专利名称：来自中药的3个新化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及3个新化合物的结构及其在制备抗乙型肝炎药物中的应用，属于药物领域。
本发明的目的是提供3个新化合物的结构及其在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
本发明所述的中药是绵马贯众，3个新化合物是在绵马贯众中发现的，是经过反复硅胶柱层析分离得到的，经波谱解析和化学方法确定了它们的结构分别为 [2R，3R]-2，3-顺-3，5，7，3’，5’-五羟基黄烷-8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷([2R，3R]-2，3-cis-3，5，7，3’，5’-pentahydroxyflavan-8-C-α-D-glucopyranoside) 三环黄绵马酸ABB(trisflavaspidic acid ABB) 东北贯众素ABAA(dryocrassin ABAA)实验例1[2R，3R]-2，3-顺-3，5，7，3’，5’-五羟基黄烷-8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷的结构测定该化合物为类白色结晶性粉末(环己烷-丙酮)，mp142-145℃；Molish反应阳性。
高分辨质谱给出分子式为C21H24O11，M-1451.1246，其它碎片峰有331(M-1-120)，301(M-1-150)。根据分子式计算出该分子的不饱和度为10。
1HNMR给出δppm8.854(1H，S)；8.830(1H，S)；8.743(1H，S)；8.049(1H，S)均为酚羟基峰，6.880(1H，S)；6.648(2H，S)；5.833(1H，S)均为芳氢，2~3ppm之间有2个氢，3~5ppm之间有14个氢，；因此推测该化合物含有2个苯环和1个糖，根据不饱和度推测该化合物除此之外还有一个环，因此推测该化合物可能是一个黄烷-3-醇苷，而且6.880(1H，S)和6.648(2H，S)为B环上的氢，因为均为单峰，推测为3’5’-二羟基取代；5.833(1H，S)应为A环上的6位或8位氢，说明A环上除了5，7-二羟基取代，6位或8位还有一个取代。
13CNMR给出9个饱和碳信号，其中6个为糖上的碳，3个为黄烷醇母核上的碳，没有羰基信号，因此进一步证明该化合物是一个黄烷-3-醇苷，糖的端基碳信号也位于60~80ppm范围内，推测应为碳苷，而且可能与母核A环上的6位或8位碳相连，与1HNMR给出结果相符。
DEPT谱给出2个CH2信号28.357和60.219，显然前者为4位碳，后者为糖上的6位碳；给出11个CH，其中4个为不饱和碳，三个较低场的(117.952，114.911，114.787)应为B环上无取代的碳，较高场的(94.876)应为A环上无取代的碳(即6位或8位碳)，另7个为饱和的碳(80.898，78.038，78.252，75.170，72.491，69.343，64.958)，5个为糖上的CH，2个为2位和3位碳；还给出8个季碳信号，其中5个为与氧直接相连的碳(154.223，154.669，154.800，144.498，144.523)，它们分别是8a、5、7、3’、5’碳；另外3个较高场的季碳(130.521，99.755，104.790)，应为1’、4a和与糖连接形成碳苷的6位或8位碳。
为了推测该化合物所连接糖的种类，对该化合物进行了薄层板上酸水解，由于碳苷较难水解，因此采用了浓盐酸50℃加热长时间(3天)水解(1天没有水解)，以葡萄糖和鼠李糖作对照，结果表明样品水解出的是葡萄糖，因此确定该化合物为3，5，7，3’，5’-五羟基黄烷-6或8-碳-葡萄糖苷。
UV显示λmax(EtOH)203.5nm，280.5nm，加入AICI3后光谱不变，因此证明无邻二酚羟基存在，与前面推测相符。
IR显示有羟基(3384cm-1)、苯环(1632，1518cm-1)和饱和碳上的氢(2926cm-1)等特征吸收。
HMBC谱显示1’’-H/8-C，1’’-H/8a-C均有相关，因此推测该化合物为8位碳与葡萄糖成碳苷。
根据葡萄糖上端基氢的偶合常数4.738(1H，d，J＝5.1Hz)，推测该化合物苷键的构型为α-苷键。后经测定其苷元([2R，3R]-2，3-顺-3，5，7，3’，5’-五羟基黄烷)的比旋光度为[α]D24＝-11.43°(丙酮)，而苷(该化合物)的比旋光度为[α]D19＝+62.96°(丙酮)，二者之差为糖的比旋光度，为+74.39°，与文献值对比进一步证明为α-苷键。
根据黄烷3-醇母核上2位和3位氢之间的偶合常数的大小，可判断2，3位手性碳的相对构型，当2，3为反式时，J2，3大约8Hz左右，当2，3为顺式时，J2，3则小于1Hz，该化合物的2-H和3-H均为单峰，因此推测该化合物2，3位手性碳的相对构型为顺式即为[2R，3R]或[2S，3S]；根据儿茶素的绝对构型与旋光方向的关系可知[2R，3R]为左旋，[2S，3S]为右旋；经测定该化合物的苷元[α]D24＝-11.43°(丙酮)，即为左旋，因此推测该化合物的绝对构型为[2R，3R]。
综上所述，确定该化合物的结构为[2R，3R]-2，3-顺-3，5，7，3’，5’-五羟基黄烷-8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷([2R，3R]-2，3-cis-3，5，7，3’，5’--pentahydroxyflavan-8-C-α-D-glucopyranoside)。
