实验条件摸索过程如图4至图5所示，具体步骤如下:
[0034](I)合成13nm金纳米颗粒(AuNP):在圆底烧瓶中加入10mL 0.01 % (w/w)氯金酸，在连续搅拌的条件下煮沸回流，勾速加入ImL 3% (w/w)梓檬酸钠，继续搅拌煮沸30min合成 13nm AuNPs ο
[0035](2)利用巯基聚乙二醇mPEG-SH在13nm AuNP表面固定拉曼报告分子:在ImL合成好的13nm AuNPs溶液中加入50 μ L 20 μ M mPEG-SH和50 μ L 2mM结晶紫，室温混匀20min，14000rpm离心lOmin，去除950 μ L上清液，得沉淀，即修饰有拉曼报告分子的核心(core)。
[0036](3)在普朗尼克F127存在下，在核心表面包裹银壳层:用ImL 0.1% (w/w)普朗尼克F127重悬拉曼报告分子修饰的金纳米颗粒，加入40 μ L 1mM硝酸银和100 μ L 4mM对苯二酸，室温混勾30min，得coreOAg。
[0037](4)用氯金酸刻蚀银壳层，形成间隙含有拉曼报告分子的金银合金包裹金纳米颗粒:向ImL银壳层包裹的核心溶液中加入64 μ L 10mM抗坏血酸和200 μ L 8mM氯金酸，室温混匀反应30min后，95°C退火30min合成间隙含有拉曼报告分子的强拉曼信号纳米颗粒(coreOAgAu)。
[0038]用透射电镜和紫外-可见分光光度计表征合成好的强拉曼信号的纳米颗粒(如图2所示)，用线性元素分析强拉曼信号的纳米颗粒间隙的大小(如图3A和B)，用X射线光电子能谱分析颗粒表面金元素和银元素(如图3C和D)。
[0039]取相同浓度不同纳米颗粒(2.5nM)于样品池中，盖上盖玻片，用拉曼光谱仪(Xp1RA, Jobin-Yvon公司，法国)测定样品的拉曼光谱。不同激光的仪器条件:532nm激光(功率密度:14.7mW/ym2，采集时间:1s) ;638nm激光(功率密度:21mW/μ m2，采集时间:Is) ;785nm激光(功率密度:50mW/μ m2，采集时间:1s)，结果如图5所示。
[0040]在638nm激光(功率密度:21mW/ μπι2，采集时间:1s)条件下，测定不同拉曼报告分子作为内标的coreOAgAu纳米颗粒的标准工作曲线，表征拉曼信号强度与纳米颗粒浓度的线性关系，证明coreOAgAu纳米颗粒适合于定量检测(如图6)。结晶紫作为拉曼报告分子的纳米颗粒用1621cm 1的峰强作为颗粒拉曼信号强度，如图4、图5A、图5B和图6A所示；罗丹明作为拉曼报告分子的纳米颗粒用1650cm1的峰强作为颗粒拉曼信号强度，如图6B所不O
[0041]本领域普通技术人员可知，本发明的成分和参数在下述范围内变化时，仍能够得到与上述实施例相同或相近的技术效果，皆属于本发明的保护范围:
[0042](I)将氯金酸溶液在连续搅拌下煮沸回流，同时匀速加入柠檬酸钠溶液以还原氯金酸形成粒径12?14nm金纳米颗粒，得金纳米颗粒溶液，其中氯金酸溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为100:1?1.5，且氯金酸溶液中含有0.01?0.02*1:%的氯金酸，梓檬酸钠溶液中含有2.8?3.5wt%的柠檬酸钠；
[0043](2)在上述金纳米颗粒溶液中加入巯基聚乙二醇溶液和拉曼报告分子(包括结晶紫、碱性品红和罗丹明中)溶液，室温下混匀反应20?25min，13000?15000rpm离心10?12min，去上清液，留沉淀，得到修饰有拉曼报告分子的核心，其中巯基聚乙二醇的分子量为0.75?20kDa，巯基聚乙二醇在该步骤的反应体系中的浓度为0.2?5 μΜ(优选0.5?
