合物的体外最有效的[36]。另一种缓冲 剂，pH 7的S乙醇胺，据发现对于保持PEI -甘露二糖(PE Im) /pDNA复合物在冷冻干燥时与 50%甘油组合是有效的。冷冻干燥的组合物能够存储在-20°C或4°C下长达30天，并仍然保 持200nm的粒径(wo 2010/125544)[37]。
[0013] 使用PEI共价结合至聚乙二醇（PEG)和胆固醇（畑ol)，PEG-PEI-畑ol(0.554mg/ mL)/pDNA(0.15mg/mL)，在乳糖或薦糖（0.3、1.5或3%(巧八））中制备的脂质阳离子多聚物 (Iipopolyplexes)可W被冷冻干燥和再水化成5、1或0.5mg/mL的最终DNA浓度，而无需向组 合物中加入缓冲剂。在-20或-80°C ,60%畑存储冷冻干燥的样品2年后或在重构和在4°C下 存储样品长达3个月之后(WO 2009/021017)，粒径或生物学活性(体外、体内、癌症患者中） 在运些组合物之间几乎没有看到变化[35]。事实上，先前已经报道，脂质阳离子多聚物在低 薦糖含量(对于包含50g DNA/血的组合物相当于0.0625%(w/v))下经过冻融之后便不太易 于降解，而无需对其物理化学性质修饰且对照物的转染效率至少50% [32]。
[0014] 鉴于本领域的当前技术状态，仍然需要一种聚电解质复合组合物，其提供聚电解 质复合物在溶液中增加的稳定性，并改善聚电解质复合物在长时间储存中对物理或化学降 解(设及，例如，冷冻干燥)的抗性，并能够在代表接近等渗的有效剂量的浓度下再水化。
【发明内容】
[0015] 本发明的各个方面设及一种聚电解质复合组合物，包含聚合物、核酸分子、冻干保 护剂和缓冲剂，所述组合物在冷冻干燥和再水化之后保持聚电解质复合物的生物学活性。
[0016] 本发明的各个方面设及一种聚电解质复合组合物，包含壳聚糖、含量为约50iig/mL 的脱氧核糖核酸、含量为约0.5 % (w/V)至约1 % (w/v)的海藻糖和含量为约3mM至约4mM之间 的组氨酸。
[0017] 本发明的各个方面设及一种聚电解质复合组合物，包含壳聚糖、含量为约IO^g/ mL的脱氧核糖核酸、含量为约l%(w/v)至2%(w/v)的海藻糖和含量为约6mM至约SmM之间的 组氨酸。
[0018] 本发明的各个方面设及一种制备聚电解质复合组合物的方法，该聚电解质复合组 合物保持其在冷冻干燥和再水化之后的生物学活性，方法包括W下步骤:将壳聚糖与冻干 保护剂和缓冲剂混合W形成壳聚糖组合物;独立地将核酸与冻干保护剂和缓冲剂混合W形 成核酸组合物;和将壳聚糖组合物与核酸组合物混合W形成聚电解质复合组合物。
[0019] 本发明的各个方面设及一种试剂盒，包含如本文中限定的聚电解质复合组合物； 和重构组合物的说明书。
[0020] 本发明的各个方面设及如本文中限定的聚电解质复合组合物用于向需要其的受 试者递送核酸的用途。
【附图说明】
[0021 ]现在将参考附图。
[0022]图IA，B和C。图IA图示说明了显示在没有冻干保护剂存在下经过冻融(F/T)之后看 到的纳米颗粒聚结(尺寸5倍增加）的曲线图，而向组合物加入至少l%w/v的甘露醇、0.5% (w/v)薦糖、0.5%(w/v)葡聚糖f5kDa或0.1%(w/v)海藻糖二水合物时，防止了聚结(直径< 15化m);图IB图示说明了显示使用最低的所指示的冻干保护剂含量的转染效率的曲线图； 图IC图示说明了显示在冻融之后纳米颗粒维持巧光素酶表达的曲线图，而在无冻干保护剂 时观察到显著降低。转染效率和蛋光素酶表达水平都表示为无赋形剂(OFT)的新鲜对照物 的百分比，而对照物具有43%的总细胞的转染效率和8.03610化1]/111111111旨蛋白的蛋光素酶 表达水平。
