专利名称：包含生物表面活性剂的皮肤护理化妆料和皮肤粗糙改善剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及将生物表面活性剂或其预混合品用于皮肤护理/皮肤 粗糙改善，尤其是将生物表面活性剂用作化妆品，和进一步涉及皮肤 护理/皮肤粗糙改善的化妆料，其包含生物表面活性剂或其预混合品。 更具体地说，本发明涉及一种化妆料，其特征在于生物表面活性剂
是甘露糖赤藓糖醇脂(以下简称"MEL")，例如甘露糖赤藓糖醇脂A(以 下简称"MEL-A")，甘露糖赤藓糖醇脂B(以下简称"MEL-B")或甘 露糖赤藓糖醇脂C(以下简称"MEL-C");或甘露糖甘露糖醇脂(以下 简称"MML")。另外，本发明涉及一种皮肤粗糙改善剂。
背景技术：
粗皮病是指皮肤处于干燥状态，在皮肤上观察到角质细胞的鳞片 样脱落。这类粗皮病的形成归因于角质细胞间脂质例如胆固醇、神经 酰胺和脂肪酸的溶出，和可归因于紫外线和洗涤剂的角质细胞变性及 表皮细胞中增殖/角质化平衡紊乱而导致角质层渗透屏障形成不全。为 了预防或治疗前述粗皮病的目的，人们已经对向皮肤中补充角质间细 胞脂质成分或合成的角质间细胞脂质类似物进行了研究。
在细胞棘层和粒层中生物合成的片层(Lamella)颗粒在恰恰位于角 质层下面的细胞间隙中释放，延伸形成片层结构，并在细胞间隙中扩 展，产生前述的角质细胞间脂质。片层颗粒由糖基神经酰胺、胆固醇、 神经酰胺、磷脂等等组成；然而，在角质细胞间脂质中几乎很少包括 糖基神经酰胺。也就是说，人们相信，片层颗粒中的糖基神经酰胺被 P-葡糖脑苷脂酶水解，并转变为神经酰胺，而且这种神经酰胺形成片 层结构，导致作为角质细胞间脂质的角质层渗透屏障的形成改善，充 当预防粗皮病的屏障。据报道，神经酰胺增补剂可有效克服由于洗涤剂造成的皮肤粗糙，并且可高效地改善皮肤粗糙(非专利文献1)。
植物提取液主要由糖基神经酰胺组成，但仍然不是令人满意的神 经酰胺的替代物。在其合成期间有许多反应步骤，并且其大规模生产 成本很高。
MEL是酵母产生的天然表面活性剂，先前已经报道了其各种生理 作用(非专利文献2)。近来，已经发现了通过用甘露糖醇替代赤藓糖醇 获得的甘露糖甘露糖醇脂(MML)(专利文献1)。人们已经认识到它们在 外用制备物和化妆品中作为消炎剂和抗过敏剂(专利文献2)、作为治疗 秃顶和毛发生长药物(专利文献3)的用途以及它们的抗菌作用(专利文 献4)和表面张力降低作用(专利文献5);然而，MEL作为有效改善皮肤 粗糙的替代物的用途还是未知的。
专利文献1: JP 2005-104837-A 专利文献2: JP 2005-68015-A 专利文献3: JP 2003-261424-A 专利文献4: JP Sho-57-145896-A 专利文献5: JP Sho-61-205450 非专利文献l:皮肤与美容，36:210,2004
非专禾U文献2: Journal of Bioscience and Bioengineering 94:187，
200
发明内容
本发明解决的问题
神经酰胺可用作化妆品中的成分用于改善皮肤粗糙，但因为合成 产物或植物中的提取产物很昂贵，目前仅仅少量使用神经酰胺。本发 明的主要目的是提供皮肤的外用制备物，其使用微生物产生的生物表 面活性剂作为神经酰胺的替代物。也就是说，本发明提供了生物表面 活性剂，通过其改善了角质层渗透屏障的形成，由此获得粗皮病的改善，而且其是容易获得的脂质成分，作为皮肤的外用制备物。 解决问题的方法
由于对解决上述问题进行了彻底研究，人们发现，将生物表面活 性剂加入到皮肤粗糙模型(通过用十二烷基硫酸钠(SDS)脱脂的三维皮 肤模型制作)中之后，生物表面活性剂起到神经酰胺的替代物的作用； 通过在粗皮病部位(通过用SDS处理人的皮肤而产生)上应用，进一 步证明了生物表面活性剂的用途。简而言之，人们发现，生物表面活 性剂不仅可以作为乳化剂使用，而且还可以替代神经酰胺来使用；由 此完成本发明。
本发明涉及下列皮肤护理化妆料和皮肤粗糙改善剂。
(1) 皮肤护理化妆料，其包含至少一种生物表面活性剂。
(2) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其用于改善皮肤粗槌。
(3) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其用于通过表面活性剂的作用改善 皮肤粗糙。
(4) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其中生物表面活性剂是甘露糖赤藓 糖醇脂(MEL)和/或甘露糖甘露糖醇脂(MML)。
(5) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其中生物表面活性剂是选自甘露糖 赤藓糖醇脂A(MEL-A)、甘露糖赤藓糖醇脂B(MEL-B)和甘露糖赤藓糖 醇脂C(MEL-C)中的至少一种。
