专利名称：一种提取荷叶黄酮的工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从天然植物具体是从荷叶中提取总黄酮的制备工艺，特别是用沉淀、 超滤、大孔吸附树脂技术提取荷叶总黄酮，分步洗脱收集不同类型的荷叶黄酮的制备方 法，并适用于规模化生产用。
背景技术：
荷叶药用基础研究证实了荷叶具有一定的减肥降脂的作用，荷叶的浸剂和煎剂能直 接扩散血管，引起中度降压，荷叶有降压作用，可辅助性治疗继发性肥胖症。荷叶中含 有黄酮化合物、生物碱、萜类化合物等生物活性成分。这些成分具有相当强的抗氧化作 用，能清除生物体内过剩的自由基、防止组织体内脂质过氧化、提高人体机体的免疫力 等，是首选的治疗心脑血管疾病的天然药物。据报道，黄酮类化合物对于改善心、脑血 液循环，调节血脂，降低血清胆固醇等有很好的疗效。
目前，荷叶黄酮生产工艺主要有溶剂萃取法、碱提酸沉法、超临界C02萃取法和树 脂吸附法，其中溶剂萃取法成本高，碱提酸沉法只能提取部分荷叶黄酮，超临界萃取法 设备投入大。目前荷叶黄酮还没有投入工业化生产，其技术仍处于研究探索阶段。现有 关于荷叶黄酮树脂提取研究及专利技术的缺陷是，用大孔树脂吸附前未进行萃取去除脂 溶性杂质，更未去除大分子杂质，上柱后，对树脂污染大，吸附容量很低，使得树脂吸 附不适宜工业化生产中应用，得到的产品纯度也欠佳；其次，解吸并没有考虑荷叶黄酮 是一类结构不同、极性不等的化合物，没有对荷叶黄酮进行分步洗脱分离，分离去杂不 够具体。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用沉淀一萃取一超滤一大孔吸附树脂吸附联用技术精 制荷叶黄酮的方法，浓縮脱醇后沉淀去除了水不溶性杂质，石油醚萃取脱除脂溶性杂质， 超滤膜去除水溶性大分子杂质，大孔吸附树脂选择性吸附荷叶黄酮，分步洗脱收集不同 类型的高纯度黄酮的制备方法，为医药行业使用提供规模化生产的提取荷叶黄酮的工艺。
本发明的技术方案是按下列步骤顺序进行
1) 将洁净鲜荷叶干燥、粉碎，制得荷叶粉末；
2) 将荷叶粉末与50 70%乙醇，按重量比1: 25~30混合置入浸提釜中，升温至70~80 °C，静置40 60分钟，制得荷叶黄酮浸提液；
3) 将浸提液置入真空浓縮釜，脱除浸提液中的乙醇，至釜内物料质量为荷叶质量的 9 11倍时，停止脱除乙醇，得浓缩浸提液，再过滤去除浓縮浸提液中的沉淀物；
4) 将过滤后的浓縮浸提液置入萃取釜，加入石油醚，搅拌、静置30分钟，萃取去 除脂溶性杂质，得萃余液；
5) 调节萃余液的pH值为8.0 10,过滤去除碱不溶性杂质，调节pH值至原有水 平，加入所用荷叶质量的30 50倍的水进行稀释，再用MWCO在5 10万超滤膜进行 超滤，去除水溶性大分子杂质，超滤时为常温，压力为0.10 0.20MPa，直至料液剩15 30%时，加水透析至少两次，制得黄酮超滤处理液；
6) 采用吸附容量为196mg黄酮/mL大孔树脂，将其湿法装入树脂柱，水洗涤平衡后， 将超滤处理液缓慢通入树脂柱，上柱流速为4 6BV/h，检测漏出液黄酮浓度达到初始浓 度的10 20%时停止上柱；
7) 对吸附饱和的树脂柱，采用1.0 2.0倍树脂体积的pH值为3~5、温度为10 15 。C的水洗涤，有效去除杂质；然后用1.0 2.0倍树脂体积的10%左右的乙醇水溶液洗脱 树脂吸附的黄酮甙类化合物，得纯度>50%的黄酮甙类化合物；接着用1.0 2.0倍树脂体 积的20 40%乙醇水溶液洗脱树脂吸附的中等极性的黄酮类黄酮化合物，得纯度>85%的 中等极性的黄酮类黄酮化合物；再用1.0~2.0倍树脂体积的45 50%的乙醇水溶液洗脱， 该洗液弃用；最后，用1.0 2.0倍树脂体积的60%左右的乙醇水溶液洗脱树脂中吸附的 极性弱的黄酮类化合物，得纯度>50%的极性弱的黄酮类化合物；
