专利名称：具有消肿抗炎改善血液循环的精氨酸七叶皂苷及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法。
由于七叶皂苷不溶解于水，现阶段在临床上使用的为七叶皂苷钠，经过长期大量的临床观察，七叶皂苷钠对外伤及外周血管疾病有很高的治疗价值。七叶皂苷钠为静脉给药，在给药过程中，血管易产生痉挛，所以存在输液部位疼痛等副作用，长期使用易产生静脉炎等现象。
本发明的特征在于用精氨酸和七叶皂苷反应成盐，并以下列结构式(I)表示的盐或相应的异构体 本发明所述的制备方法如下(A)在反应器中依次加入七叶皂苷、L-精氨酸和蒸馏水，搅拌反应至澄清液，减压蒸干溶剂，在残留物中加入乙醇或丙酮，研磨得类白色沉淀，过滤，减压干燥，得类白色固体；或(B)在反应瓶中依次加入七叶皂苷、L-精氨酸和蒸馏水，搅拌反应至澄清液，自-40℃起分段升温真空冷冻干燥，得类白色固体。
本发明所述的七叶皂苷、L-精氨酸的摩尔配比为1∶1。
本发明所述的精氨酸包括L-精氨酸，或D-精氨酸，或D、L-精氨酸。
本发明所述的七叶皂苷包括七叶皂苷A，或七叶皂苷B。
本发明所述的分段升温真空冷冻干燥具体如下-40℃下预冻8小时后，继续抽真空冷冻2小时，再分别在-30℃、-20℃、-10℃、-5℃、0℃、10℃、20℃、30℃温度下抽真空冷冻2小时、2小时、4小时、8小时、8小时、4小时、2小时、2小时。
本发明经过蛋清诱发大鼠足趾肿胀试验，小鼠耳二甲苯致炎法试验，急性毒性试验，血管刺激性试验等证明本发明在保留消肿、抗炎和改善血液循环用途的同时，解决了七叶皂苷在水中的溶解性，能降低血管痉挛的产生，提高了用药的安全性。
用七叶皂苷为对照品进行含量测定，产品含量为99.5％。
用七叶皂苷为对照品进行含量测定，产品含量为99.7％。
冷冻干燥条件温度(℃) 时间(小时) 备注-40 8 预冻-40 2 抽真空-30 2 抽真空-20 2 抽真空-10 4 抽真空-58 抽真空0 8 抽真空104 抽真空202 抽真空302 抽真空得类白色固体129.7g，收率99.3％。
用七叶皂苷为对照品进行含量测定，产品含量为99.6％。
计算各组大鼠足爪肿胀度均值与标准差，并作t检验比较各给药组与空白对照组间有无显著性差异。结果见下表。
精氨酸七叶皂苷对蛋清诱发大鼠足爪肿胀的影响剂量组别动物数 体重 致炎前足 致炎后足爪体积(ml)(mg/kg) (只) (g)爪体积(ml)1.5hr 3hr4 .5hr4.082 精氨酸七叶皂苷 10 172±7 0.835±0.071 0.411±0.063*0.401±0.054*0.519±0.0252.857 精氨酸七叶皂苷 10 171±6 0.836±0.080 0.47±0.122*0.476±0.109*0.61±0.101*2.000 精氨酸七叶皂苷 10 171±5 0.822±0.063 0.602±0.09*0.632±0.092*0.7723±0.092*1.400 精氨酸七叶皂苷 10 171±6 0.826±0.071 0.74±0.039*0.814±0.54*0.898±0.06*0.980 精氨酸七叶皂苷 10 171±5 0.831±0.065 0.923±0.095 0.939±0.091 1.001±0.095空白组(同体积氯化钠注射液) 0.841±0.038 0.993±0.025 0.993±0.05 0.983±0.035与空白对照相比 +P＜0.05*P＜0.01由表可见，与空白对照组相比，精氨酸七叶皂苷在给药后1.5、3、4.5小时，剂量4.082、2.857、2.000mg/kg组，均有非常显著性差异。试验结果表明，精氨酸七叶皂苷对鸡蛋清所致的大鼠足爪肿胀，呈现明显的抗炎作用。
选取体重26-30g雄性小鼠60只，随机分成6组，每组10只。将二甲苯滴于小鼠右耳，每鼠30μl，左耳对照。致炎1小时后，第1至第5组小鼠分别腹腔注射精氨酸七叶皂苷溶液剂量以七叶皂苷计为6.67、4.67、3.27、2.29、1.06mg/kg，药液浓度分别为0.267、0.187、0.131、0.091、0.0641mg/ml，给药体积为0.5ml/20g，第6组同法腹腔注射氯化钠注射液0.5ml/20g。
给药后2小时，将小鼠颈椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳，用直径为8mm的打孔器分别在左、右耳同一部位打下园耳片，称重，求每鼠左、右耳片重量之差，作为肿胀度。将肿胀度进行统计学处理，比较各给药组与空白对照组间有无显著性差异，结果见下表。
