专利名称：一种分离的阿托西汀杂质，阿托西汀杂质的制备方法及其作为参照标准的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种分离的盐酸阿托西汀杂质，其制备及其它杂质的制备，与其作为参照标准的用途。
背景技术：
阿托西汀(ATM)，称为(R)(-)-N-甲基-3-(2-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺，具有如下结构 另外，阿托西汀分子式为C17H21NO，分子量为255.35，并且由79.96％C，8.29％H，5.49％N和6.27％O重量比组成。阿托西汀盐酸盐即盐酸阿托西汀，商品名为STRATTERA，用于治疗注意力-缺陷-活动过度障碍(ADHD)的处方口服胶囊剂量为10mg、18mg、25mg、40mg和60mg。EP 0 052 492公开阿托西汀是鼠下丘脑突触小体中去甲肾上腺素摄取的竞争性抑制剂，作用分别比N-甲基-3-(2-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(托莫西汀，“TMX”)的外消旋混合物和(+)-对映体高2倍和9倍。阿托西汀是托莫西汀的(R)-(-)对映体。
美国专利号4,018,895公开了外消旋托莫西汀和其它芳基氧基苯基丙胺，例如FLUXETINE和NISOXETINE，也公开了这些化合物的精神病治疗作用。EP 0 052 492公开了阿托西汀，包括其药学上可接受的的加成盐，例如盐酸盐，也公开了它们作为抗抑郁药的用途。EP 0 721 777公开了阿托西汀在治疗ADHD中的用途。
本领域已知盐酸阿托西汀的制造方法，包括欧洲专利公开号EP 0052 492、美国专利号4,868,344和6,541,668、国际专利申请公开号WO 00/58262，其内容通过引用结合到本文中。
本领域已知出于对人体给药安全考虑在一种有效的药物成分(API)产品商业化之前需要由国家和国际的管理机关建立毒理学上非特征性杂质的鉴定的极低下限。通常，每种杂质的限量少于约0.15％重量比。未鉴定的和/或非特征性杂质的限量明显更低，通常少于0.1％重量比。因此，在API制造中，在商业化之前要求产品例如盐酸阿托西汀的纯度，与在配方药物的制造中活性剂的纯度相同。
本领域也已知API中的杂质可能来源于API自身的降解，这关系到贮藏中纯API和包括化学合成的制造过程中的稳定性。工艺杂质包括未反应的原料、原料中包含的杂质的化学衍生物、合成的副产物和降解产物。
除了稳定性这个API保质期中的一个因素外，商业制造过程中产生的API的纯度无疑是商业化的一个必要条件。商业制造过程中引入的杂质必须限制在很少量，并且最好基本上不存在。例如，API制造商的ICH Q7A生产指南要求在制造过程中通过明确规定原料的质量，控制工艺参数，例如温度、压力、时间和化学计量比，和包括纯化步骤，例如结晶、蒸馏和液-液萃取来保持工艺杂质在设定界限以下。
反应的产品混合物很少是有符合药物标准的足够纯度的单一化合物。反应的副产品和副产物和反应中使用的辅助试剂在多数情况下也会出现在产品混合物中。在一种API加工过程中的某一阶段，例如盐酸阿托西汀，必须分析纯度，通常通过HPLC或GC分析，以测定它是否适合继续加工和最后在药物产品中使用。API不需要绝对纯净，因为绝对纯度是很难达到的理论目标。建立纯度标准的目的是保证API尽可能无杂质，并因此，临床使用尽可能安全。像上面讨论的，美国食品和药品管理指导方针推荐一些杂质的量限制在少于0.1％。
通常用光谱和/或其它物理方法鉴定副产品、副产物和辅助试剂(总称为“杂质”)，然后得到一个峰位置，例如色谱中的峰位置，或TLC板中的斑点。(Strobel p.953，Strobel，H.A.；Heineman，W.R.，化学仪表系统化方法(Chemical InstrumentationA SystematicApproach)，3rd dd.(Wiley & SonsNew York 1989))。此后鉴定杂质，例如，通过它在色谱图中的相对位置，其中色谱图中的位置通常通过测量样品注射到色谱柱中到特定成分洗脱并通过检测器之间的数分钟时间测定。色谱图中的相对位置称为“保留时间”。根据仪器使用条件以及很多其它因素，保留时间每天或甚至在一天之中都在变化。为了减小影响这些变化用于杂质的准确识别，操作者用“相对保留时间”(“RRT”)来鉴定杂质。(Strobel p.922)。杂质的RRT是它的保留时间除以参照标记的保留时间。理论上，盐酸阿托西汀本身可以用作参照标记，但实际上它在混合物中占很大比例以致可使柱子饱和，并由于最大峰值可以漂移，导致不能重复保留时间(Strobel，Fig.24.8(b)，p.879，举例说明了当柱子超载时观察到的不对称峰)。因此，它对选择除API以外的化合物并用那种化合物作为参照标记是有利的，向混合物中加入的或存在于混合物中的这种化合物数量大到足以以检测并且小到不足以饱和柱子。
药物制备研究研究和开发领域中技术人员理解在相对纯状态的化合物可用作“参照标准”。参照标准与参照标记相似，只用于定性分析，但也用于未知混合物中参照标准的化合物的定量。当参照标准的已知浓度的溶液和未知混合物用相同技术分析时，参照标准是“外标”(Strobel p.924，Snyder p.549，Snyder，L.R.；Kirkland，JJ.近代液相色谱法序论(Introduction to Modern Liquid Chromatography)，2nd ed.(John Wiley & SonsNew York 1979))。可以通过比较检测器的响应强度来测定混合物中化合物的量。也参照美国专利号6,333,198，通过引用结合到本文中。
