一种多糖组合物、制备方法及其用图
【专利摘要】本发明涉及保健食品领域，特别涉及中药组合物及其制备方法、用途以及含有该中药组合物的药物、保健食品。本发明提供了一种中药组合物，由党参、茯苓和猴头菇组成，或由党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组成。实验表明，本发明制得的中药组合物、药物或保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用。既有营养价值，又有预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能，还能调节肠道菌群，对胃黏膜有辅助保护作用。
【专利说明】
一种多糖组合物、制备方法及其用途
技术领域
[0001] 本发明涉及保健食品领域，特别涉及中药组合物及其制备方法、用途以及含有该 中药组合物的药物、保健食品。
【背景技术】
[0002] 溃疡性结肠炎是一种常见的慢性肠道疾病，也是一种多因素、多层次的原因不明 的非特异性炎症，其病因不明、病程迀延难愈、反复发作。主要临床表现为腹痛、腹泻、黏液 脓血便等，国内外流行病学数据显示，溃疡性结肠炎发病率和患病率均呈现明显的增高趋 势，被世界卫生组织列为现代难治病之一。溃疡性结肠炎多以氨基水杨酸类药物、肾上腺糖 皮质激素、免疫抑制剂等为主，但大多药物疗效不佳，且有一定的副作用。而多糖做为天然 高分子化合物，由醛糖或酮糖通过苷链连接而成，是中草药的主要活性成分之一，来源广泛 而且无毒，具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、降血脂等药理活性和药效功能。中 药多糖在溃疡性结肠炎的相关研究领域中日益受到重视。
[0003] 党参(学名；Codonopsis pilosula)产地中国北方海拔1560-3100米的山地林边及 灌丛中。党参属植物全世界约有40种，中国约有39种，药用有21种、4变种。党参为中国常用 的传统补益药，古代以山西上党地区出产的党参为上品，具有补中益气，健脾益肺之功效。 现代研究，党参有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。此外对 化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。
[0004] 茯苓，中药名。为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。多于7 ~9月采挖，挖出后除去泥沙，堆置"发汗"后，摊开晾至表面干燥，再"发汗"，反复数次至现 皱纹、内部水分大部散失后，阴干，称为"茯苓个"；或将鲜茯苓按不同部位切制，阴干，分别 称为"茯苓块"和"茯苓片"。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸 失眠。
[0005] 猴头菇是一种木腐食用菌。一般生长在麻栎、山毛栎、栓皮栎、青刚栎、蒙古栎和胡 桃科的胡桃倒木及活树虫孔中，悬挂于枯干或活树的枯死部分。野生菌大多生长在深山密 林中。在平原和丘陵地区很少见到。20世纪70年代以来，现代医学陆续证明猴头菌有良好的 药用价值，临床应用表明，猴头菇可治疗消化不良、胃溃疡、胃窦炎、胃痛、胃胀及神经衰弱 等疾病。如果是轻度神经衰弱患者，食用猴头菇不失为较好的辅助治疗。在临床应用上面， 采用猴头菇进行治疗，对于轻度或是重度神经衰弱均可取得较为显著理想的疗效。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明提供中药组合物及其制备方法、用途以及含有该中药组合物的 药物、保健食品。本发明所得的中药组合物、药物或保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无 毒副作用。既有营养价值，又有预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能，还能调节肠 道菌群，对胃黏膜有辅助保护作用。
[0007] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0008] 本发明提供了一种中药组合物，由党参、茯苓和猴头菇组成。
[0009] 在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述党参的有效成分为党参多 糖，所述茯苓的有效成分为茯苓多糖，所述猴头菇的有效成分为猴头菇多糖。
[0010] 在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述党参多糖、所述茯苓多糖与 所述猴头菇多糖的质量比为(1~5):(1~5):(1~5)。
[0011] 在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述党参多糖、所述茯苓多糖与 所述猴头菇多糖的质量比为(2~4): (2~4): (2~4)。
[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述党参多糖、所述茯苓多糖与 所述猴头菇多糖的质量比为2:3:3。
[0013] 在本发明的一些具体实施方案中，中药组合物中所述党参多糖、所述茯苓多糖、或 所述猴头菇多糖为天然或人工合成。
