Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2-甲硫基乙基)胺基衍生物的组合物在预防或治疗胰 ...的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2?甲硫基乙基)胺基衍生物的组合物在预防或治疗胰腺纤维化药物中的应用，本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及一种Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2?甲硫基乙基)胺基衍生物的组合物、制备方法及其在制备预防或治疗胰腺纤维化药物上的用途。本发明公开了一种Salviskinone A的苯并咪唑基和二(2?甲硫基乙基)胺基衍生物的组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有预防或治疗胰腺纤维化的作用，具有开发预防或治疗胰腺纤维化药物的价值。
【专利说明】
Sa IV i sk i none A的苯并咪性基和二(2-甲硫基乙基)胺基衍生 物的组合物在预防或治疗膜腺纤维化药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明设及有机合成和药物化学领域，具体设及组合物、制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002] 膜腺纤维化是各种原因所致慢性膜腺炎的共同特征，同时也是与其伴随的组织病 理学特点，表现为大量成纤维细胞增生和富含连接组织的细胞外基质。是多种原因导致膜 腺损伤修复的结果，近期发现膜腺星状细胞和多种细胞因子与膜腺纤维化有关，膜腺纤维 化目前发病率愈来愈高，急需研发高效低毒的抗膜腺纤维化药物。
[0003] 膜腺纤维化的治疗目前已有的药物存在毒性大、安全性低的问题，从天然产物中 寻找化合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物，从而得到高效低毒的潜在药物最 有重要价值。
[0004] 本发明设及的化合物I是一个2011年发表（Ayumi Ohsaki et al.， 2011 . Salviskinone A,a diterpene with a new skeleton from Salvia 口^6￥日131^;[.了日化日11日化0]11日1:1日'3 52(2011)1375-1377)的化合物，我们对化合物1进行 了结构修饰，获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV 制备了组合物并对该组合物抗膜腺纤维化活性进行了评价，其具有抗膜腺纤维化活性。
【发明内容】
[0005] 本发明公开了一个新的组合物，该组合物由化合物ΙΠ 和化合物IV组成，该组合物 中化合物ΠI和化合物IV的质量百分数分别为60 %和40 %。
[0006]
[0007]本发明公开的组合物可W制成药学上可接受的盐或药学上可接受的载体。
[000引药效学实验表明，本发明的组合物具有较好的抗膜腺纤维化作用。本发明的药学 上可接受的盐具有同样的药效。
[0009] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加 W限定。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1化合物Salviskinone A的制备
[0011] 化合物Salviskinone A(I)的制备方法参照Ayumi Ohsaki等人发表的文献(Ayumi Ohsaki et al.,2011.Salviskinone A,a diterpene with a new skeleton from Salvia przewalskii.Tetr址e化on Letters 52(2011)1375-1377)的方法。
[0012]
[0013] 实施例2 Salviskinone A的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0014] 将化合物I(312mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四下基漠化锭（TBAB) (0.08邑），1，2-二漠乙烧(3.760邑，20.00111111〇1)和61^的50%氨氧化钢溶液。混合物在35摄氏 度揽拌12h"12h之后将反应液倒入冰水中，立即用二氯甲烧萃取两次，合并有机相溶液。然 后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涂4次，再用无水硫酸钢干燥，最后减压浓缩去除 溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬=100:1.5，v/v)， 收集栋色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物II的栋色粉末(327mg，78%)。
[001 引 iHMffi(500MHz，DMS0-d6)S6.63(s，lH)，6.37(s，lH)，5.81(s，lH)，4.51(s，2H), 3.84(s，lH)，3.79(s，2H)，2.15(s，lH)，2.04(s，lH)，1.91(s，lH)，1.65(s，lH)，1.39(s，3H), 1.08(3,6扣，0.99(3，細）.
[0016] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl88.07(s),183.70(s),154.38(s),147.57(s),140.21 (s),136.40(s),134.71(s),131.25(s),128.40(s),118.83(s),72.12(s),45.49(s),37.54 (s),33.58(s),31.78(s),26.17(s),25.12(s),24.66(s),23.51(s),23.17(s),22.65(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+扣+calcd for C2抽2泌r03:419.1222;found 419.1220.
[001 引
[0019] 实施例3 Salviskinone A的0-(苯并咪挫基）乙基衍生物（III)的合成
[0020] 将化合物II(209mg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟(345mg， 2.5mmol)，舰化钟（84mg，0.5mmol)和苯并咪挫（llSOmg，lOmmol)，混合物加热回流加。反应 结束后将反应液倒入冰水中，用等量二氯甲烧萃取Ξ次，合并有机相。依次用水和饱和食盐 水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗 品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100:1.5，v/v)，收集栋色集中洗脱带，浓缩 即得到化合物ΠΙ的栋色固体(215mg，43%)。
[00別]1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)S8.15(s，lH),7.54(d，J=25.0Hz，2H),7.15(s，lH), 7.06(s，lH)，6.33(d，J = 84.1Hz，lH)，6.26(s，lH)，5.66(s，lH)，4.38(d，J=15.8Hz，4H)， 3.57(3，1扣，1.96(3，1扣，1.90(3，1扣，1.77(3，把），1.51(3，1扣，1.20(3,3扣，0.99(3，細）， 0.81(3，細）.
