用于治疗氧化应激的螯合纳米铈氧化物的制作方法_3

文档序号:9650040阅读:来源:国知局
acisternal)、角膜内、冠状牙齿内(intracornal-dental)、冠状动脉内、海绵 体内(intracorporus cavernosum)、皮内、椎间盘内、管内、十二指肠内、硬膜内、表皮内、 食管内、胃内、齿龈内、回肠内、病灶内、管腔内、淋巴管内、髓内、脑膜内、肌肉内、眼内、卵 巢内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、窦内(intrasinal)、脊柱内、滑膜内、腱内 (intratendinous)、睾丸内、鞘内、胸内、小管内、肿瘤内、鼓室内、子宫内、血管内、静脉内、 静脉内推注、静脉内滴注、心室内、膀胱内、玻璃体内、离子电渗、冲洗、经喉、经鼻、鼻饲、封 闭敷裹技术(occlusive dressing technique)、眼用、经口、经口咽、肠胃外、经皮、关节周 围、硬膜外、神经周围、牙周、经直肠、经呼吸(吸入)、眼球后、经软组织、蛛网膜下、结膜下、 皮下、舌下、黏膜下、局部、经皮、经乳腺、经黏膜、经胎盘(transplacenta)、经气管、经鼓膜、 经输尿管、经尿道、经阴道、以及任意其他或未指定的途径。
[0053] 在另一些实施方案中,使本发明的纳米铈氧化物颗粒保留在医疗装置或假体(例 如,套管、导管或支架)中或其表面上,从而在短时间或长时间内局部或全身地减轻炎症。
[0054] 在多个实施方案中,本发明的纳米铈氧化物颗粒以本领域已知的任意合适的形式 递送,所述形式包括但不限于,混悬剂、凝胶剂、片剂、肠衣片剂、负载脂质体、散剂、栓剂、难 恪剂(infusible)、锭剂、乳膏剂、洗剂、油膏(salve)或吸入剂。
[0055] 在多个实施方案中,本发明的纳米铈氧化物颗粒与其他可药用物质组合,所述物 质例如但不限于:水、盐、缓冲剂、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、糖、人或牛血清白蛋白、脂质、药 物、着色剂、矫味剂、黏合剂、胶、表面活性剂、填充剂或本领域已知的任意赋形剂。
[0056] 在至少一个实施方案中,包含本发明纳米铈氧化物颗粒的载剂在施用之前进行灭 菌。
[0057] 在另一些实施方案中,使细胞或细胞培养物与本发明纳米铈氧化物颗粒接触。接 触可通过体内或体外方法通过暴露细胞或细胞培养物来实施,其中后一种方法包括将经处 理细胞重新引入对象中,例如最初从其获得所述细胞的对象。在多个实施方案中,所述细胞 本质上是原核的或真核的。在至少一个实施方案中,将经处理细胞用于生产用于制药工业 中的蛋白质(一般称为生物制品),例如但不限于抗原、抗体和疫苗。在另一个实施方案中, 将经处理的细胞用于发酵工艺。
[0058] 通过以下实施例进一步举例说明了本发明,所述实施例并不旨在以任何方式限制 本发明。
[0059] 实验部分
[0060] 纳米颗粒散射和尺寸评估
[0061] 通过评估当红激光笔灯照射时相对于来自纯溶剂样品的散射量由分散体表现 出的Tyndell散射度进行了颗粒分散体的简单定性表征。使用配备有石英杯(quartz cuvette)的 Brookhaven 90Plus 颗粒尺寸分析仪(Brookhaven Instruments Corp., Holtzville,New York,U.S. Α·)通过动态光散射(dynamic light scattering,DLS)进行 了纳米颗粒分散体颗粒尺寸的定量评估。所报道的DLS尺寸是对数加权参数。