[0014] 本发明还提供了所述的中药组合物的制备方法，取所述党参、所述茯苓或所述猴 头菇粉碎，按照党参、茯苓或猴头菇:水=(〇. 5g~2.0g): 5mL的比例加水，以g/mL计，在70°C ~75°C下加热搅拌提取2~4h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两 次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液:95 %乙醇=1 :(7~10)的体积比将相应的7~10倍体积95%乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4°C下过 夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖。
[0015] 本发明还提供了所述制备方法制得的中药组合物。
[0016] 本发明还提供了所述的中药组合物和/或所述制备方法制得的中药组合物在制备 预防和/或改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适的药物和/或保健食品中的用途。
[0017] 所谓肠胃不适，包括上腹胃脘部不适、胃部疼痛、饭后饱胀、嗳气、返酸，恶心、呕 吐，消化不良，肠胃绞痛。
[0018] 在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物中所述党参多糖、所述茯苓多 糖与所述猴头菇多糖的使用剂量为300mg/kg。
[0019] 本发明还提供了一种用于预防和/或改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适的药物 和/或保健食品，包括所述的中药组合物和/或所述制备方法制得的所述的中药组合物以及 药学上可接受的辅料。
[0020] 所述药学上可接受的辅料包括载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。
[0021] 在本发明的一些具体实施方案中，所述药物或所述保健食品的剂型为胶囊、片剂、 颗粒剂、口服液、散剂、袋泡茶。
[0022] 本发明提供了一种中药组合物，由党参、茯苓和猴头菇组成。实验表明，本发明制 得的中药组合物、药物或保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用。既有营养价值， 又有预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能，还能调节肠道菌群，对胃黏膜有辅助 保护作用。
【具体实施方式】
[0023] 本发明公开了中药组合物及其制备方法、用途以及含有该中药组合物的药物、保 健食品，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发 明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发 明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应 用本发明技术。
[0024]根据本发明第一方面，提供了一种保健食品组合物，所述组合物包含党参多糖、茯 苓多糖、猴头菇多糖，优选以重量计2:3:3比例混合，任选进一步包括医学或食品可接受的 载体、赋形剂、赋形剂和/或填充剂。
[0025]在本方面一个优选的实施方式中，所述党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖为天然 的或人工合成的。
[0026] 根据本发明第二方面，提供一种保健食品组合物的制备方法，所述方法包括，混合 以重量计2:3:3比例的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖。
[0027] 在本发明一个优选的实施方式中，所述党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖由如下 方法制得:取所述党参、所述茯苓或所述猴头菇粉碎，按照党参、茯苓或猴头菇:水=(0.5g ~2.0g): 5mL的比例加水，以g/mL计，在70°C~75°C下加热搅拌提取3h，过滤获得的滤渣按 照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清 浓缩液，按照澄清浓缩液:95 %乙醇=1: (7~10)的体积比将相应的7~10倍体积95 %乙醇 加入到澄清浓缩液中，混匀后于4°C下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即 获得党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖。
[0028]根据本发明第三方面，提供了一种根据第二方面的方法制备的保健食品组合物。
[0029] 根据本发明第四方面，提供了一种组合物在制备预防和改善慢性肠炎及其引起的 肠胃不适的疾病的药物或保健食品中的用途。
[0030] 所谓肠胃不适，包括上腹胃脘部不适、胃部疼痛、饭后饱胀、嗳气、返酸，恶心、呕 吐，消化不良，肠胃绞痛。
[0031] 在本方面一个优选的实施方式中，所述药物或保健食品的剂型为胶囊、片剂、颗粒 剂、口服液、散剂、袋泡茶。
[0032] 通过实验令人惊奇的发现，本发明所得的保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无 毒副作用。既有营养价值，又有预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能，还能调节肠 道菌群，对胃黏膜有辅助保护作用。