[002引图2A-H。图姻示说明了显示在1或10%(w/v)甘露醇（图2A-2B)、薦糖（图2C-2D)或 葡聚糖5kDa(图沈-2F)的存在下冻融的纳米颗粒比不含冻干保护剂（图2G)的新鲜制备的颗 粒组合物更呈球形的图像。在无冻干保护剂之下冻融的纳米颗粒发生严重聚结(图2H)。
[0024]图3A-D。图3A图示说明了显示冷冻干燥和再水化成包含0.5% (w/v)薦糖、葡聚糖 化化或海藻糖二水合物的等体积组合物引起纳米颗粒聚结的曲线图；再水化的颗粒具有 比新鲜制备的复合物更大的最高达24倍的Z-平均；图3B图示说明了显示其强度上的平均尺 寸比新鲜制备的颗粒更大的最高达9.5倍的曲线图；图3C图示说明了显示多分散性指数 (PDI)超过0.35的曲线图；和图3D图示说明了显示C电位为0或负值的曲线图。
[002引图4A-C。图4A-C图示说明了显示向包含0.5%冻干保护剂的组合物中加入pH 4.5 或抑6.5的巧樣酸/巧樣酸S钢缓冲剂引起新鲜样品中形成微观聚集体和冻融之后完全聚 结的曲线图。
[0026] 图5A-B。图5A图示说明了显示新鲜制备的壳聚糖/DNA复合物具有不同形态的图 像；图5B图示说明了显示加入pH 6.5的心组氨酸达到13.75mM的最终浓度，引起形成稍大 的、更接近球形的纳米颗粒的图像。
[0027] 图6A-C。图6A-B图示说明了曲线图，显示了向含0.5%冻干保护剂的组合物中加入 k组氨酸不引起发生聚结的曲线图：在新鲜和冻融的组合物中观察到粒径稍有增加；图6C 图示说明了显示PDI仍然低于0.35的曲线图。
[002引图7A-I。图7A-C的图示说明了显示在0.5或1 % (w/v)赋形剂和13.75mM组氨酸的存 在下冷冻干燥的纳米颗粒可W用低至其原始体积的10%再水化而不影响粒径，但其PDI下 降的曲线图；图7D-F图示说明了显示包含0.5% (w/v)薦糖或海藻糖二水合物和13.75mM组 氨酸的组合物可W被冷冻干燥和再水化成原始体积(化IX)或20倍(化20X)其初始浓度而无 颗粒聚结的曲线图；图7G-I图示说明了显示0.5%(w/v)薦糖或海藻糖二水合物组合物能够 用尽可能少的3.44mM k组氨酸进行冷冻干燥而无其粒径或PDI变化的曲线图。
[0029] 图8A-GH。图8A-C图示说明了显示在复合物形成之前，用赋形剂稀释壳聚糖和DNA 对新鲜制备的纳米颗粒粒径几乎没有影响，但在k组氨酸的存在下产生的颗粒具有较低的 PDI的曲线图，图8D-H图不说明了显不含0.5% (w/v)薦糖或海澡糖和3.44mM组氨酸的组合 物进行RhlX或Rh20X之后未观察到粒径变化(Z-平均或强度上的平均粒径），但在化20X时 PDI小幅降低的曲线图。用0.5% (w/v)葡聚糖，颗粒更大，但仍保持约300nm，并且PDI从在 化1X时的0.4减小降低至化20X时的0.18。
[0030] 图9A-D。图9A-B图示说明了显示转染效率和巧光素酶表达水平的按照无赋形剂的 新鲜对照物(无 Lyo-化S(O)-新鲜）的百分比表示的曲线图，对照物具有53%的总细胞的转 染效率和6.76E-扣M巧光素酶/mg蛋白质的表达水平。含0.5% (w/v)冻干保护剂的组合物 在冷冻干燥之前具有接近对照物的100%的转染效率，并且在冷冻干燥之后低于对照物的 45%，而同时在冷冻干燥后其蛋光素酶表达水平低于对照物的25%。图9C-D图示说明了显 示同时包含0.5%冻干保护剂和3.441111的心组氨酸的组合物在冷冻干燥之前具有接近对照 物的110%的转染效率，在再水化至等体积(化IX)之后超过对照物的80%，并且对于包含海 藻糖的组合物按照20X再水化之后达到高达对照物的77 %。含心组氨酸和薦糖或海藻糖二 水合物的组合物具有类似于对照物的巧光素酶表达水平(对照物的116%至66%)，而对于 包含葡聚糖5kDa的那些则表达为对照物的57 %至12 %。