(6) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其中生物表面活性剂是甘露糖赤藓 糖醇脂B(MEL-B)。
(7) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其中生物表面活性剂是甘露糖赤藓 糖醇脂C(MEL-C)。
(8) 按照(1)的皮肤护理化妆料，其中生物表面活性剂是甘露糖赤藓 糖醇脂A(MEL-A)。
(9) 一种皮肤粗糙改善剂，其由至少一种生物表面活性剂组成。
本发明的效果在本发明中已经发现，可以使用诸如MEL-A、 MEL-B禾B MEL-C 的MELs以及MML (均为通过微生物产生的生物表面活性剂)来代替 神经酰胺，用于皮肤护理和皮肤粗糙改善。本发明的生物表面活性剂 可以通过培养微生物而大规模生产。通过使用该神经酰胺替代物，可 以预期皮肤粗糙改善/皮肤护理作用和乳化作用。由此，可以获得有效 改善皮肤粗糙的皮肤外用制备物。尤其是，MEL-B和MEL-C是高度亲 水性的，并且可以制备成稳定的乳化剂。生物表面活性剂可以以预混 合品的形式使用。
优选的是MELs，因为MELs可以通过溶解在油基或油溶成分中从 而组合在用于皮肤的化妆料和外用制备物中，并且可以通过将MEL引 入到脂质体中，以水溶液(例如皮肤化妆水，保湿液)形式制备，其可以 出色地引入至皮肤中。脂质体可以以非水溶液的形式使用。不必将所 有MELs都成形到脂质体中，可以将脂质体形式的MELs与片层形状 的MELs或单体MELs混合。
本发明的生物表面活性剂特别用作皮肤护理化妆料和用作改善皮 肤粗糙的化妆料；它也用作准药物和药物，例如皮肤病治疗剂，所述 皮肤病例如中度至重度的皮肤粗糙、痤疮、湿疹、皮脂缺乏症、老年 干皮病和皮肤瘙痒。
生物表面活性剂可以用作与洗涤用化妆料组合的成分，这是因为 除了皮肤粗糙改善/皮肤护理作用之外，生物表面活性剂还具有洗净性
附图的简要说明
图1是通过生存率(甲簪的吸光度)表示的MEL在皮肤粗糙模型 (使用三维皮肤模型制作，并用SDS处理)中的效果图2是表示当包含MEL-A的乳膏施加在用SDS处理而变粗糙的 人胳臂上部皮肤上时，角质层中水分回收效果的图；图3是通过生存率(甲簪的吸光度)表示的MEL-A、 MEL(OL) 和MEL(MY)在皮肤粗糙模型(使用三维皮肤模型制作，并用SDS处理) 中的效果图；MEL-A二通过用大豆油培养产生的MEL; MEL(MY^通过 用肉豆蔻酸甲酯培养产生的MEL; MEL-A(OL^通过用橄榄油培养产 生的MEL;
图4是通过生存率(甲簪的吸光度)表示的MEL-B和MEL-C在 皮肤粗糙模型(使用三维皮肤模型制作，并用SDS处理)中的效果图； MEL-B比MEL-A更能够提高皮肤粗糙的改善；在图中，MEL-A(OL) 是使用橄榄油作为原料制备的MEL-A， MEL-B(OL)是使用橄榄油作为 原料制备的MEL-B， MEL-A(SB)是使用大豆油作为原料制备的 MEL-A ， MEL-B(SB)是使用大豆油作为原料制备的MEL-B , MEL-C(SB)是使用大豆油作为原料制备的MEL-C;
图5是表示当包含MEL-B的乳膏施加在用SDS处理而变粗糙的 人胳臂上部皮肤上时，角质层中水分回收效果图6是表示MEL-B和MEL-C的分散稳定性的图。在水分散稳定 性方面，MEL-B和MEL-C比MEL-A更出色；几乎没有观察到浑浊变 化，这是因为，6小时之后仍保持稳定的悬浮状态；和
图7是表示当使用三维皮肤模型对MEL-B脂质体水溶液和 MEL-B悬浮液进行皮肤粗糙测试时的结果图，并检验了效果。
实施本发明的最佳方式
本文的"生物表面活性剂"是通过生物体所产生、具有表面活性 作用和乳化作用的物质的一般名称，其不仅显示出出色的表面活性和 高的生物降解性，并且因为具有各种生理作用，因而显示出不同于那 些合成表面活性剂的行为与功能的可能性。
"预混合品"是指除了加入功能性物质之外还加入了分散剂而得 到的物质，或者用溶剂稀释从而在制造化妆品时易于使用的物质。本 发明的生物表面活性剂可以以预混合品的形式提供，其中混合了分散 剂和溶剂，作为用于皮肤粗糙改善/皮肤护理的化妆料或化妆品添加剂。神经酰胺是在角质层中占据大约50%细胞间脂质的神经鞘脂类。 先前常常使用由牛脑获得的神经酰胺，但由于疯牛病的蔓延，需要用 于化妆品的从植物中获得的神经酰胺。
类神经酰胺作用是在皮肤角质层中主要细胞间成分神经酰胺的改 善肤色下降和化妆品适应性下降的作用。单独的生物表面活性剂具有 类神经酰胺的皮肤粗糙改善/皮肤护理作用；通过与神经酰胺组合，可 以提高生物表面活性剂的效果。
具有类神经酰胺作用的生物表面活性剂的一个优点是，可以容易 地大规模生产并可以以乳化剂形式使用。因此，本发明的生物表面活 性剂比现有的神经酰胺具有更多的用途。
