作为s1p1受体激动剂、免疫抑制剂和抗炎药的3,5-二(芳基或杂芳基)异唑和1,2,4-二唑类的制作方法

专利名称：：作为s1p1受体激动剂、免疫抑制剂和抗炎药的3,5-二(芳基或杂芳基)异唑和1,2,4-二唑类的制作方法作为S1P1受体激动剂、免疫抑制剂和抗炎药的3，5-二(芳基或杂芳基)本发明涉及多环的化合物、其制备方法、其用作药物的用途以及包含它们的药物组合物。更具体而言，本发明一方面提供了式I的化合物，或其生理学上可水解的衍生物、其盐、水合物和/或溶剂化物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中x是-n-或m:h画；R,是取代的联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-d-4烷氧基)-苯基，其中至少一个苯基基团是单取代的；被一个或多个取代基所取代的苯基或被取代的五或六元杂芳基；其中，上述各基团所述的取代基各自独立地选自C!-8烷基、面代d-s烷基、d.s烷氧基、卣代CL8烷氧基、d-8烷氧基-d-8烷氧基、d-8烷基-Ci8烷氧基、d.8烷基-囟代d.8烷氧基、卣代C,-8烷基-d-8烷氧基、面代C^烷基-卣代C，.s烷氧基、卣代Cw烷氧基-d-8烷氧基、C^烷氧基-囟代Cw烷氧基、囟代C^烷氧基-卣代C^烷氧基、C,-8烷氧基-d-8烷基、卤代C,_8烷氧基-d-8烷基、d.s烷氧基-卣代C,-8烷基、卣代d-8烷氧基-卤代Q.8烷基、C2-6链烯氧基、Cw炔氧基、C3-6环烷基、C3.6环烷基-C"烷基、C3-6环烷基-Cw烷氧基、Cw环烷基-氧基、苯基-C"烷氧基和杂环-Q-4烷氧基；R2是任选地被面素、oh、nh2、CL4烷氧基或CL4烷基羰基氧基所取异噁唑和1,2,4-喁二唑类代的C"烷基；氨基；OH;C,—4烷氧基；NH-OH;羧基；氨磺酰基；氨甲酰基；或HN-CO-d—4烷基；或者R2是R3R4COOH或R3R4CONH2，其中R3是S02-NH、S02-N(C14烷基)、CO-NH、CO-N(CL4烷基)、CH20、NH画CO或N(d-4烷基)CO;并且Rt是任选地净皮O、S或C-CH2打断的Cw亚烷基，或4壬选地取代的亚苯基或(:3-6亚环烷基；且环A可以是苯基或杂芳基，其各自任选地被一个或多个独立地选自卣素、Cw烷基、卣代d—4烷基、Cw烷氧基、面代d—4烷氧基或腈的取代基进一步取代；或者R2是氢，条件是环A是3-吡咬基。囟素可以是氟、氯或溴，优选氟或氯。作为基团或在基团中存在的烷基或烷氧基可以是直链或支链的。d-6亚烷基可以是直链或支链的。作为基团或作为基团的一部分的卤代Cw烷基或卤代烷氧基可以是被1-5个卤素取代的d-s烷基或Cu烷氧基，例如CF3或CF3-CH2-0-。d.s烷基-卣代C^烷氧基可以是被C^烷基例如在1位进一步取代的卤代C,—8烷氧基。这一点也可以适用于其它基团。当R,是取代的联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C"烷氧基)-苯基时，一个和/或两个苯基基团可以是被取代的，例如被卤素、C,-4烷基、C^烷氧基、卣代d—8烷基、卣代C^烷氧基或腈所单-或二取代。优选联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C^烷氧基)-苯基的至少一个苯基基团是单取代的，例如如上所述。更优选联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-Cw烷氧基)-苯基的每个苯基基团都是单取代的，例如如上所述，例如被卣代d-s烷基所单取代，并且第二个苯基基团上的取代基任选地为卤素、Cw烷基或Cr4烷氧基或面代C^8烷基。当Ri是取代的苯基时，其可以是单-或二取代的。当R，是单取代的苯基时，所述取代基可以优选为卣代d—8烷基，特别是位于间位，尤其有代表性的是在间位的三氟甲基。当R,是二取代的苯基时，一个取代基可以优选为卣代d-8烷基、特别是三氟曱基，并且第二个取代基可以是C,-8烷基、卤代d-8烷基、C,-8烷氧基、囟代d-8烷氧基、C^烷氧基-d-8烷氧基、C,-8烷基-Cw烷氧基、d-8烷基-面代d-8烷氧基、卣代d-8烷基-CL8烷氧基、卣代CL8烷基-自代CL8烷氧基、自代C,.8烷氧基-d.8烷氧基、C,.s烷氧基-卣代Cw烷氧基、卣代d-8烷氧基-卣代d-8烷氧基、Cu烷氧基-C,-8烷基、卣代C,-8烷氧基-d-8烷基、d-8烷氧基-卣代d—8烷基、卣代C^8烷氧基-卣代c,.s烷基、Cw链烯氧基、C2-6炔氧基、(:3.6环烷基、C^环烷基-Cw烷基、C3-6环烷基-CL4烷氧基、C3，6环烷基-氧基、苯基-CL4烷氧基或杂环-d-4烷氧基，优选C^烷基、卣代C^烷基、d.s烷氧基、卣代C，-8烷氧基或C3-6环烷基，更优选Cu烷基、卣代C,-8烷基、d-8烷氧基或C3.6环烷基，并且特别是C3-6环烷基。当Ri是二取代的苯基时，第一个取代基优选在间位，并且第二个取代基优选在对位。R,为五或六元杂芳基的例子包括例如瘗吩基或呋喃基。