[0033] 本发明目的提供一种具有预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功效的保健 食品及其制备方法，同时确认和评价党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合对慢性肠炎及 其引起的肠胃不适是否具有预防和改善作用。为实现上述目的，本发明所采用的技术方案 是建立TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的大鼠慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型，以此确定和评 价多糖组合对慢性肠炎及其引起的肠胃不适预防和改善作用。具体过程步骤如下：
[0034] 先对84只SPF级SD大鼠分成四组，即空白对照组、模型对照组、阳性药对照组、党参 多糖组、茯苓多糖组、猴头菇多糖组、党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组，每组14只动物，雌 雄各半。各组动物预防性给药前称重，然后预防性给药1周(党参多糖组、茯苓多糖组、猴头 菇多糖组、党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组灌胃给予相应多糖剂量各为300mg/kg，给药 容积为10mL/kg，每天1次，其他三组给予等体积的动物饮用水）。预防性给药结束后，除空白 对照组(给予50 %乙醇)外，其他各组采用TNBS (三硝基苯磺酸)造模。造模方法:动物禁食不 禁水24h后用3 %戊巴比妥钠尾静脉注射麻醉，动物麻醉后，用一次性肛门插管轻柔插入结 肠约8cm后注入造模药液，大鼠提尾倒置60s让药液充分停留结肠内。造模结束后各组动物 继续给药16天(党参多糖组、茯苓多糖组、猴头菇多糖组、党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖 组灌胃给予相应多糖剂量各为300mg/kg，每天1次，空白对照组、模型对照组给予等体积的 动物饮用水，阳性对照组给予柳氮磺啦啶肠溶片混悬液，剂量为600mg/kg)。
[0035] 实验期间观察大鼠的粪便性状(粪便粘稠度、肛周污秽情况）、摄食情况和精神行 为状态;测定统计动物体重及体重增长，造模后动物疾病活动指数(DAI)，脾脏和胸腺的脏 器重量及脏器系数，并进行动物结肠组织病理学检查。通过对模型动物的指标进行分析比 较，令人惊奇的发现，党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组相比模型对照组，甚至党参多糖 组、茯苓多糖组、猴头菇多糖组，可显著增加 TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的慢性肠炎及其引起 的肠胃不适模型大鼠的摄食量，并增加其体重；可显著降低TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的大 鼠慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠的疾病活动指数(DAI)，并降低其死亡率，增强机 体免疫调节能力。
[0036] 本发明制备的保健食品通过预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能实验 进行评价和验证，应该指出的是，所列举的实施例不应理解为对本发明的限制。
[0037] 本发明提供的中药组合物及其制备方法、用途以及含有该中药组合物的药物、保 健食品中所用原料及试剂均可由市场购得。
[0038] 下面结合实施例，进一步阐述本发明：
[0039]实施例1党参多糖的制备
[0040] 本发明所述党参多糖通过以下制备方法制备获得:将党参粉碎后，按照党参:水= 0.5g: 5mL的比例加水，在70 °C下加热搅拌提取2h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和 时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩 液:95%乙醇=1:7的体积比将7倍体积95%乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4°C下过夜 静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得党参多糖。
[0041] 实施例2茯苓多糖的制备
[0042] 本发明所述茯苓多糖通过以下制备方法制备获得:将茯苓粉碎后，按照茯苓:水= lg: 5mL的比例加水，在75 °C下加热搅拌提取3h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时 间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液 :95%乙醇=1:9的体积比将9倍体积95%乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4°C下过夜静 置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得茯苓多糖。
[0043]实施例3猴头菇多糖的制备
