树鼩在制备阿尔茨海默病模型中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及树駒在制备动物疾病模型中的应用，特别设及树駒在制备阿尔茨海默 病模型中的应用。
【背景技术】
[0002] 树駒（Tupaia belangeri)属树駒目树駒科树駒属的动物，分布在东南亚各国。在 中国大陆，分布于广西、海南、贵州、云南、四川、西藏等地，主要生活于热带和亚热带森林、 灌丛、村落附近。
[0003] 阿尔茨海默病(Alzheimer'S Disease,AD)是一种威胁人类健康的神经系统疾病。 目前对于AD的治疗还没有十分明确的方法。建立良好的AD动物模型，有助于对AD的病因病 机的认识，并可W指导AD的预防和治疗。目前的AD模型按动物种类划分主要有灵长类动物 模型和晒齿类动物模型两大类。灵长类动物模型价格十分昂贵，晒齿类动物模型则与人类 神经系统差别较大。建立一种费用相对低廉，但是比晒齿类动物更接近人类的动物模型对 于AD等神经系统疾病究很有意义。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是如何获得费用相对低廉，但是比晒齿类动物更接近 人类的阿尔茨海默病动物模型。
[0005] 为了解决W上技术问题，本发明提供了 W下技术方案：
[0006] S1、树駒、D-半乳糖、的定粉样蛋白l-42(A01-42)、碟膏葦氨酸（IBO)和戊己比妥钢 在制备阿尔茨海默病动物模型中的应用。
[0007] S2、树駒、D-半乳糖、的定粉样蛋白1-42、碟膏葦氨酸和戊己比妥钢在制备具有下述 至少一种特性的树駒疾病模型中的应用：
[000引1)胶质细胞增生；
[0009] 2)神经元纤维缠结；
[0010] 3)学习巧区能力下降。
[0011] S3、树駒在制备阿尔茨海默病动物模型中的应用。
[0012] S4、树駒在制备具有下述至少一种特性的树駒疾病模型中的应用：
[OOU] 1)胶质细胞增生；
[0014] 2)神经元纤维缠结；
[001引3)学习巧区能力下降。
[0016] 上述应用中，用于制备阿尔茨海默病动物模型或树駒疾病模型的树駒可为雄性。
[0017] 上述应用中，用于制备阿尔茨海默病动物模型或树駒疾病模型的树駒的月龄可为 3月龄。
[0018] 上述Sl或S2的应用中，树駒、D-半乳糖、的定粉样蛋白1-42、碟膏葦氨酸和戊己比妥 钢的配比为 Ikg体重：1.5g:83]ig:8：3iig:20mg。
[0019] 上述应用均包括：
[0020] 1)连续30天给树駒给药D-半乳糖，D-半乳糖每天的给药剂量均为50毫克每千克体 重，W开始给药D-半乳糖的当天记为第1天，第31天用1 % (质量百分含量)戊己比妥钢溶液 进行麻醉，1%戊己比妥钢溶液的给药剂量为2mL ? kg^体重；
[0021] 2)将的定粉样蛋白1-42和碟膏葦氨酸注入树駒的海马区，得到所述阿尔茨海默病 动物模型或所述树駒疾病模型;所述的定粉样蛋白1-42和碟膏葦氨酸的给药剂量均为83yg/ Ikg体重。
[0022] 实验证明，与对照组(给药生理盐水的树駒)和空白组相比，对树駒给药D-半乳糖、 0淀粉样蛋白1-42、碟膏葦氨酸和戊己比妥钢得到的树駒模型(模型组)具有如下阿尔茨海 默病表现:学习记忆能力下降，并出现神经胶质细胞增生和神经元纤维缠结。Morris水迷宫 测试结果表明模型组树駒（给药D-半乳糖、的定粉样蛋白1-42、碟膏葦氨酸和戊己比妥钢的 树駒）出现了明显的学习记忆功能障碍。病理检测结果表明，模型组树駒脑海马区出现明显 胶质细胞增生和神经元纤维缠结(neurofibrilIa巧化ngles,NFT)，对照组(给药生理盐水 的树駒)和空白组无明显病理改变。
