针对血管内皮生长因子的氨基酸序列和包括其的多肽用于治疗特征在于过量和/或病理...的制作方法

专利名称：：针对血管内皮生长因子的氨基酸序列和包括其的多肽用于治疗特征在于过量和/或病理...的制作方法针对血管内皮生长因子的氨基酸序列和包括其的多肽用于治疗特征在于过量和/或病理性血管发生或新血管形成的病症和疾病本发明涉及针对(如本文所定义)血管内皮生长因子(VEGF)的氨基酸序列，以及包括或基本上由一种或多种所述氨基酸序列组成的化合物或构建体，且特别是蛋白和多肽(在本文中也分别称为"^发欲y^^"^^！^/C、"^"发欲游众^激〃、和〃本发欲游多嚴，。.本发明还涉及编码所述氨基酸序列和多肽的核酸(在本文也称为",发努/^^"邀"或"^:发剪游樣穿^^^^/");制备所述氨基酸序列和多肽的方法；表达或能够表达所述氨基酸序列或多肽的宿主细胞；包含所述氨基酸序列、多肽、核酸和/或宿主细胞的组合物，且特别是药物组合物；和所述氨基酸序列或多肽、核酸、宿主细胞和/或组合物，特别地对预防、治疗或诊断目的，如本文所提及的预防、治疗或诊断目的的应用。通过本文进一步的描述，本发明的其他方面、实施方案、优势和应用将会变清楚。血管发生是一种重要的细胞事件，其中血管内皮细胞增殖、剪除并且改组以由现有的血管网络形成新的血管。血管供应的发展对于正常的和病理性增殖过程是重要的(Folkman和Klagsbrun科学(Science)1987，235:442-447)。递送氧和营养素，以及去除代谢产物代表在多细胞生物体内发生的大部分生长过程中的限速步骤。在成年人中，血管发生由"血管生成平衡"，即在血管生长的刺激和抑制信号之间的生理平衡严格控制。在正常情形中，在伤口愈合、器官再生过程中、和在排卵、月经和胎盘形成过程中在女性生殖系统中发生新血管形成。在一些病理性过程中，诸如肿瘤生长、类风湿性关节炎、糖尿病视网膜病、年龄相关的黄斑变性、和银屑病中，它也是一种重要的因子。考虑血管发生的显著的生理学和病理学重要性，大量的工作致力于阐明能够调控该过程的因子。提议血管发生过程由在促和抗-血管生成分子之间的平衡调节，并且在许多疾病，特别是癌症中是不受控制的(derailed)(Carmeliet和Jain自然(Nature)2000,407:249-257)。血管生成表型的开关依赖于在血管生成刺激剂和抑制剂之间的平衡的局部改变。一种最重要的促血管生成因子是血管内皮生长因子(VEGF)，也称为VEGF-A或血管渗透因子(VPF)。VEGF属于这样的基因家族，其包括胎盘生长因子(PIGF)(Maglione等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.SciUSA)1991,88:9267-9271;Maglione等.癌基因(Oncogene)1993,8:925-931),VEGF-B(Olofsson等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.SciUSA)1996,93:2576-2581),VEGF-C(Joukov等.降胎杂志(EMBOJ.)1996,15:1751-1758;Lee等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.SciUSA)1996，93:1988-1992),VEGF-D(Orlandini等.美国国家科学院学报(Proc.Natl,Acad.SciUSA)1996，93:11675-11680,Achen等.美国国家科学院学报(proc.Natl.Acad.SciUSA)1998,95:548-553),VEGF-E(Hoeben等.药理学综述(Pharmacol.Rev.)2004，56:549-580)和VEGF-F(Hoeben等.药理学综述(Pharmacol.Rev.)2004，56:549-580)。人VEGF以至少6种同种型存在(VEGF121，VEGF145,VEGF165,VEGF183,VEGF189,和VEGF206)，其由单一基因mRNA的可变剪接产生(Ferrara和Davis-Smyth内分泌综述(Endocr.Rev.)1997,18:1-22)。VEGF165,最丰富的同种型，是一种分子量为45,000道尔顿的碱性、肝素结合的、二聚体糖蛋白。已经鉴定了两种VEGF酪氨酸激酶受体(VEGFR)与VEGF相互作用，即fms-样酪氨酸激酶Flt-1(VEGFR-1或Flt-l)和激酶结构域区，也称为胎儿肝脏激酶(VEGFR-2，KDR或Flk-1)(Shibuya等.癌基因(Oncogene)1990,5:519-24;Matthews等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1991,88:9026-30;Terman等.癌基因(Oncogene)1991,6:1677-83;Terman等.生物化学和生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res,Commun.)1992,187:1579-86;deVries等.,科学(Science)1992，255:989-91;Millauer等.细胞(Cell)1993,72:835-46;Quinn等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1993,90:7533-7)。VEGFR-1具有针对VEGF的最高亲和力，Kd为10-20pM(deVries等.科学(Science)1992,255:989-91),并且VEGFR-2具有稍低的针对VEGF的亲和力，Kd为75-125pM(Terman等.，癌基因(Oncogene)1991,6:1677-83;Millauer等.细胞(Cell)1993,72:835-46;Quinn等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1993，90:7533-7)。VEGF的进一步详细的描述，VEGF与其受体的相互作用和VEGF在正常和病理性过程中的功能可以在Hoeben等.(药理学综述(Pharmacol.Rev,)2004,56:549-580)和Ferrara(内分泌综述(EndocrineRev.)2004，25:581-611)中找到。VEGF已被报道为正常和异常血管发生的关键调控子(Ferrara和Davis-Smyth内分泌综述(EndocrineRev.)1997，18:4-25;Ferrara分子医学杂志(J.Mol.Med.)1999,77:527-543)。与有助于血管形成过程的其它生长因子相比较，VEGF在其针对血管系统内内皮细胞的高特异性上是独特的。VEGF对于胚胎血管形成和血管发生是重要的(Carmdiet等.自然(Nature)1996，380:435-439;Ferrara等.自然(Nature)1996，380:439-442)。此外，VEGF对于女性生殖道内循环血管增殖是必需的并且是骨骼生长和软骨形成必需的(Ferrara等.自然医学(NatureMed.)1998,4:336-340;Gerber等.自然医学(NatureMed.)1999,5:623-628)。除了作为血管发生和血管形成的血管生成因子之外，VEGF,作为多效性生长因子，在其它生理学过程中表现出多种生物学作用，诸如内皮细胞存活、血管渗透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙流入(Ferrara和Davis-Smyth内分泌综述(EndocrineRev.)1997,18:4-25)。此外，最近的研究己经报道VEGF对一些非内皮细胞类型，如视网膜色素上皮细胞、胰腺管细胞和施旺细胞的促有丝分裂作用(Guerrin等.细胞生理学杂志(J.CellPhysiol.)1995,164:385-394;Oberg-Welsh等.分子细胞内分泌学(Mol.Cell.Endocrinol.)1997,126:125-132;Sondell等.神经科学杂志(J.Neurosd.)1999，19:5731-5740)。VEGF还参与包括病理性血管发生的病症或疾病的发展。所检验的大部分人肿瘤过量表达VEGFmRNA(Berkman等.临床研究杂志(JClinInvest)1993，91:153-159;Brown等.癌症研究(CancerRes.)1993,53:4727-4735;Brown等.人病理学(HumanPathol.)1995,26:86-91;Dvorak等.美国病理学杂志(AmJ.Pathol.)1995,146:1029-1039;Mattern等.英30国癌症杂志(Brit.J.Cancer.)1996，73:931-934)。VEGF在眼流体中的浓度与患有糖尿病性和其它缺血性相关的视网膜病的患者中的血管活性增殖的存在高度相关(Aiello等.新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)1994,331:1480-1487)。此外，最近的研究已经证明了VEGF在患有AMD的患者中的脉络膜新血管膜中的定位(Lopez等.眼科学和视觉科学研究(Invest.Ophtalmo.Vis.Sd.)1996,37:855-868)。年龄相关的黄斑变性(AMD)是老年人群体中严重视觉丧失的主要原因。AMD的渗出性形式特征在于脉络膜新血管形成和视网膜色素上皮细胞脱离。己经在多种炎性病症中观察到VEGF上调(Dvorak临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol.)2002，20:4368-4380)。VEGF已经参与RA的发病机理，RA是一种血管发生在其中起着显著作用的炎症疾病(Koch等.免疫学杂志(J.Immunol.)1994,152:4149-4156;Fava等.实验医学杂志(J.Exp.Med.)1994,180:341-346)。在伤口愈合和银屑病中，上皮角质形成细胞强表达VEGF，所述伤口愈合和银屑病是以增加的微血管渗透性和血管发生为特征的病症(Detmar等.皮肤病学研究杂志(J.Invest.Dermatol.)1995,105:44-50)。还在脑水肿的发展中观察到VEGF上调。已经在成年大鼠脑中观察到弥散的、低丰度的VEGFmRNA表达(Monacci等.美国生理学杂志(Am.J.Physiol.)1993,264:C995-C1002)。对VEGF及其在血管发生和不同过程中的作用的说明提供了潜在的新治疗干预靶点。VEGF功能被阻断或防止VEGF受体酪氨酸激酶的激活的小分子抑制(Schlaeppi和Wood癌症转移综述(CancerMetastasisRev,)1999,18:473-481)并且因此干扰VEGF信号转导途径。包含细菌或植物毒素的肿瘤细胞-特异性细胞毒性缀合物可以抑制VEGF对肿瘤血管发生的刺激作用。VEGF165-DT385缀合物(与VEGF^稠合或化学缀合的白喉毒素结构域)，例如，在体内有效抑制肿瘤生长(Olson等.国际癌症杂志(Int.J.Cancer)1997,73:865-870)。使用反转录病毒-递送的Flk-1突变体(Millauer等.自然(Nature)1994,367:576-579)和可溶的VEGF受体(Kong等.人类基因治疗(Hum.GeneTher.)1998,9:823-833;Goldman等.美国国家科学院学报(proc.Natl.Acad.Sci.USA)1998,95:8795-8800;Gerber等.癌症研究(CancerRes.)2000,60:6253-6258;Kuo等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.SciUSA)2001,98:4605-4610;Holash等.美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)2002,99:11393-11398)也表现出肿瘤生长抑制作用。已经开发VEGF-中和抗体，诸如A4.6.1和MV833，来阻断VEGF与其受体结合，并且己经表现出临床前的抗肿瘤活性(Kim等.自然(Nature)1993，362:841-844;Folkman自然医学(Nat.Med.)1995，1:27-31;Presta等.癌症研究(CancerRes.)1997,57:4593-4599;Kanai等.国际癌症杂志(Int.J.Cancer)1998,77:933-936;Ferrara和Alitalo自然医学(Nat.Med.)1999,5:1359-1364;320,340)。抗-VEGF抗体治疗通常将裸鼠或重度联合免疫缺陷性小鼠中皮下移植的快速生长的、血管发生-依赖性的人肿瘤异种移植物转化为小的、无血管化的微集落。关于抗-VEGF途径在临床试验中的综述，参见Campochiaro和Hackett(癌基因(Oncogene)2003,22:6537-6548)。已经使用A4.6.1，也称为贝伐单抗(Avastin⑧；Genentech，旧金山，CA)获得了大部分临床经验(Bunn在美国临床肿瘤学学会年会学报(9"co/ogy)中2001年5月12-15日，旧金山,第20巻，第395-406页，美国临床肿瘤学学会(AmericanSocietyofClinicalOncology),ChestnutHill,MA;Margolin等.临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol.)2001,19:851-856)。Avastin与化疗联合得到FDA核准，或者在临床试验中用于大量的癌症适应证。然而，该产品组合受到副作用(出血，动脉血栓栓塞，高血压，胃肠(GI)穿？L,伤口愈合问题，蛋白尿症和充血性心力衰竭)的困扰，所述副作用主要是由抗-VEGF活性不限于肿瘤部位，而是长时间期间持续在循环中的事实。这导致外周内皮细胞生理到病理生理活性的转变。抗-VEGF策略也是FDA核准用于AMD患者的，其使用重组的人源化抗-VEGFFab(rhuFabVEGF,Ranibizumab或Lucentis)(Chen等.分子生物学杂志(J.Mol.Bio.)1999,293:865-881;Ferrara等.视网膜(Retina)2006，26:859-870)。已经发现rhuFabVEGF在灵长类AMD模型中减少血管发生和血管渗漏(Krzystolik等.眼科学学报(Arch.32Ophthalmol.)2002,120:338-346)。将VEGF抑制剂局部递送至眼睛比全身施用引起较少的副作用。可以通过玻璃体内注射获得高眼内浓度。然而，由于眼内炎、玻璃体出血、和视网膜脱落的危险，对于慢性疾病诸如糖尿病性视网膜病的治疗，重复注射是不理想的。纳米抗体(如本文进一步定义)比常规的四链抗体更有效且更稳定，其导致(l)较低的剂型，较不频繁的给药，导致较少的副作用；和(2)提高的稳定性，导致更宽的施用途径选择，包括口服或皮下途径，并且除了静脉内途径之外还有缓慢释放制剂。例如，具有稳定的抗-VEGF纳米抗体的缓慢释放制剂可以有利的用于AMD治疗，避免需要重复注射和与其相关的副作用。另外，它们的小尺寸和短半衰期使得它们特别适用于治疗AMD。小的尺寸将促进该纳米抗体更深入渗透至眼内以到达脉络膜血管。由于它们的小尺寸，纳米抗体具有穿过膜和渗透至其它较大的多肽和蛋白不可及的生理区室、组织和器官的能力。所述小尺寸的纳米抗体具有较短的半衰期，并且在肾脏和膀胱中快速累积，在那里它们停留多于48小时。这使得它们也理想地适用于治疗肾细胞癌和膀胱癌。例如，当全身施用抗-VEGF纳米抗体时，将在循环中存在低抗-VEGF活性，具有降低的副作用危险，而在肿瘤旁边获得高的抗-VEGF活性和对肾脏或膀胱癌的有效治疗。由于它们的小尺寸，纳米抗体还可以选择性结合VEGF上的特异性表位(诸如例如，VEGFR-2结合位点)而不(空间)阻碍其它表位(诸如例如VEGFR-1结合位点)。这可能导致对特定生物过程的选择性抑制，而其它生物过程不被抑制，这降低了副作用危险。事实上，已经表明，阻断VEGF与VEGFR-2而不是与VEGFR-1结合的单克隆抗体(2C3)引起新形成的不成熟血管的内皮细胞的程序性细胞死亡，所述新形成的不成熟血管依赖VEGF保持细胞黏附在临时的细胞外基质上，直到周围内皮细胞促进更多的永久性(prermanent)黏附模式，而成熟血管的完整性不受该抗血管形成治疗法的影响(Brekken等.癌症研究(CancerRes.)2000，60:5117-5124)。纳米抗体的小尺寸还使得它们理想地适用于制备双特异性或多特异性多肽。双特异性抗-VEGF/抗-VEGFR纳米抗体或双特异性抗-VEGF/抗-月中瘤纳米抗体，例如，将特异性靶向肿瘤旁边，同时循环中保持低的抗-VEGF活性，副作用减少。由于它们更高的功效，与VEGF上的两个不同表位(例如，VEGFR-1结合位点和VEGFR-2结合位点)结合的双特异性纳米抗体可能是有利的。本发明的多肽和组合物通常可以用于调节，且特别是抑制和/或防止VEGF与VEGFR的结合，并且因此调节且特别是抑制或防止由VEGF和/或VEGFR介导的信号传导，以调节涉及VEGF和/或VEGFR的生物途径，和/或以调节与所述信号传导或这些途径相关的生物机制、反应和作用。因此，本发明的多肽和组合物可以用于预防和治疗(如本文定义)以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病。通常，"以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病"可以定义为可以分别通过给需要其的受试者(即，患有该疾病或病症或其至少一种症状和/或处于引起或发展所述疾病或病症的危险中)适当施用本发明的多肽或组合物(且特别地，其药物活性量)和/或已知的针对VEGF或涉及VEGF的生物途径或机制有活性的有效成分(且特别地，其药物活性量)得到预防和/或治疗的疾病和病症。基于本文的公开内容，所述以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症或疾病的实例对于熟练的技术人员将是清楚的，并且例如，包括下述疾病和病症各种肿瘤病症，包括但不限于肿瘤、且尤其是实体恶性肿瘤(Hoeben等.药理学综述(Pharmacol.Rev.)2004，56:549-579),乳腺癌(Yoshiji等.癌症研究(CancerRes.)1996，56:2013-2016;Brown等.人类病理学(Hum.Pathol.)1998,26:86-91;Linderholm等.