[0031 ] 图10A-F。图IOA-D图示说明了显示含0.5%海藻糖二水合物和3.5mM心组氨酸的 浓缩纳米颗粒组合物通过20X倍系数再水化之后引起尺寸和PDI的少量增加，但复合物的C 电位没有变化;使用一个或两个连续的冷冻干燥/再水化循环W达到最终20X浓度系数对纳 米颗粒物理化学性质没有影响的曲线图；图IOE-F图示说明了显示在单次冷冻干燥(FD/ 化20x)之后浓缩20X的组合物具有对照物100 %的转染效率，而经过两个连续的冷冻干燥循 环邮（10X+2X)和化(5X+4X)]之后，它们具有对照物的至少85 %的转染效率的曲线图。具有 20X终浓度系数的所有组合物在它们冷冻干燥一次或两次时具有对照物64 %至69 %的巧光 素酶表达水平。
[00创图11A-C。图1IA-B中图示说明了显示在包含1 %或2% (w/v)海藻糖和7或3.5mM组 氨酸的CS/siRNA组合物的化IX或化20X之后，对于在颗粒形成之后10化g/mL的SiRNA浓度， 观察到最低粒径变化(Z-平均）的曲线图。运些组合物的PDI在化IX之后低于0.25而在化20X 之后小于0.20;图IlC图示说明了显示包含1 %海藻糖和7mM k组氨酸的组合物在抑之后保 留沉默效率，而残余eGFP表达水平为未处理细胞的52至47%之间，无论组合物是新鲜的、 化IX或是化IOX的。
【具体实施方式】
[0033] 本发明源于本发明人的W下发现:壳聚糖核酸纳米颗粒能够被冷冻干燥和浓缩， 再水化之后无粒径变化或生物学活性损失或高渗溶液的产生，条件是在待冻干的颗粒悬浮 液中存在合适的冻干保护剂类型和浓度，W及缓冲剂类型和浓度。
[0034] 因此，本发明一个实施方式提供了运样的聚电解质复合组合物，其提供了聚电解 质复合物在溶液中增加的稳定性和/或聚电解质复合物对长期储存中的物理或化学降解的 改善的抗性。
[0035] 本发明的另一个实施方式提供了运样的冷冻干燥的聚电解质复合组合物，其提供 了聚电解质复合物在溶液中的稳定性和/或聚电解质复合物对长期储存中的物理或化学降 解的改善的抗性。
[0036] 在一些运些实施方式中，聚电解质复合物是基于多糖的聚电解质复合物。在一些 情况下，聚电解质复合物是多糖和核酸之间的聚电解质复合物。
[0037] 正如本文中所用，术语"聚电解质"是指其重复单元带有电解质基团的聚合物。因 此，聚电解质包括聚阳离子和聚阴离子。运些基团在水溶液中离解，使得聚合物带电荷。聚 电解质性质因此既类似于电解质又类似于聚合物。
[0038] 如本文所用，术语"多糖"是指由通过糖巧键结合在一起的单糖单元的长链所组成 的、在水解时得到组成单糖或寡糖的分子。
[0039] 在一些情况下，多糖是壳聚糖。正如本文中所用，术语"壳聚糖"是指一种由随机分 布的-(1-4)-连接的D-葡糖胺(脱乙酷单元)和N-乙酷基-D-葡糖胺（乙酷化单元)组成的线 性多糖。它通常通过用碱性氨氧化钢处理邮和其他甲壳类的壳制成。壳聚糖具有广泛的有 益性质，包括生物相容性、生物可降解性、粘膜粘合(mucoaa化esive)性能、抗微生物/抗真 菌活性和非常低毒性。
[0040] 壳聚糖的分子量W及链上的胺基团的量(脱乙酷或孤A的程度)对其生物学和生理 学特性具有重大影响。例如，乙酷基的含量和分布影响生物可降解性，因为不存在乙酷基团 或其均匀分布(无规而不是嵌段)会引起酶降解的速率非常低。
[0041] 在运些实施方式的一些实践中，壳聚糖可W包含化学修饰。包含化学修饰的壳聚 糖的实例包括，但不限于:具有W下的壳聚糖类化合物：（i)可W共价连接至壳多糖和/或壳 聚糖、或离子地或疏水地粘附于与核酸或寡核巧酸复合的壳聚糖类化合物的特异性或非特 异性的细胞祀向部分，和（ii)壳多糖和壳聚糖的各种衍生物或修饰，其用于改变它们的物 理、化学或生理学性质。运种修饰的壳聚糖的实例是具有W下各项的壳聚糖类化合物:特异 性或非特异性祀向配体、膜渗透剂、亚细胞定位组件、溶内吞体(endosomo Iy t i C)(胞溶)剂、 核定位信号、胶体稳定剂、促进血液中长循环半衰期的试剂和化学衍生物(如盐、0-乙酷化 和N-乙酷化衍生物）。用于壳聚糖的化学修饰的一些位点包括:C2(NH-C0-C出或N出）、C3(0H) 或 Cs(OfcOH)D