优选噢吩基。当R,为取代的杂芳基时，其为单-或二取代的，优选二取代的。取代基可以是例如卤代C,_8烷基如CF3和/或任选地被卤素、d-4烷基或d-4烷氧基取代的苯基。当R4是任选地取代的亚苯基或C^亚环烷基时，其可以是l，4-亚苯基或<:3.6亚环烷基如亚环己基，其任选地被卣素取代。环A可以任选地被下述基团进一步取代例如卣素、d-4烷基、卣代Cw烷基、Cw烷氧基、卣代C,—4烷氧基或腈，优选被卣素、d—4烷基、卤代d-4烷基、(^.4烷氧基或卤代d-4烷氧基取代，更优选被卤素、C^烷基、卣代CL4烷基或d-4烷氧基取代，并且特别是被卤素、d-4烷基或C^烷氧基取代。当环A是杂芳基时，其可以是包含选自氮、氧和硫的一种杂原子的六元芳环，例如吡咳L基、嘧咬基或吡"秦基。当环A是杂芳基时，其可以优选嘧啶基或吡梵基，更优选吡"錄，甚至更优选3-吡咬基。独立地、整体地或以任何组合或亚组合的形式优选以下含义i)R,是联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-d-4烷氧基)-苯基，其中至少一个苯基基团连有卣代d-4烷基，例如CF3;ii)R！是被卣代Cw烷基如CF3和任选地如上所述的第二个取代基所取代的苯基；iii)R，是被卣代Q—4烷基如CF3和苯基所取代的噻吩基；iv)R2是氨磺酰基；v)R2是R3-R4COOH;或R3-R4-CONH2;更优选R3-R4CONH2;vi)R3是S02國NH;S02-N(d.4烷基)；NH誦CO;或N(C14烷基)CO;vii)R4是任选地,皮O打断的d.6亚烷基；viii)R2是NH2;ix)环A是未取代的苯基(即除了R2没有其它取代基)。x)环A是取代或未取代(即除了R2没有其它取代基)的吡。定基。式I的化合物可以以游离形式或盐形式存在，所述的盐形式为例如与有机酸或无机酸如盐酸或乙酸的加成盐，或当R2是COOH或包含COOH时与碱形成的盐，例如碱盐如钠盐或钟盐，或取代或未取代的铵盐。应当理解，式I化合物可以以光学异构体、外消旋物或非对映异构体形式存在。例如，当R4是支链的亚烷基时，R4可以包含不对称碳原子。应当了解本发明包括所有的对映异构体和构象异构体以及它们的混合物。在涉及具有如上所述的不对称碳原子的原料时，也应用类似的考虑。式I化合物的生理学上可水解的衍生物是指在生理条件下可水解得到式I化合物和生理学可接受的副产物的化合物，例如可水解得到式I化合物和在预期剂量水平上无毒的醇的酯。本发明还包括制备式l化合物的方法，该方法包括a)为了制备其中X是-N-且R2为如上所定义的式I化合物，将式II的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中环A和R2如上文所定义，或其官能^f生物如活化的酯、酰氯或酸酐，与式III化合物或其官能衍生物反应<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中R,如上文所定义；或b)为了制备其中X是CH且R2是NH2的式I化合物,将式VI的化合物其中R,如上文所定义，与式VII的化合物反应<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>其中环A如上文所定义且R，2是NH2;或c)将式I的化合物转化为另一种式I的化合物，并将所得的游离形式或盐形式的式I化合物回收，并且在需要时，将所得的游离形式的式I化合物转化为所需的盐形式，或者反之亦然。所述方法的步骤a)到c)可以按照本领域的已知方法或下文实施例中公开的方法来进行。将式I化合物转化为另一种式I化合物的例子可以包括例如i)为了制备其中R，是取代的联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C"烷氧基)-苯基(其中至少一个苯基基团是单取代)的式I化合物，将其中R,不是取代的联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C"烷氧基)-苯基(其中至少一个苯基基团是单取代)的式I化合物转化成其中R,是取代的联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C"烷氧基)-苯基(其中至少一个苯基基团是单取代)的式I化合物。ii)为了制备其中R2是R3-R4-COOH的式I化合物，将其中存在于R2中的COOH为生理学上可水解的酯如曱酯形式的式I化合物水解。iii)为了制备其中X是-N-且Y是O且R2是R3-R4-COOH(其中R3是NH-CO或N(Cw烷基)CO且Rt如上文所定义)的式I化合物，将下面的式I化合物与酰化剂反应其中RpX、R、和环A如上文所定义。iv)为了制备其中R2是R3-R4-CONH2的式I化合物，将其中R2是R3-R4-COOH的式I化合物与酰胺化试剂反应。在步骤a)中用作原料的式III化合物可以通过将式VIII的化合物与羟胺反应来制备，其中R,如上文所定义。在步骤b)中用作原料的式VI化合物可以通过将式IX的化合物与羟胺反应来制备，其中R,如上文所定义。