癌症研究(CancerRes.)2000,61:2256-2260;Fox等.柳叶刀肿瘤学(LancetOncol.)2001，2:278-289;Gasparini肿瘤学和血液学重要综述(Crit.Rev.Oncol.Hematol.)2001，37:97-114),肺癌诸如非小细胞肺癌(Giatromanolaki等.病理学杂志(J.Pathol.)1996,179:80-88;Volm等.抗癌研究(AnticancerRes.)1997,17:99-103;Volm等.国际癌症杂志(Int.J.Cancer)1997,64-68;Bunn在美国临床肿瘤学学会年会学报(iVoceec^gso/Ae^rawa/MeW"go/Jw^7'c""5bc/e/^0/C7/m'ca/0"co/o^)中2001年5月12-15曰，旧金山，第20巻，第395-406页，美国临床肿瘤学学会(AmericanSocietyofClinicalOncology),ChestnutHill，MA;Fox等.柳叶刀肿瘤学(LancetOncol.)2001,2:278-289)，胃癌(Brown等.癌症研究(CancerRes.)1993，53:4727-4735;S画ki等.癌症研究(CancerRes.)1996，56:3004-3009;Maeda等.癌症(Cancer)1996,77:858-863;Ellis等.欧洲癌症杂志(Eur.J.Cancer)1998,34:337-340;Uchida等.英国癌症杂志(Br.J.Cancer)1998,77:1704-1709;Fox等.柳叶刀肿瘤学(LancetOncol.)2001，2:278-289)，食管癌，结肠直肠癌(Papamicheal抗癌研究(AnticancerRes.)2001,21:4349-4353),肝癌，卵巢癌(Olson等.癌症研究(CancerRes.)1994，54:276-280;Sowter等.实验室研究(Lab.Invest.)1997，77:607-614;Yamamoto等.英国癌症杂志(Br.J.Cancer)1997,76:1221-1227)，泡膜细胞瘤，卵巢男胚瘤，宫颈癌，子宫内膜癌(Guidi等.癌症(Cancer)1996,78:454-460),子宫内膜增生，子宫内膜异位(McLaren等.临床研究杂志(J.Clin.Invest.)1996，98:482-489;Shifren等.临床内分泌和代谢杂志(J.Clin.Endocrinol.Metab.)1996，81:3112-3118;Hull等.临床内分泌和代谢杂志(J.Clin.Endocrinol.Metab.)2003，88:2889-2899;Hoeben等.药理学综述(Pharmacol.Rev.)2004,56:549-579),纤维肉瘤，绒毛膜癌，头颈癌，鼻咽癌，喉癌，肝胚细胞瘤，卡波西肉瘤，黑素瘤，皮肤癌，血管瘤，海绵状血管瘤，成血管细胞瘤(Berkman等.临床研究杂志(J.Clin.Invest.)1993,91:153-159;Wizigmann等.癌症研究(CancerRes.)1995,155:1358-1364),胰腺癌，成视网膜细胞瘤，星形细胞瘤，成胶质细胞瘤(Shweiki等.自然(Nature)1992，359:843-845;Plate等.自然(Nature)1992,359:845-848;Phillips等.国际肿瘤学杂志(Int.J.Oncol.)1993,2:913-919)，神经鞘瘤,少突神经胶质细胞瘤，成神经管细胞瘤，成神经细胞瘤，横纹肌肉瘤，成骨肉瘤，平滑肌肉瘤，尿道肉瘤，肾肿瘤(Brown等.美国药理学杂志(Am.J.Pathol.)1993，143:1255-1262;Nicol等.泌尿学杂志(J.Urol.)1997，157:1482-1486;Tomisawa等.欧洲癌症杂志(Eur.J.Cancer)1999,35:133-137)，膀胱瘤(Brown等.美国病理学杂志(Am.J.Pathol.)1993,143:1255-1262)，甲状腺癌(Soh等.临床内分泌学和代谢杂志(J.Clin.Endocrinol.Metab.)351997，82:3741-3747;Klein等.临床内分泌学和代谢杂志(J.Clin,Endocrinol.Metab.)2001,86:656-658),维尔姆斯瘤，肾细胞瘤，前列腺癌(Joseph等.临床癌症研究(Clin.CancerRes.)1997,3:2507-2511;Balbay等.临床癌症研究(Clin.CancerRes.)1999,5:783-789),与斑痣性错构瘤(phakomatoses)相关的异常血管增生，梅格斯综合征，血液学恶性病(Gerber和Ferrara分子医学杂志(J.Mol.Med.)2003,81:20-31)如T细胞淋巴瘤，急性成淋巴细胞白血病，伯基特淋巴瘤，急性淋巴细胞白血病，组织细胞淋巴瘤，早幼粒细胞白血病，等等；各种非肿瘤性疾病和病症，包括但不限于类风湿性关节炎(Koch等.免疫学杂志(J.Immunol.)1994，152:4149-4156;Fava等.实验医学杂志(J.Exp.Med.)1994,180:341-346;Walsh,风湿病学(Rheumatology)(牛津)1999,38:103-112;Ballam等.国际实验病理学在杂志(Int.J.Exp.Pathol.)1999,80:235-250;Ikeda等.病理学杂志(J.Pathol.)2000，191:426-433;deBrandt等.类风湿性关节炎(ArthritisRheum.)2000，43:2056-63;Lee等.临床实验风湿病学(Clin.Exp.Rheumatol.)2001，19:321-324;Ballara等.类风湿性关节炎(ArthritisRheum.)2001，44:2055-2064),骨关节炎(Walsh,风湿病学(Rheumatology)(牛津)1999,38:103-112),银屑病(Bhusan等.1999,动脉粥样硬化，糖尿病性和其它视网膜病(Aiello等.新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)1994,331:1480-1487;Malecaze等.眼科学学报(Arch.Ophthalmol.)1994,112:1476-1482;Duh禾QAiello糖尿病(Diabetes)1999,48:1899-1906;Chakrabarti等.糖尿病代谢研究综述(DiabetesMetab.Res.Rev.)2000，16:393-407;Ozaki等.美国眼科学杂志(Am.J.Pathol.)2000,156:697-707)，晶状体后纤维素增生，新血管性青光眼，年龄相关的黄斑变性(AMD)(Lopez等.眼科学视觉科学研究(Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.M996,37:855-868;Chen等.分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)1999,293:865-881;Krzystolik等.眼科学学报(Arch.Ophthalmol.)2002,120:338-346),甲状腺增生(包括格雷夫斯病)，角膜及其他组织移植，同种异体移植排斥(Reinders等.临床研究杂志(J.Clin.Invest.)2003，112:1655-1665)，各种炎性病症(Dvorak临床肿瘤学杂志(J.Clin.Oncol.)2002,20:4368-4380),慢性炎症，肺部炎症，肾病综合征，先兆子痫(Maynard等.临床研究杂志(J.Clin.Invest.)2003,111:649-658;Hoeben等.药理学综述(Pharmacol.Rev.)2004,56:549-579),卵巢过度刺激综合征(OHSS)(McCIure等.柳叶刀(Lancet)1994,344:235-269;Lee等.Fertil.Steril.1997,68:305-311;Levin等.临床研究杂志(J.Clin.Invest.)1998，102:1978-1985;Artini等.Fertil.Steril.1998，70:560-565;Ferrara等.自然医学(Nat.Med.)1998,4:336-340)，多囊卵巢综合征(PCOS)(Agmwal等.人类生殖(Hum.Reprod.)1998,13:651-655),腹水，心包渗出(诸如与心包炎相关的)，和胸膜渗出；水肿(Kovacs等.中风(Stroke)1996，27:1865-1872;Hayashi等.中风(Stroke)1997,28:2039-2044;Lennmyr等.神经病和实验神经学杂志(J.NeuropatholExp.Neurol.)1998,57:874-882),包括但不限于中枢神经系统(CNS)水肿，大脑水肿，脊髓或脊椎管水肿或其它导致升高的颅内压的病症(诸如局部脊髓损伤)，血管生成性水肿和细胞毒性水肿，由各种病理性病症或刺激导致或伴随其的水肿，包括但不限于，急性高血压，脑膜炎，脑炎，脓疡，肿瘤性疾病(如上述)(特别是实体瘤)，外伤(诸如头损伤)，出血,病毒感染，大脑性疟疾，中风，辐射，多发性硬化病，后心脏停博，出生窒息，谷氨酸毒性，脑病，组织缺氧，局部缺血和肾透析。可以使用VEGF激动剂，例如，用在心血管缺血中(Hoeben等.药理学综述(Pharmacol.Rev.)2004，56:549-579);外周血管病诸如严重四肢缺血(Baumgartner等.循环(Circulation)1998，97:1114-1123),血栓闭塞性脉管炎(thrombangitisobliterans)(Isner等.血管手术杂志(J.Vase.Surg.)1998，28:964-973)，缺血性血管闭塞(Mack等.血管手术杂志(J.Vase.Surg.)1998,27:699-709)，外周动脉闭塞(peripheralartherialocclusion)(PAO)和血管再形成缺血性心脏组织。特别地，本发明的多肽和组合物可以用于预防和治疗以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病，所述过量和/或病理性血管发生或新血管形成由过量的和/或不需要的通过VEGF介导或由其中涉及VEGF的途径介导的信号传导引起。基于本文公开的内容，所述以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病的实例同样是熟练的技术人员所清楚的。37因此，但不限于此，例如，本发明的氨基酸序列和多肽可以用于预防和/或治疗目前用可以用调节VEGF-介导的信号传导的有效成分预防或治疗的所有疾病和病症，诸如在上文引用的现有技术中提及的那些。还想到本发明的多肽可以用来预防和/或治疗所有这样的疾病和病症，g卩，对于所述疾病和病症使用所述有效成分的治疗处于正常研发中、已经提出、或将在将来提出或研发。另外，想得到，由于它们如本发明进一步所述的有利特性，本发明的多肽可以用于预防和治疗除对其正在使用或将提议或研发这些已知的有效成分的那些疾病和病症之外的其它疾病和病症；和/或本发明的多肽可以提供用于治疗本文所述的疾病和病症的新方法和方案。对于熟练的技术人员，本发明的氨基酸序列和多肽的其它应用和用途将通过本发明进一步公开的内容变得清楚。一般地，本发明的目的是提供可以用于诊断、预防和/或治疗以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病以及本发明引用的其它疾病和病症的药物活性试剂，以及包括其的组合物；并且提供用于诊断、预防和/或治疗所述疾病和病症的方法，所述方法包括施用和/或使用所述试剂和组合物。特别地，本发明的目的是提供与本领域内目前所用和/或所知的试剂、组合物和/或方法相比较具有某些优点的这样的药物活性试剂、组合物和/或方法。这些优点将从下文进一步描述中变得清楚。更特别地，本发明的目的是提供可以用作药物活性试剂的治疗性蛋白，以及包括其的组合物，其用于诊断、预防和/或治疗以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病以及本文提及的其它疾病和病症；和提供用于诊断、预防和/或治疗所述疾病和病症的方法，所述方法包括施用和/或使用所述治疗性蛋白和组合物。因此，本发明的具体目的是提供针对(如本文所定义)VEGF、特别是针对来自温血动物的VEGF、更特别是针对来自哺乳动物的VEGF、并且尤其是针对人VEGF的氨基酸序列；并且提供包括至少一种所述氨基酸序列或基本上由其组成的蛋白和多肽。特别地，本发明的具体目的是提供适合在温血动物、并且特别是在哺乳动物、且更特别是在人类中用于预防、治疗和/或诊断应用的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。更特别地，本发明的具体目的是提供可以在温血动物、特别是在哺乳动物、且更特别是在人中用于预防、治疗、减轻和/或诊断一种或多种与vegf相关的和/或由vegf介导的疾病、紊乱或病症(如本文提及的疾病、紊乱和病症)的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。本发明还有一个具体目的是提供可以用于制备用于预防和/或治疗温血动物、特别是哺乳动物、且更特别是人类中的一种或多种与vegf相关的和/或由vegf介导的疾病、紊乱或病症(如本文提及的疾病、紊乱和病症)的药物或兽医用组合物的所述氨基酸序列和所述蛋白和/或多肽。在本发明中，通常，这些目的通过利用本文所述的氨基酸序列、蛋白、多肽和组合物实现。一般地，本发明提供针对(如本文所定义)和/或可以特异性结合(如本文所定义)vegf的氨基酸序列；以及包括至少一个所述氨基酸序列的化合物和构建体、且特别是蛋白和多肽。更特别地，本发明提供可以以如本文所定义的亲和力(适当测量禾口/或表示为Ko-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，k^-速率和/或k。r速率，或备选地为IC5Q值，如本发明进一步所述)与VEGF结合的氨基酸序列；以及包括至少一个所述氨基酸序列的化合物和构建体、且特别是蛋白和多肽。特别地，本发明的氨基酸序列和多肽邻选这样，以致它们-以10弋10-12摩尔/升或更小、并且优选地10:10—12摩尔/升或更小、并且更优选地10-S-10"摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与vegf结合；和/或这样，以致它们一以i。2m'V1-约io7m-V',优选io3M-V1-io'ntV1,更优选104m-V1-107m-V1,诸如105m-V1-107]VrV1的k。n-速率与vegf结合；和/或这样，以致它们-以Is"(t1/2=0.69s)-10—6s"(提供具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10'2S"-10-6S",更优选io'3S-1-io-6S—1,诸如10—4S"-10—6S"合。优选地，本发明的单价氨基酸序列(或包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽)优选是这样的，以致它将以小于500nM,优选小于200nM,更优选小于10nM,诸如小于500pM的亲和力与VEGF结合。对于本发明的氨基酸序列或多肽与VEGF结合的一些优选的IC50值将从本发明的进一步描述和实施例中变得清楚。对于与VEGF结合，本发明的氨基酸序列通常将在其氨基酸序列内包含一个或多个氨基酸残基、或氨基酸残基的一个或多个序列(g卩，每个"序列"包括彼此相邻或彼此紧邻的两个(或多个)氨基酸残基，即，在该氨基酸序列的一级或三级结构上)，通过其本发明的氨基酸序列可以与VEGF结合，因此所述氨基酸残基或氨基酸残基序列形成结合VEGF的位点(本发明还称为"^^"禁会泣/T')。本发明提供的氨基酸序列优选地基本上采用分离的形式(如本文所定义)、或形成本发明的蛋白或多肽的一部分(如本文所定义)，其可以包括一个或多个本发明的氨基酸序列或基本上由其组成，并且其可以任选地还包括一个或多个其它氨基酸序列(全部任选地通过一个或多个适当的接头连接)。例如，并且不限于，本发明的一个或多个氨基酸序列可以用作在这样的蛋白或多肽内的结合单位，所述蛋白或多肽可以任选地包含可以作为结合单位的一个或多个其它氨基酸序列(即，针对除VEGF外的一个或多个其它耙标)，以便分别提供单价、多价或多特异性的本发明的多肽，全如本文所述。这样的蛋白或多肽也可以采用基本上分离的形式(如本文所定义)。本发明的氨基酸序列和多肽同样优选地基本上由单一氨基酸链组成，其不通过二硫键与任何其它氨基酸序列或链连接(但是其可以或可以不包含一个或多个分子内二硫键。例如，已知，纳米抗体-…如本文所述——有时可以在CDR3和CDR1或FR2之间包含二硫键)。然而，应该注意到，一个或多个本发明的氨基酸序列可以彼此连接和/或与其它氨基酸序列连接(例如通过二硫键)以提供这样的肽构建体，其也可以用于本发明中(例如，Fab，片段，F(ab')2片段，ScFv构建体，"双抗体"以及其它多特异性构建体。例如，参考Holliger和Hudson的综述，自然生物技术(Nat.40Biotechnol.)2005年9月;23(9):1126-36。)。一般地，当本发明的氨基酸序列(或包括其的化合物、构建体或多肽)意欲施用给受试者时(例如，为了如本发明所述的治疗和/或诊断目的)，其优选不是在所述受试者内天然存在的氨基酸序列；或当它不在所述受试者内天然存在时，其采用基本上分离的形式(如本文所定义)。熟练的技术人员还应该清楚，对于药物应用，本发明的氨基酸序列(以及包括其的化合物、构建体和多肽)优选地针对人VEGF;而对于兽医用目的，本发明的氨基酸序列和多肽优选地针对来自待治疗的物种的.VEGF，或至少与来自待治疗的物种的VEGF交叉反应。此外，本发明的氨基酸序列可以任选地，并且除了所述至少一个针对VEGF结合的结合位点之外，包含针对其它抗原、蛋白或靶标结合的一个或多个其它结合位点。本发明的氨基酸序列和多肽的功效、以及包括其的组合物的功效可以使用任何适合的体外测定、基于细胞的测定、体内测定和/或本身已知的动物模型、或它们的任何组合进行检测，这取决于所涉及的具体的疾病或病症。适当的测定和动物模型对于熟练的技术人员将是清楚的，并且例如包括ELISA;固相受体结合和阻断测定，(x筛选测定(PerkinElmer,MN，美国)；Biacore(BIAcoreAB公司，Uppsala，瑞典)；细胞增殖测定，诸如例如在Winkles等.