[0044] 本发明所述茯苓多糖、猴头菇多糖通过以下制备方法制备获得:将猴头菇粉碎后， 按照猴头菇:水= 2g:5mL的比例加水，在75°C下加热搅拌提取4h，过滤获得的滤渣按照上述 料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过减压浓缩和离心获得澄清浓缩 液，按照澄清浓缩液:95%乙醇=1:10的体积比将10倍体积95%乙醇加入到澄清浓缩液中， 混匀后于4°C下过夜静置沉淀，离心收集沉淀，经过真空冷冻干燥即获得猴头菇多糖。
[0045] 实施例4党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物的制备
[0046] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以重量计比例2:3:3混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充 剂。
[0047] 制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。
[0048] 实施例5党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物的制备
[0049] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以重量计比例1:5:5混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充 剂。
[0050] 制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。
[0051] 实施例6党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物的制备
[0052] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以重量计比例5:1:1混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充 剂。
[0053] 制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。
[0054] 实施例7党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物的制备
[0055] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以重量计比例2:4:3混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充 剂。
[0056] 制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。
[0057] 实施例8党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物的制备
[0058] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以重量计比例4:2:4混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充 剂。
[0059] 制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。
[0060] 实施例9党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物的制备
[0061] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以重量计比例3:3:2混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/或填充 剂。
[0062] 制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。
[0063] 实施例10党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合对预防和改善慢性肠炎及其引 起的肠胃不适功能的验证
[0064] 1、实验材料
[0065] 1.1、实验仪器
[0066]电子分析天平(型号:FA_B):湖北好美佳仪器设备有限公司。
[0067] 1.2、实验试剂
[0068] TNBS(三硝基苯磺酸），纯度>99% (高纯级）：上海恒远生物科技有限公司；
[0069]戊巴比妥钠，纯度>99% (高纯级）：北京普博斯生物科技有限公司；
[0070] 福尔马林固定液10% :上海远慕生物科技有限公司；
[0071] 柳氮磺吡啶肠溶片(规格0.25g):华润双鹤药业股份有限公司。
[0072] 1.3、实验动物与饲料
[0073] SD大鼠84只，SPF级(无特定病原体级实验动物，指除清洁动物应排除的病原外，不 携带重要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原；饲育在屏障系统中，是通过无 菌动物、悉生动物而获得的），200~300g，50~60天，雄雌各半;购于湖南斯莱克景达实验动 物有限公司；
[0074]动物维持饲料名称:实验鼠生长繁殖颗粒料（Φ 12mm颗粒），25kg/袋;购于湖南斯 莱克景达实验动物有限公司。
[0075] 2、试验设计
[0076] 2.1实验分组与动物造模