如果预定了补偿检测器对两种化合物的灵敏度差别的“响应因子”，参照标准也可用于定量混合物中另一种化合物。(Strobel p.894)。为此目的，向混合物中直接加入参照标准，并称为“内标”(Strobel p.925，Snyder p.552)。
当没有加入参照标准，未知混合物包含可检测量的参照标准化合物时用所谓“标准加入”技术，参照标准甚至可以用作内标。在“标准加入”中，通过加入已知并且不同数量的内标至少制备两种样品。(Strobel pp.391-393，Snyder pp.571，572)。通过将检测器响应对加入到每种样品中的参照标准的量作图，并外延图表到零点，可测定未经添加的混合物中存在的参照标准引起的检测器响应比例(参见例如，Strobel，
图11.4p.392)。
如本领域技术人员已知的，通过了解其化学结构和合成途径，及通过鉴定影响在最后产品中杂质量的参数来大大加强工艺杂质的控制。
附图简述图1显示通过GC在HP-3535％苯基甲基硅氧烷(HewlettPackard cat.N°19091G-113)柱子上得到的ATM-HCl杂质的典型的色谱图。
图2显示通过GC在Zebron ZB-WAX 100％聚乙二醇(Phenomenex cat.N°7KK-G007-22)柱子上得到的2-氟代甲苯杂质的典型的色谱图。
图3显示通过非手性色谱仪在YMC-Pack ODS-AQ，S-5μm柱子上得到的D-ATM的典型的色谱图。
图4显示通过手性色谱仪在CHIRALCEL OD-R纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)柱子上得到的盐酸阿托西汀的典型的色谱图。
发明概述在第一个实施方案中，本发明目的在于分离的盐酸阿托西汀杂质；N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(3-ATM HCl)的分离的盐酸盐。
在另一个实施方案中，本发明目的在于制备3-ATM HCl的方法，通过3-氟代甲苯(3FT)与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物(alkolate)在下面确定的工艺条件下反应。
而在另一个实施方案中，本发明目的在于制备另一种盐酸阿托西汀杂质N-甲基-3-(4-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(4-ATM HCl)的方法，通过4-氟代甲苯(4FT)与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物在下面确定的工艺条件下反应。
而在又一个实施方案中，本发明目的在于制备另一种盐酸阿托西汀杂质N-甲基-3-苯氧基-3-苯基丙胺(D-ATM HCl)的方法，通过氟苯(FB)与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物在下面确定的工艺条件下反应。
在一个实施方案中，本发明目的在于在盐酸阿托西汀定性分析中作为参照标记的3-ATM HCl及两种盐酸阿托西汀杂质4-ATM HCl和D-ATM HCl的使用的方法。
在另一个实施方案中，本发明目的在于一种用3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl作为参照标准分析定量盐酸阿托西汀纯度的方法。
而在又一个实施方案中，本发明目的在于一种规定用于合成所需纯度的盐酸阿托西汀的2FT原料中3FT、4FT和FB杂质数量限度的方法，该方法包括使用3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl作为参照标准。
在另一个实施方案中，本发明目的在于一种盐酸阿托西汀纯度定量的方法，包括使用3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl作为参照标准，其中参照标准或者作外标或者作内标。
在一个实施方案中，本发明目的在于一种用于2-氟代甲苯纯度分析的分析方法。
在另一个实施方案中，本发明目的在于一种包含限制用于盐酸阿托西汀合成的2FT原料中杂质3FT、4FT和FB数量的方法，通过使用3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl中至少一种作为参照标准确定在2-氟代甲苯原料中3FT、4FT和FB的数量以保证盐酸阿托西汀产品纯度。
而在又一个实施方案中，本发明目的在于一种用于测量盐酸阿托西汀样品中的三种杂质的新颖的GC方法。在进一步实施方案中，本发明指示一种用于测量2-氟代甲苯样品中3FT、4FT和FB的新颖的GC方法。
发明详述除非文中另有说明，本文所用的在申请中涉及的三种杂质包括外消旋混合物和对映体纯形式。因此，例如N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(和它的首字母缩略词“3-ATM HCl”)指的是(±)-N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺或者是(R)(-)-N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺。