(美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.SciUSA)1987，84:.7124-7128)，Miao等.(2006,生物化学和生物物理学研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun:)345:438-445),Jo等.((美国病理学杂志(Am.J.Patho1.)2006,168:2036-2053)和Wu等.(临床癌症研究(Clin.CancerRes.)2006，12:6573-6584)中所述；VEGF-诱导的趋化性测定，诸如例如在WO94/10202,WO00/37502和Miao等.(2006,生物化学和生物物理学研究通讯(Biochem.Bi叩hys.Res.Commun.)345:438-445)中所述；体外和体内血管发生测定，诸如例如鸡尿囊绒膜(chorioallantorcmembrane)(CAM)测定和其它血管发生测定，如在Hasan等.(血管发生(Angiogenesis)2004,7:l-16)中所述；异种移植小鼠模型，诸如例如在WO94/10202,WO00/37502，Presta等.(癌症研究(CancerRes.)1997,57:4593-4599)和Wu等.(临床癌症研究(Clin.CancerRes.)2006,12:6573-6584)中所述；缺血性小鼠视网膜模型，诸如例如在Duh和Aiello(糖尿病(Diabetes)1999,48:1899-1906)中所述；关于缺血性视网膜病的动物模型，诸如例如在Aiello等.(美国国家科学院学报(Proc.Natl,Acad.Sci.USA)1995,92:10457-10461)中所述；灵长类动物AMD模型，诸如例如在Krzystolik等.(眼科学学报(Arch.Ophthalmol.)2002,120:338-346)中所述；灵长类动物缺血性虹膜新血管形成模型；角膜新血管形成模型，诸如例如在Jonssen等.(眼科学视觉科学研究(Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.)2003,44:117-123)和Jo等.(美国眼科学杂志(Am.J.Pathol.)2006,168:2036-2053)中所述；脉络膜新血管形成(CNV)模型，诸如例如在Mori等.(美国病理学杂志(Am.J.Pathol.)2001,159:313-320)和Jo等.(美国病理学杂志(Am.J.Pathol.)2006,168:2036-2053)中所述；脑水肿模型，诸如例如在WO00/37502中所述，以及在下述实验部分和在本文引用的现有技术中所用的测定和动物模型。在Biacore中，关于纳米抗体VEGF165结合的KD优选地诸如为1pM-100nM,优选为1pM-10nM,更优选为1pM-1nM,诸如为1pM-100pM。在a筛选测定中(如在实施例部分所述)，关于所述纳米抗体抑制VEGF/VEGFR相互作用的IC5o优选地诸如为1pM-100nM,优选为1pM-10nM，更优选为lpM-lnM，诸如为lpM-100pM。在HUVEC细胞增殖测定中(如在实施例部分所述)，关于所述纳米抗体抑制VEGF刺激的增殖的ICso优选地诸如为0.1pM-10nM，优选为0.1pM-1nM，更优选为0.1pM-200pM,诸如为0.1pM-20pM。此外，按照本发明，针对来自第一温血动物物种的VEGF的氨基酸序列和多肽可以或可以不表现出与来自一种或多种其它温血动物物种的VEGF的交叉反应性。例如，针对人VEGF的氨基酸序列和多肽可以或可以不表现出与来自一种或多种其它灵长类物种(诸如，不限于，来自猕猴属(Mac"ca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(ikfoc^^/ascz'cw/an》)和/或恒河猴(恒河猴(il/acacamw/a"a)))和狒狒(豚尾狒狒的VEGF的交叉反应性，和/或与来自通常用于疾病动物模型中的(例如小鼠、大鼠、兔、猪或狗)、且特别是用于与VEGF相关的疾病和病症的动物模型中(诸如本发明提及的物种和动物模型)的一种或多种动物物种的VEGF的交叉反应性。在这一方面，对于熟练的技术人员应该清楚，从药物开发观点来看，所述交叉反应性，当存在时，可以具有优点，因为它允许在所述疾病模型中检测所述针对人VEGF的氨基酸序列和多肽。更一般地，与来自多个哺乳动物物种的VEGF交叉反应的本发明的氨基酸序列和多肽将通常有利于用于兽医应用，原因在于它将允许在多种物种之间使用相同的氨基酸序列或多肽。因此，在本发明的范围内还包括针对来自一个动物物种的VEGF的氨基酸序列和多肽(诸如针对人VEGF的氨基酸序列和多肽)可以用于治疗另一个动物物种，只要所述氨基酸序列和/或多肽的应用在待治疗的物种中提供所需要的作用。本发明的氨基酸序列和多肽可以结合VEGF家族中除VEGF-A之外的其它成员。优选地，本发明的氨基酸序列和多肽结合VEGF-A，而不与VEGF家族的其它成员相互作用。本发明的氨基酸序列和多肽结合至少一种VEGF同种型(即，VEGF110，VEGF121,VEGF145,VEGF165,VEGF183,VEGF189和/或VEGF206)。在优选的方面，本发明的氨基酸序列和多肽结合至少两种同种型，至少三种同种型，至少四种同种型，至少五种同种型，和优选地，所有VEGF同种型。在另一个优选的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽可以结合一种VEGF同种型(诸如例如，VEGF121,VEGF145或VEGF165),两种同种型(诸如例如，VEGF121和VEGF145;或VEGF145和VEGF165;或VEGF121和VEGF165),三种同种型(诸如例如，VEGF121,VEGF145和VEGF165;或VEGF145,VEGF189和VEGF206;或VEGF121,VEGF165和VEGF183),四种同种型(诸如例如，VEGF110,VEGF121，VEGF165和VEGF183;或VEGFllO,VEGF121,VEGF145和VEGF165),五种同种型(诸如例如，VEGF121,VEGF145,VEGF165，VEGF183和VEGF186;或VEGF121,VEGF145，VEGF165,VEGF183和VEGF206)或六种同种型(诸如例如，VEGF121,VEGF145，VEGF165,VEGF183，VEGF189和/或VEGF206)。在本发明的一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽可以，例如，结合所有可溶的同种型，而不与肝素43(heparing)-结合的同种型相互作用；或者本发明的氨基酸序列和多肽可以结合所有肝素-结合的同种型，而不与可溶的同种型相互作用。本发明在其最广泛意义上还不特别限于或限定在本发明的氨基酸序列和多肽所针对的VEGF的特异性抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象(confirmation)(在适用时)。例如，所述氨基酸序列和多肽可以或可以不针对"相互作用位点"(如本文定义)。然而，通常假定并且优选本发明的氨基酸序列和多肽优选地针对VEGF受体的VEGF结合位点(Keyt等.生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1996,274:5638-5646),或者另外能够干扰VEGF与VEGF受体的相互作用，诸如通过空间阻碍VEGF接近VEGF受体。因此，在一个优选的但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽针对关于VEGFR-1的结合位点和/或关于VEGFR-2的结合位点，并且如本文进一步所定义。在一个优选的但非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列和多肽与组成VEGF上关于VEGFR-1和/或VEGFR-2的结合位点的至少一个氨基酸相互作用。在本发明的一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽抑制VEGF与VEGFR-1的结合，而不抑制VEGF与VEGFR-2的结合。在本发明的另一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽抑制VEGF与VEGFR-2的结合，而不抑制VEGF与VEGFR-1的结合。在本发明的另一个方面中，本发明的氨基酸序列和多肽抑制VEGF与VEGFR-1的结合并且抑制VEGF与VEGFR-2的结合。如本文进一步所述，本发明的多肽可以包含两个或多个针对VEGF的本发明的氨基酸序列。通常，所述多肽以与本发明的单个氨基酸序列相比提高的亲和力(avidity)与VEGF结合。例如，这样的多肽可以包括两个这样的本发明的氨基酸序列，即所述本发明的氨基酸序列针对VEGF的同一抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象(在适用时)(其可以是或可以不是相互作用位点)；或者包括至少一个本发明的"第一"氨基酸序列，其针对VEGF的第一抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象(在适用时)(其可以是或可以不是相互作用位点)；和至少一个本发明的"第二"氨基酸序列，其针对与所述第一不同的第二抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象(在适用时)(其可以是或可以不44是相互作用位点)。优选地，在本发明的所述"双互补性(biparatopic)"多肽中，至少一种本发明的氨基酸序列针对相互作用位点(如本文定义)，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此。此外，当靶标是结合对(例如，受体-配体结合对)的一部分时，所述氨基酸序列和多肽可以是这样的，以致它们与同源结合配偶体(例如，配体、受体或其它结合配偶体，在适用时)竞争与所述耙标结合，和/或是这样的，以致它们(完全或部分)中和(neutralize)所述结合配偶体与所述靶标的结合。在适用情形中，本发明的氨基酸序列可以结合VEGF的两个以上的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象(confirmation),这也在本发明范围内。在这样的情形中，与本发明的氨基酸序列和/或多肽结合的VEGF的抗原决定簇、表位、部分、结构域或亚基可以基本上是相同的(例如，如果VEGF包含重复的结构基序或以嵌合体/多聚体形式存在)，或可以是不同的(并且在后一种情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以可能是相同或不同的亲和性和/或特异性结合VEGF的所述不同的抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基)。此外，例如，当VEGF以活化构象存在和以无活性构象存在时，本发明的氨基酸序列和多肽可以结合这些构象中的任一种，或者可以结合这两种构象(即，以可能是相同的或不同的亲和性和/或特异性)。此外，例如，本发明的氨基酸序列和多肽可以与这样的VEGF构象结合，即，在所述构象中其与相关配体结合(或与细胞外基质结合，诸如与细胞外基质中细胞表面包含肝素的蛋白聚糖结合)，可以与这样的VEGF构象结合，即，在所述构象中其不与相关配体(诸如是可溶的构象)结合，或者可以与所述两种构象结合(同样以可能是相同的或不同的亲和性和/或特异性)。还预计本发明的氨基酸序列和多肽通常将与VEGF的所有天然存在的或合成的类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段结合；或至少与VEGF的那些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段结合，其包含与本发明的氨基酸序列和多肽在VEGF中(例如在野生型VEGF中)结合的抗原决定簇或表位基本上相同的一个或多个抗原决定簇或表位。同样地，在这样的情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以与本发明的氨基酸序列结合(野生型)VEGF的亲和性和特异性相同或不同(即，高于或低于其)的亲和性和/或特异性结合所述类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段。本发明的氨基酸序列和多肽与VEGF的一些类似物、变体、突变体、等位基因、部分和片段结合而不与另一些结合，这也包括在本发明的范围内。当VEGF以单体形式存在和以一个或多个多聚体形式(诸如其二聚体形式)存在时，本发明的氨基酸序列和多肽只与单体形式的VEGF结合，只与多聚体形式的VEGF结合，或与单体和多聚体形式二者结合，这在本发明的范围内。同样地，在这样的情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以与本发明的氨基酸序列与所述多聚体形式结合的亲和性和特异性相同或不同(即，高于或低于其)的亲和性和/或特异性与单体形式^口口o此外，当VEGF可以与其他蛋白或多肽缔合以形成蛋白复合体(例如，具有多个亚基)时，本发明的氨基酸序列和多肽可以与处于其非缔合状态的VEGF结合，与处于其缔合状态的VEGF结合，或与二者均结合，这在本发明的范围内。在所有这些情形中，本发明的氨基酸序列和多肽可以以与本发明的氨基酸序列和多肽与处于其单体和非缔合状态的VEGF结合的亲和性和/或特异性可能是相同的或不同(即，高于或低于其)的亲和性和/或特异性与所述多聚体或缔合蛋白复合体结合。此外，对于熟练的技术人员应该是清楚的，包含两个或更多个针对VEGF的氨基酸序列的蛋白或多肽可以以比相对应的单体氨基酸序列更高的亲和力(avidity)与VEGF结合。例如，但不限于，包含两个或更多个针对VEGF的不同表位的氨基酸序列的蛋白或多肽可以(并且通常将)以比不同单体的每一个更高的亲和力结合，并且包含两个或更多个针对VEGF的氨基酸序列的蛋白或多肽还可以(并且通常将)以更高的亲和力结合VEGF的多聚体(如其二聚体)。在本发明的一个方面中，本发明的蛋白或多肽包含两个氨基酸序列，每一个针对不同的VEGF受体结合位点，艮卩，针对关于VEGFR-1的结合位点和针对关于VEGFR-2的结合位点.一般地，本发明的氨基酸序列和多肽将至少结合那些形式的VEGF(包括单体、多聚体和缔合形式)，从生物学和/或治疗观点看来，其是最相关的，这对于熟练的技术人员将是清楚的。使用本发明的氨基酸序列和多肽的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物，和/或使用包括一个或多个所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物或基本上由其组成的蛋白或多肽，也在本发明的范围内，只要这些适用于本发明考虑的应用。所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物通常将包含(至少部分)针对VEGF结合的功能性抗原-结合位点；并且更优选地将能够特异性结合VEGF，并且甚至更优选地能够以如本发明所定义的亲和性(适当地测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，k。n-速率和/或k。『速率，或备选地作为ICso值，如本发明进一步所述)结合VEGF。所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物、蛋白和/或多肽的一些非限制性实例将通过本发明的进一步描述变得清楚。还可以通过适当组合(即，通过连接或基因融合)一个或多个(更小的)本发明所述的部分或片段而提供本发明的其他片段或多肽。在本发明的一个具体而非限制性方面中，其将在本发明中进一步描述，与它们衍生自其中的氨基酸序列相比，所述类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物在血清中具有增加的半衰期(如本文进一步所述)。例如，可以将本发明的氨基酸序列连接到(化学或其他方式)一个或多个延长半衰期的基团或部分(诸如PEG)上，以提供具^"增加的半衰期的本发明的氨基酸序列的衍生物。在一个具体而非限制性的方面中，本发明的氨基酸序列可以是包括免疫球蛋白折叠的氨基酸序列，或可以是在适当条件(诸如生理条件)下能够形成免疫球蛋白折叠(即，通过折叠)的氨基酸序列。其中特别参考Halaby等的综述(蛋白质工程杂志(J.ProteinEng.)1999，12,563-71)。优选地，当正确折叠以形成免疫球蛋白折叠时，这样的氨基酸序列能够特异性结合(如本文所定义)VEGF;并且更优选地能够以如本发明所定义的亲和性(适当地测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，k。n-速率和/或k。ir速率，或备选地作为IC50值，如本发明进一步所述)结合VEGF。此外，所述氨基酸序列的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物优选是这样的，以致它们包括免疫球蛋白折叠或者能够在适当的条件下形成免疫球蛋白折叠。特别地，但不限于，本发明的氨基酸序列可以是基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列；或所述氨基酸序列的任何适当的片段(那么其通常将包含至少一些形成至少一个CDR的氨基酸残基，如本文进一步所述)。本发明的氨基酸序列可以特别是免疫球蛋白序列或其适当的片段，并且更特别地是免疫球蛋白可变结构域序列或其适当的片段，诸如轻链可变结构域序列(例如，Vl-序列)或其适当的片段；或重链可变结构域序列(例如，Vh-序列)或其适当的片段。当本发明的氨基酸序列是重链可变结构域序列时，它可以是来源于常规四链抗体的重链可变结构域序列(诸如，不限于，来源于人抗体的Vh序列)，或是来源于所谓的"重链抗体"(如本文所定义)的所谓的vhh-序列(如本文所定义)。然而，应该注意到，本发明不限制本发明的氨基酸序列的来源(或用于表达其的本发明的核苷酸序列的来源)，也不限制产生或获得(或己经产生或获得)本发明的氨基酸序列或核苷酸序列的方法。