8)将上步骤分离得到的三种荷叶黄酮类化合物解吸液，分别进行真空浓缩，回收乙 醇，得三种浸膏，再将三种浸膏分别进行真空干燥、粉碎，得三种荷叶黄酮精细粉。
鲜荷叶的采取原则为莲藕生长成熟期、色泽鲜艳、无斑点的荷叶。
往步骤2)制得的滤渣中以重量比1: 15 10加入50~70%乙醇，按步骤2)的温度、 时间再提取一次，并将该提取液加入步骤2)制得的提取液。
往步骤4)的浓縮浸提液中加入2/3 1倍体积的沸程为6(TC的石油醚，萃取两次， 去除脂溶性杂质。
将萃余液调节pH8 9，微滤后调节pH至原有水平5.6 5.9，加水稀释，至所用荷叶 质量的30 50倍停止加水，再进行超滤，当超滤进行至料液剩15 30%时，加水透析3 6 次，每次透析加水量为荷叶质量的2 4倍。
大孔吸附树脂为YZ-006树脂，树脂材料为酚醛合成树脂，比表面积400-500 m2/g， 孔容0.80 1.0ml/g，平均孔径70 80婆，湿真密度1.02 U2。
对步骤7)中洗脱黄酮类化合物后的树脂分别加入2.0 4.0倍树脂体积，浓度为2 5 %的碱、酸、95%的乙醇进行洗涤，使树脂恢复吸附性能。
本发明具有的优点本专利申请技术，对浸提液采用浓縮脱醇后沉淀去除了水不溶 性杂质，其次采用石油醚萃取脱除脂溶性杂质，接着又采用超滤膜去除水溶性大分子杂 质，经过这些预处理后，上柱液有效去除了杂质，减轻了对树脂吸附的干扰，使树脂对 黄酮的吸附能力大大增强，黄酮吸附容量从83mg/ml树脂增加至200mg/ml树脂，更能适 应规模化提取的需要。这样的处理步骤更有效遵循分离纯化技术串联使用的基本规律， 即沉淀、萃取易实施，去杂效果显著的优先使用，吸附、层析等精度分离的手段应在后 续工艺中使用。洗脱去杂除了用清水洗柱外，根据45 55%乙醇水溶液洗脱段组分杂质 多，黄酮含量少的特点，废弃该段梯度洗脱组分，有效去除了杂质。梯度洗脱得到， 20%~40%乙醇水溶液洗脱组分荷叶黄酮纯度>85%，高于现有专利技术50%~70%的纯度， 10%乙醇水溶液洗脱组分得到极性强的黄酮甙类化合物，纯度>50%， 60%乙醇水溶液洗 脱组分得到极性弱的黄酮类化合物，纯度>50%,都满足国家二类新药原料的要求。本发 明的提取方法安全、简便、合理经济、适用于大规模生产。
具体实施例方式
实施例1
现场采收的鲜荷叶水洗、风干或烘干、粉碎，得到荷叶粉末；把5kg荷叶粉末用125L 60%的乙醇水溶液浸提，温度75。C，浸提时间40min,收集滤液，滤渣用75L的60X乙 醇再提取一次，合并两次滤液；减压浓縮浸提液至50L左右，回收乙醇，过滤去除水不 溶性杂质；将浓缩过滤浸提液用33.3L石油醚(沸程6(TC)萃取两为5万超滤膜进行超滤， 超滤工艺条件为操作温度常温、超滤压力0.15MPa，当超滤保留液次，将萃余液调节 pH9，过滤去除出现的少量沉淀；加100L水稀释后，用MWCO减少至20L左右，分四 次各加入20L水透析，保证黄酮彻底透过膜，最终滤液体积为初始荷叶质量的50倍 (L/kg)，黄酮透过率>90%，制得黄酮超滤处理液。
在内径<D为80mm树脂柱内，湿法装入高度1000mm的YZ-006树脂(树脂特征参 数材料为酚醛合成树脂，比表面积400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g，平均孔径70 80乾湿真密度1.02 1.12)，超滤处理液调节pH至5.8左右后，缓慢上柱，采用1.5 倍树脂体积的酸性pH4低温15'C以下的水洗涤有效去除杂质，然后用1.0 2.0倍树脂体