本文所用术语“芳香族溶剂”指的是C6-0芳香族烃例如，但不限于苯、二甲苯或甲苯。
本文所用术语“预定的水平”，是指杂质3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl的水平，即通过GC或HPLC测量的等于或低于0.15％的水平。
本文所用术语“分离的”指的是通过GC或HPLC判定至少为80％纯的化合物，优选至少90％，甚至更优选至少95％，并且最优选至少99％。
依据它们的位置在鉴定混合物成分的定性分析中使用“参照标记”，例如，在色谱或薄层色谱(TLC)板中。(Strobel pp.921，922，953)。为此目的，如果化合物在混合物中存在则没必要向混合物中加入化合物。“参照标记”只用于定性分析，而参照标准可用于定量或定性分析，或用于两种分析。因此，参照标记是参照标准的一部分，并包括在参照标准的定义内。
本文所用术语“参照标准”指的是可用于活性药物成分的定量和定性分析的化合物。例如，化合物的HPLC或GC保留时间可以用来确定相对保留时间，因此可能做定性分析。注射到HPLC或GC柱子之前的溶液中化合物的浓度可以用HPLC或GC峰下面积作比较，因此可以做定量分析。
在上述一般术语中描述了参照标准。然而本领域技术人员将理解，检测器响应可以是，例如得到的色谱图的峰高或积分的峰面积，例如通过UV或折射率检测法，从HPLC系统的洗脱液检测或，例如离子火焰检测(FID)或热导率检测法，从气相色谱的洗脱液检测，或其它检测器响应，例如，在荧光TLC板上斑的UV吸收率。参照标准的位置可用于计算用于盐酸阿托西汀和盐酸阿托西汀杂质的相对保留时间。
本文所用术语“大体上”，是指RRT大体上相同，即6次注射总体相对标准偏差等于或低于5％。
本发明目的在于一种以前未鉴定过的盐酸阿托西汀的杂质，它的制备以其它已知杂质的制备，并且本发明目的在于这些杂质作为参照标准用于盐酸阿托西汀纯度分析定量的使用，与在高纯度盐酸阿托西汀的制造中要求一样。
在(±)托莫西汀溶液和最终产品中已经鉴定三种盐酸盐杂质。这三种盐酸盐杂质是一种以前未鉴定过的化合物N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(3-ATM HCl)，以及N-甲基-3-(4-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(4-ATM HCl)的盐酸盐，和N-甲基-3-苯氧基-3-苯基丙胺(D-ATM HCl)的盐酸盐。这三种盐酸盐杂质分别通过3-氟代甲苯(3FT)、4-氟代甲苯(4FT)和氟苯(FB)与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物反应形成。发现用常规的纯化步骤除去这些盐酸盐杂质惊人地困难。
本发明提供一种分离的盐酸阿托西汀杂质，N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(3-ATM HCl)，具有结构 这种3-ATM HCl杂质是阿托西汀的区域异构体。
本发明提供一种通过2-氟代甲苯的杂质3-氟代甲苯与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物反应制备3-ATM HCl的方法。这种方法包括a)在温度为至少90℃并在强碱存在下，N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺与DMSO结合；b)加入3-氟代甲苯并保持反应混合物至少5小时；c)向反应混合物中加入第一种有机溶剂和水；d)回收(±)3-甲基托莫西汀碱粗品；e)在C1-4醇和芳香族溶剂存在下，(±)3-甲基托莫西汀碱粗品与(S)-(+)-扁桃酸结合，并加热到温度为约65℃-约70℃；f)回收3-甲基托莫西汀(S)-(+)-扁桃酸盐；
g)3-甲基托莫西汀(S)-(+)-扁桃酸盐与第二种有机溶剂、水和碱结合；h)回收3-甲基托莫西汀碱；i)把3-甲基托莫西汀碱转变为相应的盐酸盐。
在步骤a)中加入相对少量DMSO，并且甚至认为DMSO是催化剂。优选，每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中DMSO量是约0.1～约20mol。最优选，每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中DMSO量是约3～约4摩尔。
在步骤a)中强碱可以是NaOH、KOH、Ca(OH)2或Ba(OH)2中任何一种。优选，强碱是KOH。优选每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中存在碱量为约3～约4摩尔。
优选在步骤b)中每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中加入的3-氟代甲苯的量至少为2摩尔。
优选在步骤c)中第一种有机溶剂选自C5-10脂肪族和芳香族烃，芳香族烃可被一种或多种(优选1～3种)C1-3烷基、C3-8烷基酯和C3-8烷基醚取代。更优选，有机溶剂选自甲苯、苯、二甲苯、二异丙醚、甲基-叔-丁基醚(methyl-tert-butyl)、乙酸乙酯、乙酸正丁酯(ethyl acetaten-butylacetate)和乙酸异丁酯。最优选，有机溶剂是甲苯。