[0077]实验分组:本实施例采用SPF级SD大鼠84只，分为空白对照组、模型对照组、阳性药 对照组、实施例1制备的党参多糖组、实施例2制备的茯苓多糖组、实施例3制备的猴头菇多 糖组、实施例4制备的党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组，每组14只动物，雌雄各半。动物预 防性给药前称重，然后预防性给药1周；实施例1制备的党参多糖组、实施例2制备的茯苓多 糖组、实施例3制备的猴头菇多糖组、实施例4制备的党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组灌 胃给予相应多糖剂量各为300mg/kg，给药容积为10mL/kg，每天1次，其他三组给予等体积的 动物饮用水，其他组的动物给予等量饮用水。预防性给药结束后，空白对照组给予1:1稀释 的无水乙醇，其他各组采用TNBS (三硝基苯磺酸)造模。
[0078]造模方法:预防性给药结束后，动物禁食不禁水24h后用3%戊巴比妥钠尾静脉注 射麻醉，动物麻醉后，用一次性肛门插管轻柔插入结肠约8cm后注入造模药液，大鼠提尾倒 置60s让药液充分停留结肠内。造模结束后各组动物继续给药16天(实施例1制备的党参多 糖组、实施例2制备的茯苓多糖组、实施例3制备的猴头菇多糖组、实施例4制备的党参多糖+ 茯苓多糖+猴头菇多糖组灌胃给予相应多糖剂量各为300mg/kg，每天1次，空白对照组、模型 对照组给予等体积的动物饮用水，阳性对照组给予柳氮磺吡啶肠溶片混悬液，剂量为 600mg/kg)。
[0079] 2.2观察指标及检测方法
[0080] -般观察及称重:每日观察大鼠的粪便性状(粪便粘稠度、肛周污秽情况）、摄食情 况和精神行为状态，每周称重两次;根据表1的指标，计算造模后动物疾病活动指数(DAI)。
[0081] 表1
[0082]
[0083]注:DAI = (体重下降分数+粪便性状分数+粪便隐血分数)/3 [0084]结肠肉眼观察:动物给药结束后用3%戊巴比妥钠尾静脉注射麻醉(30mg/kg)麻醉 后腹主动脉取血后处死，取远端结肠约8cm，沿纵轴剪开肠管，0.9 % NaCl溶液冲洗干净后进 行结肠病变肉眼评分，根据表2结肠肉眼评分标准进行评分。
[0085]表 2
[0087] 结肠病理学检查：取距肛门8cm左右受损结肠，中性福尔马林固定常规石蜡制片， Η-E染色，然后进行组织病理学检查。对炎细胞（中性粒细胞和淋巴细胞)浸润按表3进行评 分。
[0088] 表 3
[0089]
[0090] 此外，还对预防性给药以及造模后动物的摄食量、动物造模后死亡率、胸腺和脾脏 脏器重量及脏器系数等数据进行统计。
[0091] 以上各指标，在不同性别、组别中，对各标准的计量数据(动物体重)计算平均值土 标准差，采用SPSS统计软件进行处理。根据不同的数据类型采用不同的处理方法，P<0.05 时认为差异具有统计学意义。病理学检查出现异常情况则需按其发生率和程度进行组间比 较。方差齐性和正态分布时采用one-way AN0VA，各组之间多重比较采用Dunnett-t法检验； 方差不齐或非正态分布时采用Kruskal-Wallis检验，各组之间多重比较采用Dunnett-t法 检验。
[0092] 2.3、结果分析
[0093] 动物预防性给药时一般观察未见明显异常。除空白对照组外，其他动物造模后均 出现拉稀、肛周污秽严重、精神状态不佳，皮毛粗糙，摄食量明显减少。
[0094] 表4为预防性给药以及造模后动物的摄食量数据统计结果。从中可以看出，动物预 防性给药期间，各组动物摄食量未见明显差别;造模后三天，与模型对照组比较，实施例1制 备的党参多糖组、实施例2制备的茯苓多糖、实施例3制备的猴头菇多糖组、实施例4制备的 党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组的动物个别时段摄食量未见明显差异;但该三组在造模 后6-10天、10-13天和13-16天的摄食量明显大于模型对照组，并且党参多糖+茯苓多糖+猴 头菇多糖组(或称组合物组）的动物摄食量比另外两组更大；相比于空白对照组，模型对照 组动物造模后摄食量减少。由此可知:实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组 合可令人惊奇地增加 TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠 的摄食量，而且比单独使用党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖更具优势。
[0095]表 4
[0098]表5为预防性给药以及造模后动物的体重数据统计结果(体重:x±SD，单位g)。从 中可以看出，造模后相比于空白对照组，模型对照组动物体重减轻，增重减少；而其他四组 数据令人惊奇地显示，实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合更能增加 TNBS (三硝基苯磺酸)诱导的大鼠慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠的体重，而且比单独使 用党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖更具优势(P〈〇. 05)。
[0099]表 5
[0102] 表6为动物造模后的疾病活动指数(DAI)统计结果。相比于空白对照组，模型对照 组动物的疾病活动指数(DAI)显著高于空白对照组(p〈0.01);由表中数据可知，实施例4制 备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合可显著降低TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的大鼠慢 性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠的疾病活动指数(DAI)(p〈0.01)，比单独使用党参多 糖、茯苓多糖或猴头菇多糖更具令人惊奇的优势(P〈〇.05)。
