专利名称：用于治疗癌症的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗癌症的方法，特别是治疗肝癌的方法。本发明还涉及用于这样的治疗的组合物。
背景技术：
肝细胞癌(HCC)是致死率最高的恶性肿瘤之一，并且在世界范围内位列第七位最常见的癌症。其发生率有很大的差异，在亚洲国家最经常发生。由于隐袭的发病，大多数HCC在诊断出时已不可以切除。目前全身使用来治疗HCC的化疗剂不是很成功(1-5)。在近几年，局部递送药物来治疗HCC的优点已有描述。该给药途径直接在肿瘤位点达到了较高的药物浓度，而使身体的其余部分免受毒性影响。此外，在被肝脏肿瘤高度摄取并且长时间保留的油例如碘油(lipiodol)中递送药物可进一步提高该给药途径的选择性(6-8)。通过达到高的局部肝脏水平，该方法使得能够治疗对氯法齐明或其类似物敏感的肝脏肿瘤。然而，所用的药物必须极其溶于油例如碘油以适当地递送以及随后在肿瘤内让药物从脂质中持续释放。
氯法齐明是一种氯苯吩嗪化合物，其分子量为473.14，并且由于其复杂的杂环结构，其在正常条件下具有特征性的深红色到橙色(9)。其是作为一类化合物—氯苯吩嗪当中活性最强的抗分枝杆菌剂出现的，是由Medical Research council of Ireland的实验室从1944年合成的，当时这是寻找结核病治疗手段的计划的一部分。已经合成了几百个氯法齐明衍生物，并且在实验室中测试了其可能的治疗应用。
氯法齐明的结构[C27H22Cl2N2；3-(4-氯苯胺基)-10-(4-氯苯基)-2，10-二氢-2-(异丙基亚氨基)-吩嗪]。
自1962年开始，氯法齐明已用于治疗分枝杆菌疾病。其在多种疾病的治疗中是临床有效且安全的，并且主要是与达普宋和利福平联合用于治疗多种杆菌性麻风病。目前，氯法齐明的主要应用是在治疗瘤型麻风的世界卫生组织多药物治疗中。氯法齐明一般被视为安全的药物。尽管如此，其使用还是带来了某些缺点和副作用。这些副作用通常是轻的、与剂量有关的以及可逆的。所观察到的最常见的副作用是皮肤变为红棕色，这在施以高剂量的所有患者中都能看得见。某些文化，特别是一些亚洲种族认为有关的着色是耻辱和不能接受的，并且这是不依从治疗方案的主要原因(9-12)。
氯法齐明或其类似物的抗微生物作用已经成为众多科学出版物和专利的主题。
最近两组研究人员已经报道了口服使用氯法齐明来治疗HCC。Ruff等人(13)报道，10％(3/30)的用氯法齐明进行治疗的患者(HCC)具有客观反应，而43％(13/30)的患者的该疾病稳定了最长达20个月。在随后的研究中，Falkson等人(14)报道了在仅用氯法齐明进行HCC治疗的患者当中，没有任何患者具有客观反应。
Van Rensburg等人已报道了氯法齐明在体外抗FaDu—一种人鳞状细胞癌、PLC/PRF 5—一种人HCC细胞系的活性，以及在体内抗化学诱导的小鼠肉瘤和大鼠乳腺肿瘤的活性(15，16)。类似地，Sri-Pathmanthan已表明了氯法齐明在体外和体内(裸鼠异种移植物)条件下对人肺癌细胞有活性(17)。最近，US专利5,763,443(该专利的公开内容引入本文以供参考)提出了有关氯苯吩嗪的多药耐药性(MDR)活性。
发明概述本发明者们已证明了氯法齐明是一些肝脏和结肠直肠癌细胞系增殖的有效抑制剂。