因此，本发明的氨基酸序列可以是天然存在的氨基酸序列(来自任何适当的物种)或合成的或半合成的氨基酸序列。在本发明的具体而非限制性方面，所述氨基酸序列是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适当的物种)或合成的或半合成的免疫球蛋白序列，其包括但不限于"人源化的"(如本文所定义)免疫球蛋白序列(诸如部分或完全人源化的小鼠或兔免疫球蛋白序列，并且特别是部分或完全人源化的Vhh序列或納米抗体)，"骆驼源化的(camelized)"(如本文所定义)免疫球蛋白序列，以及已经通过下列技术获得的免疫球蛋白序列诸如亲和力成熟(例如，起始于合成的、随机的或天然存在的免疫球蛋白序列),CDR移植，镶盖术(veneering),组合来源于不同的免疫球蛋白序列的片段，利用重叠的引物进行的PCR装配,以及熟练的技术人员公知的加工免疫球蛋白序列的相似技术;或前述任一项的任何适当的组合。例如，参考标准手册，以及进一步的描述和本发明提及的现有技术。48类似地，本发明的核苷酸序列可以是天然存在的核苷酸序列或合成的或半合成的序列，并且例如，可以是通过PCR从适当的天然存在的模板(例如，从细胞分离的DNA或RNA)分离的序列，己经从文库(并且特别是表达文库)分离的核苷酸序列，已经通过向天然存在的核苷酸序列中引入突变(利用任何适当的本身已知的技术，诸如错配PCR)而制备的核苷酸序列，已经使用重叠的引物通过PCR制备的核苷酸序列，或已经利用本身已知的DNA合成技术制备的核苷酸序列。本发明的氨基酸序列可以特别是结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)、单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)、"dAb"(或适合用作dAb的氨基酸序列)或纳米抗体⑧(Nanobody)(如本文所定义，并且包括但不限于Vhh序列)；其它单可变结构域、或它们中任一种的任何适当的片段。对于(单)结构域抗体的概括描述，参考上文引用的现有技术，以及参考EP0368684。对于术语"dAb's"，例如，参考Ward等(自然(Nature)1989年10月12日；341(6242):544-6),参考Holt等，生物技术趋势(TrendsBiotechnol.),2003，21(11):484画490;以及例如参考WO06/030220，WO06/003388与Domantis(DomantisLtd.)有限公司的其它公布的专利申请。还应该注意到，尽管由于它们不是哺乳动物来源的，在本发明的情形中较不优选，但是单结构域抗体或单可变结构域可以来源于某些鲨鱼(shark)物种(例如，所谓的"IgNAR结构域"，参见例如WO05/18629)。特别地，本发明的氨基酸序列可以是纳米抗体⑧(如本文所定义)或其适当的片段。/"注意,謝#贫#(7Va"ok^Xg)久辨f贫谬7^r7Va"o6c^/M)丽浙謝术克;#@(A^"oc/o"e⑧)为^厚^f^^f,份^/^公眾"Wy^xTV.KJ游&#裔#。7所述针对VEGF的纳米抗体在本发明也称为"^r发^^^謝苯緣。对于纳米抗体的概括描述，参考下文的进一步描述，以及参考本发明所引用的现有技术。在这一方面，然而，应该注意到，本文描述和现有技术主要描述所谓"VH3种类"的纳米抗体(即，与VH3种类的人种系序列如DP-47、DP-51或DP-29具有高度序列同源性的纳米抗体)，所述纳米抗体形成本发明的优选方面。然而，应该注意到，本发明在其最广泛意义上通常涵盖任何类型的针对VEGF的纳米抗体，并且例如，还涵盖属于所谓的"Vh4种类"的纳米抗体(即，与VH4种类的人种系序列如DP-78具有高度序列同源性的纳米抗体)，例如，如在埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年4月14日提交的题目为"D尸-7S存謝^贫沐60尸-7&/汰￡A/awo6W^/，的美国临时申请60/792，279(还见PCT/EP2007/003259)中描述。一般地，纳米抗体(特别是Vhh序列和部分人源化的納米抗体)可以特别地特征在于，在一个或多个构架序列(同样如本文进一步所述)中存在一个或多个"薪,志遂基(7w〃mwA:ms"(如本发明所述)。因此，通常，纳米抗体可以定义为具有下述(通用)结构的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2一FR3隱CDR3陽FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4,并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3,并且其中一个或多个标志残基如本文进一步所定义。特别地，纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4,并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3,并且其中所述构架序列如本文进一步所定义。更特别地，纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2画FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4,并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中i)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37,44,45,47，83,84，103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自下表A-3中提及的标志残基；50并且其中ii)所述氨基酸序列与SEQIDNO's:1-22的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基(在序列SEQIDNO's:1-22中用X表示)。在这些纳米抗体中，所述CDR序列通常如本文进一步定义。因此，本发明还涉及这样的纳米抗体，其可以结合(如本文定义)和/或针对VEGF，涉及其适当的片段，以及包括一个或多个所述纳米抗体和/或适当的片段或基本上由其组成的多肽。SEQIDNO，s486—575提供己经针对VEGF产生的多种Vhh序列的氨基酸序列。特别地，本发明在一些具体的方面提供-这样的氨基酸序列，其针对(如本文定义)VEGF并且其与SEQIDNO，s:441-485中的至少一个氨基酸序列具有至少80%、优选至少85%、诸如90%或95%或更高的序列同一性。这些氨基酸序列还可以是这样的，以致它们中和(neutralize)同源配体与VEGF的结合；和/或与同源配体竞争结合VEGF;和/或针对VEGF上的相互作用位点(如本文定义)(诸如配体结合位点)；-这样的氨基酸序列，其交叉阻断(如本文定义)SEQIDNO，s:441-485中的至少一种氨基酸序列与VEGF结合和/或其与SEQIDNO's:441-485中的至少一种氨基酸序列竞争结合VEGF。同样地，这些氨基酸序列还可以是这样的，以致它们中和(neutralize)同源配体与VEGF的结合；和/或与同源配体竞争结合VEGF;和/或针对VEGF上的相互作用位点(如本文定义)(诸如配体结合位点)；其中氨基酸序列可以如本文进一步所述(并且可以例如是纳米抗体)；以及包括一个或多个所述氨基酸序列的本发明的多肽(其可以如本文进一步所述，并且可以例如是如本文所述的双特异性的和/或双互补性的多肽),和编码所述氨基酸序列和多肽的核酸序列。所述氨基酸序列和多肽不包括任何天然存在的配体。因此，本发明的一些特别优选的纳米抗体是可以结合(如本发明进51一步所定义)和/或针对VEGF的纳米抗体，并且其i)与SEQIDNO，s:441-485的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基。在这一方面，还参考表A-l，其列出了SEQIDN0，s:441-485的纳米抗体的构架1序列(SEQIDNO's:126-170),构架2序列(SEQIDNO，s:216-260),构架3序列(SEQIDNO，s:306-350)和构架4序列(SEQIDNO's:396-440)(关于在所述构架1序列的位置1-4和27-30的氨基酸残基，还参考下文的评述。因此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略这些残基)；并且其中ii)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37,44，45,47,83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自下表A-3中提及的标志残基。在这些纳米抗体中，所述CDR序列通常与本文进一步所定义。同样地，所述纳米抗体可以以任何适当的方式获得，并且来源于任何适当的来源，并且例如，可以是天然存在的Vhh序列(S卩，来自于适当的骆驼科(Camdid)物种)或合成的或半合成的氨基酸序列，包括但不限于"人源化的"(如本文所定义)纳米抗体，"骆驼源化的"(如本文所定义)免疫球蛋白序列(并且特别是骆驼源化的重链可变结构域序列)，以及己经通过下列技术获得的纳米抗体诸如亲和力成熟(例如，起始于合成的、随机的或天然存在的免疫球蛋白序列),.CDR移植，镶盖术，组合来源于不同的免疫球蛋白序列的片段，利用重叠的引物进行的PCR装配，以及熟练的技术人员公知的加工免疫球蛋白序列的相似技术;或前述任一项的任何适当的组合，这如本发明进一步描述。此外，当納米抗体包括Vhh序列时，所述纳米抗体可以适当地被人源化，如本发明进一步所述，以便提供一个或多个本发明的进一步(部分或完全)人源化的纳米抗体。类似地，当纳米抗体包括合成的或半合成的序列(诸如部分人源化的序列)时，所述纳米抗体可以任选地进一步适当地被人源化，同样如本发明所述，同样以便提供一个或多个其他本发明的(部分或完全)人源化的纳米抗体。特别地，人源化的纳米抗体可以是如前述段落中关于纳米抗体概括定义的氨基酸序列，但是其中存在至少一个这样的氨基酸残基(并且特别地，在至少一个构架残基中)，所述氨基酸残基是和/或对应人源化的取代(如本文所定义)。基于本发明公开的内容，对于熟练的技术人员，一些优选的、而非限制性的人源化取代(及其适当的组合)将变得清楚。另外，或者备选地，通过比较天然存在的vhh序列的构架区序列与一个或多个紧密相关的人vh序列的相对应的构架序列，可以确定其它潜在有用的人源化取代，此后，可以将由此确定的一个或多个潜在有用的人源化取代(或其组合)引入到所述Vhh序列中(以本身已知的任何方式，如本文进一步所述)，并且可以检测所得到的人源化的vhh序列对靶点的亲和性、稳定性、表达的容易性和水平、和/或其它需要的特性。在这种方式中，通过利用有限的试验和误差程度，熟练的技术人员基于本发明公开的内容可以确定其它适当的人源化取代(或其适当的组合)。此外，基于前述内容，纳米抗体(的构架区)可以是部分人源化的或完全人源化的。本发明一些特别优选的人源化的纳米抗体是SEQIDNO's:441-485的纳米抗体的人源化变体。因此，本发明一些其它优选的纳米抗体是这样的纳米抗体，其可以结合(如本文进一步所述)VEGF，并且其i)是SEQIDNO's:441-485的氨基酸序列之一的人源化变体；和/或ii)与SEQIDNO，s:441-485的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基；并且其中i)优选地，在依据Kabat编号的位置11，37,44,45，47，83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自下表A-3中提及的标志残基。按照本发明的另一个具体方面，本发明提供许多特别适合结合VEGF的氨基酸残基的序列(streches)(即，小肽)。这些氨基酸残基的序列可以存在于，和/或可以结合在本发明的氨基酸序列中，特别以它们形成本发明的氨基酸序列的(部分)抗原结合位点的方式存在和/或结合。由于这些氨基酸残基序列最初作为针对VEGF产生的重链抗体或Vhh序列的CDR序列产生(或可以基于和/或来源于所述CDR序列，如本文进一步所述)，在本文中它们还将通常被称为"CD/岸身，(g卩，分别称为CDR1序列，CDR2序列和CDR3序列)。然而，应该注意到，本发明在其最广泛意义上不限于这些氨基酸残基序列可能在本发明的氨基酸序列中具有的特有的结构作用或功能，只要这些氨基酸残基序列允许本发明的氨基酸序列与VEGF结合。因此，一般地，本发明在其最广泛意义上包括任何这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列能够与VEGF结合，并且包括一个或多个本发明所述的CDR序列，并且特别地两个或更多个所述CDR序列的适当组合，其通过一个或多个其它氨基酸序列彼此适当连接，以致整个氨基酸序列形成能够结合VEGF的结合结构域和/或结合单位。然而，还应该注意到，在本发明的氨基酸序列中仅存在一个所述CDR序列可以本身已经足以提供能够结合VEGF的本发明的氨基酸序列；例如，同样参考WO03/050531中描述的所谓的"派遣片段(Expeditefragments)"。因此，在另一个具体而非限制性的方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括选自由本文所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列(或它们的任何适当的组合)组成的组的至少一个氨基酸序列。特别地，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的氨基酸序列，其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、CDR2序列和CDR3序列(或它们的任何适当的组合)组成的组的至少一个氨基酸序列。一般地，在本发明的这一方面中，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个氨基酸残基序列的任何氨基酸序列，其中所述氨基酸残基序列具有与本发明所述的至少一个CDR序列的序列相对应的氨基酸序列。这样的氨基酸序列可以或可以不包括免疫球蛋白折叠。例如，并且不限于，这样的氨基酸序列可以是适当的免疫球蛋白序列片段，所述片段包括至少一个所述CDR序列，但是其不够大，不足以形成(完整)的免疫球蛋白折叠(例如，同样参考WO03/050531中所述的"派遣片段")。备选地，这样的氨基酸序列可以是适当的"蛋白支架"，所述蛋白支架包括与这样的CDR序列相对应(即，作为其抗原结合位点的一部分)的至少一个氨基酸残基序列。用于呈递氨基酸序列的适当的支架对于熟练的技术人员将是清楚的，并且例如，包括，但不限于，基于或来源于免疫球蛋白的结合支架(即，除了本文己经描述的免疫球蛋白序列之外)，来源于蛋白质A结构域的蛋54白支架(诸如AffibodiesTM),淀粉酶抑肽(tendamistat),纤连蛋白，脂笼蛋白，CTLA-4，T-细胞受体，设计的锚蛋白重复序列，avimers禾nPDZ结构域(Binz等，自然生物技术(Nat.Biotech)2005，巻23:1257)，和基于DNA或RNA的结合部分，包括但不限于DNA或RNA适体(Ulrich等，组合化学高通量筛选(CombChemHighThroughputScreen)20069(8):619-32)。同样地，包括一个或多个这些CDR序列的任何本发明的氨基酸序列优选是这样的，以致其可以特异性结合(如本文所定义)VEGF，并且更特别地是这样的，以致其可以以如本发明所限定的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，k。n-速率和/或kofr速率，或备选地作为ICs()值，如本发明进一步所述)与VEGF结合。更特别地，本发明该方面所述的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的任何氨基酸序列,其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、本文所述的CDR2序列和本文所述的CDR3序列组成的组的至少两个氨基酸序列，以致(i)当第一氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列时，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR2序列或本文所述的CDR3序歹U;(ii)当第一氨基酸序列选自本文所述的CDR2序列时，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列或本文所述的CDR3序列；或(iii)当第一氨基酸序列选自本文所述的CDR3序列时，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列或本文所述的CDR3序列。甚至更特别地，本发明的氨基酸序列可以是包括至少一个抗原结合位点的氨基酸序列，其中所述抗原结合位点包括选自由本文所述的CDR1序列、本文所述的CDR2序列和本文所述的CDR3序列组成的组的至少三个氨基酸序列，以致第一氨基酸序列选自本文所述的CDR1序列，第二氨基酸序列选自本文所述的CDR2序列，并且第三氨基酸序列选自本文所述的CDR3序列。优选的CDR1、CDR2和CDR3序列的组合将通过本发明的进一步描述变得清楚。对于熟练的技术人员将是清楚的，这样的氨基酸序列优选是免疫球蛋白序列(如本文进一步所述)，但是例如，它也可以是包括呈递所述CDR序列的适当的支架的任何其它的氨基酸序列。因此，在一个具体而非限制性方面中，本发明涉及针对VEGF的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；d)SEQIDNO's:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；g)SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或它们的任何适当的组合。