2μ Μ)，拉曼报告分子在该步骤的反应体系中的浓度为20?500 μ M (优选50?200 μ Μ)，巯基聚乙二醇与拉曼报告分子的质量比为2.68?67:100，巯基聚乙二醇和拉曼报告分子的总质量与金纳米颗粒的质量比为0.176?4.4:100 ;
[0044](3)用普朗尼克F127溶液重悬上述修饰有拉曼报告分子的核心，再加入硝酸银溶液和对苯二酚溶液，室温混匀反应30?40min，以在上述核心上包裹银壳层，上述普朗尼克F127溶液中普朗尼克F127的浓度为0.1?1.0wt% (优选0.1?0.5wt% )，对二苯酚在该步骤的反应体系中的浓度为0.4?5mM (优选0.4?2mM)，硝酸银在该步骤的反应体系中的浓度为0.08?2mM(优选0.2?0.8mM)；
[0045](4)向步骤(3)制得的物料中加入抗坏血酸溶液和氯金酸溶液，室温混匀反应30?40min后，80?95°C退火10?50min (优选20?40min)，即得间隙含有拉曼报告分子的所述强拉曼信号的纳米颗粒，其中抗坏血酸在该步骤的反应体系中的浓度为6.4?15mM(优选6.4?12.8mM)，氯金酸在该步骤的反应体系中的浓度为0.32?8mM(优选
0.8 ?3.2mM)。
[0046]以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
【主权项】
1.一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)将氯金酸溶液在连续搅拌下煮沸回流，同时匀速加入柠檬酸钠溶液以还原氯金酸形成粒径12?14nm金纳米颗粒，得金纳米颗粒溶液，其中氯金酸溶液与柠檬酸钠溶液的体积比为100:1?1.5，且氯金酸溶液中含有0.01?0.02*1:%的氯金酸，梓檬酸钠溶液中含有2.8?3.5wt%的柠檬酸钠； (2)在上述金纳米颗粒溶液中加入巯基聚乙二醇溶液和拉曼报告分子溶液，室温下混勾反应20?25min，13000?15000rpm离心10?12min，去上清液，留沉淀，得到修饰有拉曼报告分子的核心，其中巯基聚乙二醇的分子量为0.75?20kDa，巯基聚乙二醇在该步骤的反应体系中的浓度为0.2?5 μ M，拉曼报告分子在该步骤的反应体系中的浓度为20?500 μΜ，巯基聚乙二醇与拉曼报告分子的质量比为2.68?67:100，巯基聚乙二醇和拉曼报告分子的总质量与金纳米颗粒的质量比为0.176?4.4:100 ; (3)用普朗尼克F127溶液重悬上述修饰有拉曼报告分子的核心，再加入硝酸银溶液和对苯二酚溶液，室温混匀反应30?40min，以在上述核心上包裹银壳层，上述普朗尼克F127溶液中普朗尼克F127的浓度为0.1?1.0wt%，对二苯酚在该步骤的反应体系中的浓度为0.4?5mM，硝酸银在该步骤的反应体系中的浓度为0.08?2mM ; (4)向步骤(3)制得的物料中加入抗坏血酸溶液和氯金酸溶液，室温混匀反应30?40min后，80?95°C退火10?50min，即得间隙含有拉曼报告分子的所述强拉曼信号的纳米颗粒，其中抗坏血酸在该步骤的反应体系中的浓度为6.4?15mM，氯金酸在该步骤的反应体系中的浓度为0.32?8mM。2.如权利要求1所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述拉曼报告分子包括结晶紫、碱性品红和罗丹明。3.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述巯基聚乙二醇在步骤(2)的反应体系中的浓度为0.5?2 μΜ。4.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述拉曼报告分子在步骤(2)的反应体系中的浓度为50?200 μ Μ。5.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤⑶中普朗尼克F127溶液中普朗尼克F127的浓度为0.1?0.5wt%。6.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述对二苯酚在步骤(3)的反应体系中的浓度为0.4?2mM。7.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述硝酸银在步骤(3)的反应体系中的浓度为0.2?0.8mM。8.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述抗坏血酸在步骤(4)的反应体系中的浓度为6.4?12.8mM。9.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述氯金酸在步骤(4)的反应体系中的浓度为0.8?3.2mM。10.如权利要求1或2所述的一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，其特征在于:所述步骤(4)的退火时间为20?40min。
【专利摘要】本发明公开了一种强拉曼信号的纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：(1)将氯金酸溶液在连续搅拌下煮沸回流，同时匀速加入柠檬酸钠溶液以还原氯金酸形成粒径12～14nm金纳米颗粒，得金纳米颗粒溶液；(2)在上述金纳米颗粒溶液中加入巯基聚乙二醇溶液和拉曼报告分子溶液，室温下混匀反应，得到修饰有拉曼报告分子的核心；(3)用普朗尼克F127溶液重悬上述修饰有拉曼报告分子的核心，再加入硝酸银溶液和对苯二酚溶液，以在上述核心上包裹银壳层；(4)向步骤(3)制得的物料中加入抗坏血酸溶液和氯金酸溶液，室温混匀反应后，80～95℃退火，即得所述强拉曼信号的纳米颗粒。本发明的制备方法与传统方法相比，此法廉价、简单、高效、通用性强。
【IPC分类】B22F9/24, G01N21/65, B82Y40/00
【公开号】CN105108171
【申请号】CN201510616713
【发明人】杨朝勇, 李久兴, 祝冰青, 马艳丽, 严锦懋, 阮庆宇, 林冰倩, 周雷激, 朱志
【申请人】厦门大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月24日