积的10%的乙醇水溶液洗脱黄酮甙类化合物，真空浓縮烘干粉碎得干粉50.03g，纯度 >50%;后用1.5倍树脂体积的40%乙醇水溶液洗脱中等极性的黄酮类黄酮化合物，真空 浓縮烘干粉碎得干粉120.21§，纯度>85%;再用1.5倍树脂体积的50%乙醇水溶液洗脱， 弃去这部分洗脱液，最后用1.5倍树脂体积的60%乙醇水溶液洗脱极性弱的黄酮类化合 物，真空浓縮烘干粉碎得干粉16.54g,纯度>50°/。。 实施例2
现场采收的鲜荷叶水洗、风干或烘干、粉碎，得到荷叶粉末；把5kg荷叶粉末用150L 60%的乙醇水溶液浸提，温度7(TC，浸提时间60min，收集滤液，滤渣用50L的60X乙 醇再提取一次，合并两次滤液；减压浓縮浸提液至50L左右，回收乙醇，过滤去除水不 溶性杂质；将浓縮过滤浸提液用35L石油醚(沸程6(TC)萃取两为5万超滤膜进行超滤， 超滤工艺条件为操作温度常温、超滤压力0.15MPa，当超滤保留液次，将萃余液调节 pH8，过滤去除出现的少量沉淀；加100L水稀释后，用MWCO减少至20L左右，分两 次各加入80L水透析，保证黄酮彻底透过膜，最终滤液体积为初始荷叶质量的50倍 (L/kg)，黄酮透过率>卯％，制得黄酮超滤处理液。
在内径①为80mm树脂柱内，湿法装入高度1100mm的YZ-006树脂，超滤处理液 调节pH至5.8左右后，缓慢上柱，采用2.0倍树脂体积的酸性pH4低温15。C以下的水洗 涤有效去除杂质，然后用2.0倍树脂体积的10%的乙醇水溶液洗脱黄酮甙类化合物，真 空浓縮烘干粉碎得干粉50.92g，纯度>50%;后用2.0倍树脂体积的40%乙醇水溶液洗脱 中等极性的黄酮类黄酮化合物，真空浓縮烘干粉碎得干粉120.86g，纯度>85%;再用 1.0 2.0倍树脂体积的50%乙醇水溶液洗脱，弃去这部分洗脱液，最后用1.0 2.0倍树脂 体积的60%乙醇水溶液洗脱极性弱的黄酮类化合物，真空浓縮烘干粉碎得干粉16.32g， 纯度>50%。 实施例3
现场采收的鲜荷叶水洗、风干或烘干、粉碎，得到荷叶粉末；把5kg荷叶粉末用125L 50%的乙醇水溶液浸提，温度8(TC，浸提时间40min，收集滤液，滤渣用50L的50X乙 醇再提取一次，合并两次滤液；减压浓缩浸提液至40L左右，回收乙醇，过滤去除水不 溶性杂质；将浓縮过滤浸提液用40L石油醚(沸程60'C)萃取两为5万超滤膜进行超滤， 超滤工艺条件为操作温度常温、超滤压力0.15MPa，当超滤保留液次，将萃余液调节 pH9，过滤去除出现的少量沉淀；加100L水稀释后，用MWCO减少至20L左右，分四 次各加入20L水透析，保证黄酮彻底透过膜，最终滤液体积为初始荷叶质量的50倍 (L/kg)，黄酮透过率>卯％，制得黄酮超滤处理液。
在内径0为80mm树脂柱内，湿法装入高度1000mm的YZ-006树脂(树脂特征参 数材料为酚醛合成树脂，比表面积400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g,平均孔径70 80禁，湿真密度1.02 1.12)，超滤处理液调节pH至5.8左右后，缓慢上柱，采用1.5 倍树脂体积的酸性pH4低温15'C以下的水洗涤有效去除杂质，然后用1.0 2.0倍树脂体 积的10%的乙醇水溶液洗脱黄酮甙类化合物，真空浓縮烘干粉碎得干粉51.20g，纯度 >50%;后用1.5倍树脂体积的40%乙醇水溶液洗脱中等极性的黄酮类黄酮化合物，真空 浓縮烘干粉碎得干粉117.66g，纯度>85%;再用1.5倍树脂体积的45%乙醇水溶液洗脱， 弃去这部分洗脱液，最后用L5倍树脂体积的60%乙醇水溶液洗脱极性弱的黄酮类化合 物，真空浓縮烘干粉碎得干粉13.75g,纯度>50%。