因此，在第一个方面，本发明提供了治疗个体中肿瘤的方法，所述方法包括将包含治疗有效量的式I化合物或其类似物或代谢物的组合物局部递送到肿瘤位点 式I其中R1和R4选自氢原子、卤素原子、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟甲氧基和三氟甲基，R2选自氢和卤素原子，R3选自氢原子、C1-C4烷基、N，N-二烷基氨基烷基、C3-C12环烷基、甲基环己基、羟基环己基、环烷基甲基、哌啶基、烷基取代的哌啶基和N-苄基取代的哌啶基，且n是1-3并包括1和3的数字。
附图1人肝细胞瘤细胞系HepG2中的细胞增殖，通过3[H]胸苷掺入测定的，并且是以每分钟的计数(CPM)表示的。将细胞在培养物中用不同浓度的氯法齐明(CF，0-5μM)处理5天。值代表每分钟计数(CPM)的平均值±s.e.m.，其与在处理期结束时每个孔中存在的活细胞数目成正比。
附图2将铺在6孔平板中的HepG2细胞用氯法齐明(0-5mM)处理1、3或7天，使用台盼蓝染料法计数剩余的活细胞数目。所有计数都是以一式四份的方式获得。值代表平均值±标准误差。
附图3让大鼠肝细胞瘤细胞novikoff在试管中生长，并用不同浓度的氯法齐明(0-10mM)处理1、3或7天。在处理期结束时，使用台盼蓝法计数剩余的活细胞数目。所有计数都是以一式三份的方式获得，并且值代表平均值±标准误差。
附图4在人肝细胞瘤细胞系HepG2中氯法齐明对细胞增殖的抑制。将铺在24孔平板中的细胞在培养物中用氯法齐明(CF，5μM)、碘油(L，100μl)或氯法齐明-碘油(CF/L)处理1天，并充分洗涤。然后将细胞与单独的培养基(没有加入药物或碘油)再培养9天。通过3[H]胸苷掺入测定细胞增殖，并且结果(平均值±s.e.m.)是以每分钟的计数(CPM)表示。
附图5向大鼠(雄性S.D.)的肝脏中接种2×106个大鼠肝脏肿瘤细胞。7天后，再进行一次剖腹术，测定肿瘤体积(V1)后，通过将导管置于肝动脉内来缓慢地输注100μl无菌生理盐水、碘油或氯法齐明(0.4mg，溶解在100μl碘油中)。7天后，将动物安乐死，并测定肿瘤体积(V2)。
附图6分析得自用单次肝动脉内剂量的氯法齐明(0.4mg，在100μl碘油中)治疗的动物的血浆样本以测定总胆红素。用药物治疗后7天在临将动物安乐死之前通过心脏穿刺来收集血液。
附图7向大鼠(雄性S.D.)的肝脏中接种2×106个大鼠肝脏肿瘤细胞。7天后，再进行一次剖腹术，并测定肿瘤体积(V1)。24小时后，通过每天一次口服载体
或氯法齐明(50mg/kg，在0.5％CMC悬浮液中)治疗动物，共7天。在该期间结束时在最后一次给药后24小时，将动物安乐死，并测定肿瘤体积(V2)。
附图8在培养物中用不同浓度的氯法齐明处理5天的LOVO细胞(结肠直肠癌细胞系)中以每分钟计数表示的[3H]胸苷掺入。
发明详述本发明者们已经证明了，在肝脏肿瘤的治疗中向肝脏局部施用氯苯吩嗪化合物提供了很多优点。本发明者们还相信，通过将该氯苯吩嗪化合物局部递送到其它癌症例如结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、间皮瘤、肾癌和脂肉瘤的肿瘤，也可以获得该有益效果。
因此，在第一个方面，本发明涉及治疗个体中肿瘤的方法，所述方法包括将包含治疗有效量的式I化合物或其类似物或代谢物的组合物局部递送到肿瘤位点 式I其中R1和R4选自氢原子、卤素原子、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟甲氧基和三氟甲基，R2选自氢和卤素原子，R3选自氢原子、C1-C4烷基、N，N-二烷基氨基烷基、C3-C12环烷基、甲基环己基、羟基环己基、环烷基甲基、哌啶基、烷基取代的哌啶基和N-苄基取代的哌啶基，且n是1-3并包括1和3的数字。