当本发明的氨基酸序列包含b)和/或c)所述的一个或多个氨基酸序列时i)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，在b)和/或c)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文所定义)；和/或ii)与a)所述的相对应氨基酸序列相比，b)和/或c)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；和/或iii)利用一种或多种本身已知的亲和力成熟技术通过亲和力成熟的方式，b)和/或c)所述的氨基酸序列可以是来源于a)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。类似地，当本发明的氨基酸序列包含e)和/或f)所述的一个或多个氨基酸序列时i)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，在e)和/或f)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文所定义)；和/或ii)与d)所述的相对应氨基酸序列相比，e)和/或f)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；和/或iii)利用一种或多种本身已知的亲和力成熟技术通过亲和力成熟的方式，e)和/或f)所述的氨基酸序列可以是来源于d)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。此外，类似地，当本发明的氨基酸序列包含h)和/或i)所述的一个或多个氨基酸序列时i)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，在h)和/或i)所述的氨基酸序列中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文所定义)；和/或ii)与g)所述的相对应氨基酸序列相比，h)和/或i)所述的氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；和/或iii)利用一种或多种本身已知的亲和力成熟技术通过亲和力成熟的方式，h)和/或i)所述的氨基酸序列可以是来源于g)所述的氨基酸序列的氨基酸序列。一应该理解，最后的前述段落通常也适用于分别包括b)，c)，e),f)，h)或i)所述的一个或多个氨基酸序列的本发明的任何氨基酸序列。在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列i)SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列；ii)SEQIDNO's:261-305的氨基酸序列；和iii)SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列；或它们的任何适当组合。此外，优选地，在这样的氨基酸序列中，至少一个所述氨基酸残基序列形成结合VEGF的抗原结合位点的一部分。在一个更具体而同样非限制性方面中，本发明涉及针对VEGF的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列a)SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；d)SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d),e),f),g),h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d)，e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b)，c),g),h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b),c),d),e)或f)所述的氨基酸序列之一。在该具体方面中，所述氨基酸序列优选地包括选自由下列各项组成的组的两个以上的氨基酸残基序列i)SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列；ii)SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列；和iii)SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列；以致,(i)当第一氨基酸残基序列对应于SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQIDNO，s:261—305或SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQIDNO，s:171-215或SEQIDNO，s:351—395的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于SEQIDNO，s:171-215或SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列之一。此外，在这样的氨基酸序列中，所述至少两个氨基酸残基序列同样优选地形成结合VEGF的抗原结合位点的一部分。在甚至更具体而非限制性的方面中，本发明涉及针对VEGF的氨基酸序列，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO's:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；59i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3，2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列。优选地，在该具体方面中，第一氨基酸残基序列选自由SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列组成的组；第二氨基酸残基序列选自由SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列组成的组；并且第三氨基酸残基序列选自由SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列组成的组。同样地，优选地，在这样的氨基酸序列中，所述至少三个氨基酸残基序列形成结合VEGF的抗原结合位点的一部分。所述氨基酸序列的序列的优选组合将通过本发明进一步的公开内容变得清楚。优选地，在所述氨基酸序列中，所述CDR序列与SEQIDNO's441-485的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性，优选至少80%的氨基酸同一性，更优选至少90%的氨基酸同一性，诸如95%的氨基酸同一性或更多，或甚至基本上100%的氨基酸同一性。该氨基酸同一性的程度可以，例如，通过确定在所述氨基酸序列和SEQIDNO's:441-485的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽视形成构架区的氨基酸残基。此外，所述本发明的氨基酸序列可以如本文进一步所述。此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)VEGF;并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合VEGF(适当测量和/或表示为Ko-值(实际的或表观的),KA-值(实际的或表观的)，k。n-速率和/或kofT速率，或备选地为IC50值，如本文进一步所述)。当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；禾口/或-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列。特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDRl选自由SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列组成的组；禾口/或CDR2选自由SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列组成的组；和/或CDR3选自由SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列组成的组。特别地，当本发明的氨基酸序列基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDRl-CDR3)组成时，本发明的氨基酸序列优选地是这样的，以致-CDRl选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或这样的氨基酸序列的任何适当的片段。特别地，这样的本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致CDR1选自由SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列组成的组；并且CDR2选自由SEQIDNO's:261-305的氨基酸序列组成的组；并且CDR3选自由SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列组成的组。同样地，优选的CDR序列的组合将通过本文的进一步描述而变得清楚。此外，所述氨基酸序列优选是这样的，以致它们可以特异性结合(如本文所定义)VEGF;并且更特别地以如本文所定义的亲和性结合VEGF(适当测量和/或表示为Kd-惶(实际的或表观的),KA-值(实际的或表观的),k。n-速率和/或k。fr速率，或备选地作为ICso值，如本发明进一步所述)。在一个优选而非限制性方面中，本发明涉及基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQIDNO，s:441-485的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性，优选至少80%的氨基酸同一性，更优选至少90%的氨基酸同一性，诸如95°/。的氨基酸同一性或更多，或者甚至基本上100%的氨基酸同一性。例如，这种氨基酸同一性的程度可以通过确定在所述氨基酸序列和SEQIDNO's:62441-485的一个或多个序列之间的氨基酸同一性程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成所述构架区的氨基酸残基。本发明的所述氨基酸序列可以如本文进一步所述。在这样的本发明的氨基酸序列中，所述构架序列可以是任何适当的构架序列，并且例如，基于标准手册和进一步公开的内容以及本发明引用的现有技术，适当的构架序列的实例对于熟练的技术人员将是清楚的。所述构架序列优选是免疫球蛋白构架序列或已经来源于免疫球蛋白构架序列(例如，通过人源化或骆驼源化)的构架序列(的适当组合)。例如，所述构架序列可以是来源于轻链可变结构域(例如，Vl-序列)和/或来源于重链可变结构域(例如，v『序列)的构架序列。在一个特别优选的方面中，所述构架序列是已经来源于VHH-序列的构架序列(其中所述构架序列可以任选地已经被部分或完全人源化)或是已经骆驼源化(如本文所定义)的常规VH序列。所述构架序列优选地是这样的，以致本发明的氨基酸序列是结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)；是单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)；是"dAb"(或适合用作dAb的氨基酸序列)；或是纳米抗体tm(包括但不限于Vhh序列)。同样地，例如，基于标准手册和进一步的公开内容以及本发明所提及的现有技术，适当的构架序列对于熟练的技术人员将是清楚的。特别地，在本发明的氨基酸序列中存在的所述构架序列可以包含一个或多个标志残基(如本文所定义)，以致本发明的氨基酸序列是一种纳米抗体。所述构架序列(的适当的组合)的一些优选的、而非限制性的实例将通过本文进一步的公开内容变得清楚。同样地，如本文关于本发明的氨基酸序列概括所述，还可以使用前述任一种的适当的片段(或片段组合)，诸如包含适当与一个或多个构架序列侧连和/或通过一个或多个构架序列连接的一个或多个CDR序列的片段(例如，以与这些CDR相同的顺序，并且构架序列可以以所述片段所来源的全长的免疫球蛋白序列存在)。所述片段还也可以是这样的，以致它们包括或可以形成免疫球蛋白折叠，或者备选地是这样的，以致它们不包括或不能形成免疫球蛋白折叠。在一个具体的方面中，这样的片段包括如本文所述的单CDR序列(并且特别是CDR3序列)，其在每一边侧连构架序列(的一部分)(并且特别地，在所述片段所来源的免疫球蛋白序列中与所述CDR序列相邻的构架序列的一部分。例如，CDR3序列可以在FR3序列(的一部分)之后并且在FR4序列(的一部分)之前)。这样的片段还可以包含二硫键，并且特别是连接分别在所述CDR序列之前和之后的两个构架区的二硫键(为了形成这样的二硫键的目的，可以使用在所述构架区中天然存在的半胱氨酸残基，或备选地，半胱氨酸残基可以合成添加或引入到所述构架区)。对于这些"派遣片段"的进一步描述，同样参考WO03/050531，以及参考埃博灵克斯股份有限公司(AblymcN.V.)于2006年12月5日提交的题目为"能够结合血清蛋白的肽(尸ep&fecopaWeto"ram;raWra)"的美国临时申请(发明人Revets,HildeAdiPierrette;Kolkman，JoostAlexander;和Hoogenboom,HendricusRenerusJacobusMattheus)(也参见PCT/EP2007/063348)。在另一个方面中，本发明涉及一种化合物或构建体，并且特别是一种蛋白或多肽(在本发明中还分别称为"4:发敏游众^激"或"^^发欽^^多if，)，其包括一个或多个本发明的氨基酸序列(或其适当的片段)或基本上由其组成，并且任选地还包括一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位。如通过本发明进一步的公开内容，对于熟练的技术人员将变得清楚的，所述其它基团、残基、部分、结合单位或氨基酸序列可以或可以不为本发明的氨基酸序列(和/或为其存在于其中的化合物或构建体)提供其它的官能性，并且可以或可以不修饰本发明的氨基酸序列的特性。例如，所述其它基团、残基、部分或结合单位可以是一个或多个额外的氨基酸序列，以致所述化合物或构建体是(融合)蛋白或(融合)多肽。在一个优选而非限制性的方面中，所述一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位是免疫球蛋白序列。甚至更优选地，所述一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位选自由下列各项组成的组结构域抗体、适合用作结构域抗体的氨基酸序列、单结构域抗体、适合用作单结构域抗体的氨基酸序列、"dAb"、适合用作dAb的氨基酸序列、或纳米抗体。备选地，例如，所述基团、残基、部分或结合单位可以是化学基团、残基、部分，其自身可以是或可以不是生物学和/或药理学活性的。例如，并且不限于，所述基团可以连接到一个或多个本发明的氨基酸序列上，以提供本发明的氨基酸序列或多肽的"衍生物"，如本发明进一步所述。也在本发明范围内的是这样的化合物或构建体，其包括一个或多个本文所述的衍生物或基本上由其组成，并且任选地还包括任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位。优选地，所述一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位是氨基酸序列。在上述化合物或构建体中，所述一个或多个本发明的氨基酸序列以及所述一个或多个基团、残基、部分或结合单位可以彼此直接连接和/或通过一个或多个适当的接头或间隔臂(spacer)连接。例如，当所述一个或多个基团、残基、部分或结合单位是氨基酸序列时，所述接头可以也是氨基酸序列，以致所得到的化合物或构建体是融合(蛋白)或融合(多肽)。本发明的化合物或多肽通常可以通过这样的方法制备，所述方法包括将所述一个或多个本发明的氨基酸序列任选地通过一个或多个适当的接头适当地连接到所述一个或多个其它基团、残基、部分或结合单位上的至少一个步骤，以提供本发明的化合物或多肽。本发明的多肽还可以通过这样的方法制备，所述方法通常至少包括下述步骤提供编码本发明的多肽的核酸，以适当方式表达所述核酸，和回收所表达的本发明的多肽。这样的方法可以以本身已知的方式进行，例如，基于本发明进一步所述的方法和技术，其对于熟练的技术人员将是清楚的。由本发明的氨基酸序列起始，设计/选择和/或制备本发明的化合物或多肽的方法在本发明中还称为"格式化"所述的本发明的氨基酸序列；并且组成本发明的化合物或多肽的一部分的本发明的氨基酸被认为是"格式化的"或采用所述的本发明的化合物或多肽的"格式"。基于本发明的公开内容，熟练的技术人员将清楚本发明的氨基酸序列可以被格式化的方法实例以及所述格式的实例;并且所述格式化的氨基酸序列形成本发明的另一个方面。在本发明的一个具体方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列相比，本发明的化合物或本发明的多肽可以具有增加的半衰期。基于本文进一步的公开内容，所述化合物和多肽的一些优选而非限制性实例对于熟练的技术人员将变得清楚，并且例如包括下列各项已经被化学修饰以增加其半衰期(例如，通过聚乙二醇化方式)的本发明的氨基酸序列或多肽；包括至少一个用于结合血清蛋白(诸如血清白蛋白，例如参见EP0368684B1，第4页)的另外的结合位点的本发明的氨基酸序列；或包括至少一个与增加本发明的氨基酸序列的半衰期的至少一个部分(并且特别是至少一个氨基酸序列)连接的本发明的氨基酸序列的本发明的多肽。