[0103] 表6
[0105] 注：与空白对照组比较(#p〈0 · 05，##p〈0 · 01);与模型对照组比较(*p〈0 · 05，**p〈 0·01)〇
[0106] 表7为动物造模后死亡率统计结果。模型对照组动物造模后死亡率显著高于空白 对照组(Ρ〈〇.05)。从数据中可知，实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合可 令人惊奇地降低TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的大鼠慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠 的死亡率，且比单独使用党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖更具优势(ρ〈〇.05)。
[0107] 表7
[0109] 注：与空白对照组比较(#p〈0 · 05)。
[0110] 表8为本实施例动物胸腺和脾脏脏器重量及脏器系数统计结果。与空白对照组比 较，模型对照组动物胸腺脏器重量及脏器系数均小于空白对照组，脾脏脏重量及脏器系数 均大于空白对照组。相比于模型对照组，实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖 组动物胸腺脏器重量及脏器系数均大于模型对照组，脾脏重量及脏器系数均小于模型对照 组，说明实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合可显著增强机体免疫调节能 力，比单独使用党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖具有更强(P〈〇. 05)免疫调节能力。
[0111] 表8
[0114] 注:与空白对照组比较(#p〈0 · 05)。
[0115] 表9为本实施例三硝基苯磺酸诱导的慢性肠炎及其引起的肠胃不适大鼠结肠病变 肉眼评分的影响结果。与空白对照组比较，模型对照组动物结肠病变肉眼评分提高（P〈 0.05)。但实施例4制备的党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组动物结肠病变肉眼评分与其他 四组相比有令人惊奇的降低趋势(P〈〇. 05)。
[0116] 表9
[0117]
[0118] 注："*"与模型对照组比较与模型照组比较，P〈0.05;"**"与模型对照组比较，P〈 〇. 01。；各受试物组动物分值与模型对照组比较无显著性差异(P>〇. 05)
[0119] 表10为本实施例中三硝基苯磺酸诱导的慢性肠炎及其引起的肠胃不适大鼠结肠 损伤部位炎细胞浸润评分的影响结果，其显示模型对照组动物及受试物组（阳性对照组、实 施例1制备的党参多糖组、实施例2制备的茯苓多糖组、实施例3制备的猴头菇多糖组、实施 例4制备的党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组)动物结肠损伤处及结肠正常损伤交接处均 可见到黏膜的缺失，中性粒细胞浸润，淋巴细胞浸润，坏死，嗜酸性粒细胞浸润，隐窝腺扩 张;黏膜下层大量纤维组织增生，水肿，中性粒细胞浸润，淋巴细胞浸润，嗜酸性粒细胞浸 润，含铁血黄素沉积，巨噬细胞浸润;肌层肌纤维消失，中性粒细胞浸润，淋巴细胞浸润，纤 维组织增生等;浆膜层增生、水肿、巨噬细胞浸润等改变。但相对模型对照组和阳性对照组， 实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合对TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的大鼠 慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠的结肠损伤要低(P〈〇. 05)。
[0120] 表1〇
[0121]
[0122] 综合以上结果，实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物可以使 TNBS(三硝基苯磺酸)诱导的慢性肠炎及其引起的肠胃不适模型大鼠的摄食量、体重均增 加，降低动物造模后的死亡率，增强机体免疫调节能力，减轻动物造模后的疾病活动指数 (DAI)，减轻结肠炎症状，因此实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物具有 预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适作用，而且比单独使用党参多糖、茯苓多糖或猴 头菇多糖更具优势，且具有显著差异(P<〇.05)。
[0123] 取实施例5~实施例9制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物进行上述实 验，实验结果与实施例4制备的组合物的结果相同或相近，比单独使用党参多糖、茯苓多糖 或猴头菇多糖更具优势，且具有显著差异(P<〇.05)。
[0124] 实施例11党参多糖、茯苓多糖及猴头菇多糖组合保护胃黏膜功能的验证