其中X是-N-且R2是NH2的式I化合物也可以通过将式III的化合物与式II，的化合物或其官能衍生物如活化的酯、酰氯或酸酐反应来制备，其中环A如上文所定义。所得化合物中存在的硝基基团可以随后通过R，画COH例如催化氢化而被还原。在没有对原料的制备进行具体描述的情况中，这些化合物是已知的或可以按照类似于本领域的已知方法或下文公开的方法进行制备。以下实施例是本发明的例证。步骤a)在惰性气氛下于50。C向4-氰基-2-三氟苯胺(1当量)在苯中的溶液中加入亚硝酸正戊基酯(l当量)。在回流l小时后，加入第二当量的亚硝酸正戊基酯。在另外回流2小时后，将反应混合物冷却到室温并减压浓缩。将深色残余物在硅胶上纯化，使用环己烷^环己烷/乙酸乙酯9/1作为流动相(浅橙色油状物)。步骤b)将步骤a)的化合物(l当量)溶于甲酸(75。/。)，加入Ra-Ni(4当量)。在80。C下3小时后，通过HyfloSuperCef过滤反应混合物，将催化剂/Hyflo用乙醇洗涤2次(注意+易燃)。将所得溶液浓缩(产率61%;酯和酸的混合物)，不经过任何进一步纯化而用于步骤c)。步骤c)将步骤b)的化合物与盐酸羟胺(1.25当量)溶于乙醇，加入K2C03(1.1当量)。在室温下18小时后，浓缩反应混合物，并在加入水后用乙酸乙酯萃取。经Na2S04干燥后，通过珪胶进行纯化，使用环己烷/乙实施例1:4-[3-(2-三氟曱基-联苯-4-基)-异噁唑-5-基-苯胺a)2-三氟甲基-联苯-4-甲醛將酸乙酯9/l作为流动相，得到2-三氟甲基-联苯-4-甲醛肟。ESI誦MS(ESI+):266(M+1H)+b)4-3-f2-三氟曱基-联苯-4-基)-异噁唑-5-基l-苯胺在0。C下向2-三氟甲基-联苯-4-甲醛肟(1当量)在CH2Ch的溶液中加入10%的NaOCl水溶液。随后将4-乙炔基苯胺(1.1当量)的溶液加入，接着将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释，用水萃取3次。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤并浓缩。用Na2S04干燥后，通过硅胶进行纯化，使用环己烷/乙酸乙酯9/1今7/3作为流动相.ESI画MS(ESI+):381(M+1H)+实施例2:N-H-[3-(2-三氟曱基-联苯-5-基)-异噁唑-3-基卜苯基}-琥珀酰胺酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>将实施例1的化合物(l当量)溶于CH2C12,加入4-甲基吗啉(2当量)和琥珀酸酐(2当量)。在室温下16小时后，通过过滤得到纯的标题产物(白色固体)。ESI-MS(ESI+):481(M+1H)十实施例3:N-(4-[3-(2-三氟曱基-联苯-4-基)-异噁唑-5-基卜苯基)-琥珀酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>将实施例2的化合物溶于DMF,随后加入N-(3-二曱基氨基丙基)-N，-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC.HC1;1.5当量)、羟基苯并三唑(HOBt;1.3当量)、25%NH4OH的水溶液(1.2当量)和二异丙基乙胺(1.5当量)。在室温下16小时后，浓缩反应混合物，通过珪胶纯化(CH2CV甲醇95/5CH2C12/甲醇/乙酸50%卯/10/0.125作为流动相)，得到纯的标题化合物。ESI-MS(ESI+):480(M+1H)+3-{4-[3-(2-三氟曱基-联苯-4-基)-[1，2，4噁二唑-5-基-苯磺酰基氨基}-丙酸步骤a)在惰性气氛下、于50。C向4-氛基-2-三氟苯胺(1当量)在苯的溶液中加入亚硝酸正戊基酯(l当量)。在回流l小时后，加入第二当量的亚硝酸正戊基酯。再回流2小时后，将反应混合物冷却到室温，并减压浓缩。将深色残余物在硅胶上纯化，使用环己烷^环己烷/乙酸乙酯9/l作为流动相(浅橙色油状物)。步骤b)将步骤a)的化合物溶于THF中，在-10。C下滴加羟胺(50。/。的水溶液；IO当量)。在室温下16小时后，将反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将有才/l^目用Na2S04干燥后，通过硅胶纯化，以环己烷/乙酸乙酯75/25作为流动相。b)4-(2-甲氧基羰基-乙基氨基磺酰基)-苯曱酸实施例4:a)N-羟基-2-三氟甲基-联苯-4-甲脒<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>使用二异丙基乙胺(2当量)作为碱，将4-氯磺酰基-苯曱酸(1当量)与H-J3Ala-OMexHC1在CH2C12中进行反应来制备。在室温下30分钟后，将反应混合物用水萃取，有机层用Na2S04干燥。除去溶剂得到标题化合物。c)3-{4-342-三氟曱基-联苯-4-基)-〖1,2,41噁二唑-5-基1-苯磺酰基氨基}-丙酸甲酯将4-(2-甲氧基羰基-乙基氨基磺酰基)-苯甲酸(1当量)溶于DMF，并加入EDC.HC1(1.3当量)和HOBt(l.l当量)。