基于本文进一步的公开内容，包括所述半衰期延长部分或氨基酸序列的本发明的多肽的实例对于熟练的技术人员将变得清楚；并且例如，包括，但不限于，这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列适当地连接一个或多个血清蛋白或其片段(诸如(人)血清白蛋白或其适当的片段)或连接一个或多个可以结合血清蛋白的结合单位(诸如，例如，结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，"dAb"，，适合用作dAb的氨基酸序列，或纳米抗体，其可以结合血清蛋白如血清白蛋白(诸如人血清白蛋白)、血清免疫球蛋白如IgG、或运铁蛋白；参考进一步的描述和本发明提及的参考文献)；这样的多肽，其中本发明的氨基酸序列连接Fc部分(诸如人Fc)或其适当的部分或片段;或这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列适当连接一个或多个可以结合血清蛋白的小蛋白或肽(诸如，但不限于，记述在WO91/01743，WO01/45746，WO02/076489中的蛋白和肽，以及埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年12月5日提交的题目为"能够结合血清蛋白的肽(P取/(iayC(3pa6/eo/6zW/"gto化r画/rafez'm1)"的埃博灵克斯股份有限公司的美国临时申请(还参见PCT/EP2007/063348))。通常，具有增加的半衰期的本发明的化合物或多肽优选地具有是相对应的本发明的氨基酸序列本身的半衰期至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，具有增加的半衰期的本发明的化合物或多肽可以具有增加超过l小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的半衰期。在本发明的一个优选而非限制性方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，所述本发明的化合物或多肽具有增加超过1小时，优选超66过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的血清半衰期。在本发明的另一个优选而非限制性方面中，所述本发明的化合物或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的半衰期。在另一个方面中，本发明涉及编码本发明的氨基酸序列或本发明的多肽(或其适当的片段)的核酸。这样的核酸在本发明中还称为"^:发^^游并且例如，可以采用基因构建体的形式，如本发明进一步所述。在另一个方面中，本发明涉及表达(或在适当的环境下能够表达)本发明的氨基酸序列和/或本发明的多肽的宿主或宿主细胞，和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。通过本发明进一步的描述，所述宿主或宿主细胞的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。本发明还涉及一种产品或组合物，所述产品或组合物包含或包括至少一种本发明的氨基酸序列、至少一种本发明的多肽(或其适当的片段)和/或至少一种本发明的核酸、以及任选地一种或多种所述组合物本身已知的其它成分，即，取决于所述组合物的目的用途。例如，这样的产品或组合物可以是药物组合物(如本文所述)、兽医用组合物或用于诊断用途的产品或组合物(同样如本文所述)。通过本发明进一步的描述，所述产品或组合物的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽，或包括其的组合物在体外(例如，在体外或细胞测定法中)或体内(例如，在单细胞内或在多细胞生物体内，并且特别是在哺乳动物内，并且更特别是在人中，诸如在处于以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的疾病或病症的危险中或患有其的人中)调节VEGF(的方法或组合物)中的应用。本发明还涉及在体外(例如，在体外或细胞测定法中)或在体内(例如，在单细胞内或在多细胞生物体内，并且特别是在哺乳动物内，并且更特别是在人中，诸如在处于以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的疾病和病症的危险中或患有其的人中)调节VEGF的方法，所述方法包括至少使VEGF与至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽接触、或与包括其的组合物接触的至少一个步骤，其以适合调节VEGF的方式和量与至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽接触。本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽之一在制备用于调节VEGF的组合物(诸如，但不限于，如本文进一步所述的药物组合物或制剂)中的应用，所述调节是在体外的(例如，在体外或细胞测定法中)或在体内的(例如，在单细胞内或在多细胞生物体内.，并且特别是在哺乳动物内，并且更特别是在人中，诸如在处于以过量和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的疾病和病症的危险中或患有其的人中)。在本发明的上下文中，"调节(modulating)"或"调节(tomodulate)"通常意指减少或抑制VEGF的活性、或者备选地提高VEGF的活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(诸如本文提到的那些)测量的。特别地，"调节(modulating)"或"调节(tomodulate)"可以意指这样的减少或抑制VEGF的活性、或者备选地提高VEGF的活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(诸如本文提及的那些)测量的，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的VEGF活性相比较，所述VEGF活性的减少或抑制、或备选地提高至少1°/。，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。如熟练的技术人员清楚的，"调节"还可以包括对VEGF针对其一种或多种靶标、配体或底物的亲和性、亲和力、特异性和/或选择性实施改变(其可以是提高或降低)；和/或与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下相比较，对VEGF针对在其中存在VEGF的培养基或环境的一种或多种条件(诸如pH、离子强度、存在辅因子等)的敏感性实施改变(其可以是提高或降低)。如对于本领域技术人员清楚的，这也可以通过任何适合的方式和/或使用任何本身己知的适当的测定，如本文所述或在本文提及的现有技术中所述的测定法进行确定。"调节"还可以意指对于其中涉及VEGF(或其中涉及其底物、配体、或途径，诸如其信号传导途径或代谢途径以及它们相关的生物或生理作用)的一种或多种生物或生理机制、作用、反应、功能、途径或活性实施改变(即，分别作为激动剂或作为拮抗剂的活性)。同样，熟练的技术人员应该清楚，所述作为激动剂或拮抗剂的作用可以以任何适当的方式和/或使用任何本身已知的适当测定法(体外的且通常是细胞或在测定中)确定，所述测定法诸如本文所述的测定法或在本文引用的现有技术中所述的测定法。特别地，作为激动剂或拮抗剂的作用可以是这样的，以致与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的生物或生理活性相比较，目的生物或生理活性分别提高或减少至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%,至少70%，至少80%，或90%或更多。例如，调节可以包括减少或抑制VEGF与其底物或配体之一的结合和/或与天然配体、底物竞争结合VEGF。抑制或阻止VEGF与其受体结合可以减少过量的血管发生和/或新血管形成的作用，诸如例如，在如本文所述的不同的癌症、肿瘤和癌中以及在非肿瘤疾病中，如类风湿性关节炎、AMD、银屑病等等(见前文所述)。优选地，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的血管发生和/或新血管形成相比较，过量的血管发生和/或新血管形成减少至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%,至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。在一方面中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽抑制和/或阻止VEGF与VEGFR-1结合。优选地，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的结合相比较，VEGF与VEGFR-1的结合被抑制至少1%,优选至少5%,诸如至少10%或至少25%,例如至少50%，至少60%,至少70%，至少80%，或90%或更多。在另一方面中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽抑制和/或阻止VEGF与VEGFR-1结合但不抑制VEGF与VEGFR-2结合。优选地，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的结合相比较，VEGF与VEGFR-1的结合被抑制至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。在另一方面中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽抑制和/或阻止VEGF与VEGFR-2结合。优选地，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的结合相比较，VEGF与VEGFR-2的结合被抑制至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。在另一方面中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽抑制和/或阻止VEGF与VEGFR-2结合但不抑制VEGF与VEGFR-1结合。优选地，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的结合相比较，VEGF与VEGFR-2的结合被抑制至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。在另一方面中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽抑制和/或阻止VEGF与VEGFR-1结合和VEGF与VEGFR-2结合。优选地，与在相同条件但不存在本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的条件下，在相同测定中的结合相比较，VEGF与VEGFR-1禾Q/或VEGF与VEGFR-2的结合被抑制至少1%，优选至少5%，诸如至少10°/。或至少25%,例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。调节还可以包括激活VEGF或其中涉及VEGF的机制或途径(例如，使用具有增加的半衰期的本发明的氨基酸或多肽)，其可以与缺血性病症诸如例如外周动脉(arhterial)闭合(PAO)和新血管形成缺血性心脏组织的治疗相关。调节可以是可逆的或不可逆的，但是对于药学和药理学目的，其通常是以可逆方式进行。本发明还涉及用于制备或产生本文所述的氨基酸序列、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的方法。通过本发明进一步的描述，所述方法的一些优选而非限制性实例将变得清楚。一般地，这些方法可以包括下列步骤a)提供氨基酸序列的组、集合或文库；和b)从所述氨基酸序列的组、集合或文库中筛选可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的氨基酸序列；禾口c)分离所述可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的氨基酸序列。在这样的方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是任何适当的氨基酸序列的组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列的组、集合或文库(如本文所述)，诸如免疫球蛋白序列的首次用于实验的组、集合或文库；免疫球蛋白序列的合成的或半合成的组、集合或文库；和/或已经进行了亲和力成熟的免疫球蛋白序列的组、集合或文库。此外，在这样的方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是重链可变结构域(诸如VH结构域或VHH结构域)或轻链可变结构域的组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是结构域抗体或单结构域抗体的组、集合或文库，或可以是能够作为结构域抗体或单结构域抗体行使功能的氨基酸序列的组、集合或文库。在本方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列的免疫组、集合或文库，例如，来自已经用VEGF适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物的免疫球蛋白序列的组、集合或文库。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。在上述方法中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体、或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选氨基酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。同样参考Hoogenboom在自然生物技术(NatureBiotechnology)，23,9,1105-1116(2005)中的综述。在另一个方面中，用于产生氨基酸序列的方法包括至少下列步骤a)提供表达氨基酸序列的细胞的集合或样品；b)从所述细胞的集合或样品中筛选表达可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的氨基酸序列的细胞；和c)(i)分离所述氨基酸序列；或(ii)从所述细胞分离编码所述氨基酸序列的核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。例如，当所需要的氨基酸序列是免疫球蛋白序列时，所述细胞的集合或样品可以是，例如，B细胞的集合或样品。此外，在该方法中，细胞样品可以来源于已经用VEGF适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。上述方法可以以任何适当的方式进行，这对于熟练的技术人员将是清楚的。例如，参考EP0542810,WO05/19824,WO04/051268和WO04/106377。步骤b)的筛选优选地使用流式细胞术技术诸如FACS进行。对于此，例如，参考Lieby等，血液(Blood),巻97，No.12,3820(2001)。在另一个方面中用于产生针对VEGF的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤a)提供编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库；b)从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的氨基酸序列的核酸序列；.和c)分离所述核酸序列，然后表达所述氨基酸序列。在这样的方法中，所述编码氨基酸序列的核酸序列的组、集合或文库可以是，例如，编码免疫球蛋白序列的首次用于实验的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库;编码免疫球蛋白序列的合成的或半合成的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；和/或编码已经进行了亲和力成熟的免疫球蛋白序列的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库。此外，在这样的方法中，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码重链可变结构域(诸如VH结构域或VHH结构域)或轻链可变结构域的组、集合或文库。例如，所述核酸序列的组、集合或文库可以编码结构域抗体或单结构域抗体的组、集合或文库，或能够作为结构域抗体或单结构域抗体行使功能的氨基酸序列的组、集合或文库。在该方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是核酸序列的免疫的组、集合或文库，例如，所述核酸序列来源于已经用VEGF适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的哺乳动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。例如，所述核酸序列的组、集合或文库编码重链可变结构域或轻链可变结构域的免疫的组、集合或文库。在一个具体的方面中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以编码VHH序列的组、集合或文库。在上述方法中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选编码氨基酸序列的核苷酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本发明进一步的公开内容。同样参考Hoogenboom在自然生物技术(NatureBiotechnology),23,9，1105-1116(2005)中的综述。本发明还涉及通过上述方法或备选地通过包括上述方法之一以及至少下列步骤的方法而获得的氨基酸序列，所述步骤为确定所述免疫球蛋白序列的核苷酸序列或氨基酸序列;并且以本身已知的方式表达或合成所述氨基酸序列，诸如通过在适当的宿主细胞或宿主生物体内表达，或通过化学合成。