[0022] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl87.90(s),183.51(s),154.17(s),147.37(s),146.27 (s),139.98(s),139.63(s),136.22(s),134.51(s),133.48(s),131.05(s),128.18(s), 123.93(s)，123.35(s)，118.56(d，J = 9.細z)，110.85(s)，68.55(s)，45.29(s)，44.74(s)， 37.34(s),33.36(s),25.96(s),24.94(s),24.46(s),23.32(s),22.96(s),22.42(s).
[0023] HRMS化SI):m/z[M+H]+calcd for C2姐33化〇3:457.2491;found:457.2493。
[0024]
[00巧]实施例4 Salviskinone A的0-(二径乙胺基）乙基衍生物的合成
[0026] 将化合物II(209mg，0.5mmo 1)溶于30mL乙腊当中，向其中加入无水碳酸钟(690mg， S.Ommol)，舰化钟（252mg，1.5mmol)和二乙醇胺（1051mg，lOmmol)，混合物加热回流9h。反应 结束后将反应液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烧萃取2次，合并有机相。依次用水和饱和 食盐水洗涂合并之后的有机相，再用无水硫酸钢干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产 物粗品用硅胶柱层析纯化(流动相为:石油酸/丙酬= 100:0.5，v/v)，收集黄色集中洗脱带 并挥去溶剂即得到Salviskinone A的0-(二径乙胺基）乙基衍生物的淡黄色固体（159.5mg， 72%)。
[0027] 1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)S6.52(s，lH)，6.40(s，lH)，5.71(s，lH)，4.15(s，2H), 3.70(s，lH)，3.37(s，4H)，3.00(s，2H)，2.50(s，4H)，2.07(s，lH)，1.96(s，lH)，1.83(s，lH), 1.57((1，1 = 1.4化，3扣，1.30(3,3扣，0.99(3，細），0.90(3,6扣.
[002引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl88.01(S),183.52(s),154.08(s),147.15(s),140.11 (s),136.23(s),134.42(s),130.84(s),128.31(s),118.62(s),68.93(s),58.73(s),56.61 (s),53.94(s),45.20(s),37.13(s),33.49(s),25.96(s),24.84(s),24.26(s),23.43(s), 22.97(s),22.33(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C26出8N〇5:444.2750;found:444.2746。
[0030]
[0031 ] Salviskinone A的〇-(二径乙胺基）乙基衍生物
[0032] 实施例5 Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物的合成
[0033] 将实施例4制备的Salviskinone A的0-(二径乙胺基）乙基衍生物（0.222邑， 0.5mmol)溶于6mL氯仿，逐滴加入氯化亚讽(0.238g，2mmol)，反应物加热回流化。将反应物 冷却至室溫，滴加甲醇分解过量的氯化亚讽，减压浓缩除去溶剂。产物经硅胶柱层析纯化 (石油酸/丙酬100:0.3，v/v)，得到Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物的淡黄色 固体（170.0mg，71%)。
[0034] 1h NMR(500MHz，Chloroform-dl)S6.51(s，lH)，6.22(s，lH)，5.72(s，lH)，4.16(s, lH),3.66(s,lH),3.44(s,4H),3.01(s,2H),2.80(s,2H),2.64(s,2H),2.04(s,lH),1.98(s, 1扣，1.85(3，1扣，1.59(3，1扣，1.28(3,3扣，0.97(3,6扣，0.93(3，細）.
[003引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl87.90(s),183.41(s),153.97(s),147.04(s),140.00 (s),136.12(s),134.31(s),130.73(s),128.20(s),118.51(s),68.82(s),55.57(s),53.94 (s),45.20(s),39.10(s),37.02(s),33.39(s),25.87(s),24.76(s),24.19(s),23.33(s), 22.88(s),22.25(s).
[0036] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C2姐36Ci2N03:480.2072;found:480.2070。
[0037]
[003引 Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物
[0039] 实施例6 Salviskinone A的0-(二(2-甲硫基乙基)胺基）乙基衍生物的合成
[0040] 将实施例5制备的Salviskinone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物（0.240邑， 0.5mmo 1)溶于15mL乙醇，室溫下加入甲硫醇钢(0.2Ig，3mmo 1)，反应物加热回流化。减压浓 缩除去溶剂，所得产物用硅胶柱层析进行纯化(石油酸/丙酬100:0.5，v/v)，得到黄色固体 物，即化合物 IV(〇.169g，67%)。
[004U 1h NMR(500MHz，Chloroform-dl)S6.48(s，lH)，6.41(s，lH)，5.65(s，lH)，4.12(s, 2H)，3.99(s，lH)，2.94(s，2H)，2.53(d，J=15.4Hz，8H)，1.99(s，lH)，1.94(s，6H)，1.90(s， 1扣，1.77(3，1扣，1.51(3，1扣，1.23(3,3扣，0.92(3,6扣，0.83(3，細）.
