一种利用环糊精水溶液提取大豆异黄酮的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物提取工艺研究领域，具体涉及一种利用环糊精水溶液提取大豆异 黄酮的方法。
【背景技术】
[0002] 环糊精是直链淀粉在由芽孢杆菌产生的环糊精葡萄糖基转移酶作用下生成的一 系列环状低聚糖的总称，通常含有6~12个D-吡喃葡萄糖单元。其中研究得较多并且具 有重要实际意义的是含有6、7、8个葡萄糖单元的分子，分别称为alpha-、beta_和gama-环 糊精。根据X-线晶体衍射、红外光谱和核磁共振波谱分析的结果，确定构成环糊精分子的 每个D(+)_吡喃葡萄糖都是椅式构象，各葡萄糖单元均以1，4-糖苷键结合成环，由于连 接葡萄糖单元的糖苷键不能自由旋转，环糊精不是圆筒状分子而是略呈锥形的圆环，尤以 β-环糊精最为常用，β-环糊精结构成环状中空筒状，环筒外部是亲水性的表面，内部的 非极性基团形成一个具有一定尺寸的疏水空腔，当β -环糊精上每个葡萄糖残基的2_，3_， 6-位羟基中的氢原子被羟丙基取代时，形成了羟丙基β-环糊精，羟丙基β-环糊精在医药 领域的主要应用体现在（1)增加难溶性药物的水溶性；(2)增加药物稳定性、提高药物生物 利用度；⑶降低药物的毒副作用；同时，羟丙基-β-环糊精可用于口服药物、注射剂、粘膜 给药系统（包括鼻粘膜、直肠、角膜等）、透皮吸收给药系统、亲脂性靶向药物的载体，还可 用做蛋白质的保护剂和稳定剂。
[0003] 大豆异黄酮是存在于大豆中的生物活性成分，是一种具有多种重要生理活性的天 然营养因子，是纯天然的植物雌激，近年来的研究表明，大豆异黄酮具有防治绝经期综合 症、癌症、骨质疏松症、心血管疾病和早老性痴呆症，以及美容、延缓衰老等多方面的生理作 用，对于高雌激素水平者，表现为抗激素活性，可防治乳腺、子宫内膜、结肠、前列腺、肺、皮 肤等癌细胞的生长和白血病，及其它心血管疾病。大豆提取物作为营养补充食品使用，此 外，大豆异黄酮还显著的降低了乳腺癌的发病率，但大豆异黄酮的资源十分有限，在含量较 高的大豆荚中也仅含〇. 1%~0.5%，而豆柏作为大豆油生产工业的副产品，常常只用作畜 禽饲料，其中的大豆异黄酮没有得到很好的开发应用，这些豆柏除少部分用于发酵酱油、生 产大豆浓缩蛋白或分离蛋白外，绝大多数被用作饲料，大豆中含有的生理活性物质大豆异 黄酮留在豆柏中未被利用。
[0004] 普通大豆异黄酮难溶于水，在现有技术中，多是以醇提法对豆柏中的大豆异黄酮 进行提取分离，例如专利号为201010489101.0的专利，其解决了大豆异黄酮分离的问题， 但是提取上依旧采取的是醇提法，并且提取的过程较繁琐；由于其溶解性极差，也就限制 了其在食品药品中的添加与使用，同时在进入人体后在人体的吸收利用度也不能达到预期 的效果，所以在水溶液中对大豆异黄酮的提取就需要探索一套科学地提取大豆异黄酮的工 艺，有利于充分利用豆柏资源的同时，也提高其在水溶液中的溶解度及稳定性，为进一步开 发和研究大豆异黄酮生理功能奠定基础。
【发明内容】
[0005] 本发明设计开发了一种利用环糊精水溶液提取大豆异黄酮的方法，目的是解决大 豆异黄酮在水溶液条件下提取过程中能源浪费，操作不便，提取效率低等问题，通过利用羟 丙基β-环糊精与大豆异黄酮的包合作用，使水溶液下的豆柏中的大豆异黄酮能够高效提 取，同时，也利用了羟丙基β-环糊精具有溶血性低，安全性高，增加难溶性药物稳定性等 特点，使羟丙基环糊精能够高效可靠的用于本发明中。
[0006] 本发明提供的技术方案为：
[0007] -种利用环糊精水溶液提取大豆异黄酮的方法，包括如下步骤：
[0008] 步骤一：称取待实验干燥豆柏1. 5~2. 0g，将待实验干燥豆柏研磨至80目~100 目豆柏粗品；
[0009] 步骤二：将所述豆柏粗品加入到环糊精水溶液中浸泡2~4h;其中，环糊精的质 量占所述豆柏粗品质量的5%~20%，所述豆柏粗品的质量与水溶液的体积的料液比为 1 : 50 ~1 : 100 ;
[0010] 步骤三：将所述豆柏粗品和所述环糊精水溶液的混合液加热提取0. 5h~2. 5h，加 热提取温度50°C~90°C，提取结束后，述豆柏粗品和所述环糊精混合液自然冷却至室温； [0011] 步骤四：计算出大豆异黄酮的转移提取率。
[0012] 优选的是，所述豆柏为脱脂豆柏。
[0013] 优选的是，所述环糊精为羟丙基β-环糊精。