[0125] 选择SPF级SD大鼠，雄性，体重180-220g。将每批动物按体重随机分为7组，包括正 常对照组、模型对照组、实施例1制备的党参多糖组、实施例2制备的茯苓多糖组、实施例3制 备的猴头菇多糖组和实施例4制备的党参多糖+茯苓多糖+猴头菇多糖组(或称组合物组)试 验组(表11)，每组10只，各组均按l〇ml/kg经口灌胃，1次/天，连续30天。末次给药后各组动 物禁食不禁水24h。除正常对照组外，所有其他组动物灌胃给予无水乙醇1.0ml/只，lh后处 死动物，取胃，结扎幽门，灌注适量10%甲醛溶液，固定20min，然后沿胃大弯剪开，洗净胃内 容物，展开胃黏膜。试验效果评分标准参考《保健食品检验与评价技术规范》。试验结果如表 12所示。
[0126] 表11对酒精诱导的急性胃黏膜损伤大鼠模型的影响试验组设置
[0128]表12对急性酒精性大鼠胃黏膜损伤的影响
[0131] 注：与模型照组比较，P〈0.05; "**"与模型对照组比较，P〈0.01。
[0132] 试验发现正常组胃黏膜上皮完整，腺体排列整齐，未见出血、坏死、糜烂或溃疡形 成，胃壁细胞及主细胞形态正常，未见萎缩、变性或坏死，未见化生或异型增生，肌层未见肥 厚、萎缩或出血、坏死，浆膜未见出血、水肿及炎症细胞渗出。模型对照组胃黏膜出血、充血、 上皮细胞变性坏死，急性胃黏膜损伤病变总积分与正常对照组比较显著性升高(p〈0.01)。 单药组和组合物试验组胃黏膜出血、充血、上皮细胞变性坏死程度对比模型对照组明显减 轻，具有统计学差异(P〈〇.05);除正常组以外，其余各组大鼠胃黏膜损伤发生率均为100%; 实施例4制备的组合物试验组对急性酒精胃黏膜损伤抑制率分别为71.2%。实施例4制备的 组合物试验组胃黏膜充血、出血、上皮细胞变性坏死程度较模型对照组显著性减低（P〈 0.01)。胃黏膜病变积分检测未见明显差异，但实施例4制备的组合物试验组对急性胃黏膜 损伤病变的改善趋势好于模型对照组和单药组。说明实施例4制备的试验组组合物对急性 胃黏膜损伤具有明显(P〈〇.05)保护作用。该结果显示，将三种多糖混合后，有利于提高研究 样品对急性胃黏膜损伤的保护，符合药物之间的相加和协同作用原则。
[0133] 取实施例5~实施例9制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物进行上述实 验，实验结果与实施例4制备的组合物的结果相同或相近，无显著差异(P>0.05)。
[0134] 实施例12党参多糖、茯苓多糖及猴头菇多糖组合调节人肠道菌群人体试食实验
[0135] 依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范（2003年）》的调节肠道菌群功能人体 试食实验评价办法，对实施例1~3制备的多糖及实施例4中所制备的组合物进行评价，具体 如下：
[0136] 1.试食实验分组
[0137] 试食实验分组情况见表13:
[0138] 表13试食实验分组表
[0140] 2.人体试食实验方法
[0141 ]将受试者随机分成5个组，每组20人，在受试者试食之前，均无菌采取受试者粪便， 16S rDNA测序检验肠道菌群，作为本底水平的参照。按表13的分组情况，组1服用对照组、组 2、3、4服用单糖试验组，组5服用组合物组，4周后，采取受试者粪便，16S rDNA测序检验肠道 菌群，与本底水平对比，对比其相对丰度增加的倍数。
[0142] 3.肠道菌群检测方法
[0143] 粪便样本首先进行DNA提取，PCR扩增16SrDNA的V3~V5区域，然后用454平台测序， 测序方向V5->V3。每个样品原始数据平均7795条tag，读长400bp左右。最终用于分析的tag 数平均为3235，读长265bp左右。16S分析主要采用mothur软件(http: //www. mothur.org/ wiki/Mothur_manual)，包括质控，0TU聚类，注释等分析，并在完成数据物种分类的基础上， 分析各个物种的相对丰度。
[0144] 4.实验结果
[0145] 实验结果见表14:
[0146] 表14人肠道菌群各菌属的测序数据丰度对比（与试食之前的本底水平相比提高倍 数）
[0148] 注：与模型照组比较，P〈0.05; "**"与模型对照组比较，P〈0.01。
[0149] 综合以上结果，试食四周后，实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组 合物可以使对照组和单糖试验组的乳酸菌、丁酸梭菌、罗斯拜瑞氏菌属、罗斯氏菌属等益生 菌数均有明显的增加。由此，表明本发明实施例4制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖 组合物具有调节人体肠道菌群的作用，而且比单独使用党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖 更具优势(P〈〇.〇5)。
[0150] 根据该党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物具有预防和改善慢性肠炎及其引 起的肠胃不适、保护胃黏膜、调节肠道菌群的作用，将天然的、人工的、以及上述实施例1、2 和3的制备方法制成的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖，按2:3 :3比例配制（即实施例4制 备的组合物，试验发现2:3:3比例配置效果最出人意料），再加入食用或药用辅料，可制备成 胶囊、片剂、颗粒剂、口服液、散剂、袋泡茶等各种保健食品的剂型。