在室温下30分钟后，加入N-羟基-2-三氟曱基-联苯-4-甲脒(1当量)，并将反应混合物保持在卯。C下16小时。除去溶剂后，将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和NaHC03溶液萃取。在将有机相用Na2S04干燥后，通过硅胶进行纯化，使用环己烷/乙酸乙酯/CH2C128/2/1作为流动相，得到标题化合物。ESI隱MS(ESI):530(M-IH)-d)3-{4-3-(2-三氟曱基-联苯-4-基)-11,2,41噁二唑-5-基1-絲酰基氨基}-将LiOH(2当量)溶于曱醇/水(l/l)中，加入所述的酯(l当量)。在50。C下4小时后，减压蒸发除去甲醇。用1NHCl将pH调节至约3，反应混合物用乙酸乙酯萃取3次。合并的有机层用Na2S04干燥，过滤，浓缩，在除去溶剂后得到白色粉末状的标题化合物。ESI-MS(ESI):516(M-1H)实施例4-[3-(2-三氟甲基-联苯-4-基)-[l，2，4噁二唑-5-基I-苯胺a)5-(4-硝基-苯基)-3-f2-三氟曱基-联苯-4-基)-l,2,41噁二唑使用4-硝基苯甲酸替代实施例1-步骤c)的方法中的4-(2-甲氧基羰基-乙基氨基磺酰基)-苯甲酸，得到白色粉末状的标题化合物。ESI画MS(ESI+):412(M+1H)+b)将步骤a)的化合物溶于曱醇/乙酸乙酯1/1中，在室温、常压下用Pd/d。。/。作为催化剂氢化16小时。经HyfloSuperCeP过滤后，浓缩反应混合物，在硅胶上纯化(CH2Cl2^CH2CV甲醇95/5作为流动相)，得到标题化合物。ESI-MS(ESI+):382(M+1H)+实施例6:2，6-二甲氧基-3-[3-(2-三氟甲基-联苯-4-基)-l，2，4噁二唑-5-基-吡啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>将2，6-二曱氧基-烟酸(1当量)溶解于二喁烷，加入EDC.HC1(1.3当量)和HOBt(l.l当量)。在室温下30分钟后，加入N-羟基-2-三氟曱基-联苯-4-曱脒(l当量)，并保持反应混合物在90'C下16小时。在除去溶剂后，将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和NaHC03溶液萃取。在将有机相用Na2S04干燥后，通过硅胶纯化，使用环己烷/乙酸乙酯^环己烷/乙酸乙酯100+70/30作为流动相，得到标题化合物。ESI画MS(ESI):426(M-1H)-按照上面实施例所述的方法，使用适宜的原料获得式I的化合物，其中X、R,、R2和环A如下文的表l中所定义。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>游离形式或可药用盐形式的式I化合物显示了例如作为S1P1受体激动剂、例如通过体外和体内试验中所表明的有价值的药理学特性，因此表明其可用于治疗。A.体外式I化合物具有对单独的人类SIP受体的结合亲和性，其按照下列试验进行测定A.体外测定结合于从表达人EDG受体的CHO细胞制备的膜的GTPy-35Sl的GPCR激活试验SIP,(EDG-1)GTP[，35s结合试验从稳定表达N-末端c-myc标记的人EDG-1的CHO细胞克隆中制备经过匀浆的膜。将细胞培养在两个850cm2旋转培养瓶内的悬浮液中，培养3或4天后收获。将细胞离心下来，用冷的PBS洗涤一次，重悬浮于^20ml的緩沖液A(20mMHEPES,pH7.4，10mMEDTA，无EDTA的完整的蛋白酶抑制剂合剂[l片/25mll)中。使用Polytron匀浆器以30000rpm、每次15秒的3次间隔将细胞混悬液在冰上匀浆。将勻浆物首先在台式4氐速离心才几上以2000rpm离心10分钟。通过细胞滤网后，将上清液接着以50，000g在4。C离心25分钟。沉淀用緩冲液B(15%甘油，20mMHEPES,pH7.4，O.lmMEDTA,无EDTA的完整的蛋白酶抑制剂合剂[l片/10mlj)重新悬浮。使用BCA蛋白测定试剂盒(皮尔斯公司(Pierce))，以BSA作为标准蛋白质，测定制备物的蛋白浓度。将膜分成小份，冻存于-80。C。在DMSO中制备浓度范围为10mM-0.01nM的待测化合物溶液。将S1P在4%BSA溶液中稀释作为阳性对照。将需要量的膜制备物采用水冷的实验緩沖液(20mMHEPES，pH7.4，100mMNaCl，10mMMgCl2，0.1%不含脂肪酸的BSA，5pMGDP)稀释并充分涡旋。将2fU或更少的化合物分配在圆底96-孔聚苯乙烯分析板的每一个孔中，随后加入100^1稀释的膜制备物(3-10照/孔)，将其置于冰上直到加入热GTPyS。用冷的实验緩冲液将卩SSj-GTPyS稀幹到l:1000(v/v)，向每孔中加入lOOjd。反应在室温下进行90分钟，然后用PackardFiltermateHarvester将膜收集在Perkin誦ElmerUnifilterGF/B-96滤膜上。