[0042] 1化 NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl87.81(s),183.42(s),154.08(s),147.28(s),139.90 (s),136.12(s),134.44(s),130.96(s),128.09(s),118.53(s),68.94(s),53.83(s),52.15 (s),45.21(s),37.24(s),33.29(s),31.87(s),25.85(s),24.86(s),24.38(s),23.21(s), 22.88(s),22.34(s),14.38(s).
[0043] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C2姐42N〇3S2:504.2606;found:504.2603。
[0044]
[0045] 实施例7组合物抗膜腺纤维化活性
[0046] 谢料
[0047] 1.1动物Wistar大鼠，雄性，体重180-200邑。
[004引 1.2组合物剂量:0.9mg/kg。
[0049] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的60mg化合物III的粉末和研磨之后过200 目网的40mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用满轮揽拌仪混合即得到lOOmg组合物， 使用时用水溶解运lOOmg的组合物即得到组合物的溶液。
[(K)加]2实验方法
[0051 ] 2.1造模方法:Wistar大鼠 W腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，连续2个月，可出现 膜脏腺细胞减少，间质内脂肪及结缔组织的增生。
[0化2] 2.2分组及给药方法
[0化3]模型大鼠随机分为模型组，组合物0.9mg/kg组、化合物III 0.9mg/kg组和化合物 IV 0.9mg/kg组，另设空白对照组。给药组于造模开始后给药，口服连续30天;60天时解剖动 物。
[0054] 2.3检测指标
[0化日]2.3.1实验结束时取膜脏称重。
[0化6] 2.3.2膜脏?脯氨酸含量测定取100mg样本在水中匀浆，ll(rC10N肥l中水解20 小时。HC1用氮气挥发，水解产物用双蒸水溶解后过滤。取0.5ml液体与3ml构祿酸憐酸缓冲 液(0.15M构祿酸加0.6M憐酸氨二钢)和0.5ml溶于9M憐酸的1M过舰酸混合。加1.75ml提取缓 冲液（5份甲苯：5份2-甲基-1-丙醇：2份1-丙醇），震荡30min，离屯、。组织相（0.6ml)与 EhrlichiS试剂混合放置15min。在565nm现憶吸收度，用4-径-1-脯氨酸制作标准曲线计算 浓度，含量Wug/g组织表示。
[0化7] 2.3.3组织学检查膜脏组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，染色后镜检。对纤维 化情况评分(0-3分）。
[005引3结果
[0059] 3.1组合物对大鼠膜脏脏器系数的影响
[0060] 实验结束时，将大鼠处死、解剖，称量体重和膜脏重并计算其与体重的比值(膜脏 脏器系数），结果见表1。组合物对膜脏脏器系数的影响，与模型组比较有显著性差异。化合 物ΠΙ和化合物IV对膜脏脏器系数的影响，与模型组比较无显著性差异。
[0061] 表 1
[0062]
[0063] *表示p<0.05,与模型组比较
[0064] 3.2膜脏径脯氨酸含量测定
[0065] 实验结束时，对各组大鼠进行肺部径脯氨酸含量测定，结果如表2。组合物对径脯 氨酸含量的影响，与模型组比较有显著性差异。化合物ΠΙ和化合物IV对径脯氨酸含量的影 响，与模型组比较无显著性差异。
[0066] 表 2
[0067]
[0068] *表示p<0.05,与模型组比较
[0069] 3.3组织学检查
[0070] 实验结束时，将大鼠处死、解剖;标本常规包埋、固定、肥染色，镜检。
[0071] 结果:模型组第60天可见膜导管周围严重炎症反应;嗜中粒细胞核淋己细胞浸润， 间质水肿，出血W及偶见膜泡细胞坏死;膜泡细胞消失位置及膜泡间出现纤维化。
[0072] 组合物可减少炎症反应和纤维化。评分结果见表3。组合物对评分的影响，与模型 组比较有显著性差异。
[0073] 表 3
[0074]
[0075] *表示p<0.05，与模型组比较;空白对照组的炎症细胞浸润和纤维化评分都为0.
[0076] 结论:本发明通过组合物对大鼠膜腺纤维化的影响，证实了组合物具有抗膜腺纤 维化的作用。因此，组合物可作为活性成分用于制备抗膜腺纤维化的药物。而化合物III和 化合物IV无此活性，不能用于制备抗膜腺纤维化的药物。
[0077] 实施例8本发明所设及组合物片剂的制备
[0078] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0079] 实施例9本发明所设及组合物胶囊的制备
[0080] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为60%和40%，2. 如权利要求1所还的纽/日、物的制爸力'/云，兵狩祉73:符彳七贫物m的粉木和化合物IV 的粉末按照质量百分数分别为60%和40%充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用，其特征为:所述组合物 逆转胰腺纤维化所引起的胰脏脏器系数下降。5. 如权利要求3所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用，其特征为:所述组合物
【文档编号】A61P29/00GK105998003SQ201610256648
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年4月22日
【发明人】王卓婷
【申请人】南京赋海澳赛医药科技有限公司