对于生物表面活性剂，可以使用海藻糖脂质、鼠李糖脂、槐糖脂、 表面活性素、刺孢青霉酸、乳胶、MEL、 MML等等，但优选使用形成 片层结构的生物表面活性剂。在这些生物表面活性剂之中，优选MEL 和MML，更优选MEL=A、 MEL-B或MEL-C，特别优选MEL-B或 MEL-C。
形成片层结构的生物表面活性剂包括MEL和MML，特别包括 MEL。
在本发明的一个实施方案中，优选MELs包括由式(I)代表的 MEL-A、由式(II)代表的MEL-B和由式(III)代表的MEL-C三个类型； 可以单独或组合使用这些。更优选由式(I)代表的MEL-A和由式(II)代 表的MEL-B，最优选由式(II)代表的MEL-B。
MML由式(IV)代表(在式中，在甘露糖中的4位和6位的任何一个 或两个乙酰基可以被羟基取代)。Ri和Fe各自具有l至19个碳原子，优选1至17个，且更优选7 至15个。
Ri和W可以相同或不同，并且包括Q至Q9烷基、C2至Q9烯基、 C5至d9二烯基和Cs至C^三烯基。
在式(I)、 (11)、 (III)和(IV)中，W和R2的优选基团包括d至C19 烷基，例如CH3(CH2)6, CH3(CH2)8, CH3(CH2)10CH3(CH2)12, CH3(CH2)14, CH3(CH2)16和CH3(CH2)18。式(I)、 (II)或(III)中的MEL和式(IV)中的 MML，其中W和112是d至d9烷基，可以如下获得将原料例如饱 和羧酸或不饱合一元羧酸例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、月桂 酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸和棕榈油酸或其酯(单垸基酯， 单、二-、三甘油酯，或者包括这些饱和脂肪酸或不饱合单脂肪酸的油 脂)加入到培养基中。当不饱合羧酸例如油酸或棕榈油酸用作原料时， 引入不饱合羧酸或在其(3-氧化期间的产物，由此对于W和R2，烷基变 成主要部分，烯基变成少量部分。同样，式(I)、 (II)或(III)中的MEL和 式(IV)中的MML，其中W和112是C2至C,9烯基、Cs至<319二烯基或 Cs至d9三烯基，可以如下获得将原料例如具有两个或多个双键的亚 油酸、亚麻酸、花生四烯酸、EPA、 DHA或其酯(单垸基酯，单、二-、 三甘油酯，或者包括其高度不饱和脂肪酸的油脂)加入到培养基中。例 如，当亚油酸用作原料时，对于Ri和R2,烯基变成主要部分，二烯基 变成少量部分。当亚麻酸用作原料时，对于W和R2， 二烯基变成主要 部分，烯基或三烯基变成少量部分。
可以单独使用这些生物表面活性剂，或可以组合使用两种或多种 生物表面活性剂。<formula>formula see original document page 10</formula><formula>formula see original document page 11</formula>
在式(I)至(IV)中，W和I^可以相同或不同，并且表示氢原子；直 链或支链Q至d9、优选d至Cn、且更优选C7至ds烷基；直链或 支链C2至d9、优选C2至Cn、且更优选C7至ds烯基；直链或支链
Cs至d9、优选Cs至Cn、且更优选C7至ds二烯基；或者直链或支链 Cs至C^、优选Cs至Cn、且更优选Cs至C5三烯基。
对于制备生物表面活性剂的方法没有特别限制，可以任选地选择
使用微生物的发酵法。例如，可以按照标准方法，通过培养尸""&矽m" a,Wflrc"ca NBRC 10736来制备MELs(MEL-A， MEL-B禾Q MEL-C)。作 为微生物可以使用尸化wdoz;;ma a"^rc"cfl 、多形性酵母菌属 (尸^^/o^ma^.)等等。众所周知，可以从任何微生物中容易地得到 MEL混合物。使用硅胶色谱可以纯化MEL混合物，分离出MEL-A、 MEL-B禾口 MEL-C。 i^ewc/ozyma aw^3rc,Zca禾口 PseM^ozywa tewA:M6aewsf51 被认为是产MEL-B的微生物，可以使用这些微生物。尸^Mc/o矽mfl /w6"e/w^被认为是产MEL-C的微生物，可以使用这种微生物。对于 具有产MEL能力的微生物没有特别限制，根据目的可以适当地选择。
对于发酵制备生物表面活性剂的培养基，可以使用由N源(例如 酵母抽提物和蛋白胨)、C源(例如葡糖和果糖)、无机盐(例如硝酸 钠、磷酸氢二钾和硫酸镁七水混合物)组成的常见培养基，和可以使用向其中加入一或两种以上非水底物例如油脂如橄榄油、大豆油、向 日葵油、玉米油、芥花籽油和椰子油和烃例如液体石蜡和十四烷的那 些培养基。