R1取代优选位于1-位，并优选为Cl。
优选的是，n＝1，R1是Cl，R2是H，R3是CH(CH3)2，且R4是Cl。
特别优选氯苯吩嗪化合物为氯法齐明。
本发明方法特别适于治疗肝脏肿瘤。肿瘤可以是肝细胞瘤(原发性肝癌)或肝脏中的继发性癌症。优选经由肝动脉局部递送到肝脏。
本发明方法还可用于治疗其它癌症，例如结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌或其它器官中的继发性转移瘤。
氯苯吩嗪化合物的局部递送可通过施用在可药用制剂中的化合物来实现。组合物可作为连续输液经由泵通过患病器官的主要动脉例如对于肝细胞瘤为肝动脉来给药。此外，组合物可作为悬浮液来腹膜内给药以治疗源自卵巢癌、胰腺癌、胃癌或任何其它癌症的腹膜疾病。
制剂优选包含脂质。特别优选的是肿瘤对其高度摄取从而可将高浓度药物递送给肿瘤的脂质。
优选地，脂质是油，优选可通过外部手段例如CT、MRI或PET显示影像的油。优选该油为碘化油，特别是碘油—一种罂粟籽油的碘化乙酯。在另一优选的实施方案中，该油是可碘化的亚油酸乙酯。
虽然在本发明中碘油是优选的油，但是应当理解，满足下列标准的任何油都适于局部递送化合物1)与血液相容，和2)对于氯法齐明或其它命名的氯苯吩嗪来说是合适的溶剂。
还优选的是，该油使得能够外部监测贮药库(depot)。这样油可携带使得能够通过任何外部手段例如CT、MRI、PET检测的组分、化学基团或取代基。
可使用的油的非限制性实例包括大豆油(参见Tibell等人，TransplInt 1993 669-72)，棉籽油，红花油，脂肪酸甘油单酯，中链甘油三酯和食用油例如橄榄油、花生油、胡桃油、鳕鱼肝油等。从Larodan FineChemicals AB(www.larodan.se)可获得多种色谱纯化的油。
众所周知，所有这样的油(如同碘油)都必须与表面活性剂一起使用，以在注射到循环系统中时是安全的(参见Guerbet的专利，GB1081551)。
可使用的其它脂质的非限制性实例包括硝酰基脂肪酸、在MRI中使用的NFA(参见Gallez等人，Magn Reson Med 1993 30592-599)、用于CT的多碘化甘油三酯(参见Weichert等人，J Med Chem 199538636-646)和用于CT的多碘化三酰基甘油(参见Weichert等人，JMed Chem 1986 292457-65)。
与全身给药相比，使用脂质例如碘油局部递送药物可在肿瘤位点达到更高的药物浓度，同时降低了其它身体器官暴露于不想要的药物作用的程度，从而减少了副作用数目以及减轻了副作用严重程度。在HCC中，通过选择碘油作为递送药物的载体，这可更具选择性和更有效。
当注射到肝动脉内时，油被HCC保留数周至一年以上，但是在7天内就能从正常肝脏实质中清除。虽然不希望以任何方式限制本发明，但是试图解释碘油在HCC中保留的一个假设认为，这些细胞不能清除碘油，因为它们缺乏网状内皮枯否细胞组分。本发明者们先前已经证明了在体外，溶解在碘油中的维生素D化合物例如1，25-二羟基维生素D3对HepG2细胞产生了显著且持续的抑制作用，并且当经由携带肿瘤的大鼠的肝动脉注射时，药物保留在肿瘤内(参见国际专利申请PCT/AU98/00440和PCT/AU99/00323，其公开内容引入本文以供参考)。
在本发明者们用氯法齐明、碘油和肝细胞瘤细胞系所取得的经验的基础上，他们相信，给予溶解在油例如碘油中的氯法齐明并且经由肝动脉给药将使得在肿瘤细胞内药物从油中持续地释放出来，从而持续地抑制肿瘤细胞的增殖。