此外，在上述步骤后，一个或多个本发明的氨基酸序列可以适当地被人源化(或备选地，被骆驼源化)；和/或可以将这样获得的氨基酸序列彼此连接，或连接一个或多个其它适当的氨基酸序列(任选地，通过一个或多个适当的接头)，以提供本发明的多肽。此外，编码本发明的氨基酸序列的核酸序列可以被适当地人源化(或备选地，被骆驼源化)并且适当地表达；和/或编码本发明的氨基酸序列的一个或多个核酸序列可以彼此连接，或连接编码其它适当的氨基酸序列的一个或多个核酸序列(任选地通过编码一个或多个适当的接头的核苷酸序列)，然后，这样获得的核苷酸序列可以进行适当地表达，以提供本发明的多肽。本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的应用和用途，以及涉及用于预防和/或治疗与VEGF相关的疾病和病症的方法。通过本发明进一步的描述，一些优选的但非限制性的应用和用途将变得清楚。本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物用于治疗。特别地，本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物用于治疗可以通过给需要其的受试者施用(药物有效量的)本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体或多肽、而预防或治疗的疾病。更特别地，本发明涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物用于治疗以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病。通过本发明进一步的描述，本发明的其它方面、实施方案、优点和应用也将变得清楚，其中本发明将更详细地描述和讨论本发明的纳米抗体以及包括其的本发明的多肽，其形成本发明的一些优选方面。如通过本发明进一步的描述将变得清楚，与"dAb"或相似的(单)结构域抗体或免疫球蛋白序列相比，纳米抗体通常提供某些优点(本文所述的)，本发明的纳米抗体也提供所述优点。然而，熟练的技术人员应该清楚，下述教导的更通用的方面也可以适用于(直接或类似地)本发明的其它氨基酸序列。发明详述在本描述、实施例和权利要求中a)除非另外指明或限定，所用的所有术语具有它们在本领域内的通用意思，其对于熟练的技术人员应该是清楚的。例如，参考标准手册，如Sambrook等，"分子克隆实验室手册(MolecularCloning:ALaboratoryManual)"(第2版)，巻1-3,冷泉港实验室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)(1989);F.Ausubel等，编，"现代分子生物学方法(Currentprotocolsinmolecularbiology)",GreenPublishing禾口WileyInterscience,纽约(1987);Lewin,"基因II"("GenesII"),JohnWiley&Sons,NewYork,纽约，(1985);Old等，"基因操作原理基因工程导言(PrinciplesofGeneManipulation:AnIntroductiontoGeneticEngineering)，，,第2版，力口禾[)福尼亚大学出版社(UniversityofCaliforniaPress),伯克禾U,CA(1981);Roitt等，"免疫学(Immunology)"(第6版)，Mosby/Elsevier,Edinburgh(2001);Roitt等，Roitt基础免疫学(Roitt，sEssentialImmunology),第10版.BlackwellPublishing,英国(2001);禾BJaneway等，"免疫生物学(Immunobiology)，，(第6版)，GarlandSciencePublishing/ChurchillLivingstone,纽约(2005)，以及本发明所引用的公知
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；b)除非另外指明，术语"免疫球蛋白序列"一一不管其在本文中用来指重链抗体或常规的4-链抗体一一用作一般术语，包括完整大小的抗体、其单独的链、以及其所有部分、结构域或片段(包括但不限于抗原-结合结构域或片段，分别诸如VHH结构域或VH/VL结构域)。另外，术语"序列"用于本文时(例如在类似"免疫球蛋白序列"、"抗体序列"、"可变结构域序列"、"VHH序歹U"或"蛋白序列"的术语中)通常应该理解为包括相关的氨基酸序列、以及编码所述氨基酸序列的核酸或核苷酸序列，除非上下文需要更狭义的解释。此外，术语"核苷酸序列"在用于本文时还包括具有所述核苷酸序列的核酸分子，以致术语"核苷酸序列"和"核酸"应该认为是等价的，并且在本文中互换使用；c)除非另外指明，所有没有具体详细描述的方法、步骤、技术和操作可以以本身已知的方式进行并且已经进行，这对于熟练的技术人员是清楚的。例如，仍旧参考标准手册，参考本发明所提及的公知
背景技术：
，和参考其中所引用的其它参考文献；以及例如，参考显示下述综述Presta,高级药物递送综述(Adv.DrugDeliv.Rev.)2006，58(5-6):640-56;Levin和Weiss，分子生物系统(Mol.Biosyst.)2006,2(1):49-57;Irving等"免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods),2001，248(1-2),31-45;Schmitz等.，Placenta,2000,21增刊A,S106-12,Gonzales等.，肿瘤生物学(TumourBiol.)，2005，26(1),31-43,其描述用于蛋白质工程的技术，诸如亲和力成熟和其它用于提高特异性以及蛋白如免疫球蛋白的其它需要特性的技术；75d)氨基酸残基按照标准的三字母或一字母的氨基酸密码显示，如在表A-2提及的；表A-2:—字母和三字母氨基酸密码<table>tableseeoriginaldocumentpage77</column></row><table>e)出于比较两种或更多种核苷酸序列的目的，第一核苷酸序列和第二核苷酸序列之间的"序列同一性"百分数可以通过用[第一^^麽,身^与第二^^身巾浙座位置除以[第一虔^游#^朦总莉并且乘以[/00^]而计算，其中在第二核苷酸序列中核苷酸的每一删除、插入、取代或添加一一与第一核苷酸序列相比一一都视作在单一核苷酸(位置)的差异。备选地，两种或更多种核苷酸序列之间的序列同一性程度可以使用已知的用于序列比对的使用标准设置的计算机算法进行计算，诸如NCBIBlastv2.0。例如，在WO04/037999，EP0967284，EP1085089,WO00/55318,WO00/78972，WO98/49185和GB2357768-A中描述了用于确定序列同一性程度的一些其它的技术、计算机算法和设置。通常，出于按照上文列出的计算方法来确定两种核苷酸序列之间的"序列同一性"的百分数的目的，将具有最大核苷酸数目的核苷酸序列视作"第一"核苷酸序列，并且将另一种核苷酸序列视作"第二"核苷酸序列；f)出于比较两种或更多种氨基酸序列的目的，第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的"百分数(在本文称为"氨基酸同一性")可以通过用[第一富基虔,身^与第二賓基麽^^^淑应泣f游賨基麼嫂基游厨游賓基虔嫂基教^]除以[第一賓基虔,身^游賓基攀嫂塞忌^]并且乘以[7M^]而计算，其中第二氨基酸序列中氨基酸残基的每一删除、插入、取代或添加一一与第一氨基酸序列相比一一都视作在单一氨基酸残基(位置)上的差异，即，视作本文所定义的"^"^^^^^"。备选地，两种氨基酸序列之间的序列同一性程度可以使用已知的计算机算法进行计算，诸如上文提及的用于确定核苷酸序列的序列同一性程度的那些，其仍旧使用标准设置。通常，出于按照上文列出的计算方法来确定两种氨基酸序列之间的"序列同一性"的百分数的目的，将具有最大氨基酸残基数目的氨基酸序列视作"第一"氨基酸序列，并且将另一种氨基酸序列视作"第二"氨基酸序列。此外，在确定两种氨基酸序列之间的序列同一性程度时，熟练的技术人员可以考虑所谓的"保守"氨基酸取代，其通常可以描述为这样的氨基酸取代，即，其中氨基酸残基被具有相似化学结构的另一种氨基酸残基取代，并且其对所述多肽的功能、活性或其它生物学特性几乎没有或者基本上没有影响。这种保守氨基酸取代是本领域内公知的，例如，从wo04/037999,GB-A函2357768,WO98/49185,WO00/46383和WO01/09300中可知；并且可以基于WO04/037999以及WO98/49185和其中所引用的其它参考文献的相关教导而选择这种取代的(优选)类型和/或结合。所述保守取代优选地是这样的取代，即，其中下列组(a)-(e)内的一个氨基酸被同组内的另一氨基酸残基取代(a)小的脂肪族、非极性或弱极性的残基Ala,Ser,Thr，Pro和Gly;(b)极性、带负电荷的残基及其(不带电荷的)酰胺Asp，Asn，Glu和Gln;(c)极性、带正电荷的残基:His，Arg和Lys;(d)大的脂肪族、非极性残基Met,Leu,Ile,Val和Cys;以及(e)芳族残基Phe,Tyr和Trp。特别优选的保守取代如下Ala取代成Gly或取代成Ser;Arg取代成Lys;Asn取代成Gin或取代成His;Asp取代成Glu;Cys取代成Ser;Gin取代成Asn;Glu取代成Asp;Gly取代成Ala或取代成Pro;His取代成Asn或取代成Gin;lie取代成Leu或取代成Val;Leu取代成lie或取代成Val;Lys取代成Arg，取代成Gin或取代成Glu;Met取代成Leu，取代成Tyr或取代成lie;Phe取代成Met,取代成Leu或取代成Tyr;Ser取代成Thr;Thr取代成Ser;Tip取代成Tyr;Tyr取代成Tip;和/或Phe取代成Val，取代成lie或取代成.Leu。用于本文所述的多肽的任何氨基酸取代还可以基于Schulz等，蛋白质结构原理(PrinciplesofProteinStructure),Springer-Verlag,1978研究的不同物种的同源蛋白之间的氨基酸变异频率的分析，基于Chou和Fasman，生物化学(Biochemistry)13:211,1974和高级酶学(Adv.Enzymol.)，47:45-149,1978研究的结构形成潜力的分析，和基于Eisenberg等，美国国家科学院学报(Proc.Nad.AcadSci.USA)81:140-144，1984;Kyte和Doolittle;分子生物学杂志(JMolec.Biol.)157:105-132,1981，以及Goldman等，物理化学综述年刊(Ann.Rev.Biophys.Chem.).15:321-353，1986研究的蛋白中疏水模式的分析，所有这些通过引用完全结合于此。在本文描述和上文引用的公知
背景技术：
中给出关于纳米抗体的一级、二级和三级结构的信息。此外，出于这一目的，例如，Desmyter等，自然结构生物学(NatureStructuralBiology),巻3,9,803(1996);Spinelli等，自然结构生物学(NaturalStructuralBiology)(1996);3,752-757;和Decanniere等，结构(Structure),巻7,4，361(1999)给出来自美洲驼(llama)的VHH结构域的晶体结构。关于在常规VH结构域中形成VH/VL界面的一些氨基酸残基和在这些位置的潜在的骆驼源化(camelizing)取代的其它信息可以在上文引用的现有技术中找到。g)如果在它们的全长有100%的序列同一性(如本发明所定义)，那么认为氨基酸序列和核酸序列"完全相同"。h)当比较两种氨基酸序列时，术语"^^^^^^^f是指与第二序列相比，在第一序列位置上的单个氨基酸残基的插入、删除或取代；应该理解两种氨基酸序列可以包含l个、2个或多个这样的氨基酸差异。i)当认为核苷酸序列或氨基酸序列分别"包括"另一个核苷酸序列或氨基酸序列，或"基本由"另一个核苷酸序列或氨基酸序列"组成"时，这可以意指后一个核苷酸序列或氨基酸序列已经分别结合在最先提及的核苷酸序列或氨基酸序列中，但是更通常地，这一般意指最先提及的核苷酸序列或氨基酸序列在其序列内分别包括核苷酸或氨基酸残基的序列，其分别与后一个序列具有相同的核苷酸序列或氨基酸序列，而不管实际上已经怎样产生或获得最先提及的序列(例如，其可以通过本文所述的任何适当的方法进行)。通过非限制性实例的方式，当认为本发明的纳米抗体包括CDR序列时，这可以意指所述CDR序列已经结合在本发明的纳米抗体内，但是更通常地，这一般意指本发明的纳米抗体在其序列内包含具有与所述CDR序列相同的氨基酸序列的氨基酸残基序列，而不管已经怎样产生或获得所述本发明的纳米抗体。还应该注意到，当后一个氨基酸序列具有特异性生物学或结构功能时，它优选地具有在最先提及的氨基酸序列中基本相同、相似或等价的生物学或结构功能(换言之，最先提及的氨基酸序列优选是这样的，以致后一个序列能够实施基本上相同的、相似的或等价的生物学或结构功能)。例如，当认为本发明的纳米抗体分别包括CDR序列或构架序列时，在所述纳米抗体中的所述CDR序列和构架优选地分别能够作为CDR序列或构架序列行使作用。此外，当认为核苷酸序列包括另一个核苷酸序列时，最先提及的核苷酸序列优选是这样的，以致当它被表达成表达产物(例如，多肽)时，由后一个核苷酸序列编码的氨基酸序列形成所述表达产物的一部分(换言之，后一个核苷酸序列处在与所述最先提及的、较大的核苷酸序列相同的阅读框内)。j)核酸序列或氨基酸序列视作'丫幼基术丄分庸游f^式/'_一例如，与其天然生物来源和/或其从中获得的反应介质或培养介质相比一一此时其已经与其通常在所述来源或介质中与之缔合的至少一种其它成分(诸如另一种核酸，另一种蛋白/多肽，另一种生物成分或高分子或至少一种污染物、杂质或次要组分)分离。特别地，当它已被纯化至少2倍，特别是至少10倍，更特别地至少100倍，并且达到1000倍或更多时，认为核酸序列或氨基酸序列"基本上分离"。当使用适当技术确定时，诸如适当的层析技术，诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，"以基本上分离形式"的核酸序列或氨基酸序列优选地基本上是均相的；k)当用于本文时，术语"结构域"通常是指氨基酸序列的球状区域(诸如抗体链，且特别是重链抗体的球状区域)，或者指基本上由所述球状区域组成的多肽。通常，例如，这样的结构域包括作为片层或通过二硫键而稳定的肽环(例如3或4个肽环)。术语"结合结构域"是指针对抗原决定簇的这样的结构域(如本文定义)；1)术语'抗原决定簇'是指抗原上由^C原-结合分子(诸如本发明的纳米抗体或多肽)并且更特别是由所述分子的抗原-结合位点而识别的表位。术语"抗原决定簇"和"表位"在本文中还可以互换地使用；m)对于特定的抗原决定簇、表位、抗原或蛋白(或对于至少其一部分、片段或表位)可以(特异性)结合、具有亲和性和/或具有特异性的氨基酸序列(诸如本发明的纳米抗体、抗体、多肽，或通常为抗原结合蛋白或多肽或其片段)认为是"针对(against)"或者"针对(directedagainst)"所述抗原决定簇、表位、抗原或蛋白。n)术语"特异性"是指特定的抗原-结合分子或抗原-结合蛋白(诸如本发明的纳米抗体或多肽)分子可以结合的不同类型的抗原或抗原决定簇的数目。抗原-结合蛋白的特异性可以依据亲和性和/或亲和力(avidity)而确定。亲和性，表示为抗原与抗原-结合蛋白的解离平衡常数(KD)，是抗原决定簇和所述抗原-结合蛋白上抗原-结合位点之间的结合强度的测量Kd信越小，抗原决定簇和抗原-结合分子之间的结合强度越强(备选地，亲和性还可以表示为亲和常数(KA)，其为1/KD)。熟练的技术人员应该清楚(例如，基于本发明进一步的公开内容)，亲和性可以以本身己知的方式确定，其取决于目的特异性抗原。亲和力是抗原-结合分子(诸如本发明的纳米抗体或多肽)和相关抗原之间的结合强度的测量。亲和力与抗原决定簇及其在抗原-结合分子上的抗原结合位点之间的亲和性以及在所述抗原-结合分子上存在的相关结合位点的数目相关。典型地，抗原-结合蛋白(诸如本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽)将以10—5-10—12摩尔/升或更小、并且优选地10:10"2摩尔/升或更小并且更优选地10—8-10"2摩尔/升的解离常数(KD)(g卩，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))而结合它们的抗原。任何大于1(^摩尔/升的KD值(或任何小于1(^M"的Ka信)升/摩尔通常认为指示非特异性结合。优选地，本发明的单价免疫球蛋白序列将以小于500nM、优选地小于200nM、更优选地小于10nM诸如小于500pM的亲和性与理想的抗原结合。抗原-结合蛋白与抗原或抗原决定簇的特异性结合可以以本身已知的任何适当的方法确定，其包括，例如，斯卡査德分析和/或竞争结合检测，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心式(sandwich)竞争测定，和本领域本身己知的其不同的变化；以及本发明提及的其它技术。解离常数可以是实际的或表观解离常数，熟练的技术人员应该清楚。确定解离常数的方法对于熟练的技术人员应该是清楚的，并且例如，包括本文提及的技术。在这一点上，还应该清楚，不可能测量大于104摩尔/升或10'3摩尔/升(例如，10—2摩尔/升)的解离常数。任选地，熟练的技术人员应该清楚，可以根据(实际或表观)缔合常数(KA)利用[KD:1/KA]的关系计算所述(实际或表观)解离常数。亲和性表示分子相互作用的强度或稳定性。亲和性通常作为Kd或解离常数给出，其具有摩尔/升(或M)的单位。亲和性还可以表示为缔合常数Ka，其等于1/Kd，并且具有(摩尔/升)—1(或M'1)的单位。在本说明书中，两个分子(诸如本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽及其目的靶点)之间的相互作用的稳定性将主要以它们相互作用的KD值表示；熟练的技术人员应该清楚，考虑到KA^/KD的关系，通过其KD值表示分子相互作用的强度也可以用于计算相对应的Ka値。由于KD-值通过公知的关系式DG=RT.ln(KD)(等价于DG^RT.ln(KA))与结合的自由能(DG)相关，KD-值还在热力学意义上表征分子相互作用的强度，在所述关系式中，R等于气体常数，T等于绝对温度，并且ln表示自然对数。