可以任选设定发酵条件例如pH值、温度和时间周期，并且发酵之 后的培养基可以直接用作本发明的生物表面活性剂。如果需要的话， 发酵后，在本发明的实质没有受损的范围内，可以将任选的操作例如 过滤、离心、提取、纯化和灭菌施用于培养基，并且还可以稀释、浓 縮和干燥所得到的提取物。
对于用作原料的植物油脂没有特别限制，并且可以根据目的适当 地选择；这些可以包括大豆油、菜籽油、玉米油、花生油、棉籽油、 红花油、芝麻油、橄榄油和棕榈油。在它们之中，就提高生产效率(生 产量，生产速度和产率)而言，特别优选大豆油。可以单独使用或两种 或多种组合使用这些。
对于无机氮源没有特别限制，并且可以根据目的适当地选择；例 子包括硝酸铵、脲、硝酸钠、氯化铵和硫酸铵。
对于收集和纯化生物表面活性剂的方法没有特别限制，并且可以 根据目的适当地选择；例如通过将培养基离心以收集油分，并用有机 溶剂例如乙酸乙酯提取，浓縮，从而收集生物表面活性剂。
对于提取溶剂，可以单独使用通过水与有机溶剂例如醇(例如低级 醇例如甲醇、无水乙醇和乙醇或多元醇例如丙二醇和1，3-丁二醇)、酮
例如丙酮、乙醚、二瞎烷、乙腈、酯例如乙酸乙酯、二甲苯、苯和氯 仿混合获得的混合液体，或者将两种或多种混合液体组合使用，还可 以使用通过将各溶剂提取物组合获得的那些溶剂。
对于提取方法没有特别限制。通常，提取可以在室温至溶剂的沸点温度下、在常压下进行。提取之后，可以使用过滤或离子交换树脂 来吸取、脱色或纯化提取物，以制备溶液、软膏、凝胶或粉末。在很 多情况下，可以直接使用得到的产物，但如果需要的话，可以在不影 响产物效果的范围内对其进行纯化处理例如除臭处理或脱色。对于除 臭手段和脱色手段，可以使用活性炭柱，并且可以任选选择和进行通 常适用于提取物质的普通手段。如果需要的话，可以使用硅胶柱纯化 来获得高纯度生物表面活性剂。
对于表面活性剂，优选MEL-A、 MEL-B和MEL-C，更优选MEL-B 和MEL-C，特别优选MEL-B。
用作皮肤护理/皮肤粗糙改善的化妆料的本发明生物表面活性剂， 可以通过如上所述的微生物发酵来制备。
加入到化妆料中的生物表面活性剂的量，可以根据其所应用的化 妆料的类型而变化，不能一概而定，但可以处于皮肤粗糙改善/皮肤护 理作用没有被削弱的范围内。通常，相对于各种化妆料，优选的量是 0.001至50质量％，更优选0.1至20质量％，更加优选1至15质量％， 特别优选3至10质量％。本文中，加入到化妆料中的生物表面活性剂 的使用形式是任选的。例如，可以直接使用从培养基中提取的生物表 面活性剂，或可以使用高度纯化的生物表面活性剂，或可以悬浮在水 中或溶于有机溶剂例如乙醇中之后使用生物表面活性剂。
可通过在油溶性基质或油溶性成分中溶解，从而将生物表面活性 剂组合入化妆料中，并且优选在水系化妆料中以脂质体形式组合，所 述水系化妆料例如面部化妆水和保湿液。优选以脂质体形式组合该生 物表面活性剂，这是因为它与皮肤细胞融合，从而提高了它的吸收率。 对于制备脂质体的方法没有特别限制；可以使用任何公知的制备方法， 例如乙醇注入法或邦哈姆(Bangham)法。对于使用生物表面活性剂来制备本发明化妆料的方法没有特别限 制，可以将生物表面活性剂溶于非离子型表面活性剂、低级醇、多元 醇或天然油脂例如橄榄油、角鲨垸、脂肪酸或高级醇中。
非离子型表面活性剂的实例包括脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如，脱 水山梨糖醇单油酸酯，脱水山梨糖醇单异硬脂酸酯，脱水山梨糖醇单
月桂酸酯，脱水山梨糖醇单棕榈酸酯，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，脱 水山梨糖醇倍半油酸酯，脱水山梨糖醇三油酸酯，双甘油脱水山梨糖 醇五-2-乙基己酸酯，双甘油脱水山梨糖醇四-2-乙基己酸酯)；甘油/聚 甘油脂肪酸酯(例如，单棉子油脂肪酸甘油酯，甘油单芥酸酯，甘油倍 半油酸酯，甘油单硬脂酸酯，ot，a'-油酸焦谷氨酸甘油酯，单硬脂酸苹 果酸甘油酯)；丙二醇脂肪酸酯(例如，单硬脂酸丙二醇酯)；固化蓖 麻油衍生物；和甘油烷基醚。
基于POE的亲水性非离子型表面活性剂的实例包括POE-脱水山 梨糖醇脂肪酸酯(例如，POE-脱水山梨糖醇单油酸酯，POE-脱水山梨糖 醇单硬脂酸酯，POE-脱水山梨糖醇单油酸酯，POE-脱水山梨糖醇四油 酸酯)；POE-山梨糖醇脂肪酸酯(例如，POE-山梨糖醇单月桂酸酯，POE-山梨糖醇单油酸酯，POE-山梨糖醇五油酸酯，POE-山梨糖醇单硬脂酸 酯)；POE-甘油脂肪酸酯(例如，POE-甘油单硬脂酸酯，POE-甘油单异 硬脂酸酯，POE-甘油三异硬脂酸酯，POE-单油酸酯)；POE-脂肪酸酯(例 如，POE-二硬脂酸酯，POE-单二油酸酯，二硬脂酸乙二醇酯)；POE-烷基醚(例如，POE-月桂基醚，POE-油烯基醚，POE-硬脂酰醚，POE-山嵛基醚，POE-2-辛基十二烷基醚，POE-胆甾烷醇醚)；嵌段聚醚型(例 如，Pluronic); POE / POP-烷基醚(例如，POE / POP-鲸蜡基醚，POE / POP-2-癸基十四烷基醚，POE / POP-单丁基醚，POE / POP-氢化羊毛脂， POE / POP-甘油醚)；四-POE /四-POP-乙二胺縮合物(例如，季酮酸 (Tetronic)); POE-蓖麻油固化蓖麻油衍生物(例如，POE-蓖麻油，POE-固化蓖麻油，POE-固化蓖麻油单异硬脂酸酯，POE-固化蓖麻油三异硬 脂酸酯，POE-固化蓖麻油焦谷氨酸酯单异硬脂酸二酯，POE-固化蓖麻油马来酸酯)；POE-蜂蜡羊毛脂衍生物(例如，POE-山梨糖醇蜂蜡)；烷