[0062] 纳米颗粒电荷评估
[0063] 通过使用来自 Malvern Instruments 的 Zetasizer Nano ZS 测量 ζ 电位进行了 纳米颗粒电荷的定量评估。
[0064] 实施例1 :使用铈和柠檬酸制备纳米颗粒
[0065] 向带有磁力搅拌棒的800ml玻璃烧杯中引入500ml高纯(high purity,HP)水。 然后将水加热至70°C,并将4. 83克柠檬酸(CA)溶解在其中。添加氢氧化铵(28%至 30% )以将溶液的pH调节至约8. 5。将反应容器的温度升高至约80°C。将10. 0克量的 Ce (NO3) 3 · 6 (H2O)溶解于30ml HP水中,并在几分钟内将该溶液缓缓添加至搅拌的反应混 合物中。以这种方式将等摩尔量的CA和Ce添加到反应混合物中。然后在几分钟内将包含 4. 8ml 50% H2O2 〇1202与铈的摩尔比为3. 0)的50ml溶液缓慢添加到三价铈离子和柠檬酸的 等摩尔量反应混合物中。覆盖反应产物,然后再加热1小时,得到透明的黄色悬液。在搅拌 下冷却之后,通过渗滤将直接形成的纳米颗粒分散体洗涤至离子电导率小于约lOmS/cm,以 除去过量的盐。
[0066] 最终产物分散体是透明的黄色液体,当用低强度激光束照射时其表现出高度的 Tyndall散射,表明其包含良好分散的胶体颗粒。通过动态光散射进行的颗粒尺寸分析表明 平均流体动力学直径为7. SnnuX射线衍射(X-ray diffraction,XRD)谱分析表明存在与以 立方萤石结构为特征的CeO2 (PDF#34-394,方铺矿)结构不同的主晶相。通过使用Scherrer 法分析(220)峰宽确定了平均微晶尺寸为2. Onm。
[0067] 实施例2 :用铈、柠檬酸和DCTA制备纳米颗粒
[0068] 向带有磁力搅拌棒的600ml玻璃烧杯中引入500ml高纯(HP)水。将2. 41克量的 柠檬酸(CA)添加到反应混合物中。将4. 264克量的1,2_二氨基环己烷四乙酸单水合物 (DCTA)连同约6ml的氢氧化铵一起溶解于水中以帮助溶解,并添加到反应混合物中。添加 氢氧化铵(28 %至30 % )以将溶液的pH调节至约8. 5。添加10. 0克量的Ce (NO3) 3 ·6 (H2O)。 CA/DCTA/Ce的摩尔比例为0. 5/0. 5/1. 0。然后将IOml包含4. 8克50% H2O2的溶液(H2O2与 铈离子的摩尔比为3.0)缓慢添加到铈、柠檬酸和DCTA溶液混合物中。然后在80°C下将反 应产物加热1小时。在搅拌下冷却之后,通过渗滤将直接形成的纳米颗粒分散体洗涤至离 子电导率小于约10mS/cm,以除去过量的盐。
[0069] 冷却之后,最终产物分散体是透明的浅橙色液体,在用低强度激光束照射时,其表 现出高度的Tyndall散射,表明其包含分散良好的胶体颗粒。通过动态光散射进行的颗粒 尺寸分析表明其流体动力学直径为2. 6nm,多分散度为0. 227。X射线衍射(XRD)谱分析表 明存在与以立方萤石结构为特征的CeO2(PDF#34-394,方铈矿)结构不同的主晶相。通过使 用Scherrer法分析(220)峰宽确定了平均微晶尺寸为1.9nm。
[0070] 实施例3 :使用铈、柠檬酸和NTA制备纳米颗粒