碘油的这些独特性质以及氯法齐明的效力和脂溶性一起使得该组合成为用于在HCC患者中肝动脉内给药的有吸引力的制剂。
氯苯吩嗪化合物的治疗有效量的确定可使用常规计算方法根据动物数据来进行。氯苯吩嗪化合物的浓度通常为至少约0.1μM，一般为约0.1-约10μM。
氯法齐明是脂溶性非常强的化合物，其logp值为7.4[(辛醇/水)9]。
在第二个方面，本发明提供了用于治疗个体中肿瘤的药物组合物，所述组合物包含脂质载体和浓度为至少0.1μM的式I化合物或其类似物或代谢物 式I其中R1和R4选自氢原子、卤素原子、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟甲氧基和三氟甲基，R2选自氢和卤素原子，R3选自氢原子、C1-C4烷基、N，N-二烷基氨基烷基、C3-C12环烷基、甲基环己基、羟基环己基、环烷基甲基、哌啶基、烷基取代的哌啶基和N-苄基取代的哌啶基，且n是1-3并包括1和3的数字。
优选R1取代位于1-位，并优选为Cl。
优选的是，n＝1，R1是Cl，R2是H，R3是CH(CH3)2，且R4是Cl。
氯苯吩嗪化合物特别优选为氯法齐明。
脂质载体优选为肿瘤对其高度摄取，这样可将高浓度药物递送给肿瘤的脂质。
优选地，脂质是油，优选可通过外部手段例如CT、MRI或PET显示影像的油。该油优选为碘化油，特别是碘油—一种罂粟籽油的碘化乙酯。
虽然在本发明中碘油是优选的油，但是应当理解，满足下列标准的任何油都适于局部递送化合物1)与血液相容，和2)对于氯法齐明或其它命名的氯苯吩嗪来说是合适的溶剂。
还优选的是，该油使得能够外部监测贮药库。这样油可携带能够通过任何外部手段例如CT、MRI、PET检测的组分、化学基团或取代基。
可使用的油的非限制性实例包括大豆油(参见Tibell等人，TransplInt 1993 669-72)，脂肪酸甘油单酯，中链甘油三酯和食用油例如橄榄油、花生油、胡桃油、鳕鱼肝油等。
众所周知，所有这样的油(如同碘油)都必须与表面活性剂一起使用， 以在注射到循环系统中时是安全的(参见Guerbet的专利，GB1081551)。
可使用的其它脂质的非限制性实例包括硝酰基脂肪酸、在MRI中使用的NFA(参见Gallez等人，Magn Reson Med 1993 30592-599)、用于CT的多碘化甘油三酯(参见Weichert等人，J Med Chem 199538636-646)和用于CT的多碘化三酰基甘油(参见Weichert等人，JMed Chem 1986 292457-65)。
氯苯吩嗪化合物优选以至少约0.5μM的浓度存在于组合物中。氯苯吩嗪化合物的上限是由该化合物的溶解度决定的。然而，氯苯吩嗪化合物的浓度优选为约0.1-约10μM。
在另0一个方面，本发明涉及式I化合物或其类似物或代谢物在制备用于治疗个体肿瘤的药物中的应用 式I其中R1和R4选自氢原子、卤素原子、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟甲氧基和三氟甲基，R2选自氢和卤素原子，R3选自氢原子、C1-C4烷基、N，N-二烷基氨基烷基、C3-C12环烷基、甲基环己基、羟基环己基、环烷基甲基、哌啶基、烷基取代的哌啶基和N-苄基取代的哌啶基，且n是1-3并包括1和3的数字，其中所述药物适于局部递送到肿瘤位点上。
R1取代优选位于1-位，并优选为Cl。
优选的是，n＝1，R1是Cl，R2是H，R3是CH(CH3)2，且R4是Cl。
氯苯吩嗪化合物特别优选为氯法齐明。