优选在步骤e)中每1g(±)3-甲基托莫西汀碱中加入C1-4醇的量约为0.1ml。最优选，C1-4醇是甲醇。芳香族溶剂可以是被一种或多种(优选1～3种)C1-10烷基，例如甲苯、苯、二甲苯取代的芳香族的烃。有机溶剂首选甲苯。优选，加热后，反应混合物冷却到温度为约0℃-约20℃。优选，反应混合物冷却到温度为约5℃-约10℃。
优选步骤g)中碱选自碱土金属氢氧化物，例如NaOH或KOH，或碱土金属碳酸盐例如Na2CO3或K2CO3。最优选，碱是NaOH。
优选步骤g)中第二种有机溶剂选自脂肪族或芳香族烃例如C5-8烷、甲苯和二甲苯，C1-4烷基酯例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸正丁酯和乙酸异丁酯，酮例如甲乙酮，直链的或支链的C4-8醇例如正丁醇、2-丁醇和正戊醇或它们的混合物。更优选，第二种有机溶剂选自乙酸甲酯、乙酸正丁酯和乙酸异丁酯。最优选，第二种有机溶剂是乙酸正丁酯。
美国专利号4,018,895公开第二种杂质是N-甲基-3-(4-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(4-ATM HCl)，并具有结构 这种4-ATM化合物是阿托西汀的区域异构体。
本发明提供一种通过2-氟代甲苯的一种杂质4-氟代甲苯与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物在上面描述的用于3-ATM HCl制备的工艺条件下反应制备它的方法。
第三种杂质是N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺或“去甲基阿托西汀”(D-ATM)。U.S.专利号4,018,895公开这种化合物，并具有结构 本发明提供一种通过2-氟代甲苯的一种杂质氟苯与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺的烷氧化物在上面描述的用于3-ATM HCl制备的工艺条件下反应制备D-ATM杂质的方法。
通过独立合成鉴定这三种杂质，其中由包含已知量为约2％(各自重量比)的3FT(3-氟代甲苯)、4FT(4-氟代甲苯)和FB(氟苯)，的2FT(2-氟代甲苯)有意制备(±)TMX。反应中形成的相应副产物的相对量，通过GC面积百分比检测，符合预期的向亲核置换的芳香族激活作用。即来源于FB的D-ATM HCl的量远大于来源于3FT的3-ATM HCl的量，来源于3FT的3-ATM HCl的量又远大于来源于4FT的4-ATM HCl的量。发现这些杂质的相对量超过反应后回收的2FT也符合预期。即FB的量少于3FT的量，3FT的量少于4FT的量。表1提供了这些结果表1
通过气相色谱分析了来源于盐酸ATM合成的逐步工艺的(±)托莫西汀和这些中间产物以从ATM中分离这三种杂质，经GC非手性分析，总是产生包括两种对映体的峰。
在纯化过程中，假定分析技术产生样品中杂质的相应峰，则杂质X的纯化因子可定义如下(原料样品中X的峰面积％)/(产品样品中X的峰面积％)这种计算意味纯化因子越高，越容易除去杂质，而且纯化因子小于1表明即使可能，除去杂质也可能非常困难。
得到3-ATM、4-ATM和D-ATM杂质的纯化因子通常很低，最大值为4.56。其它杂质的值大于50，并且那些杂质可有效除去。在扁桃酸盐阶段也发现D-ATM杂质的纯化因子小于1。下列表提供了详细分析，其中报告了GC面积百分比数据和计算的纯化困子，即用于合成中各步骤的各杂质的原料A％对产品A％的比例。
表2步骤2阿托西汀(S)-(+)扁桃酸盐粗品(ATM-SAM粗品)构成
表3步骤3纯化的阿托西汀(S)-(+)扁桃酸盐(纯化的ATM-SAM)构成
表4步骤4和5盐酸阿托西汀(ATM HCl)构成
可使用用于计算D-ATM HCl、3-ATM HCl和4-ATM HCl的量的纯化因子返回来计算2-氟代甲苯中FB、3FT和4FT的量。计算如下
尽管方法包括五个纯化步骤，即两次萃取和三次结晶，但3-ATMHCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl的清除率低的惊人。因此，像通常预计的，通过重复本领域使用的纯化步骤得不到所需纯度的盐酸阿托西汀。通过限制原料2-氟代甲苯中杂质3FT、4FT和FB的量可能得到所需纯度。可通过上面描述的纯化因子计算确定3FT、4FT和FB杂质的限量，条件是有合适的参照标准可用。
本发明提供包括使用3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl作为参照标记或参照标准的各种方法。
当使用这些对映体纯的杂质时，它们将以外消旋物形式在相同的保留时间被洗脱。
提供一种鉴定盐酸阿托西汀样品中杂质的方法，包括(a)提供包含参照标记和盐酸阿托西汀的参照样品；(b)用HPLC或GC测定参照样品以确定参照标记相对于盐酸阿托西汀的相对保留时间；(c)用HPLC或GC测定盐酸阿托西汀的样品以确定杂质相对于盐酸阿托西汀的相对保留时间；(d)比较在步骤(b)和(c)中测得的相对保留时间；如果在步骤(b)和(c)中确定的相对保留时间大体上相同，鉴定杂质与参照标记相同；其中参照标记选自3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl。