实验例2 trisflavaspidic acid ABB的结构测定类白色结晶性粉末(环己烷-丙酮)，mp117-122℃；坚固蓝B盐显粉红色；FAB-MS给出分子量为626，其它碎片峰主要有417、403、305(A环和B环碎片)，208、209(A环碎片)，179(C环碎片)，168(B环碎片)，153(B环碎片)；显示三环间苯三酚类化合物的特征裂解，见下图
IR显示有羟基、羰基、苯环和烷基取代，符合间苯三酚类化合物特征。UV显示λmax233.5nm，286.0nm。
1HNMR给出3.57(2H，s)，为绵马根酸与绵马酚相连的亚甲基质子，3.81(2H，s)，为绵马酚与绵马酚相连的亚甲基质子，1.41(6H，s)为绵马根酸环上的同碳二甲基质子，2.13(3H，s)为绵马酚环上的甲基质子，因此可以推出该化合物的母核应为1个绵马根酸与2个绵马酚组成的三环间苯三酚；0.95(3H，t)，0.98(3H，t)，1.68(4H，m)，3.15(4H，m)，2.72(3H，s)显示有2个丁酰基和1个乙酰基；根据质谱碎片峰417、403、305(A环和B环碎片)，208、209(A环碎片)可知乙酰基连接在绵马根酸环上，而2个丁酰基则分别连接在2个绵马酚环上，因此推断该化合物为三环黄绵马酸ABB(trisflavaspidic acid ABB)。
实验例3 dryocrassin ABAA的结构测定LC/MS/MS比GC-MS和LC-MS联用技术具有更大优越性，更适用于混合物中微量成分的结构分析，特别适用于质谱具有特征裂解规律的同系物的结构研究。本文的抗疟有效部位是由间苯三酚衍生物组成的混合物，而间苯三酚衍生物的质谱均显示特征裂解方式，主要是在桥式次甲基两侧发生裂解，根据分子离子峰可推测聚合的环数，根据碎片离子的质量数可推测各环的连接顺序和取代基种类，从而确定分子的结构。
该化合物为东北贯众素ABBA的同系物，但极性稍大。LC/MS/MS测定结果显示该化合物的分子量为792，仅比东北贯众素ABPA分子量(806)小14，比东北贯众素ABBA分子量(820)小28，因此证明该化合物为四环间苯三酚，它的质谱，通过与东北贯众素ABBA的质谱比较可知，583.3碎片峰应为A环、B环和C环的碎片，比东北贯众素ABBA的A环、B环和C环碎片612小28，403.3为A环和B环的碎片，与东北贯众素ABBA的A环和B环碎片相同，因此鉴定该化合物为东北贯众素ABAA(dryocrassin ABAA)。
实验例4 抗乙肝病毒活性测定1实验材料1.1 药品上述分离得到的新化合物。
1.2 细胞HBV-DNA克隆转染人肝癌细胞(Hep G2)的2215细胞系(美国Mount sinai医学中心构建，人民解放军302医院病毒室引进并自行传代培养)。
1.3 试剂DMEM，10％进口加强型小牛血清，380μg/ml的G-418，HBsAg，HBeAg固相放射免疫测定盒，青霉素，链霉素。
2 实验方法每毫升10万个2215细胞接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，37℃5％CO2培养24h，分别加3个稀释浓度的药液，每个浓度3孔，37℃5％CO2培养4天，收集培养液测定HBsAg。同时设细胞对照组3孔。用γ-计数器测定每孔药液Bq值。
药物抑制抗原百分率％＝(细胞对照组Bq-给药组Bq)/细胞对照组Bq×100％3 实验结果见表1，2，3。
表1 化合物1在2215细胞培养中对HBsAg的作用药物浓度 HBsAg(μg/ml) Bq值 抑制率(％)对照组 3194.612.5 3059.64.225 1987.037.850 1308.359.0表2 化合物2在2215细胞培养中对HBsAg的作用药物浓度 HBsAg(μg/ml) Bq值抑制率(％)对照组 3194.612.5 1996.6 37.525 1458.3 54.450 1043.3 67.3表3 化合物3在2215细胞培养中对HBsAg的作用药物浓度 HBsAg(μg/ml) Bq值抑制率(％)对照组 3194.612.5 3174.6 0.625 2199.0 31.150 1491.3 53.3上述实验结果表明，3个新化合物在2215细胞培养中均对HBsAg有抑制作用，且具有良好量效关系。
权利要求
1.来自中药的3个新化合物。
2.根据权利要求1的应用，其中所述中药是绵马贯众。
3.根据权利要求1的应用，其中所述3个新化合物为 [2R，3R]-2，3-顺-3，5，7，3’，5’-五羟基黄烷-8-C-α-D-吡喃葡萄糖苷([2R，3R]-2，3-cis-3，5，7，3’，5’-pentahydroxyflavan-8-C-α-D-glucopyranoside) 三环黄绵马酸ABB(trisflavaspidic acid ABB) 东北贯众素ABAA(dryocrassin ABAA)
4.上述3个新化合物及其衍生物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了来自中药的3个新化合物的结构，它们分别为[2R，3R]－2，3－顺－3，5，7，3’，5’－五羟基黄烷－8－C－α－D－吡喃葡萄糖苷([2R，3R]－2，3－cis－3，5，7，3’，5’－pentahydroxyflavan－8－C－α－D－glucopyranoside)、三环黄绵马酸ABB(trisflavaspidic acid ABB)、东北贯众素ABAA(dryocrassin ABAA)，同时本发明还公开了这3个新化合物及其衍生物在制备抗乙型肝炎药物中的应用。
文档编号C07D407/04GK1552708SQ0313724
公开日2004年12月8日 申请日期2003年6月3日 优先权日2003年6月3日
发明者高增平, 陆蕴如, 雷海民 申请人:北京中医药大学