所述药物特别适于治疗肝脏肿瘤。肿瘤可以是肝细胞瘤(原发性肝癌)或肝脏中的继发性癌症。优选经由肝动脉局部递送到肝脏。
所述药物还可用于治疗其它癌症，例如结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌或其它器官中的继发性转移瘤。
所述药物优选还包含脂质。特别优选的是肿瘤对其高度摄取，这样可将高浓度药物递送给肿瘤的脂质。
优选地，脂质是油，优选可通过外部手段例如CT、MRI或PET显示影像的油。该油优选为碘化油，特别是碘油—一种罂粟籽油的碘化乙酯。
虽然在本发明中碘油是优选的油，但是应当理解，满足下列标准的任何油都适于局部递送化合物和外部监测贮药库1)与血液相容，2)对于氯法齐明或其它命名的氯苯吩嗪来说是合适的溶剂，3)携带使得能够通过任何外部手段例如CT、MRI、PET检测的组分、化学基团或取代基。
可使用的油的非限制性实例包括大豆油(参见Tibell等人，TransplInt 1993 669-72)，棉籽油，红花油，脂肪酸甘油单酯，中链甘油三酯和食用油例如橄榄油、花生油、胡桃油、鳕鱼肝油等。从Larodan FineChemicals AB(www.larodan.se)可获得多种色谱纯化的油。
众所周知，所有这样的油(如同碘油)都必须与表面活性剂一起使用，以在注射到循环系统中时是安全的(参见Guerbet的专利，GB1081551)。
可使用的其它脂质的非限制性实例包括硝酰基脂肪酸、在MRI中使用的NFA(参见Gallez等人，Magn Reson Med 1993 30592-599)、用于CT的多碘化甘油三酯(参见Weichert等人，J Med Chem 199538636-646)和用于CT的多碘化三酰基甘油(参见Weichert等人，JMed Chem 1986 292457-65)。
与全身给药相比，使用脂质例如碘油局部递送药物可在肿瘤位点达到更高的药物浓度，同时降低了其它身体器官暴露于不需要的药物作用的程度，从而减少了副作用数目以及减轻了副作用严重程度。在HCC中，通过选择碘油作为递送药物的载体，这可更具选择性和更有效。
本文所用术语“局部递送”以及变型例如“局部给药”是指直接递送到肿瘤，递送到直接供给患病器官的血管，例如对于肝癌为肝动脉，或递送到邻近肿瘤的体腔，例如对于胰腺癌为腹膜内。
本文所用术语“个体”是以其最广义使用，并且旨在包括人和非人动物。
在本说明书中，词语“包含”或其变型“含有”或“包括”应当理解为是指包含所述的成分、整数或步骤，或成分、整数或步骤组，而不是排除任何其它成分、整数或步骤，或成分、整数或步骤组。
在说明书中提及的所有出版物都引入本文以供参考。
包括在本说明书中的任何对文件、条例、材料、装置、文章等的讨论都仅是为了给本发明提供上下文而提供的。不应认为是承认任何或所有这些内容形成现有技术基础的一部分或者是本发明相关领域中的一般常识，因为其在本申请的每个权利要求的优先权日期之前在澳大利亚存在。
为了能更充分地理解本发明，现参照下列非限制性实施方案来描述本发明。
实施例1抗肝癌细胞的体外测试方法使用3[H]胸苷掺入分析来研究氯法齐明对细胞增殖的影响。将贴壁细胞(5/000-10/000)平板接种到24-孔Corning组织培养皿中，并暴露于含有载体或不同浓度的氯法齐明(10-9-10-5摩尔/升)的培养基(MEM 5％FBS)。对于是脱附的大鼠细胞系的Novikoff，将2000个细胞悬浮在2ml DMEM(5％FBS)中，并在与贴壁细胞相同的条件下保持。隔日用新鲜的培养基替换培养基。在处理期间(5-10天)结束时，通过向每个孔中加入0.5μCi[3H]胸苷并最后培养4小时来测定细胞培养物的胸苷掺入。使用β-闪烁计数器(18)测定掺入的放射性的量。结果以每分钟实际计数-培养基中使用的药物浓度或％抑制(与对照相比胸苷掺入量的减少)来表示。用氯法齐明处理不同的肝癌细胞系HUH-7、HepG2、SKHEP-1、Hep3-B(人细胞系)和Novikoff(大鼠细胞系)使得这些细胞的3[H]胸苷掺入被剂量-依赖性地抑制(表1和附图1)。