醇酰胺(例如，棕榈油脂肪酸二乙醇酰胺，月桂酸单乙醇酰胺，脂肪酸
异丙醇酰胺)；POE-丙二醇脂肪酸酯；POE-烷基胺；POE-脂肪酸酰胺； 脂肪酸蔗糖酯；垸基乙氧基二甲基胺氧化物；和三油烯基磷酸酯。
低级醇的实例包括乙醇，丙醇，异丙醇，异丁醇和叔丁醇。
多元醇的实例包括二元醇(例如，乙二醇，丙二醇，三亚甲基二醇， 1，2-丁二醇，1，3-丁二醇，四亚甲基二醇，2，3-丁二醇，五亚甲基二醇， 2-亚丁基-l,4-二醇，己二醇，辛二醇)；三元醇(例如，甘油，三羟甲基 丙烷)；四元醇(例如，季戊四醇例如1，2，6-己三醇)；五元醇(例如，木 糖醇)；六元醇(例如，山梨糖醇，甘露糖醇)；多元醇聚合物(例如，二
乙二醇，二丙二醇，三乙二醇，聚丙二醇，四乙二醇，二甘油，聚乙
二醇，三甘油，四甘油，聚甘油)；二元醇烷基醚(例如，乙二醇单甲醚，
乙二醇单乙醚，乙二醇单丁醚，乙二醇单苯醚，乙二醇单已醚，乙二
醇单-2-甲基己基醚，乙二醇异戊醚，乙二醇苄基醚，乙二醇异丙醚，
乙二醇二甲醚，乙二醇二乙醚，乙二醇二丁醚)；二元醇垸基醚(例如，
二乙二醇单甲醚，二乙二醇单乙醚，二乙二醇单丁醚，二乙二醇二甲 醚，二乙二醇二乙醚，二乙二醇丁基醚，二乙二醇甲基乙基醚，三乙 二醇单甲醚，三乙二醇单乙醚，丙二醇单甲醚，丙二醇单乙醚，丙二
醇单丁醚，丙二醇异丙醚，二丙二醇甲醚，二丙二醇乙醚，二丙二醇
丁醚)；二元醇醚酯(例如，乙二醇单甲醚乙酸酯，乙二醇单乙醚乙酸酯， 乙二醇单丁醚乙酸酯，乙二醇单苯醚乙酸酯，乙二醇二己二酸酯，乙 二醇二丁二酸酯，二乙二醇单乙醚乙酸酯，二乙二醇单丁醚乙酸酯， 丙二醇单甲醚乙酸酯，丙二醇单乙醚乙酸酯，丙二醇单丙醚乙酸酯，
丙二醇单苯醚乙酸酯)；甘油单烷基醚(例如，鲛肝醇，鲨油醇，深海醇
(bathyl alcohol));糖和糖醇(例如，山梨糖醇，麦芽糖醇，麦芽三糖， 甘露糖醇，蔗糖，赤藓醇，葡糖，果糖，淀粉降解的糖，麦芽糖，木
糖，淀粉降解糖还原的醇)；glyS0lid;四氢糠醇；POE-四氢糠醇；POP-丁基醚；POP/POE-丁基醚；三聚氧化丙烯甘油醚；POP-甘油醚；POP-甘油醚磷酸酯；POP/POE-季戊四醇醚，和聚甘油。
油类的实例包括动植物油类，例如鳄梨油，橄榄油，芝麻油，山 茶油，月见草油，海龟油，澳洲坚果油，玉米油，貂油，菜籽油，蛋
黄油，杏仁油(parsic oil)，麦胚芽油，山茶花油，蓖麻油，亚麻籽油， 红花油，棉籽油，紫苏子油，大豆油，花生油，茶油，kaya籽油，米 糠油，桐油，荷荷巴油，可可脂，精馏椰子油，马油，棕榈油，椰子 仁油，牛脂，羊脂，猪脂，羊毛脂，鲸蜡，蜂蜡，加洛巴蜡，植物蜡， 小烛树蜡和角鲨垸，其固化油类，矿物油例如液体石蜡和凡士林，和 合成三甘油例如三棕榈酸甘油酯。
脂肪酸的实例包括月桂酸，肉豆蔻酸，棕榈酸，油酸，亚油酸， 亚麻酸，硬脂酸，山俞酸，12-羟基硬脂酸，异硬脂酸，十一碳炔酸， 麦珠子酸(tolic acid) ， 二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。高级醇的 实例包括月桂醇，鲸蜡醇，十八醇，山俞醇，肉豆寇醇，油醇，十六 醇十八醇混合物，荷荷巴醇，羊毛脂醇，鲨肝醇，2-癸基十四醇，胆固 醇，植物甾醇和异十八醇。合成酯的实例包括鲸蜡基辛酸酯，辛基十 二垸基肉豆蔻酸酯，肉豆蔻酸异丙酯，肉豆蔻酸肉豆蔻基酯，棕榈酸 异丙酯，硬脂酸丁酯，月桂酸己酯，油酸癸酯，二甲基辛酸，鲸蜡基 乳酸酯和肉豆蔻基乳酸酯。有机硅的实例包括链状聚硅氧垸，例如二 甲基聚硅氧垸和甲基苯基聚硅氧垸，环状聚硅氧垸例如十甲基环聚硅 氧垸，和硅树脂的三维网状结构。
本发明的皮肤护理化妆料包括乳液、美容液、乳膏、化妆水、皮 肤护理油、清洁油、浴油、或洗面液、卸妆液、香波和美体皂。
就容易使用性而言，本发明的MELs，特别是MEL-A、 MEL-B和 MEL-C，比神经酰胺更出色，这是因为它们容易制备、并且具有乳化 作用。实施例
在下面实施例中将更详细地描述本发明；然而，本发明不局限于 这些实施例。
(皮肤粗糙改善作用的评价方法)
按照试验皮肤(Test Skin) LSE-002或003试剂盒(Toyobo Co., Ltd.)