用洗涤緩沖液(20mMHEPES，pH7.4，lOOmMNaCl，10mMMgCl2)洗涤数次后，用95。/。乙醇冲洗，将滤膜在37。C下烘箱中干燥30分钟。加入MicroScint-:20，将膜密封用于在TopCoimt上闪烁计数。用GraphPadPrism的剂量效应曲线拟合工具拟合GTPhr-"Sl结合曲线(原始数据)，获得ECso值。使用6或12个不同的浓度产生浓度效应曲线(每个浓度采用三个数据点)。采用与S1P1GTP[y-"S结合实验相似的方法进行SlP3、-4、-5和-6GTPhr-"S结合实验，实验中使用从稳定表达c-端c-myc标记或未标记的受体的CHO细胞制备的膜。对于每种膜制备物，首先采用S1P对照进行效价实验，以确定加到每个实验孔中的膜的最佳量。根据上述实验对式I化合物进行测定，观察到其对S1P1受体具有选择性。例如，在上述实验中，实施例4、13和21的化合物具有的EC5o<lnM,并且例如对S1P1受体的选择性至少20倍于S1P3受体，例如对S1P1受体的选择性至少20倍于S1P5受体。B.体外实验FLIPR钙通量实验用FLIPR钩通量实-验测试本发明化合物对S1P1、S1P3、S1P5和S1P6的激动剂活性。简而言之，将表达S1P受体的CHO细胞保持在含有5。/。FBS和500照/mlG418的F-12K培养基(ATCC)中。在实验进行前，将细胞以10000细胞/孔/25pl培养基的浓度分布于384孔黑色透明底的板中，所述培养基为含有1%FBS的F-12K培养基。第二天，将细胞用洗涤緩沖液洗涤3次(25pl/每次)。向每孔中加入约25pl染色剂，并在37'C和5。/。C02条件下孵育1小时。然后将细胞用洗涤緩沖液洗涤4次(25pl/每次)。向每孔的细胞中加入25^1的SEW2871溶液(Rosen等人公开的，用作对照)后，测定钙通量。对分别表达各种不同S1P受体的细胞进行相同的分析。每间隔3分钟记录一次FLIPR钾通量实验中的效价，并按照相对于S1P-1活化的最大峰高响应的百分数进行定量。在该实验中，本发明化合物在10—12至3.10—5nM的浓度内有活性。C.体内实验测定血淋巴细胞减少的筛选实验血循环中淋巴细胞的测定将待测化合物溶于DMSO/PEG200中，再用去离子水稀释。将待实验化合物以lmg/kg的剂量对大鼠(Lewis品系，雌性，6-12周龄)口服给药，所用溶媒的量为4ml/kg(最高2%的DMSO,最高2%的PEG200/水)。DMSO/PEG200/水和FTY720(0.3mg/kg)分别用作阴性对照和阳性对照。给药后2、6、24和48小时，在短效的异氟烷麻醉下从舌下静脉取血。将全血样品进行血液学分析。用自动分析仪测定外周淋巴细胞数。用偶联了荧光染料的特异性抗体将外周血淋巴细胞亚群染色，使用荧光激活的细胞分类器(Facscalibur)进行分析。使用两只大鼠来评价所筛选的各化合物的淋巴细胞消减活性。结果以EDs。表示，其定义为血淋巴细胞显示减少50%所需要的有效剂量。按照上述试验对式I化合物进行测定，结果表明其具有小于10mg/kg的ED50。因此，式I化合物用于治疗和/或预防由淋巴细胞相互作用介导的疾病或病症，例如在移植中，例如急性或慢性的细胞、组织或器官的同种-或异种移植物排斥反应或移植物功能恢复延迟、移植物抗宿主病；自身免疫病，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、桥本氏曱状腺炎、多发性硬化、重症肌无力、I或H型糖尿病及其有关疾病、脉管炎、恶性贫血、舍格伦综合征、葡萄膜炎、银屑病、格雷夫斯眼病、斑秃等；过敏性疾病，例如过敏性哮喘、异位性皮炎、过敏性鼻炎/结膜炎、过敏性接触性皮炎；任选与潜在异常反应有关的炎性疾病，例如炎性肠病、克罗恩病或溃疡性结肠炎，内源性哞喘、炎性肺损伤、炎性肝损伤、炎性肾小球损伤、动脉粥样硬化、骨关节炎、刺激性接触性皮炎，另外还包括湿渗性皮炎、脂溢性皮炎、免疫介导疾病的皮肤表现、炎性眼病、角膜结膜炎、心肌炎或肝炎、缺血/再灌注损伤(例如心肌梗塞、中风、肠缺血)、肾衰竭或出血性休克、创伤性休克；癌症，例如乳腺癌、T细胞淋巴瘤或T细胞白血病、肾病综合征；感染性疾病，例如中毒性休克(例如超抗原诱导的)、脓毒性休克、成人呼吸窘迫综合征或病毒感染，例如AIDS、病毒性肝炎，慢性细菌感染或老年痴呆。细胞、组织或实体器官移植物的例子包括例如胰岛、干细胞、骨髓、角膜组织、神经元组织、心脏、肺、心肺联合、肾、肝脏、肠、胰腺、气管或食管。对于上述用途而言，所需剂量当然根据给药方式、待治疗的特定病症以及预期疗效而变化。通常，推荐日剂量约为0.03-5.0mg/kg体重的系统性给药可得到令人满意的结果。在大型哺乳动物(例如人类)中推荐的日剂量约为0.5mg至约500mg,该剂量可以例如以至多每日4次的分份剂量或者以緩释形式方便地给药。用于口服给药的适当的单位剂量形式包含约0.1-50mg活性成分。式I化合物可以通过任何常规途径给药，特别是胃肠内给药，例如以片剂或胶嚢形式口服给药；或胃肠外给药，例如以可注射的溶液或悬浮液的形式给药；局部给药，例如以洗剂、凝胶剂、软膏剂或霜剂的形式；或者以鼻制剂或栓剂的形式给药。