[0042] 在本文中限定的运些实施方式的某些实践中，壳聚糖具有的特定平均分子量 (Mn)，其为约4W)a至约200W)a之间，优选约化化至约200W)a之间，更优选约化化至约100W)a 之间，更优选约IOkDa至约SOkDa之间。壳聚糖进一步具有的具体脱乙酷度(抓A)为优选约 70%至约100%之间，更优选约80%至95%之间。
[0043] 在运些实施方式的某些实践中，核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)中的 一种或多种。核酸例如是质粒(pDNA)、微环或寡脱氧核巧酸(ODN)中的一种或多种。核酸还 可W是小干扰核糖核酸(S iRNA)和小发夹核糖核酸(ShRNA)或信使核糖核酸(mRNA)中的一 种或多种。
[0044] 依据聚合物的胺基团与核酸的憐酸醋基团的摩尔比(N/P比）确定进入如本文中所 限定的组合物的聚合物和核酸的比率。在一些实施方式中，如本文中所限定的组合物的N/P 比为约1.2至约30之间，优选N作比为约2至约10之间，更优选N作比为约5。
[004引已经进行用壳聚糖/核酸聚电解质复合物的研究[38-45]。运些研究设及包含核酸 (如，例如，脱氧核糖核酸或核糖核酸）和具有8至200kDa之间的数均分子量(Mn)和72%至 95 %之间的脱乙酷度（DDA)的壳聚糖进行高效率转染的组合物(WO 2009/0075383和WO 2012/159215)。然而，运些研究既没有考虑也没有解决与运些组合物长期稳定化作用相关 的多重挑战。
[0046] 现有工作还没有解决按照治疗浓度通过在减少的体积中再水化冷冻干燥的组合 物而生产等渗壳聚糖/核酸组合物的可能性。二糖(如薦糖或甘露醇)将会防止壳聚糖类多 聚物在冷冻干燥和短期储存（<2个月）时的聚结和官能度损失[8-10]。初始组合物的pH对 于冷冻干燥期间壳聚糖水解的状态是很关键的，一旦溶液pH从6降至4.1，降解速率增加30 倍[2]。为了保证组合物的足够缓冲作用，缓冲剂的摩尔浓度必须至少等于壳聚糖单体的摩 尔浓度，但在注射的最终组合物中要低于0.1 MW防止与生理缓冲剂竞争，和其他不良影响。 壳聚糖水解率会随着HCl浓度增加而增加[1引，并在溶剂的存在下会降低，促进更紧凑的壳 聚糖链构象，糖巧键位于结构的中屯、对于水解作用不太易于接近[19]。
[0047] 视黄醇被封装于水可溶性的壳聚糖（18W)a，96%DDA)中W形成的球形纳米颗粒， 其随后冻干3天，并在无任何冻干保护剂下易于再水化。尽管运些再水化颗粒具有稍小的平 均尺寸和分布广度，但冻干对它们的C电位没有影响，也没有降解封装的视黄醇[46]。用于 口服膜岛素递送的冷冻干燥的壳聚糖(80W)a，85%DDA)/聚(Y-谷氨酸）纳米颗粒被冷冻干 燥在1.5%海藻糖中，而尽管干饼发生强巧塌，却没有改变改尺寸或再水化复合物的形态 (平均粒径<245nm，PDI<0.3)或膜岛素含量的降低[47]。已经证明壳聚糖纳米颗粒在酸性 pH值下对水解敏感：PH= 1.2，颗粒降解；在PH= 2 . O时，它们28 %更大。用S甲基壳聚糖 (TMC; 200kDa，85 %孤A，季锭化程度(DQ) 15 %或30 % )或TMC-半脫氨酸结合物（TMC-切S)和 膜岛素形成的聚电解质复合物W20的薦糖/膜岛素 w/w比率冻干在薦糖中，而在再水化之后 没有改变粒径、C电位或膜岛素封装效率[4引。用于递送加替沙星的海藻酸盐(75-l