所附有的操作手册的要领取出组织。将确保药剂暴露部位的环附着至 LSE组织表面，将0.1。/。十二垸基硫酸钠(SDS)水溶液加入环中，然后将 其在室温下静置5分钟。随后，使用抽吸器除去SDS，使用移液管喷 洒3毫升测试(assay)培养基，以洗涤组织。通过这些操作，将角质层中 的保湿成分溶出，从而制得干燥皮肤。
随后，将作为试验物的净化水或化妆液各80y L(Fenatty油脂性化 妆液；FANCL Corporation)加在LSE(living skin叫uivalent，活皮肤等价 物)组织表面上，然后将其在室温下静置60分钟。然后，使用抽吸器将 试验物抽出并除去。随后，将LSE组织放置在没有放测试培养基的测 试盘上，在调节至37。C温度和15至20% RH相对湿度的(302培养箱中 培养24小时。然后，从C02培养箱中移出LSE组织，并按照LSE-003 试剂盒所附的操作手册的要领，将含有0.333克/毫升四唑盐(MTT)试剂 的测试培养基的1.2毫升混合溶液加入到测试盘中。随后，将测试盘中 的LSE组织在调节至温度37"C和相对湿度15至20% RH的032培养 箱中培养3小时。
用MTT处理之后，使用8mm(l)的活检钻取器(biopsypunch)，将包 括有聚碳酸酯薄膜的LSE组织的中心部钻取出，获得一块LSE组织， 然后将其转至小试验管中，向其中加入700jiL的0.04N盐酸-异丙醇， 在暗处提取两个小时。提取终止之后，搅拌提取物溶液并彻底地混合。 随后，在562 nm处，测定所提取的蓝紫色甲簪的吸光度。通过该方法 获得的吸光度与改善皮肤粗糙的效果紧密相关。由此，该方法可有效 用于定量、简单和经济地评价皮肤粗糙的改善。实施例1 : MEL的制备
将1环(loop)的fl"&,'c"ca NBRC 10736接种在种子培 养基(20毫升/ 500毫升Sakaguchi烧瓶)中，进行种菌培养。在3(TC进 行过夜培养。使得到的培养基作为种菌。种子培养基由下列组成4% 葡糖，0.3%NaNO3， 0.02%MgSCVH2O， 0.02% KH2P04和0.1%酵母提 取物。将上述种菌(75毫升)接种在1.5 L(5 L-罐)生产培养基中，在30 。C、 300 rpm(搅拌频率)和0.5 L / minO(空气)(使用5L-罐)的条件下培 养。生产培养基由3%大豆油、0.02% MgS04-H20、 0.02% KH2P04禾口 0.1%酵母提取物组成。将培养基(250毫升)离心(6，500 rpm， 30分钟)， 除去上清液，收集沉淀(菌体)。将乙酸乙酯(50毫升)加入到沉淀中，然 后将其彻底地搅拌和离心(8,500 rpm， 30分钟)，以从沉淀中分离上清 液。使用蒸发器浓縮上清液。通过使用硅胶并用己烷丙酮=5:1和己 烷丙酮=1:2进行洗脱，获得MEL级分(MEL-A、 MEL-B和MEL-C)。
实施例1A : MEL-B的制备
在500毫升Sakaguchi烧瓶中，将冷冻储存的尸.to以w6ae w&(0.2 亳升)接种在20毫升YM种子培养基中，并在26'C、 180rpm下培养过 夜，以制备种子种菌。在500毫升Sakaguchi烧瓶中，将种子种菌再次 接种在20毫升YM种子培养基中，并在26"、 180rpm下培养过夜， 作为种菌。在5L罐中，将种菌(20毫升)接种在2L的YM培养基中， 并在26。C、在300 rpm(1/4 VVM， 0.5 L空气/min)培养8天。将培养 基在7,900 rpm、在4。C离心60分钟，以从上清液中分离菌体(包含 MEL-B)。将乙酸乙酯(80毫升)加入到菌体级分中，然后将其摇动至彻 底悬浮，而后在7,900 rpm、在4'C离心30分钟。将等量的盐水加入到 得到的上清液中，搅拌混合物，产生乙酸乙酯层。将合适量的无水硫 酸钠加入到乙酸乙酯层中，然后将其静置30分钟，蒸发，得到纯化的 MEL-B的粗品。使用硅胶柱(200克)，将得到的纯化MEL-B的粗品(20 克)进一步纯化，并用己烷/丙酮洗脱，得到纯化MEL-B产物。
18实施例2
虽然大豆油在实施例1中的MEL制备中用作生产原料，但本例中 改为使用橄榄油作为生产原料来分离和纯化MEL-A、 MEL-B和 MEL-C，并用和实施例l一样的方法进行培养。此时获得的MEL级分 称为MEL-A(OL)、 MEL-B(OL)和MEL-C(OL)，以便将它们与实施例1 所获得的MEL进行区分。
实施例3
虽然大豆油在实施例1中的MEL制备中用作生产原料，但本例中 改为使用肉豆蔻酸甲酯作为生产原料来分离和纯化MEL-A、 MEL-B和 MEL-C，并用和实施例1 一样的方法进行培养。此时获得的MEL级分 称为MEL-A(MY)、 MEL-B(MY)和MEL-C(MY)，以便将它们与实施例 1所获得的MEL进行区分。