可以用常规方法通过与可药用的载体或稀释剂混合来生产药物组合物，该药物组合物包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及至少一种可药用的载体或稀释剂。式I化合物可以以例如上面所述的游离形式或可药用盐形式给药。此类盐可以用常规方法制备，并具有与游离化合物相同级别的活性。根据前面所述，本发明还提供了1.1在需要此治疗的个体中预防或治疗淋巴细胞介导的疾病或病症(例如上述的疾病)的方法，该方法包括向所述个体施用有效量的式I化合物或其可药用盐；1.2在需要此治疗的个体中预防或治疗急性或慢性移植排斥反应或T-细纟包介导的炎症或自身免疫性疾病(例如上述的疾病)的方法，该方法包括向所述个体施用有效量的式I化合物或其可药用盐；2.游离形式或可药用盐形式的式I化合物，其在例如上面1.1或1.2项下所述的任何方法中用作药物。3.药物组合物，其在例如上面1.1或1.2项下所述的任何方法中使用，该药物組合物包括游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及可药用的稀释剂或载体。4.用于制备在上面1.1或1.2中所述的任何方法中使用的药物组合物的式I化合物或其可药用盐。式I化合物可以单独作为活性成分给药或者例如作为佐剂与其它药物联合给药，所述其它药物为例如免疫抑制剂或免疫调节剂或其它抗炎药物，它们用于例如治疗或预防同种-或异种移植物的急性或慢性排斥反应或炎性或自身免疫病，或者化疗药物，例如恶性细胞抗增殖药物。例如，式l化合物可以与下列药物组合使用钙神经素抑制剂，例如环孢菌素A或FK506;mTOR抑制剂，例如雷帕霉素、40-O-(2-羟基乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、TAFA誦93、biolimus-7或biolimus-9;具有免疫抑制性能的子嚢霉素，例如ABT-281、ASM981等；皮质类固醇；环磷酰胺；硫唑噪呤；曱氨蝶呤；来氟米特；咪唑立宾；麦考酚酸或盐；麦考酚酸吗乙酯；15-脱氧精胍菌素或其免疫抑制的同系物、类似物或4汙生物；PKC抑制剂，例如WO02/38561或WO03/82859中公开的，例如实施例56或70化合物；JAK3激酶抑制剂，例如N-苄基-3，4-二羟基-亚苄基-氰基乙酰胺a-氰基-(3，4-二羟基)-lN-卡基肉桂酖胺(TyrphostinAG490)、灵菌红素25-C(PNUl56804)、[4-(4'曙羟基苯基)-氨基-6，7-二曱氧基喹唑啉I(WHI-P131)、[4-(3'-溴-4'-羟基苯基)-氨基一6,7-二曱氧基喹唑啉l(WHI曙P154)、[4陽(3'，5'國二溴-4'-羟基苯基)-氨基-6,7國二甲氧基喹唑啉WHI-P97、KRX-211、3-"3R，4R)-4-甲基-3-甲基-(7H-吡咯并[2，3-司嘧啶-4-基)-氨基1-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈(以游离形式或可药用盐的形式，例如单-柠檬酸盐(也称为CP-690，550))或WO04/052359或WO05/066156中公开的化合物；免疫抑制的单克隆抗体，例如白细胞受体的单克隆抗体，例如，MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD52、CD58、CD80、CD86或它们的配体；其它免疫调节化合物，例如重組结合分子，其具有至少一部分CTLA4的胞外结构域或其突变体，例如与非-CTLA4蛋白序列结合的CTLA4至少胞外结构域的部分或其突变体，例如CTLA4Ig(例如被指定为ATCC68629)或其突变体，例如LEA29Y;粘附分子抑制剂，例如LFA-1拮抗剂、ICAM-1或-3拮抗剂、VCAM-4拮抗剂或VLA-4拮抗剂；或化疗药物，例如紫杉醇、吉西他滨、顺铂、多柔比星或5-氟尿嘧啶；或抗感染药物。当式I化合物与其它免疫抑制剂/免疫调节剂、抗炎药物、化疗药物或抗感染治疗联合给药时，共同给药的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药、化疗或抗感染化合物的剂量当然会根据所用的共同药物的类型(例如甾类或是钾神经素抑制剂)、所用的具体药物、待治疗的病症等而变化。根据前述，本发明另一方面提供了5.如上文所定义的方法，该方法包括将治疗有效、无毒的量的式I化合物和至少一种第二药物例如同时或先后地联合给药，所述第二药物例如为上述的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药或化疗药物。6.药物组合产品，例如药盒，其包含a)第一种药物，其为本文所公开的游离形式或可药用盐形式的式I化合物，和b)至少一种共同给药的药物，例如免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药、化疗药物或抗感染药物。所述药盒可以包含其给药说明书。