表1氯法齐明在体外对肝癌细胞系增殖(3[H]胸苷掺入)的影响。
值代表，对于每种细胞系，当用不同浓度的氯法齐明处理5天时，3[H]胸苷掺入的％抑制(与对照相比)的平均值±s.e.m。
这些结果表明，人细胞系对氯法齐明的抗增殖作用很敏感，在较高的药物浓度下，通常对化疗和放疗非常抵抗的大鼠细胞系Novikoff(19)表现出适度的敏感性。在所测试的人肝癌细胞系当中，Hep3-β对氯法齐明的抗增殖作用表现出最高程度的敏感性(附图1)。
实施例2抗HepG2细胞的体外测试将铺在6孔平板中的HepG2细胞用氯法齐明(0-5μM)处理1、3或7天，使用台盼蓝染料法计数剩余的活细胞。所有计数都是以一式四份的方式获得。结果如附图2所示，其中值代表平均值±标准误差。
实施例3抗大鼠肝细胞瘤细胞novikoff的体外测试让大鼠肝细胞瘤细胞novikoff在试管中生长，并用不同浓度的氯法齐明(0-10μM)处理1、3或7天。在处理期结束时，使用台盼蓝法计数剩余的活细胞数目。所有计数都是以一式三份的方式获得，并且值代表平均值±标准误差。结果如附图3所示。
实施例4使用碘油抗肝癌细胞的体外测试已经表明，一些油，特别是碘油被肝癌细胞摄取和保留。在这方面我们已表明●在细胞培养条件下，碘油被肝癌细胞高度摄取(18)
●在携带肝脏肿瘤的大鼠中，碘油被肿瘤摄取并保留在肿瘤内(19)●在肝脏肿瘤患者中，给予溶解在碘油中的大剂量的1，25-二羟基维生素D3并且经由肝动脉输注不导致高钙血症的发生●氯法齐明在碘油中高度溶解和稳定为了研究溶解在碘油中的氯法齐明是否被细胞摄取并逐渐释放以产生持续的抗增殖作用，进行下述实验。
将分会合的HepG2细胞以每孔10/000个细胞的比例铺在24孔组织培养平板中，在具有潮湿的5％CO2气氛的培养器中于37℃培养24小时。然后用在MEM或MEM加碘油(0.5％v/v)中制备的含有浓度为5μM的氯法齐明的培养基替换原培养基。对于此，将溶解在乙醇中的氯法齐明置于试管中，将乙醇在氮气流下蒸发，通过加入碘油来回收药物，最后在培养基中重新配制以得到所需的药物和碘油浓度。将两组对照细胞用在培养基中配制的氯法齐明(没有碘油)或含有碘油的培养基(没有药物)处理。24小时后，对于所有细胞，用既不含有药物也不含有碘油的标准培养基替换原培养基。从现在起，在随后的9天，隔日替换培养基。在该处理期结束时，测定细胞的胸苷掺入(如上所述)。
所得结果(附图4)表明，用溶解在碘油中并在细胞培养基中稀释(0.5％V/V)的氯法齐明短暂处理HepG2细胞导致细胞增殖被持续地抑制，一直延续到把药物从细胞培养基中除去后很久(9天)。这可能是由于油被细胞摄取，然后药物在细胞内从油中持续地释放所致。
从这些体外结果可以假定，被细胞摄取的碘油起药物贮库的作用，使得细胞连续暴露于氯法齐明，一直延续到将药物从培养基中除去之后很久。所以，在暴露于氯法齐明/碘油处理的细胞中，增殖以及由此3[H]胸苷掺入显著(p＜0.01)减少。
