一种含有聚谷氨酸的高浓度微生物菌剂及其制备方法与应用与流程

文档序号:12102988阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种含有聚谷氨酸的高浓度微生物菌剂,其特征在于,组分如下,均为重量份:

混合微生物发酵粉15~25份、轻质碳酸钙55~70份、聚谷氨酸5~10份、硫酸镁3~5份、硼酸3份、硫酸锌2份;

所述聚谷氨酸为聚-γ-谷氨酸,由D型谷氨酸和L型谷氨酸通过酰胺键连接,每个谷氨酸都留有一个游离的羧基。

2.如权利要求1所述的高浓度微生物菌剂,其特征在于,所述混合微生物发酵粉中含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、胶质芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的活菌数量之比为1:(2.5~3.5):(0.5~1.5):(0.5~1.5):(1.5~2.5),有效活菌总数达到≥1000亿个/克,其中每种菌有效活菌数不低于50亿个/克。

3.如权利要求1所述的高浓度微生物菌剂,其特征在于,所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心,菌种编号ACCC 10242;侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心,菌种编号ACCC11079;地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心,菌种编号ACCC 02002;胶质芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)来源于中国农业微生物菌种保藏管理中心ACCC 10012;巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心,菌种编号CICC 21694。

4.如权利要求1所述的高浓度微生物菌剂,其特征在于,所述聚谷氨酸的分子量≥100万。

5.权利要求1所述含有聚谷氨酸的高浓度微生物菌剂的制备方法,其特征在于,步骤为:将混合微生物发酵粉、轻质碳酸钙、聚谷氨酸、硫酸镁、硼酸、硫酸锌按比例混合,即得。

6.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,混合微生物发酵粉按如下方法制备:

(1)将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)经斜面培养后,制得斜面种A;将斜面种A转接于液体种子培养基中,经摇瓶培养,制得液体种子A;

将制得的液体种子A接种于液体发酵培养基中,控制pH值7~8、通气比为1∶(0.5~1)、转速100~200转/分,在30~37℃培养36~48h,制得发酵液A;然后将发酵液A按6%~10%的质量比转接至固体发酵培养基中,在温度35~38℃,罐压0.02~0.06Mpa条件下发酵培养至镜检芽孢率为90%时,经压滤、闪蒸、烘干粉碎,制得菌粉A;

(2)将侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)经斜面培养后,制得斜面种B;将斜面种B转接于液体种子培养基中,经摇瓶培养,制得液体种子B;

将制得的液体种子B接种于液体发酵培养基中,控制pH值6~7、通气比为1∶(0.5~1)、转速100~200转/分,在30~37℃培养36~48h,制得发酵液B;然后将发酵液B按6%~10%的质量比转接至固体发酵培养基中,在温度30~35℃,罐压0.02~0.06Mpa条件下发酵培养至芽孢率为90%时,经压滤、闪蒸、烘干粉碎,制得菌粉B;

(3)将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)经斜面培养后,制得斜面种C;将斜面种C转接于液体种子培养基中,经摇瓶培养,制得液体种子C;

将制得的液体种子C接种于液体发酵培养基中,控制pH值7~8、通气比为1∶(0.3~0.8)、转速80~150转/分,在30~37℃培养36~48h,制得发酵液C然后将发酵液C按6%~10%的质量比转接至固体发酵培养基中,在温度32~40℃,罐压0.02~0.06Mpa条件下发酵培养至芽孢率为90%时,经压滤、闪蒸、烘干粉碎,制得菌粉C;

(4)将胶质芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)经斜面培养后,制得斜面种D;将斜面种D转接于液体种子培养基中,经摇瓶培养,制得液体种子D;

将制得的液体种子D接种于液体发酵培养基中,控制pH值7~7.5、通气比为1∶(0.3~0.8)、转速190~250转/分,在30~37℃培养36~48h,制得发酵液D;然后将发酵液D按6%~10%的质量比转接至固体发酵培养基中,在温度28~36℃,罐压0.02~0.06Mpa条件下发酵培养至芽孢率为90%时,经压滤、闪蒸、烘干粉碎,制得菌粉D;

(5)将巨大芽孢杆菌(Paenibacillus mucilaginosus)经斜面培养后,制得斜面种E;将斜面种E转接于液体种子培养基中,经摇瓶培养,制得液体种子E;

将制得的液体种子E接种于液体发酵培养基中,控制pH值8~9、通气比为1∶(0.5~1)、转速100~280转/分,在30~37℃培养36~48h,制得发酵液E;然后将发酵液E按6%~10%的质量比转接至固体发酵培养基中,在温度25~35℃,罐压0.02~0.06Mpa条件下发酵培养至芽孢率为90%时,经压滤、闪蒸、烘干粉碎,制得菌粉E;

(6)将步骤(1)至(5)制备的菌粉A、菌粉B、菌粉C、菌粉D、菌粉E按照质量比1:(2.5~3.5):(0.5~1.5):(0.5~1.5):(1.5~2.5)混合,制得混合微生物发酵粉。

7.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)至(5)中,斜面培养条件为:在30~37℃的温度下,在斜面培养基中培养24~48h;所述斜面培养基每升组分如下:

蛋白胨6~9g,酵母粉3~5g,牛肉膏2~4g,氯化钠3~5g,琼脂10~25g,磷酸二氢钾0.5~1g,磷酸氢二钾0.5~1g;

优选的,所述步骤(1)至(5)中,摇瓶培养条件为:在30~37℃条件下,培养36~48h;所述液体种子培养基每升组分如下:

蛋白胨6~9g,葡萄糖5~8g,酵母粉3~5g,牛肉膏2~4g,氯化钠3~5g,磷酸二氢钾0.5~1g,磷酸氢二钾0.5~1g。

8.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)至(5)中,液体发酵培养基每升组分如下:

玉米粉10~15g,豆饼粉10~15g,葡萄糖5~10g,硫酸铵5~10g,酵母粉3~5g,磷酸二氢钾0.5~0.8g,硫酸镁0.1~0.25g,硫酸锰0.1~0.25g,氯化亚铁0.1~0.2g,调整pH值7~8;

优选的,所述步骤(1)至(5)中,固体发酵培养基组分如下,均为重量份:

麸皮20~30份,豆饼粉10~20份,玉米粉10~20份,牛肉膏10~15份,蛋白胨5~10份,氯化钠0.5~1份,硫酸铵0.5~1份,碳酸钙0.2~0.5份,磷酸二氢钾0.05~0.1份,硫酸镁0.01~0.025份,硫酸锰0.01~0.025份,氯化亚铁0.01~0.02份,硫酸锌0.01~0.02份,按水料质量比1∶(1∶1~1.2)比例加水,调pH值7~8。

9.权利要求1所述含有聚谷氨酸的高浓度微生物菌剂在改良土壤中的应用。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,步骤如下:

整地时将含有聚谷氨酸的高浓度微生物菌剂均匀撒在土壤中,通过翻地与土壤搅拌均匀;或者,浇水冲施;每亩施用量为3~5kg。

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