实施例4
现场采收的鲜荷叶水洗、风干或烘干、粉碎，得到荷叶粉末；把5kg荷叶粉末用125L 70%的乙醇水溶液浸提，温度75。C，浸提时间40min，收集滤液，滤渣用75L的70W乙 醇再提取一次，合并两次滤液；减压浓縮浸提液至50L左右，回收乙醇，过滤去除水不
溶性杂质；将浓縮过滤浸提液用30L石油醚(沸程6(TC)萃取两为5万超滤膜进行超滤， 超滤工艺条件为操作温度常温、超滤压力0.15MPa，当超滤保留液次，将萃余液调节 pH9，过滤去除出现的少量沉淀；加100L水稀释后，用MWCO减少至20L左右，分四 次各加入20L水透析，保证黄酮彻底透过膜，最终滤液体积为初始荷叶质量的50倍 (L/kg)，黄酮透过率>90%，制得黄酮超滤处理液。
在内径0)为80mm树脂柱内，湿法装入高度1000mm的YZ-006树脂(树脂特征参 数材料为酚醛合成树脂，比表面积400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g，平均孔径70 80壤，湿真密度1.02 U2)，超滤处理液调节pH至5.8左右后，缓慢上柱，采用1.5 倍树脂体积的酸性pH4低温15。C以下的水洗涤有效去除杂质，然后用1.0-2.0倍树脂体 积的10%的乙醇水溶液洗脱黄酮甙类化合物，真空浓缩烘干粉碎得干粉48.95g，纯度 >50%;后用1.5倍树脂体积的40%乙醇水溶液洗脱中等极性的黄酮类黄酮化合物，真空 浓缩烘干粉碎得干粉121.18g，纯度>85%;再用1.5倍树脂体积的50%乙醇水溶液洗脱， 弃去这部分洗脱液，最后用1.5倍树脂体积的60%乙醇水溶液洗脱极性弱的黄酮类化合 物，真空浓缩烘干粉碎得干粉17.11g，纯度>50%。
本发明的洗脱黄酮类化合物后的树脂分别加入2.0~4.0倍树脂体积，浓度为2 5%的碱、 酸、95%的乙醇进行洗涤，使树脂恢复吸附性能。使树脂再生。
权利要求
1、一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行1)将洁净鲜荷叶干燥、粉碎，制得荷叶粉末；2)将荷叶粉末与50～70％乙醇，按重量比1∶25～30混合置入浸提釜中，升温至70～80℃，静置40～60分钟，制得荷叶黄酮浸提液；3)将浸提液置入真空浓缩釜，脱除浸提液中的乙醇，至釜内物料质量为荷叶质量的9～11倍时，停止脱除乙醇，得浓缩浸提液，再过滤去除浓缩浸提液中的沉淀物；4)将过滤后的浓缩浸提液置入萃取釜，加入石油醚，搅拌、静置30分钟，萃取去除脂溶性杂质，得萃余液；5)调节萃余液的pH值为8.0～10，过滤去除碱不溶性杂质，调节pH值至原有水平，加入所用荷叶质量的30～50倍的水进行稀释，再用MWCO在5～10万超滤膜进行超滤，去除水溶性大分子杂质，超滤时为常温，压力为0.10～0.20MPa，直至料液剩15～30％时，加水透析至少两次，制得黄酮超滤处理液；6)采用吸附容量为196mg黄酮/mL大孔树脂，将其湿法装入树脂柱，水洗涤平衡后，将超滤处理液缓慢通入树脂柱，上柱流速为4～6BV/h，检测漏出液黄酮浓度达到初始浓度的10～20％时停止上柱；7)对吸附饱和的树脂柱，采用1.0～2.0倍树脂体积的pH值为3～5、温度为10～15℃的水洗涤，有效去除杂质