[0151] 取实施例5~实施例9制备的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物进行上述实 验，实验结果与实施例4制备的组合物的结果相同或相近，比单独使用党参多糖、茯苓多糖 或猴头菇多糖更具优势，且具有显著差异(P<〇.05)。
[0152] 实施例13不同比例的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物及其功效
[0153] 将实施例1制得的党参多糖、实施例2制得茯苓多糖和实施例3制得的猴头菇多糖 以表15中不同重量计比例混合，进一步加入医学或食品可接受的载体、赋形剂、赋形剂和/ 或填充剂。制成包含党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖的保健食品组合物。并按照实施10中 对预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能的验证方法，实施例11中的保护胃黏膜功 能的验证方法，实施例12中调节人肠道菌群人体试食实验方法，分别得到预防和改善慢性 肠炎及其引起的肠胃不适功能，保护胃黏膜功能及调节人肠道菌群功能的结果分值。（100 分制，以实施例4中2:3:3的混合质量比制得的组合物相应的预防和改善慢性肠炎及其引起 的肠胃不适功能记为100分，保护胃黏膜功能记为100分，及调节人肠道菌群功能的结果分 值也记为100分，其他混合比例相应的功能试验结果相比占实施例10、实施例11、实施例12 的功能试验结果的百分点，记为相应的功能分值）
[0154] 表15不同比例的党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖组合物及其功效
[0156] 功能试验结果发现党参多糖、茯苓多糖和猴头菇多糖在(1~5):(1~5):(1~5)的 混合比例时相比单独的施用三种多糖具有更显著的预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃 不适功能，保护胃黏膜功能及调节人肠道菌群功能。当施用多糖混合比例为（2~4): (2~ 4): (2~4)时，效果更显著。
[0157] 本发明所述的保健食品经科学配伍而成，相得益彰，无毒副作用；既有营养价值， 又有预防和改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适功能。
【申请人】声明，以上内容是结合具体的 实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说 明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以 做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种中药组合物，其特征在于，由党参、茯苓和猴头菇组成。2. 根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述党参的有效成分为党参多糖， 所述茯苓的有效成分为茯苓多糖，所述猴头菇的有效成分为猴头菇多糖。3. 根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述党参多糖、所述茯苓多糖与所 述猴头菇多糖的质量比为（1~5):(1~5):(1~5)。4. 根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述党参多糖、所述茯苓多糖与所 述猴头菇多糖的质量比为(2~4): (2~4): (2~4)。5. 根据权利要求2所述的中药组合物，其特征在于，所述党参多糖、所述茯苓多糖与所 述猴头菇多糖的质量比为2:3: 3。6. 根据权利要求1至5任一项所述的中药组合物的制备方法，所述党参多糖、茯苓多糖 或猴头菇多糖由如下方法制得:将党参、茯苓或猴头菇粉碎后，以g/mL计，按照党参、茯苓或 猴头菇与水的质量体积比为(〇.5g~2.0g):5mL的比例加水，在70°C~75°C下加热搅拌提取 2_4h，过滤获得的滤渣按照上述料液比、温度和时间继续提取两次，合并三次提取液，经过 减压浓缩和离心获得澄清浓缩液，按照澄清浓缩液:95%乙醇=1: (7~10)的体积比将相应 的7~10倍体积95%乙醇加入到澄清浓缩液中，混匀后于4°C过夜静置沉淀，离心收集沉淀， 经过真空冷冻干燥即获得党参多糖、茯苓多糖或猴头菇多糖。7. 根据权利要求6所述的制备方法制得的中药组合物。8. 根据权利要求1至5任一项所述的中药组合物和/或根据权利要求7所述的中药组合 物在制备预防和/或改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适、保护胃黏膜、调节肠道菌群的药物 和/或保健食品中的用途。9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述中药组合物中，所述党参多糖、所述茯 苓多糖与所述猴头菇多糖的使用剂量为300mg/kg。10. -种用于预防和/或改善慢性肠炎及其引起的肠胃不适的药物和/或保健食品，其 特征在于，包括如权利要求1至5任一项所述的中药组合物和/或如权利要求7所述的中药组 合物以及药学上可接受的辅料。
【文档编号】A61P1/00GK105902597SQ201610383590
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年5月31日
【发明人】王园园, 胡明华, 马方励, 马忠华, 秦垂新, 陈伟鸿
【申请人】无限极（中国）有限公司