也提供一种确定盐酸阿托西汀样品中杂质的量的方法，包括(a)向盐酸阿托西汀样品中加入已知量的参照标准；(b)用HPLC或GC测定盐酸阿托西汀；(c)鉴定并测量与杂质相关的HPLC或GC峰面积；(d)鉴定并测量与参照标准相关的HPLC或GC峰面积；(e)依据步骤(c)和(d)中的结果计算盐酸阿托西汀样品中杂质的量；参照标准选自3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl。
也提供一种确定盐酸阿托西汀样品中杂质的量的方法，包括
(a)提供一种包含未知浓度杂质的盐酸阿托西汀样品；(b)提供一种已知浓度杂质的样品；(c)用HPLC或GC测定盐酸阿托西汀样品的一部分和杂质样品的一部份；(d)测量从盐酸阿托西汀样品和杂质样品得到的杂质峰面积；并(e)根据步骤(d)的测量值计算盐酸阿托西汀样品中杂质的浓度；杂质选自3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl。
也提供一种保证盐酸阿托西汀制备纯度的方法，包括(a)选择杂质3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl的预定的水平；(b)测量合成盐酸阿托西汀的方法各步骤中形成的各杂质的纯化因子；(c)计算2-氟代甲苯中存在的3-氟代甲苯、4-氟代甲苯和氟苯的最高水平以使在盐酸阿托西汀生产中3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl的水平低于预定的水平；步骤(c)包括3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl作为参照标准的使用。
本领域已知合成盐酸阿托西汀的合适的方法包括2-氟代甲苯与N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺反应并包括欧洲专利公开号EP 0 052492、美国专利号4,868,344和6,541,668和国际专利申请公开号WO00/58262公开的那些。通常，生产阿托西汀的合成途径包括I.托莫西汀合成，用2-氟代甲苯作为反应试剂；II.用(S)-(+)扁桃酸作为拆分剂的托莫西汀光学拆分；并III.盐酸阿托西汀的生成和分离。
分析方法用下列气相色谱仪器和步骤确定盐酸阿托西汀杂质
柱子及填充物HP-3535％苯甲基硅氧烷(Hewlett Packard cat.N°19091G-113)或等价物长度30m直径0.32m薄膜厚度0.25μm注射器温度250℃检测器温度250℃烘箱温度 时间(min) 温度0180℃20.0 180℃23.5 250℃33.5 250℃平衡时间 5min注射体积 1μl载气 氮气流速 1.5ml/min检测器FID分流比10/1得到的典型的保留时间如下RT RRT(±)D-ATM 12.8′ 0.81ATM 15.9′ 1.00(±)3-ATM 16.9′ 1.06(±)4-ATM 18.3′ 1.15图1显示了样品的色谱图。
如下制备样品溶液约15mgATM HCl溶解于1ml水中。然后，加入10ml正己烷和2ml 5％(体积比)的氨水。剧烈混合样品，相分离后，将约1ml上层有机相转移到注射管形瓶中。
用下列气相色谱仪器和步骤确定2-氟代甲苯杂质柱子及填充物Zebron ZB-WAX 100％聚乙二醇(Phenomenex cat.N°7KK-G007-22)或等价物长度60m直径0.53m薄膜厚度1.0μm注射器温度 180℃检测器温度 200℃烘箱温度Rate℃/min 温度 保留Min60℃ 2410.0200℃ 10平衡时间3min注射体积1μl载气氮气流速3.0ml/min检测器 FID分流比 10/1得到的典型的保留时间如下RT RRT氟苯 14.4′ 0.652-丁醇 16.1′ 0.732-氟代甲苯 22.1′ 1.003-氟代甲苯 22.9′ 1.044-氟代甲苯 23.5′ 1.06图2显示了样品的色谱图。
用下列非手性HPLC方法完成阿托西汀的定量分析柱子及填充物YMC-Pack ODS-AQ，S-5μm、12nm250mm×4.6mm×5.0μm，cat n.042574458(W)
或等价物缓冲液 NaH2PO4一水化物pH 3.0∶2.8g在1000mL去离子水中，用H3PO485％(w/w)调pH在3.0。
用0.45μm过滤器过滤。
洗脱液A 乙腈∶水90∶10梯度时间(min)％缓冲液％洗脱液A0 8515204852304852平衡时间8分钟流速1.5mL/rnins。
检测器 UV在215nm柱温40℃稀释液缓冲液∶乙腈(60∶40)注射液5μL标准溶液制备准确称取约20mg去甲基阿托西汀(D-ATM)标准放100ml容量瓶中并用稀释液稀释定容。将0.5ml得到的溶液转移到100ml容量瓶中并用稀释液稀释定容。
样品溶液制备在稀释液中制备约1.0mg/ml的ATM*HCl样品溶液。
步骤注射空白稀释液以使柱子稳定并识别系统峰，建议做3个空白。
向色谱仪中注射标准品和样品的溶液使样品的色谱图一直延续到梯度程序结束。
样品的色谱图显示于图3。
通过下列手性HPLC方法确定对映体的纯度柱子及填充物CHIRALCEL OD-R纤维素三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)250mm×4.60mm×10um(Daicel chemicals cat.NA DAIC 14625)或等价物流动相 KPF6100mM/ACN-60/40注意色谱图一直持续到30分钟样品体积5.0μL流速0.8mL/min。
检测器 UV在215nm柱温35℃稀释液流动相为了获得需要的系统适应性可以改变流动相组成和流速。