[0023] 树駒的遗传学研究表明其生物学上比晒齿类动物更接近灵长类动物化i RX，Xu W,Wang Z,et al.2012.Proteomic characteristics of the liver and skeletal muscle in the Chinese tree shrew(Tupaia belangeri chinensis)[J].Protein Cell, 3(9) :691-700;许凌，范宇，蒋学龙，等.2013.树駒进化分类地位的分子证据[J].动物学研 究，34(2) :70-76),有着明显大于大鼠的大脑和更高级的神经系统，应用树駒进行神经系统 疾病研究有着良好的前景。但与其他灵长类动物相比，又具有体型小，繁殖能力强的特点， 同时，树駒有着远低于非人灵长类动物的价格，在实验操作上也更为简便。开发树駒模型， 有助于减少非人灵长类动物的实验用量。
【附图说明】
[0024] 图1为树駒海马皿病理组织图片。A.空白组树駒海马，未见异常;B.对照组树駒海 马，未见异常;C.模型组树駒，海马见胶质细胞增生。
[00巧]图2为树駒海马Bieloschsky锻银法病理组织切片。A.空白组树駒海马，未见异常； B.对照组树駒海马，未见异常;C.模型组树駒，海马见神经元纤维缠结(NFT)。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0027] 下述实施例中的树駒均为滨西亚种。
[00測 1材料
[0029] 1.1实验动物
[0030] 树駒(滨西亚种），雄性，30只，3月龄，体质量120g±10g，昆明医学院实验动物中屯、 提供。实验动物生产许可证号:SCXK (滨)2013-0002。
[0031] 1.2主要试剂和仪器
[0032] 的定粉样蛋白l-42(A01-42)，碟膏葦氨酸（ibotenic acid,化0)，D半乳糖(D-gal) 美国Sigma公司生产;A01-42浓度为2g/L，用灭菌生理盐水配制，在37°C下解育72h，使其成 为凝聚态的A化-42。
[0033] 脑立体定向仪:RWD68002,深圳市瑞沃德生命科技有限公司；微量注射器:上海安 亭微量进样器厂;电子天平:ML204，瑞±梅特勒-托利多公司。
[0034] 2 方法
[0035] 2.1动物分组
[0036] 将30只树駒按体重随机分为3组:模型组，对照注射组，空白组，每组10只动物。
[0037] 模型组:给药D-半乳糖、的定粉样蛋白1-42、碟膏葦氨酸和戊己比妥钢。树駒、D-半 乳糖、的定粉样蛋白1-42、碟膏葦氨酸和戊己比妥钢的配比为Ikg体重：1.5g:83yg:8化g: 20mg〇
[0038] 对照注射组:操作与模型组相同，所有药物改为生理盐水，注射剂量和部位与模型 组相同。
[0039] 空白组，不做任何处理。
[0040] 2.2动物模型的建立：
[0041] 动物实验在广西医科大学实验动物中屯、进行。实验动物使用许可证号：SYXK桂 2009-0004。
[0042] 每只模型组树駒连续30d腹腔注射D-Gal 50mg ? (kg ? d)-i，使其早衰。第31天用 1%(质量百分含量)戊己比妥钢溶液，2血? kg-i体重，腹腔注射麻醉。麻醉成功后，将树駒固 定于大鼠脑立体定向仪上。沿头顶部正中切开皮肤暴露矢状缝，W矢状缝同对耳线的交点 作为起始原点，在向前3.3mm，左右两侧各旁开5mm处钻开烦骨，将微量注射器针头通过立体 定位仪经开孔垂直刺入脑10mm，缓慢匀速进针时，用时5min使针尖达到树駒海马区(海马区 定位参照树駒脑立体定位图谱）（杨文光等，1990 )，缓慢推入A01-42和化O混合液化L (含AP