[0071] 向带有磁力搅拌棒的600ml玻璃烧杯中引入500ml高纯(HP)水。将2. 41克量 的柠檬酸(CA)添加到反应混合物中。将3. 129克量的2, 2',2"-次氨基三乙酸(NTA,CAS No. 139-13-9)连同氢氧化铵一起溶解于水中以帮助溶解,并添加到反应混合物中。添加氢 氧化铵(28%至30% )以将溶液的pH调节至约8. 5。添加10. 0克量的Ce (NO3)3 · 6 (H2O)。 CA/NTA/Ce的摩尔比例为0. 5/0. 5/1. 0。然后将IOml包含4. 8克50% H2O2的溶液(H2O2与 铈离子的摩尔比为3.0)缓慢添加到铈、柠檬酸和NTA溶液混合物中。然后在80°C下将反应 产物加热1小时。在搅拌下冷却之后,通过渗滤将直接形成的纳米颗粒分散体洗涤至离子 电导率小于约l〇 mS/cm,从而除去过量的盐。
[0072] 最终产物分散体是透明的黄色液体,在用低强度激光束照射时,其表现出高度的 Tyndall散射,表明其包含分散良好的胶体颗粒。通过动态光散射进行的颗粒尺寸分析表明 其流体动力学直径为2. 8nm,多分散度为0. 264。
[0073] 实施例4 :使用铈、柠檬酸和EGTA制备纳米颗粒
[0074] 向带有磁力搅拌棒的600ml玻璃烧杯中引入500ml高纯(HP)水。将2. 41克量的 柠檬酸(CA)添加到反应混合物中。将4. 497克量的乙二醇四乙酸(EGTA,CAS No. 67-42-5) 连同氢氧化铵一起溶解于水中以帮助溶解,并添加到反应混合物中。添加氢氧化铵(28%至 30% )以将溶液的pH调节至约8. 5。添加10. 0克量的Ce (NO3)3 · 6 (H2O)。CA/EGTA/Ce的 摩尔比例为0. 5/0. 5/1. 0。然后将IOml包含4. 8克50% H2O2的溶液(H2O2与铈离子的摩尔 比为3. 0)缓慢添加到铈、柠檬酸和EGTA溶液混合物中。然后在70°C下将反应产物加热1 小时。在搅拌下冷却之后,通过渗滤将直接形成的纳米颗粒分散体洗涤至离子电导率小于 约10mS/cm,以除去过量的盐。
[0075] 最终产物分散体是透明的橙色液体,在用低强度激光束照射时,其表现出高度的 Tyndall散射,表明其包含分散良好的胶体颗粒。通过动态光散射进行的颗粒尺寸分析表明 其流体动力学直径为8. 5nm,多分散度为0. 393。
[0076] 实施例5 :使用铈、柠檬酸和DTPA制备纳米颗粒
[0077] 向带有磁力搅拌棒的600ml玻璃烧杯中引入500ml高纯(HP)水。将2. 89克量 的柠檬酸(CA)添加到反应混合物中。将3. 606克量的二亚乙基三胺五乙酸(DTPA,CAS No. 67-43-6)添加到反应混合物中。添加氢氧化铵(28%至30%)以将溶液的pH调节至约 8. 5。添加 10. 0 克量的 Ce (NO3)3 · 6 (H2O)。CA/DTPA/Ce 的摩尔比例为 0· 6/0. 4/1. 0。然后 将IOml包含4. 8克50% H2O2的溶液(H2O2与铈离子的摩尔比为3. 0))缓慢添加到铺、柠檬 酸和DTPA溶液混合物中。然后在80°C下将反应产物加热1小时。在搅拌下冷却之后,通过 渗滤将直接形成的纳米颗粒分散体洗涤至离子电导率小于约10mS/cm,以除去过量的盐。
[0078] 最终产物分散体是透明的红色液体,在用低强度激光束照射时,其表现出高度的 Tyndall散射,表明其包含分散良好的胶体颗粒。通过动态光散射进行的颗粒尺寸分析表明 其流体动力学直径为2. 4nm,多分散度为0. 212。X射线衍射(XRD)光谱分析表明存在与以 立方萤石结构为特征的CeO2 (PDF#34-394,方铺矿)结构不同的主晶相。通过使用Scherrer 法分析(220)峰宽确定了平均微晶尺寸为2. lnm。
[0079] 将
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