样品的色谱图显示于图4。
实施例虽然用特定的实施例和优选的实施方案描述了本发明，可以理解本发明并不限于这些实施例和实施方案。因此，本发明包括这里描述的特定实施例和优选实施方案的变更，这对本领域技术人员而言是显而易见的。
实施例1N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(3-ATM HCl)的合成 6g(0.969mol)二甲基亚砜、40g(0.242mol)N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺(100％，mw165.12)和75.5g(1.211mol)氢氧化钾(批量工业级，90％测定)在100℃±3℃加热搅拌1小时。冷却所得的混合物到80℃，并充分搅拌，在约1小时内加入79.95g(0.726mol)3-氟代甲苯，保持温度在83℃±3℃，导致盐沉淀。然后在83℃±3℃搅拌混合物约5小时，加入300ml水和300ml甲苯。搅拌混合物数分钟，并使相分离。用50ml甲苯萃取水相，收集有机相并用80ml水洗涤三次。在约60℃-约80℃真空浓缩洗涤的有机相以产生约70g棕色液体残渣，它是包含约0.2mol 100％碱的(±)3-甲基托莫西汀碱(3-TMX)粗品。在25℃加入400ml甲苯、3ml甲醇和19.0g(0.125mol)(S)-(+)扁桃酸，产生的浆状物加热到温度为约65℃-约70℃至完全溶解形成溶液。然后冷却所得的溶液到约5℃-约10℃，导致固体3-甲基托莫西汀(S)-(+)扁桃酸盐(3-ATM-SMA)结晶，通过过滤分离，发现困难且缓慢，并用甲苯洗涤，发现也困难且缓慢。
在约50℃-约60℃真空下干燥后，回收30g产物。
在室温搅拌下30g干燥的3-ATM-SMA与150ml乙酸正丁酯和150ml水混合。加入约11g30％的氢氧化钠水溶液调节pH到约12.5，使相分离。用30ml水洗涤包含3-ATM碱的有机相两次，用滤纸过滤，并在以后的盐酸盐制备中使用如下。
搅拌的同时，用冰水浴保持温度在约15℃和约25℃之间，向滤过的有机相中滴加8.55g36％的氯化氢水溶液，导致3-ATM盐酸盐(mw291.82)结晶并混悬。在约20℃搅拌混悬液1小时，通过过滤收集固体，用35ml乙酸正丁酯洗涤两次，在约50℃-约60℃真空下干燥18小时，产生约19.6g产物，熔点为约159℃-约160℃，并且1H-NMR数据为9.58ppm，bs，2H；7.35-7.20ppm，m，5H；7.01ppm，t，1H；6.68-6.65ppm，m，2H；6.59ppm，dd，1H；5.30ppm，dd，1H；3.10ppm，quint，2H；2.57ppm，t，3H；2.41ppm，m，2H；2.22ppm，s，3H。依据起始的N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺收率为28％重量比。确定3-ATMHCl是对映体的混合物，通过手性HPLC测得相对比为99/1。
实施例2N-甲基-3-(4-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(4-ATM)的合成
76g(0.969mol)二甲基亚砜、40g(0.242mol)N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺(100％，mw165.12)和75.5g(1.211mol)氢氧化钾(批量工业级，90％测定)在100℃±3℃加热搅拌1小时。冷却所得的混合物到80℃，然后，在充分搅拌下，在约1小时内加入79.95g(0.726mol)3-氟代甲苯，保持温度在83℃±3℃，导致盐沉淀。然后在83℃±3℃搅拌混合物约5小时，并加入300ml水和300ml甲苯。搅拌混合物数分钟，使相分离。用50ml甲苯萃取水相，收集有机相并用80ml水洗涤三次。在约60℃-约80℃真空下浓缩洗涤的有机相以产生约70g(±)4-甲基托莫西汀碱(4-TMX)粗品棕色液体残渣(约0.2mol 100％碱)。在25℃加入400ml甲苯、3ml甲醇和19.0g(0.125mol)(S)-(+)扁桃酸，产生的浆状物加热到温度为约65℃-约70℃。然后冷却所得的溶液到0℃2小时。过滤分离固体4-甲基托莫西汀(S)-(+)扁桃酸盐(4-ATM-SMA)，用甲苯洗涤，任选用40mlMTBE洗涤，并在约50℃-约60℃真空下干燥，产生50g产物。
在室温搅拌下50g干燥的4-ATM-SMA与250ml乙酸(正)丁酯和250ml水混合。加入约21g30％的氢氧化钠水溶液调节pH到约12.5，使相分离。用30ml水洗涤包含4-ATM碱的有机相两次，用滤纸过滤，并在以后的盐酸盐制备中使用如下。
搅拌的同时，用冰水浴保持温度在约15℃和约25℃之间，向滤过的有机相加入14.25g36％的氯化氢水溶液。盐酸4-ATM(mw29.82)大批结晶，加入40ml乙酸正丁酯使搅拌得以进行。所得的混悬液在约20℃搅拌1小时，通过过滤收集固体，用约40ml乙酸正丁酯洗涤两次，并在约50℃-约60℃真空下干燥18小时，产生约23.5g产物，熔点为约164℃-约167℃，33％收率，根据N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺原料计算。通过手性HPLC发现4-ATM HCl是对映体的混合物，相对比为58∶42。