本文所采用的术语"共同给药"或"联合给药"或类似术语是指包括将选定的治疗药物给予单个患者，并意欲包括其中药物并不是必须通过相同给药途径或者在相同时间给药的治疗方案。本文所用术语"药物组合产品"是指通过混合或组合一种以上的活性成分而得到的产品，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语"固定组合"是指将活性成分(例如式I化合物和共同给药的药物)以单一的实体或剂型同时给予患者。术语"非固定组合"是指将活性成分(例如式I化合物和共同给药的药物)以分开的实体同时地、并存地或者先后地(没有特定时间限制)对患者给药，其中这类给药向患者体内提供了两种化合物的治疗有效水平。后者也用于鸡尾酒疗法，例如3种或更多种活性成分的给药。权利要求1.式I的化合物或其生理学上可水解的衍生物、其盐、水合物和/或溶剂化物，其中X是-N＝或＝CH-；R1是取代的联苯基、4-苯氧基-苯基或4-(苯基-C1-4烷氧基)-苯基，其中至少一个苯基基团是单取代的；被一个或多个取代基所取代的苯基或被取代的五或六元杂芳基；其中，上述的取代基各自独立地选自C1-8烷基、卤代C1-8烷基、C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-C1-8烷氧基、C1-8烷基-卤代C1-8烷氧基、卤代C1-8烷基-C1-8烷氧基、卤代C1-8烷基-卤代C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-卤代C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氧基-卤代C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基-C1-8烷基、C1-8烷氧基-卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基-卤代C1-8烷基、C2-6链烯氧基、C2-6炔氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-4烷基、C3-6环烷基-C1-4烷氧基、C3-6环烷基-氧基、苯基-C1-4烷氧基和杂环-C1-4烷氧基；R2是任选地被卤素、OH、NH2、C1-4烷氧基或C1-4烷基羰基氧基所取代的C1-4烷基；氨基；OH；C1-4烷氧基；NH-OH；羧基；氨磺酰基；氨甲酰基；或HN-CO-C1-4烷基；或者R2是R3-R4-COOH或R3-R4-CONH2，其中R3是SO2-NH、SO2-N(C1-4烷基)、CO-NH、CO-N(C1-4烷基)、CH2-O、NH-CO、或N(C1-4烷基)CO；并且R4是任选地被O、S或C＝CH2打断的C1-6亚烷基，或任选地被取代的亚苯基或C3-6亚环烷基；并且环A可以是苯基或杂芳基，其各自任选地被卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基或腈进一步取代；或者R2是氢，条件是环A是3-吡啶基。2.如权利要求l所述的化合物，其中X是-N-或-CH画；R,是取代的联苯基；或被一个或多个取代基所取代的苯基或被取代的五或六元杂芳基；其中，上述的取代基各自独立地选自Cw烷基、卣代d-s烷基、d.8烷氧基、卣代d.s烷氧基、<:3.6环烷基、C3,6环烷基-CM烷基、C3,6环烷基-氧基、苯基-Q.4烷氧基和杂环-d.4烷氧基；R2是任选地净皮闺素、OH、NH2、Cw烷氧基或CL4烷基羰基氧基取代的C^烷基；氨基；OH;C,-4烷氧基；NH-OH;羧基；氨磺酰基；氨甲酰基；或HN-CO-d—4烷基；或R2是R3-R4COOH或R3-R4-CONH2，其中113是S02-NH、S02-N(C14烷基)、CO-NH、CO-N(C,4烷基)、CH20、NH-CO或N(d.4烷基)CO;且R4是任选地^皮O、S或C-CH2打断的d—6亚烷基或任选地被取代的亚苯基或(:3-6亚环烷基；并且环A可以是苯基或杂芳基，其各自任选地被卣素、Cw烷基、卣代C"烷基、Cw烷氧基、卣代C^烷氧基或腈进一步取代；或R2是氢，条件是环A是3-吡咬基。3.如权利要求l所述的化合物，其中X是-N-或二CH-;R,是取代的联苯基；或被一个或多个取代基所取代的苯基，其中上述取代基各自独立地选自C,-8烷基、卣代d.s烷基、d—8烷氧基、卣代C,-8烷氧基、C3-6环烷基、C3.6环烷基-d.4烷基和03.6环垸基-氧基；R2是任选地,皮囟素、OH、NH2、Cw烷氧基或Cw烷基羰基氧基取代的Cw烷基；氨基；OH;C^烷氧基；NH-OH;羧基；氨磺酰基；氨甲酰基；或HN-CO-d—4烷基；或R2是R3R4COOH或R3-R4-CONH2，其中&是S02-NH、S02N(C14烷基)、CO-NH、CO-N(d4烷基)、CH2-0、NH-CO或N(C，4烷基)CO;且Rj是任选地被O、S或C-CH2打断的C^亚烷基或任选地被取代的亚苯基或Cw亚环烷基；且环A可以是苯基或杂芳基，其各自任选地被卣素、d—4烷基、囟代Cw烷基、Cw烷氧基、卣代Cw烷氧基或腈进一步取代。