实施例4 :在皮肤粗糙模型中评价MEL-A
按如下制作使用三维皮肤模型的皮肤粗糙模型。通过用1% SDS 处理试验皮肤(LSE-002或003; Toyobo Co.， Ltd.)来除去角质层中的脂
质成分，从而制作皮肤粗糙模型。如下检验皮肤粗糙预防效果将溶
解了 MEL-A的橄榄油加在细胞上，将其放置过夜，随后使用可商业购 买的MTT试剂盒计算细胞生存率。如图1所示，以MEL-A的浓度依 赖性方式提高了细胞生存率，证明MEL-A起到了神经酰胺的替代物的 作用。同时，单独的橄榄油没有显示出这样的效果。
实施例5 :在皮肤粗糙模型中评价MEL-B
按如下制作使用三维皮肤模型的皮肤粗糙模型。通过用1% SDS 处理试验皮肤(LSE-002或003; Toyobo Co.， Ltd.)来除去角质层中的脂
质成分，从而制作皮肤粗糙模型。如下检验皮肤粗糙预防效果将溶
解了实施例1A所获得的MEL-B的橄榄油加在细胞上，将其放置过夜， 随后使用可商业购买的MTT试剂盒计算细胞生存率。如图4所示，以 MEL-B的浓度依赖性方式提高了细胞生存率，证明MEL-B起到了神经酰胺的替代物的作用。同时，单独的橄榄油没有显示出这样的效果。 实施例6 :在皮肤粗糙模型中评价MEL-C
按如下制作使用三维皮肤模型的皮肤粗糙模型。通过用1% SDS 处理试验皮肤(LSE-002或003， Toyobo Co., Ltd.提供)来除去角质层中 的脂质成分，从而制作皮肤粗糙模型。按如下检验皮肤粗糙预防效果 将溶解了实施例1所获得的MEL-C的橄榄油加在细胞上，将其放置过 夜，随后使用可商业购买的MTT试剂盒计算细胞生存率。如图4所示， 以MEL-C的浓度依赖性方式提高了细胞生存率，证明MEL-C起到了 神经酰胺的替代物的作用。同时，单独的橄榄油没有显示出这样的效 果。
实施例7 :在皮肤粗糙模型中评价MEL-A(OL)和MEL-A(MY) 与实施例4相似，按如下制作使用三维皮肤模型的皮肤粗糙模型。 通过用1% SDS处理试验皮肤(LSE-002或003， Toyobo Co.， Ltd.提供) 来除去角质层中的脂质成分，从而制作皮肤粗糙模型。如下检验皮肤 粗糙预防效果将溶解了 MEL-A(实施例1)、 MEL-A(OL)(实施例2)或 MEL-A(MY乂实施例3)的橄榄油加在细胞上，将其放置过夜，随后使用 可商业购买的MTT试剂盒计算细胞生存率。如图3所示，以MEL-A 的浓度依赖性方式提高了细胞生存率，证明MEL-A起到了神经酰胺的 替代物的作用。同时，单独的橄榄油没有显示出这样的效果。
实施例8 :在人皮肤粗糙试验中，含有MEL-A的乳膏的效果 通过将人上臂内侧与1% SDS溶液接触10分钟，使皮肤变粗糙。 随后立即施加上述含有5% MEL-A的乳膏，3小时之后，用温水洗涤 皮肤。用Kim毛巾擦去油分，使用斯基康(Skicon)测定皮肤角质层的水 分量。如图2所示，当施加含有MEL-A的乳膏时，观察到了水分含量 的恢复。
实施例9 :在人皮肤粗糙试验中，含有MEL-B的乳膏的效果通过将人上臂内侧与1% SDS溶液接触10分钟，使皮肤变粗糙。
随后立即施加含有5%MEL的上述乳膏，3小时之后，用温水洗涤皮肤。 用Kim毛巾擦去油分，使用斯基康(Skiccm)测定皮肤角质层的水分量。 如图5所示，当施加含有MEL-B或C的乳膏时，观察到了水分含量的 恢复。
实施例10 : MEL-B和MEL-C的分散稳定性试验 将MEL-B或MEL-C以10毫克/毫升的浓度加入到水中，搅拌并 悬浮。在650 nm处测定吸光度。结果示于图6中。由图6中的结果很 明显看出，MEL-B和MEL-C的分散稳定性特别出色。
实施例11 : MEL-B脂质体溶液的制备
如下使用乙醇注入法，制备MEL-B脂质体溶液。将10毫克MEL-B 溶于0.5毫升乙醇中，并加入1毫升预先升温至大约7(TC的蒸馏水。 将混合物略微摇动并混合，使用旋转蒸发器蒸馏出残余的乙醇。使用 水浴型超声波仪(W-220R; Honda Electronics Co.， Ltd.)，对其施加大约 5分钟的超声处理，而后加入蒸馏水，使总体积为l毫升。
如下使用邦哈姆(Bangham)法，制备MEL-B脂质体溶液。将10毫 克MEL-B溶于1毫升氯仿中，并使用旋转蒸发器蒸馏出溶剂，以制备 薄膜。向其中加入l毫升蒸馏水，使用水浴型超声波仪(W-220R; Honda Electronics Co., Ltd.),对其施加大约5分钟的超声处理。
如下制备MEL-B悬浮液。将1毫升蒸馏水加入到10毫克MEL-B 中，使用涡旋混合器进行搅拌，以制备悬浮液。