实施例3N-甲基-3-苯氧基-3-苯基丙胺(D-ATM)的合成 g(0.969mol)二甲基亚砜、40g(0.242mol)N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺(100％，mw165.12)和75.5g(1.211mol)氢氧化钾(批量工业级，90％测定)在100℃±3℃加热搅拌1小时。冷却所得的混合物到80℃，然后，在充分搅拌下，在约1小时内加入69.77g(0.726mol)氟苯，保持温度在83℃±3℃，使盐结晶。然后在83℃±3℃搅拌混合物约5小时，加入300ml水和300ml甲苯，并搅拌混合物数分钟。然后使相分离，并用50ml甲苯萃取水相。收集有机相，并用80ml水洗涤三次。在约60℃-约80℃真空下浓缩洗涤的有机相，产生约70g棕色液体残渣，例如，(±)去甲基托莫西汀碱(D-TMX)粗品(约0.2mol的100％碱)。
在25℃加入400ml甲苯、3ml甲醇和19.0g(0.125mol)(S)-(+)扁桃酸，产生的浆状物加热到温度为约65℃-约70℃(未完全溶解)，然后冷却到约5℃-约10℃。通过过滤分离固体去甲基阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐(D-ATM-SMA)，用甲苯洗涤，并在约50℃-约60℃真空下干燥，产生48g产物。在室温搅拌下48g干燥的D-ATM-SMA与250ml乙酸正丁酯和250ml水混合。加入约16g30％的氢氧化钠水溶液调节pH到约12.5，并使相分离。用35ml水洗涤包含D-ATM碱的有机相两次，用滤纸过滤，并在以后的盐酸盐制备中使用如下。
搅拌的同时，用冰水浴保持温度在约15℃和约25℃之间，向滤过的有机相中滴加12.3g 36％的氯化氢水溶液，导致盐酸D-ATM(mw277.80)结晶。所得的混悬液在约20℃搅拌1小时，通过过滤收集固体，用40ml乙酸正丁酯洗涤两次，并在约50℃-大约60℃真空下干燥18小时，产生32.7g产物，根据N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺原料计算的收率为48％，熔点为约170℃-约174℃。通过手性HPLC发现D-ATM HCl是对映体的混合物，相对比为69∶31。
权利要求
1.一种分离的盐酸N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺。
2.一种制备盐酸N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(3-ATMHCl)的方法，包括(a)在温度为至少90℃并在强碱存在下，N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺与DMSO结合；(b)加入3-氟代甲苯并保持反应混合物至少5小时；(c)向反应混合物中加入第一种有机溶剂和水；(d)回收(±)3-甲基托莫西汀碱粗品；(e)在C1-4醇和芳香族溶剂存在下，(±)3-甲基托莫西汀碱粗品与(S)-(+)-扁桃酸结合，并加热到温度为约65℃-约70℃；(f)回收3-甲基阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐；(g)3-甲基阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐与第二种有机溶剂、水和碱结合；(h)回收3-甲基阿托西汀碱；并(i)将3-甲基阿托西汀碱转变成它的盐酸盐。
3.权利要求2的方法，其中步骤(a)包括每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺结合约0.1-20摩尔DMSO，强碱是KOH，在步骤(b)中每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中加入的3-氟代甲苯的量至少为2摩尔，步骤(c)中的第一种有机溶剂选自甲苯、苯、二甲苯、二异丙醚、甲基-叔-丁基醚、乙酸乙酯、乙酸正丁酯和乙酸异丁酯，并且步骤(e)中C1-4醇是甲醇并且加入量是每1g(±)3-甲基阿托西汀碱约0.1ml。
4.一种制备盐酸N-甲基-3-(4-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺(4-ATMHCl)的方法，包括(a)在温度为至少90℃并在强碱存在下，N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺与DMSO结合；(b)加入4-氟代甲苯并保持反应混合物至少5小时；(c)向反应混合物中加入第一种有机溶剂和水；(d)回收(±)4-甲基托莫西汀碱粗品；(e)在C1-4醇和芳香族溶剂存在下，(±)4-甲基托莫西汀碱粗品与(S)-(+)-扁桃酸结合，并加热到温度为约65℃-约70℃；(f)回收4-甲基阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐；(g)4-甲基阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐与第二种有机溶剂、水和碱结合；(h)回收4-甲基阿托西汀碱；并(i)将4-甲基阿托西汀碱转变成它的盐酸盐。