4.如权利要求l所述的化合物，其中X是-N-或-CH國；R,是取代的联苯基；或被一个或多个取代基所取代的苯基，其中上述取代基各自独立地选自d—8烷基、卣代d-8烷基和Qj-6环烷基；R2是任选地被卣素、OH、NH2、d.4烷氧基或d.4烷基羰基氧基取代的Cw烷基；氨基；OH;d-4烷氧基；NH-OH;羧基；氨磺酰基；氨甲酰基；或HN-CO-d—4烷基；或R2是R3-R4-COOH或R3-R4-CONH2,其中113是S02-NH、S02-N(d4烷基)、CO-NH、CO-N(d—4烷基)、CH2-0、NH-CO或N(d—4烷基)CO;且R4是任选地被O、S或C:CH2打断的d-6亚烷基或任选地被取代的亚笨基或Cw亚环烷基；且环A可以是苯基或杂芳基，其各自任选地被自素、Cw烷基、面代C，.4烷基、C,-4烷氧基、离代Cw烷氧基或腈进一步取代。5.如权利要求l所述的化合物，其中X是-N-或-CH-;R,是取代的联苯基；或被一个或多个取代基所取代的苯基，其中上述取代基各自独立地选自烷基、卣代d-8烷基和c3.6环烷基；R2是任选地被囟素、OH、NH2、d—4烷氧基或d—4烷基羰基氧基取代的Cw烷基；氨基；OH;d-4烷氧基；NH-OH;羧基；氨磺酰基；氨甲酰基；或HN-CO-CL4烷基；或R2是R3-R4COOH或R3-R4CONH2，其中113是S02NH、S02N(C14烷基)、CO画NH、CO-N(d—4烷基)、CH2-0、NH-CO或N(C,陽4烷基)CO;且R4是任选地被O、S或OCH2打断的Cw亚烷基或任选地被取代的亚苯基或Cw亚环烷基；且环A是苯基，其任选地被面素、C,-4坑基、卣代d-4烷基、Cw烷氧基、囟代Cw烷氧基或腈进一步取代。6.如权利要求l所述的化合物，其中X是-N《=CH-;R,是取代的联苯基；或被一个或多个取代基所取代的苯基，其中上述取代基各自独立地选自d.s烷基、囟代d.8烷基和C3.6环烷基；Rz是R3R4COOH或R3-R4-CONH2，其中113是S02-NH、S02-N(C14烷基)、CO-NH、CO-N(d4烷基)、CH2-0、NH-CO或N(C,.4烷基)CO;且R4是任选地被O、S或C-CH2打断的d-6亚烷基或任选地被取代的亚苯基或C3—6亚环烷基；且环A是苯基，其任选地被囟素、Cw烷基、卣代d-4烷基、Cw烷氧基、卣代Cw烷氧基或腈进一步取代。7.制备式I化合物的方法，该方法包括(i)为了制备其中X是-N-且R2如上文所定义的式I化合物，将式II的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中环A和R2如上文所定义，或其官能衍生物如活化的酯、酰氯或酸酐，与式III化合物或其官能衍生物反应N<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>IIIOH其中R,如上文所定义；或(ii)为了制备其中X是CH且R2是NH2的式I化合物，将式VI的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中如上文所定义，与式VII的化合物反应<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中环A如上文所定义且R，2是NH2;或(iii)将式I的化合物转化为另一种式I的化合物，并将所得的游离形式或盐形式的式I化合物回收，并且在需要时将所得的游离形式的式I化合物转化为所需的盐形式，或者反之亦然。8.包含游离形式或可药用盐形式的式I化合物以及可药用的稀释剂或载体的药物组合物。9.药物组合产品，例如药盒，其包含a)第一种药物，即上述权利要求中任意一项所述的游离形式或可药用盐形式的化合物，和b)至少一种共同给药的药物，例如免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎药、化疗药物或抗感染药物。10.如上述权利要求中任意一项所述的药物组合物或化合物在制备治疗和/或预防由淋巴细胞相互作用介导的疾病或病症、例如移植和/或自身免疫病的药物中的用途。11.在需要这类治疗的个体中预防或治疗由淋巴细胞介导的疾病或病症、例如移4直和/或自身免疫病的方法，该方法包括向所述个体施用有效量的式i化合物或其可药用盐。12.在需要这类治疗的个体中预防或治疗急性或慢性移植排斥反应或T细胞介导的炎症或自身免疫病的方法，该方法包括向所述个体施用有效量的式I化合物或其可药用盐。13.基本如上文所定义和/或描述的式(I)化合物、包含式(I)化合物的药物组合物或组合产品、制备式(I)化合物的方法或式(I)化合物、包含式(I)化合物的药物组合物或组合产品的用途。全文摘要本发明涉及多环的式(I)化合物、其制备方法、其作为药物的用途以及包含它们的药物组合物。文档编号C07D271/06GK101374821SQ200780003615公开日2009年2月25日申请日期2007年1月25日优先权日2006年1月27日发明者F·泽克里,R·阿尔贝特申请人:诺瓦提斯公司