实施例5在携带novikoff肿瘤的大鼠中的体内测试为了确定溶解在碘油中的氯法齐明在体内是否有活性，采用novikoff大鼠肿瘤模型。进行下列操作。对大鼠施以全身麻醉(氟烷气体)和剖腹术。然后使用26G 3/8结核菌素针头将悬浮在100μL培养基中的2×106个novikoff细胞滴注在肝脏被膜下方。用缝线将腹部切口缝合。所有操作都是在全身麻醉和无菌条件下进行的。
7天后，再进行一次剖腹术，测定肿瘤体积(V1)后，通过将导管置于肝动脉内来缓慢地输注100μl无菌生理盐水、碘油或氯法齐明(0.4mg，溶解在100μl碘油中)。7天后，对动物实施安乐死，并测定肿瘤体积(V2)。结果如附图5所示。
实施例6胆红素测定分析得自用单次肝动脉内剂量的氯法齐明(0.4mg，在100μl碘油中)治疗的动物的血浆样本以测定总胆红素。用药物治疗后7天在临将动物安乐死之前通过心脏穿刺来收集血液。结果如附图6所示。
实施例7口服施用氯法齐明向大鼠(雄性S.D.)的肝脏中接种2×106个大鼠肝脏肿瘤细胞。7天后，再进行一次剖腹术，并测定肿瘤体积(V1)。24小时后，通过每天一次口服载体
或氯法齐明(50mg/kg，在0.5％CMC悬浮液中)治疗动物，共7天。在该期间结束时在最后一次给药后24小时，将动物安乐死，并测定肿瘤体积(V2)。结果如附图7所示。
实施例8抗人结肠直肠癌细胞的体外测试我们还第一次证明了在体外用氯法齐明处理结肠直肠细胞系C-170、HT-29和LOVO使得通过3[H]胸苷掺入所测定的这些细胞的增殖被显著抑制(附图8)。其它结肠直肠癌细胞(HT-29和C-170)在体外也以类似于LOVO的方式被抑制，其中在这2个细胞系中，经过5天的治疗期，浓度为1μM的氯法齐明也产生了＞70％的对细胞增殖抑制。
这些结果表明，用溶解在碘油中的氯法齐明治疗的大鼠，其肿瘤显著小于用碘油或盐水治疗的动物的肿瘤。这与上述体外结果一致，这些体外结果表明氯法齐明-碘油可能首先被肿瘤细胞摄取和储存，然后释放以在肿瘤附近产生药理有效浓度，从而抑制肿瘤生长。此外，在体内抑制novikoff细胞增殖的能力非常值得关注，因为novikoff一般是耐药性细胞系，并且在体外研究中是对氯法齐明最不敏感的细胞系(表1)。
根据这些结果据信，在肿瘤、特别是肝癌患者中，溶解在碘油中并且局部给药的氯法齐明将被肿瘤细胞摄取，从而产生高的局部药物浓度和带来效力，同时使身体的其余部分免于不利地暴露于高浓度药物。
本领域技术人员应当理解，在不背离所广义描述的本发明实质或范围的情况下，可对如具体实施方案所示的本发明作多种改变和/或修改。因此，本发明实施方案在所有方面都视为举例说明而不是限制性的。
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权利要求
1.治疗个体中肿瘤的方法，所述方法包括将包含治疗有效量的式I化合物或其类似物或代谢物的组合物局部递送到肿瘤位点 式I其中R1和R4选自氢原子、卤素原子、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟甲氧基和三氟甲基，R2选自氢和卤素原子，R3选自氢原子、C1-C4烷基、N，N-二烷基氨基烷基、C3-C12环烷基、甲基环己基、羟基环己基、环烷基甲基、哌啶基、烷基取代的哌啶基和N-苄基取代的哌啶基，且n是1-3并包括1和3的数字。
2.权利要求1的方法，其中R1取代位于1-位，并优选为Cl。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中n＝1，R1是Cl，R2是H，R3是CH(CH3)2，且R4是Cl。
4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述氯苯吩嗪化合物是氯法齐明。