5.权利要求4的方法，其中步骤(a)包括每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺结合约0.1-20摩尔DMSO，强碱是KOH，在步骤(b)中每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中加入的4-氟代甲苯的量至少为2摩尔，步骤(c)中的第一种有机溶剂选自甲苯、苯、二甲苯、二异丙醚、甲基-叔-丁基醚、乙酸乙酯、乙酸正丁酯和乙酸异丁酯，并且步骤(e)中C1-4醇是甲醇并且加入量是每1g(±)4-甲基阿托西汀碱约0.1ml。
6.一种制备盐酸N-甲基-3-苯氧基-3-苯基丙胺(D-ATM HCl)的方法，包括(a)在温度为至少90℃并在强碱存在下，N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺与DMSO结合；(b)加入氟苯并保持反应混合物至少5小时；(c)向反应混合物中加入第一种有机溶剂和水(d)回收(±)D-托莫西汀碱粗品；(e)在C1-4醇和芳香族溶剂存在下，(±)D-托莫西汀碱粗品与(S)-(+)-扁桃酸结合，并加热到温度为约65℃-约70℃；(f)回收D-阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐；(g)D-阿托西汀(S)-(+)-扁桃酸盐与第二种有机溶剂、水和碱结合；(h)回收D-阿托西汀碱；并(i)将4-甲基阿托西汀碱转变成它的盐酸盐。
7.权利要求6的方法，其中步骤(a)包括每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺结合约0.1-20摩尔DMSO，强碱是KOH，在步骤(b)中每摩尔N-甲基-3-羟基-3-苯基丙胺中加入的氟苯的量至少为2摩尔，步骤(c)中的第一种有机溶剂选自甲苯、苯、二甲苯、二异丙醚、甲基-叔-丁基醚、乙酸乙酯、乙酸正丁酯和乙酸异丁酯，并且步骤(e)中C1-4醇是甲醇并且加入量是每1g(±)D-甲基阿托西汀碱约0.1ml。
8.一种鉴定盐酸阿托西汀样品杂质的方法，包括(a)提供包含参照标记和盐酸阿托西汀的参照样品；(b)用HPLC或GC测定参照样品以确定参照标记相对于盐酸阿托西汀的相对保留时间；(c)用HPLC或GC测定盐酸阿托西汀的样品以确定杂质相对于盐酸阿托西汀的相对保留时间；(d)比较在步骤(b)和(c)中确定的相对保留时间；如果在步骤(b)和(c)中确定的相对保留时间大体上相同，则鉴定杂质与参照标记相同；其中参照标记选自3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl。
9.权利要求8的方法，其中参照标记是盐酸N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺。
10.一种确定盐酸阿托西汀样品中杂质的量方法，包括(a)向盐酸阿托西汀样品中加入已知量的参照标准；(b)用HPLC或GC测定盐酸阿托西汀样品；(c)鉴定并测量与杂质相关的HPLC或GC峰面积；(d)鉴定并测量与参照标准相关的HPLC或GC峰面积；(e)依据步骤(c)和(d)中的结果计算盐酸阿托西汀样品中杂质的量；其中参照标准选自3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl。
11.权利要求10的方法，其中参照标准是盐酸N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺。
12.一种确定盐酸阿托西汀样品中杂质的量方法，包括(a)提供包含未知浓度杂质的盐酸阿托西汀样品；(b)提供已知浓度杂质的样品；(c)用HPLC或GC测定盐酸阿托西汀样品的一部分和杂质样品的一部份；(d)测量从盐酸阿托西汀样品和杂质样品得到的杂质峰面积；并(e)根据步骤(d)的测量值计算盐酸阿托西汀样品中杂质的浓度；其中杂质选自3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl。
13.权利要求12的方法，其中步骤(b)中的杂质是盐酸N-甲基-3-(3-甲基苯氧基)-3-苯基丙胺。
14.一种保证盐酸阿托西汀制剂的纯度的方法，包括(a)选择杂质3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl的预定的水平；(b)测量合成盐酸阿托西汀的方法各步骤中形成的各杂质的纯化因子；(c)计算可存在于2-氟代甲苯中的3-氟代甲苯、4-氟代甲苯和氟苯的最高水平以使产生的盐酸阿托西汀中的3-ATM HCl、4-ATMHCl和D-ATM HCl的水平低于预定的水平；其中步骤(c)包括使用3-ATM HCl、4-ATM HCl和D-ATM HCl作为参照标准。
全文摘要
本发明提供分离的盐酸N－甲基－3－(3－甲基苯氧基)－3－苯基丙胺、盐酸N－甲基－3－(4－甲基苯氧基)－3－苯基丙胺和盐酸N－甲基－3－苯氧基－3－苯基丙胺及其制备。本发明进一步提供在阿托西汀合成中上述化合物作为参照标记和/或参照标准的使用。也提供一种限制用于盐酸阿托西汀合成的2－氟代甲苯原料中杂质3FT(3－氟代甲苯)、4FT(4－氟代甲苯)和FB(氟苯)的量的方法。通过用标记3－ATM HCl确定2－氟代甲苯原料中3FT、4FT、FB的量来保证盐酸阿托西汀产品的纯度。
文档编号C07C217/00GK1946678SQ200580013416
公开日2007年4月11日 申请日期2005年6月28日 优先权日2004年6月28日
发明者E·卡斯特里, A·瓦拉蒂 申请人:特瓦药物精化学品股份有限公司