使用示于实施例4中的三维皮肤模型，对利用乙醇注入法、邦哈 姆(Bangham)法制备的MEL-B脂质体水溶液和MEL-B悬浮液进行皮肤 粗糙试验，并检验它们的效果。结果示于图7中。结果显示，利用乙 醇注入法、邦哈姆(Bangham)法中的任一种制备的MEL-B脂质体水溶液和悬浮液均显示出与MEL-B橄榄油溶液(MEL-B浓度1%)相同的
皮肤粗糙改善效果。
实施例12 :制备美容液
使用标准方法制备具有如下所示组成的美容液。作为对照物，也 使用标准方法制备不含MEL的美容液。
(组成) 山梨糖醇 二丙二醇 聚乙二醇1500 POE(20)油醇醚 脂肪酸蔗糖酯 甲基纤维素 MEL-B 净化水
实施例13 :制备乳液 使用标准方法制备具有如下所示组成的乳液。作为对照物，也使
用标准方法制备不含MEL的乳液。
(组成)(重量％)
甘油基醚1.5
脂肪酸蔗糖酯1.5
单硬脂酸脱水山梨糖醇酯1.0
角鲨垸7.5
二丙二醇5.0
MEL-B5.0
净化水至总量100%
(重量％)
4.0 6.0 5.0 0.5 0.2 0.2 5.0
至总量100%实施例14 :制备乳膏
使用标准方法制备具有如下所示组成的乳膏。作为对照物，也使 用标准方法制备不含MEL的乳膏。
(组成) (重量％)
丙二醇 6.0
邻苯二甲酸二丁酯 19.0
硬脂酸 5.0
甘油一硬脂酸酯 5.0
单硬脂酸脱水山梨糖醇酯 12.0
聚乙撑脱水山梨糖醇单硬脂酸酯 38.0
乙二胺四乙酸钠 0.03
MEL-B 5.0 净化水至总量100%
实施例15 :制备化妆用油
(组成) (重量％)
橄榄油 90 MEL-A 10
实施例16 :皮肤护理油
(组成) (重量％)
橄榄油 50
MEL-C 30
角鲨烷 10
芝麻油 10
实施例17 :皮肤护理油
(组成) (重量％)
橄榄油 39MEL陽C 59
芝麻油 1
熏衣草油 0.4
迷迭香油 0.4
鼠尾草油 0.1
5-生育酚 0.1
实施例18 :清洁油
(组成) (重量％)
橄榄油 40
MEL-B 28
甲基苯基聚硅氧烷 2
乙醇 0.3
异硬脂酸 0.1
2-乙基己酸鲸蜡酯 20
聚乙二醇二异硬脂酸酯 2
棕榈油脂肪酸二乙醇酰胺 0.1
聚乙二醇单异硬脂酸酯 2
5-生育酚 0.1
净化水 1
芳香剂 适量
实施例19 :浴油
(组成) (重量％)
橄榄油 25
MEL-A 25
液体石蜡 25
新戊二醇二辛酸酯 10
聚氧乙烯油烯基醚 10
净化水 0.55-生育酚 0.1 芳香剂 适量
工业实用性
按照本发明，通过用本发明的MEL-A、 MEL-B或MEL-C补充失 去的神经酰胺可以防止皮肤粗糙，所述MEL-A、 MEL-B或MEL-C不 仅用作乳化剂、而且还可以用作神经酰胺的替代物，由于它们比神经 酰胺更容易制备，因此预计其对产业有极大贡献。
权利要求
1.一种皮肤护理化妆料，其包含至少一种生物表面活性剂。
2. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其用于改善皮肤粗糙。
3. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其用于通过表面活性剂的 作用改善皮肤粗糙。
4. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其中所述生物表面活性剂 是甘露糖赤藓糖醇脂(MEL)和/或甘露糖甘露糖醇脂(MML)。
5. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其中所述生物表面活性剂 是选自甘露糖赤藓糖醇脂A(MEL-A)、甘露糖赤藓糖醇脂B(MEL-B)和 甘露糖赤藓糖醇脂C(MEL-C)中的至少一种。
6. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其中所述生物表面活性剂 是甘露糖赤藓糖醇脂B(MEL-B)。
7. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其中所述生物表面活性剂 是甘露糖赤藓糖醇脂C(MEL-C)。
8. 根据权利要求1的皮肤护理化妆料，其中所述生物表面活性剂 是甘露糖赤藓糖醇脂A(MEL-A)。
9. 一种皮肤粗糙改善剂，其由至少一种生物表面活性剂组成。
全文摘要
本发明涉及用于皮肤粗糙改善/皮肤护理的化妆料，其包含生物表面活性剂，特别是MEL-A、MEL-B或MEL-C。
文档编号A61Q19/00GK101316574SQ200680044160
公开日2008年12月3日 申请日期2006年11月21日 优先权日2005年11月25日
发明者井村知弘, 北川优, 北本大, 山本周平, 曽我部敦, 森田友岳, 福冈德马, 铃木道子 申请人:东洋纺织株式会社;独立行政法人产业技术综合研究所