；然后用1.0～2.0倍树脂体积的10％左右的乙醇水溶液洗脱树脂吸附的黄酮甙类化合物，得纯度＞50％的黄酮甙类化合物；接着用1.0～2.0倍树脂体积的20～40％乙醇水溶液洗脱树脂吸附的中等极性的黄酮类黄酮化合物，得纯度＞85％的中等极性的黄酮类黄酮化合物；再用1.0～2.0倍树脂体积的45～50％的乙醇水溶液洗脱，该洗液弃用；最后，用1.0～2.0倍树脂体积的60％左右的乙醇水溶液洗脱树脂中吸附的极性弱的黄酮类化合物，得纯度＞50％的极性弱的黄酮类化合物；8)将上步骤分离得到的三种荷叶黄酮类化合物解吸液，分别进行真空浓缩，回收乙醇，得三种浸膏，再将三种浸膏分别进行真空干燥、粉碎，得三种荷叶黄酮精细粉。
2、 如权利要求1所述的一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于， 鲜荷叶的采取原则为莲藕生长成熟期、色泽鲜艳、无斑点的荷叶。
3、 如权利要求1所述的一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于， 往步骤2)制得的滤渣中以重量比l: 15 10加入50 70%乙醇，按 步骤2)的温度、时间再提取一次，并将该提取液加入步骤2)制得 的提取液。
4、 如权利要求1所述的一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于， 往步骤4)的浓縮浸提液中加入2/3 1倍体积的沸程为6(TC的石油 醚，萃取两次，去除脂溶性杂质。
5、 如权利要求1所述的一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于， 将萃余液调节pH8 9，微滤后调节pH至原有水平5.6 5.9，加水稀 释，至所用荷叶质量的30 50倍停止加水，再进行超滤，当超滤进行 至料液剩15 30%时，加水透析3 6次，每次透析加水量为荷叶质 量的2 4倍。
6、 如权利要求1所述的一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于， 大孔吸附树脂为YZ-006树脂，树脂材料为酚醛合成树脂，比表面积 400-500 m2/g，孔容0.80 1.0ml/g，平均孔径70 80发，湿真密度 1.02 1.12。
7、 如权利要求1所述的一种提取荷叶黄酮的工艺，其特征在于， 对步骤7)中洗脱黄酮类化合物后的树脂分别加入2.0~4.0倍树脂体 积，浓度为2 5%的碱、酸、95%的乙醇进行洗涤，使树脂恢复吸 附性能。
全文摘要
一种提取荷叶黄酮的工艺。涉及从荷叶中提取黄酮的制备工艺。采用沉淀—萃取—超滤—大孔吸附树脂吸附联用技术精制荷叶黄酮，浓缩脱醇后沉淀去除了水不溶性杂质，石油醚萃取脱除脂溶性杂质，超滤膜去除水溶性大分子杂质，大孔吸附树脂选择性吸附荷叶黄酮，分步洗脱收集不同类型的高纯度黄酮，为医药行业使用提供规模化生产的提取荷叶黄酮的工艺。本发明对浸提液采用浓缩脱醇后沉淀去除了水不溶性杂质，其次采用石油醚萃取脱除脂溶性杂质，接着又采用超滤膜去除水溶性大分子杂质，经过这些预处理后，上柱液有效去除了杂质，减轻了对树脂吸附的干扰，使树脂对黄酮的吸附能力大大增强，黄酮吸附容量从83mg/ml树脂增加至200mg/ml树脂，能适应规模化生产。
文档编号C07D311/00GK101095724SQ20061008562
公开日2008年1月2日 申请日期2006年6月28日 优先权日2006年6月28日
发明者刘国建, 董瑞建, 红 韦, 黄阿根 申请人:扬州大学