[0014] 优选的是，所述步骤一中，所述豆柏粗品质量为0. 5g。
[0015] 优选的是，所述步骤二中，所述环糊精的质量占所述豆柏粗品质量的10 %~ 17. 5%。
[0016] 优选的是，所述步骤二中，所述豆柏粗品的质量与所述水溶液的体积的料液比为 1 : 75。
[0017] 优选的是，所述步骤二中，所述混合液加热提取1~2h。
[0018] 优选的是，所述步骤三中，所述提取温度60°C~80°C。
[0019] 优选的是，所述步骤三中，在所述豆柏粗品和所述环糊精水溶液的混合液回流状 态下进行提取。
[0020] 优选的是，所述步骤四中，计算大豆异黄酮的转移提取率的方法为：提取转移率
其中，c为提取液中大豆异黄酮浓度；V为提取液体积；m为提取时称得的豆柏实 际质量;w为豆柏中大豆异黄酮含量。
[0021] 本发明所述的有益效果：
[0022] 1、羟丙基β-环糊精能够有效增加大豆异黄酮在水中的溶解度，有效提高其稳定 性，从而有效的提高水溶液下大豆异黄酮从豆柏中的转移提取率；
[0023] 2、实验简单，操作方便，只需水提取即可，节约能耗，没有污染物的产生。
【具体实施方式】
[0024]下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据 以实施。
[0025] 本发明提供一种利用环糊精水溶液提取大豆异黄酮的方法，包括如下步骤：
[0026] 步骤一：将待实验豆柏进行脱脂处理，首先粗略称取待实验脱脂豆柏1. 5g~2. 0g 数份，将待实验豆柏研磨至1〇〇目豆柏粗品，再分别取等质量的豆柏粗品样品；
[0027] 步骤二：将称好的豆柏粗品加入到环糊精水溶液中浸泡2h~4h;其中，环糊精 的质量占豆柏粗品质量量的5%~20%，豆柏粗品的质量与水溶液的体积的料液比为 1 : 50 ~1 : 100,g/mL;
[0028] 步骤三：将豆柏粗品和环糊精水溶液的混合液置于到圆底烧瓶中进行加热提取实 验，加热提取温度为50°C~90°C，提取时间为0. 5~2. 5h;其中，当温度达到实验温度开始 计时，实验完成后提取液趁热过滤，自然冷却至室温，量取提取液的体积；
[0029] 步骤四：移取lmL提取液置于10mL容量瓶中，以纯甲醇稀释定容，超声30min，稀 释液离心（12000rpm，10min)后取上清液过滤（0. 22μηι)，续滤液进样分析，计算出大豆异 黄酮浓度；其中，通过公式提取转移
算提取转移率，c为提取液中大豆异黄 酮浓度，mg/mL;V为提取液体积，mL;m为提取时称得的?柏实际质量，g;w为?柏中大?异 黄酮含量，mg/g。
[0030] 在另一种实施例中，环糊精为羟丙基β-环糊精，由于羟丙基β-环糊精在医药领 域的具有以下几种优势：（1)增加难溶性药物的水溶性；（2)增加药物稳定性、提高药物生 物利用度；⑶降低药物的毒副作用；同时，羟丙基-β-环糊精可用于口服药物、注射剂、粘 膜给药系统（包括鼻粘膜、直肠、角膜等）、透皮吸收给药系统、亲脂性靶向药物的载体，还 可用做蛋白质的保护剂和稳定剂，所以，在进行本发明实验时，选择羟丙基β-环糊精作为 一种优选，进行药材有效成分的提取。
[0031] 在另一种实施例中，实验步骤一中，作为一种优选，将研磨后的豆柏粗品质量选择 为0. 5g，在实验室的条件下，合理的选择0. 5g作为实验室的提取质量，能够合理的去选择 后续的实验条件。
[0032] 在另一种实施例中，实验步骤一中，羟丙基环糊精的质量占待实验豆柏质量 的 10%~17. 5%〇
[0033] 在另一种实施例中，实验步骤二中，研磨后的豆柏粗品质量与加入水溶液的体积 比（料液比）为1 : 75,g/mL。
[0034] 在另一种实施例中，实验步骤二中，作为一种优选，进行提取实验的实验时间选择 为lh~2h。
[0035] 在另一种实施例中，步骤三中，升温至60°C~80°C进行提取，作为一种优选，还进 行了回流提取实验，使提取温度达到溶液回流状态，此时提取时间的计算以冷凝管中有回 流液体滴下时开始计时。
[0036] 在本发明中，首先通过对料液比、提取方法、提取时间、提取温度、羟丙基β-环糊 精用量等进行单因素考察，进一步设计正交实验对羟丙基β-环糊精辅助性提取大豆异黄 酮工艺进行研究，总结利用羟丙基β-环糊精对大豆异黄酮的选择性提取规律以及各因素 对其选择提取的影响。
[0037] 实施例1 [0038] 1、色谱条件