5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述肿瘤是肝细胞瘤或肝脏中的继发性癌症。
6.权利要求1-5任一项的方法，其所述局部递送是经由肝动脉进行的。
7.权利要求1-4任一项的方法，其中所述肿瘤选自结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、肾癌和其它器官中的继发性转移瘤。
8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述组合物是作为连续输液经由泵通过主要动脉来给药的。
9.权利要求1-7任一项的方法，其中所述组合物是腹膜内给药的。
10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述组合物还包含脂质。
11.权利要求10的方法，其中所述脂质是肿瘤对其高度摄取的脂质。
12.权利要求10或权利要求11的方法，其中所述脂质是油，优选可通过外部手段例如CT、MRI或PET显示影像的油。
13.权利要求11的方法，其中所述油是碘化油。
14.权利要求11的方法，其中所述油是碘油。
15.权利要求10的方法，其中所述脂质选自大豆油、脂肪酸甘油单酯、中链甘油三酯、橄榄油、花生油、胡桃油、鳕鱼肝油、硝酰基脂肪酸、亚油酸乙酯、多碘化甘油三酯和多碘化三酰基甘油。
16.用于治疗个体中肿瘤的药物组合物，所述组合物包含脂质载体和浓度为至少0.1μM的式I化合物或其类似物或代谢物 式I其中R1和R4选自氢原子、卤素原子、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氟甲氧基和三氟甲基，R2选自氢和卤素原子，R3选自氢原子、C1-C4烷基、N，N-二烷基氨基烷基、C3-C12环烷基、甲基环己基、羟基环己基、环烷基甲基、哌啶基、烷基取代的哌啶基和N-苄基取代的哌啶基，且n是1-3并包括1和3的数字。
17.权利要求16的组合物，其中R1取代位于1-位，并优选为Cl。
18.权利要求16或17的组合物，其中n＝1，R1是Cl，R2是H，R3是CH(CH3)2，且R4是Cl。
19.权利要求16-18任一项的组合物，其中所述氯苯吩嗪化合物是氯法齐明。
20.权利要求16-19任一项的组合物，其中所述脂质载体是肿瘤对其高度摄取的脂质。
21.权利要求16-20任一项的组合物，其中所述脂质是油。
22.权利要求21的组合物，其中所述油是碘化油。
23.权利要求21的组合物，其中所述油是碘油。
24.权利要求16-19任一项的组合物，其中所述脂质选自大豆油、脂肪酸甘油单酯、中链甘油三酯、橄榄油、花生油、胡桃油、鳕鱼肝油、硝酰基脂肪酸、亚油酸乙酯、多碘化甘油三酯和多碘化三酰基甘油。
25.权利要求16-24任一项的组合物，其中所述氯苯吩嗪化合物以至少约0.5μM的浓度存在于组合物中。
26.权利要求16-25任一项的组合物，其中所述氯苯吩嗪化合物的浓度为约0.1-约10μM。
全文摘要
本发明提供了治疗肿瘤的方法。所述方法包括将包含治疗有效量的氯苯吩嗪化合物的组合物局部递送到肿瘤位点。本发明还提供了包含氯苯吩嗪化合物与脂质相联合的组合物。
文档编号C07D241/00GK1551771SQ02815710
公开日2004年12月1日 申请日期2002年7月16日 优先权日2001年7月17日
发明者D·L·莫里斯, M·H·波格霍拉米, D L 莫里斯, 波格霍拉米 申请人:单检索有限公司