精氨酸七叶皂苷对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响剂量 组别 动物数 肿胀度(mg/ml) (只)(mg)6.670精氨酸七叶皂苷 10 4.65±1.076*4.670精氨酸七叶皂苷 10 5.64±1.085*3.270精氨酸七叶皂苷 10 6.28±0.705*2.290精氨酸七叶皂苷 10 6.93±1.059*1.061精氨酸七叶皂苷 10 7.67±0.866空白同体积N.S 10 8.16±0.486与空白对照相比+P＜0.05*P＜0.01由表可见，与空白对照组相比，剂量6.67、4.67、3.27mg/kg、2.29mg的精氨酸七叶皂苷均有非常显著性差异，剂量1.06mg/kg组的精氨酸七叶皂苷无显著性差异。试验结果表明，精氨酸七叶皂苷二甲苯所致的小鼠耳肿胀，呈现明显的抗炎作用。
选取体重为19～21g小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，按所设置的剂量静脉注射给药，给药后立即开始观察。5分钟内有动物开始死亡，1天内陆续有动物死亡，精氨酸七叶皂苷各组动物死亡数见下表，以后观察的2～14天内无动物死亡。死亡动物尸解，主要器官经肉眼观察无明显病变，存活动物观察14天后处死解剖肉眼观察各器官未见异常。
小鼠静脉给药精氨酸七叶皂苷LD50测定结果受试动物剂量 对数剂量 动物数 死亡动物 死亡率 机率单 LD50及置(mg/kg) (X) (只)数(只)(％)位(Y) 信限50.0 1.7 10 9 90 6.2840.0 1.6 10 8 80 5.84 29.7±32.0 1.51 10 7 70 5.52 5.9mg/kg25.0 1.4 10 3 30 4.4820.5 1.31 10 1 10 3.72 (P＝0.95)试验结果表明，小鼠静脉注射精氨酸七叶皂苷LD50为29.7±5.9mg/kg。而七叶皂苷钠LD50文献值为4.8±5.6mg/kg。
试验结果表明，肉眼观察注射部位血管均未见明显充血水肿等刺激反应现象，病理切片观察结果与氯化钠注射液对照组相似，耳廊皮肤的表皮和真皮各结构完好，未见变性、坏死、缺失及过度角化，耳缘静脉未见扩张充血、未见血栓行成，周围组织未见出血、水肿。
本发明经过蛋清诱发大鼠足趾肿胀试验，小鼠耳二甲苯致炎法试验，急性毒性试验，血管刺激性试验等证明本发明在保留消肿、抗炎和改善血液循环用途的同时，解决了七叶皂苷在水中的溶解性，能降低血管痉挛的产生，提高了用药的安全性。
权利要求
1.适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法，其特征在于用精氨酸和七叶皂苷反应成盐，并以下列结构式(I)表示的盐或相应的异构体
2.根据权利要求1所述的一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法，其特征在于所述的制备方法如下(A)在反应器中依次加入七叶皂苷、L-精氨酸和蒸馏水，搅拌反应至澄清液，减压蒸干溶剂，在残留物中加入乙醇或丙酮，研磨得类白色沉淀，过滤，减压干燥，得类白色固体；或(B)在反应瓶中依次加入七叶皂苷、L-精氨酸和蒸馏水，搅拌反应至澄清液，自-40℃起分段升温真空冷冻干燥，得类白色固体。
3.根据权利要求1或2所述的一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法，其特征在于所述的七叶皂苷、左旋精氨酸的摩尔配比为1∶1。
4.根据权利要求1或2所述的一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法，其特征在于所述的七叶皂苷包括七叶皂苷A，或七叶皂苷B。
5.根据权利要求1或2所述的一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法，其特征在于所述的精氨酸包括L-精氨酸，或D-精氨酸，或D、L-精氨酸。
6.根据权利要求1或2所述的一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法，其特征在于所述的分段升温真空冷冻干燥具体如下-40℃下预冻8小时后，继续抽真空冷冻2小时，再分别在-30℃、-20℃、-10℃、-5℃、0℃、10℃、20℃、30℃温度下抽真空冷冻2小时、2小时、4小时、8小时、8小时、4小时、2小时、2小时。
全文摘要
本发明涉及一种适用于消肿、抗炎和改善血液循环的精氨酸七叶皂苷和相应的异构体及制备方法,用精氨酸和七叶皂苷反应成盐,并以结构式(I)表示的盐或相应的异构体:本发明解决了七叶皂苷在水中的溶解性,能降低血管痉挛的产生,提高了用药的安全性。
文档编号C07J63/00GK1376675SQ0211359
公开日2002年10月30日 申请日期2002年4月10日 优先权日2002年4月10日
发明者文永均, 谢期林, 韩五成 申请人:成都圣诺科技发展有限公司