关于认为是有意义的(例如，特异性的)生物学相互作用的Kd典型地在10'1GM(0.1nM)-10'5M(10000nM)范围内。相互作用越强，其Kd越低。KD也可以表示为复合体的解离速率常数(表示为koff)与其缔合速率(表示为kon)的比例(以致Kd:kog/kon和KA=k。n/k。ff)。解离速率k。ff具有单位S—1(其中S是秒的SI单位符号)。缔合速率kon具有单位M—V1。缔合速率可以在l(^]VrV1-约1(^M—V之间变化，对于两分子相互作用达到扩散-极限缔合速率常数。解离速率以关系式tv^ln(2)/koff与给定的分子相互作用的半衰期相关。解离速率可以在l(T6S-l(具有数天的tv2的接近不可逆复合体)到Is—1(t1/2=0.69s)之间变化。两个分子之间的分子相互作用的亲和性可以通过本身已知的不同技术测量，诸如公知的表面等离子体共振(SPR)生物传感器技术(例如，参见Ober等，国际免疫学(Intern.Immunology)，13,1551-1559,2001)，其中将一个分子固定在生物传感器芯片上，另一个分子在流动条件下经过所固定的分子，产生k。n,k。ff测量以及因此产生KD(或Ka)僮。例如，这可以使用公知的BIACORE仪器进行。熟练的技术人员还应该理解，如果测量过程以某种方式影响涉及的分子的内在结合亲和性，例如通过与一个分子的生物传感器上的涂层相关的人为产物影响，则测量的KD可以与表观KD相对应。此外，如果一个分子含有针对另一个分子的多于一个的识别位点，则可以测量表观KD。在这样的情形中，所测量的亲和性可以受到两个分子之间相互作用的亲和力的影响。可以用来评估亲和性的另一个方法是Friguet等(免疫方法杂志(J.Immunol.Methods),77,305-19,1985)的2步ELISA(酶联免疫吸附测定)方法。该方法建立溶液相结合平衡测量，并且避免与在支持物如塑料上的一个分子的吸附相关的可能的人为产物。然而，KD的准确测量可能是非常费力的，并且作为结果，通常确定表观KD值来评估两个分子的结合强度。应该注意到，只要所有的测量以一致的方式(例如，保持测定条件不变)进行，表观KD测量可以用作真实Ko的近似值，并且因此在现有文献中，应该以同等的重要性或相关性对待KD和表观Ko。最后，应该注意到，在许多情形中，有经验的科学家可以判断相对于一些参照分子确定结合亲和性是便利的。例如，为了评估分子A和B之间的结合强度，例如，人们可以使用已知与B结合且适合用荧光团或生色团或其它化学部分标记的参照分子C，诸如在ELISA或FACS(荧光活化的细胞分选)中容易检测的生物素、或其它形式(用于荧光检测的荧光团，用于光吸收检测的生色团，用于链霉抗生物素蛋白-介导的ELISA检测的生物素)。典型地，参照分子C保持在固定的浓度，并且A的浓度关于B的给定的浓度或量变化。结果，对应于A的浓度获得ICso值，在其中将在不存在A的条件下关于C所测量的信号二等分。假定已知参照分子的Kd，即Kdw，以及参照分子的总浓度cref，则可以通过下式获得关于A-B相互作用的表观Ko:KD=IC50/(l+cref/KDref)。注意，如果cref<<KDref,则KDIC5()。假定以一致的方式(例如，保持Cref不变)针对比较的结合物进行IC50测量，则分子相互作用的强度或稳定性可以通过ICso进行评估，并且在本发明的整个内容中，认为该测量等价于KD或等价于表观KD。o)本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的半衰期通常可以定义为所述氨基酸序列、化合物或多肽的血清浓度在体内减少50%所花费的时间，例如，由于通过天然机制所述序列或化合物的降解和/或对所述序列或化合物的清除或螯合(sequestration)。本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的体内半衰期可以以任何本身已知的任何方式确定，诸如通过药物代谢动力学分析。适当的技术对于本领域熟练的技术人员应该是清楚的，并且例如，通常可以包括下列步骤将适当剂量的本发明的氨基酸序列、化合物84或多肽适当施用给温血动物(即，施用给人或另一种适当的哺乳动物，诸如小鼠、兔、大鼠、猪、狗或灵长类动物，例如来自猕猴属的猴子(诸如，并且特别是食蟹猴(食蟹猴(Macaca/wc/cM/"n'")和/或恒河猴(恒河猴(Macacamw/Wto)))和狒狒(豚尾狒狒(Popz'owra'm^)));从所述动物收集血液样品或其它样品；确定在所述血液样品中的本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的水平或浓度；并且从这样获得的数据(的图表)计算与在给药时的初始水平相比较直到本发明的氨基酸序列、化合物或多肽的水平或浓度已经减少50%的时间。例如，参考下述实验部分，以及标准手册，诸如Kenneth,A等药物的化学稳定性药剂师手册(ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists)禾卩Peters等，药物代话t动力学分析实践方法(Pharmacokineteanalysis:APracticalApproach)(1996)。还参考"药物代谢动力学(Pharmacokinetics)",MGibaldi和DPerron,MarcelDekker出版，第2综述版(2ndRev.edition)(1982)。熟练的技术人员还应该清楚(例如，参见WO04/003019的第6和7页以及其中引用的其它参考文献)，半衰期可以用参数如tl/2-a，tl/2-卩和曲线下面积(AUC)表示。在本说明书中，"半衰期增加"是指在这些参数的任何一种的增加，诸如这些参数的任何两种，或基本上所有这三种参数。当用于本发明时，"半衰期增加"或"增加的半衰期"特别是指tl/2-p的增加，具有或不具有tl/2-oi和/或AUC或二者的增加。p)在本发明的上下文中，"调节(modulating)"或"调节(tomodulate)"通常意指减少或抑制靶标或抗原的活性、或者备选地提高耙标或抗原的活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法测量的。特别地，"调节(modulating)"或"调节(tomodulate)"可以意指这样的减少或抑制耙标或抗原的生物活性、或者备选地提高靶标或抗原的(相关的或目的)生物活性，如使用适当的体外、细胞或体内测定法(其通常取决于所涉及的耙标或抗原)测量的，与在相同条件但不存在本发明的构建体的条件下，在相同测定中的靶标或抗原的活性相比较，所述靶标或抗原活性的减少或抑制、或备选地提高至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。一种或多种配体、结合配偶体、用于缔合到同聚多亚基或异聚多亚基形式中的配偶体或底物的亲和性、亲和力、特异性和/或选择性实施改变(其可以是提高或降低)；和/或与在相同条件但不存在本发明的构建体的条件下相比较，对所述靶标或抗原针对在其中存在所述靶标或抗原的培养基或环境的一种或多种条件(诸如pH、离子强度、辅因子的存在，等等)的敏感性实施改变(其可以是提高或降低)。如熟练的技术人员应该清楚的，这同样可以以任何适当的方法和/或使用本身已知的任何适当的测定法进行确定，这取决于所涉及的靶标或抗原。"调节"还可以意指对于其中涉及所述靶标或抗原(或其中涉及其底物、配体、或途径，诸如其信号传导途径或代谢途径以及它们相关的生物或生理作用)的一种或多种生物或生理机制、作用、反应、功能、途径或活性实施改变(即，分别作为激动剂、作为拮抗剂或作为逆激动剂的活性，这取决于靶标或抗原和需要的生物学或生理作用)。同样，熟练的技术人员应该清楚，所述作为激动剂或拮抗剂的作用可以以任何适当的方式和/或使用任何本身已知的适当测定法(体外的且通常是细胞或在测定中)确定，这取决于所涉及的靶标或抗原。特别地，作为激动剂或拮抗剂的作用可以是这样的，以致与在相同条件但不存在本发明的构建体的条件下，在相同测定中的生物或生理活性相比较，目的生物或生理活性分别提高或减少至少1%，优选至少5%，诸如至少10%或至少25%，例如至少50%，至少60%，至少70%，至少80%，或90%或更多。例如，调节还可以包括所述靶标或抗原的变构调节；和/或减少或抑制所述靶标或抗原与其底物或配体之一的结合和/或与天然配体、底物竞争结合所述靶标或抗原。调节还可以包括激活所述耙标或抗原或其中涉及所述靶标或抗原的机制或途径。例如，调节还可以包括关于所述靶标或抗原的折叠或构象、或关于所述靶标或抗原折叠的能力实施改变，以改变其构象(例如，在配体结合时)、以与其它(亚)基缔合、或解离。例如，调节还可以包括在所述靶标或抗原转运其它化合物的能力或作为其它化合物(诸如离子)的通道的能力实施改变。调节可以是可逆的或不可逆的，但是为了药物和药理学目的，通常86是采用可逆的方式。q)关于靶标或抗原，术语在所述靶标或抗原上的"相互作用位点"意指在所述耙标或抗原上的氨基酸残基位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或序列，其是用于结合所述靶标或抗原的配体、受体或其它结合配偶体、催化位点、裂解位点、变构相互作用位点、参与多聚化(诸如同聚体化或异源二聚体化)的位点的位点；或在所述耙标或抗原上、在所述靶标或抗原的生物作用或机制中涉及的任何其它位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列。更一般地，"相互作用位点"可以是在所述靶标或抗原上、本发明的氨基酸序列或多肽可以结合的任何位点、表位、抗原决定簇、部分、结构域或氨基酸残基序列，以致所述靶标或抗原(和/或其中涉及所述靶标或抗原的任何途径、相互作用、信号传导、生物机制或生物作用)被调节(如本文定义)。r)与第二靶标或抗原相比，当氨基酸序列或多肽以是所述氨基酸序列或多肽与第二靶标或多肽结合的亲和性的至少10倍、诸如至少100倍、并且优选地至少IOOO倍、并且达到10,000倍以上的亲和性(如上述，并且适当地表示为Kd惶,Ka値,K。ff速率和/或K。n速率)与第一抗原结合时，认为所述氨基酸序列或多肽对于第一靶标或抗原是"特异性的"。例如，第一抗原可以以是所述氨基酸序列或多肽与第二靶标或多肽结合的KD的至少10分之一、诸如至少100分之一、且优选地至少1000分之一、诸如10000倍之一或甚至更小的KD值与所述靶标或抗原结合。优选地，当与第二靶标或抗原相比，氨基酸序列或多肽是针对第一耙标或抗原"特异性的"时，它针对(如本文定义)所述第一靶标或抗原，但是不针对所述第二靶标或抗原。s)术语"交叉-阻断(cross-block)"、"交叉-阻断的(cross-blocked)"和"交叉-阻断(cross-blocking)"在本文可互换使用，意指氨基酸序列或其它结合试剂(诸如本发明的多肽)干扰本发明的其它氨基酸序列或结合试剂与给定靶标的结合的能力。本发明的氨基酸序列或其它结合试剂能够干扰另一种氨基酸序列或其它结合试剂与所述耙标结合的程度，并且因此，其是否可以认为是本发明所述的交叉阻断，可以使用竞争结合测定法(在本文也称为"交叉-阻断测定法")确定。一种特别适合的定量交叉-阻断测定法使用Biacore仪器，其可以使用表面等离子体共振技术测量相互作用的程度。另一种适当的定量交叉-阻断测定法使用基于ELISA的方法，来检测氨基酸序列或其它结合试剂关于它们与靶标的结合之间的竞争。下述通常描述用于确定氨基酸序列或其它结合试剂是否按照本发明进行交叉-阻断或能够交叉-阻断的适当的Biacore测定法。应该理解，所述测定法可以与本文所述的任何氨基酸序列或其它结合试剂一起使用。Biacore仪器(例如，Biacore3000)按照供应商的建议操作。因此，在一种交叉-阻断测定法中，利用标准胺偶联化学将靶标蛋白与CM5Biacore芯片偶联，以产生包被所述靶标的表面。典型地，200-800个靶标的共振单位将被偶联到芯片上(其是容易提供可测量水平的结合但是容易被所用的测试试剂浓度饱和的量)。将待评估它们彼此交叉-阻断的能力的两种测试氨基酸序列(称为A+和B"或其它结合试剂以1:1结合位点的摩尔比例在适当的缓冲液中混合，以产生测试混合物。当基于结合位点计算浓度时，假定氨基酸序列或其它结合试剂的分子量为所述氨基酸序列或其它结合试剂的总分子量除以在所述氨基酸序列或其它结合试剂上的耙标结合位点数目。测试混合物中每种氨基酸序列或其它结合试剂的浓度应该足够高，足以容易地饱和所述氨基酸序列或其它结合试剂关于捕获在Biacore芯片上的靶标分子的结合位点。在所述混合物中的氨基酸序列或其它结合试剂处于相同的摩尔浓度(基于结合位点)，其将典型地在1.00到1.5微摩尔之间(基于结合位点)。还制备仅包含A巧n仅包含Bt的独立溶液。在这些溶液中的八*和B-应该处在相同的缓冲液中，并且处于与在测试混合物中相同的浓度。将测试混合物通过耙标-包被的Biacore芯片，并且记录总结合量。然后，以这样的方式处理芯片，以在不损坏所述芯片-结合的靶标的条件下去除结合的氨基酸序列或其它结合试剂。典型地，这通过用30mMHC1处理芯片60秒进行。然后，将单独的八*溶液通过所述靶标-包被的表面，并且记录结合的量。同样处理芯片，以在不损坏芯片-结合的靶标的条件下去除所有结合的氨基酸序列或其它结合试剂。然后，将单独的Bt溶液通过所述靶标-包被的表面，并且记录结合的量。接着计算A*和B"昆合物的最大理论结合，并且是每种氨基酸序列或其它结合试88剂在单独通过所述耙标表面的结合的总和。如果实际记录的混合物的结合小于该理论最大值，那么所述两种氨基酸序列或其它结合试剂彼此交叉-阻断。因此，通常，本发明所述的交联-阻断的氨基酸序列或其它结合试剂是这样一种氨基酸序列或其它结合试剂，在上述Biacore交叉-阻断测定中其结合靶标，以致在所述测定过程中，并且在存在本发明的第二氨基酸序列或其它结合试剂的条件下，所记录的结合为两种氨基酸序列或结合试剂组合的最大理论结合的80%-0.1%(例如，80%-4%)，特别为最大理论结合的75%-0.1%(例如，75%-4%)，并且更特别地为最大理论结合(恰如上文定义)的70%-0.1%(例如，70%-4%)。上述Biacore测定法是用于确定氨基酸序列或其它结合试剂是否按照本发明彼此交叉-阻断的主要测定法。在罕见的情形中，特定的氨基酸序列或其它结合试剂可以不通过胺化学与CM5Biacore芯片偶联而结合靶标(这通常发生在在靶标上的相关结合位点通过与所述芯片偶联而被掩蔽或破坏时)。在这样的情形中，交叉-阻断可以使用所述耙标的标记形式，例如，N-端His-标记的形式进行确定。以这种特定的形式，抗-His氨基酸序列将与Biacore芯片偶联，并且然后该His-标记的靶标将通过芯片的表面，并且被所述抗-His氨基酸序列捕获。交叉阻断分析将主要如上述进行，除了在每次芯片再生循环之后，新的His-标记的靶标将被负载回到所述抗-His氨基酸序列包被的表面上。除了所提供的使用N-端His-标记的靶标的实施例之外，可以备选地使用C-端.His-标记的靶标。此外，对于这样的交叉-阻断分析，可以使用本领域已知的各种其它的标记和标记结合蛋白组合(例如，HA标记与抗-HA抗体；FLAG标记与抗-FLAG抗体；生物素标记与链霉抗生物素蛋白)。下述通常描述用于确定针对靶标的氨基酸序列或其它结合试剂是否如本文定义交叉-阻断或是否能够交叉-阻断的ELISA测定法。应该理解，所述测定法可以与本文所述的氨基酸序列(或其它结合试剂，诸如本发明的多肽)任一种一起使用。所述测定法的通用原理是使针对所述耙标的氨基酸序列或结合试剂包被在ELISA平板的孔上。将过量的第二、潜在的交叉-阻断、抗靶标氨基酸序列或其它结合试剂加入到溶液中(即，不与ELISA平板结合)。然后，将有限量的靶标加入到孔中。所述包被的氨基酸序列或其它结合试剂与在溶液中的氨基酸序列或其它结合试剂竞89200880005830.6争与有限量的靶标分子结合。洗涤平板，去除未被所包被的氨基酸序列或其它结合试剂结合的过量的靶标，并且还去除第二、溶液相的氨基酸序列或其它结合试剂以及在所述第二、溶液相的氨基酸序列或其它结合试剂与耙标之间形成的任何复合体。然后使用适合检测靶标的试剂测量结合的靶标的量。相对于在不存在第二、溶液相的氨基酸序列或其它结合试剂的条件下与所包被的氨基酸序列或其它结合试剂结合的靶标分子的数目，溶液中能够交叉-阻断所包被的氨基酸序列或其它结合试剂的氨基酸序列或其它结合试剂能够引起与所包被的氨基酸序列或其它结合试剂结合的靶标分子数目减少。在其中第一氨基酸序列或其它结合试剂，例如，Ab-X，被选择作为固定的氨基酸序列或其它结合试剂的情形中，将其包被在ELISA平板的孔上，此后平板用适当的封闭溶液封闭，以最小化随后加入的试剂的非特异性结合。然后，向所述ELISA平板中加入过量的第二氨基酸序列或其它结合试剂，即，Ab-Y，以致每孔Ab-Y靶标结合位点的摩尔比在包被ELISA平板的过程中所用的每孔Ab-X耙标结合位点的摩尔高至少10倍。然后，加入靶标，以致每孔加入的靶标摩尔比用于包被每孔的Ab-X靶标结合位点的摩尔低至少25-倍。在适当的温育期间后，洗涤ELISA平板，并且加入用于检测靶标的试剂，以测量由所包被的抗-靶标氨基酸序列或其它结合试剂(在该情形中为Ab-X)特异性结合的耙标的量。关于该测定法的背景信号定义为在仅使用所包被的氨基酸序列或其它结合试剂(在该情形中为Ab-X),第二溶液相氨基酸序列或其它结合试剂(在该情形中为Ab-Y),靶标缓冲液(g卩，无加入的靶标)和耙标检测试剂的孔中获得的信号。关于该测定法的阳性对照信号定义为在仅使用所包被的氨基酸序列或其它结合试剂(在该情形中为Ab-X),第二溶液相氨基酸序列或其它结合试剂缓冲液(即，不加入第二溶液相氨基酸序列或其它结合试剂)，靶标和靶标检测试剂的孔中获得的信号。ELISA测定可以以这样的方式运行，以便使得阳性对照信号是背景信号的至少6倍。为了避免由选择哪种氨基酸序列用作所包被的氨基酸序列或其它结合试剂和哪种用作第二(竞争)氨基酸序列或其它结合试剂产生的任何人为产物(例如，在Ab-X和Ab-Y之间对于靶标的显著不同的亲和性)，交叉-阻断测定可以以两种形式进行l)形式l是这样的，其中Ab-X是包被到ELISA平板上的氨基酸序列，并且Ab-Y是在溶液中的竞争氨基酸序列，并且2)形式2是这样的，其中Ab-Y是包被到ELISA平板上的氨基酸序列，并且Ab-X是在溶液中的竞争氨基酸序列。如果，当与在不存在溶液相抗-靶标氨基酸序列或其它结合试剂的条件下(即，阳性对照孔)获得的靶标检测信号相比较，不管是在形式1中还是在形式2中，溶液相的抗-靶标氨基酸序列或其它结合试剂能够引起靶标检测信号的60%-100%的减少、特别是70%-100%的减少、且更特别是80%-100%的减少(即，由被包被的氨基酸序列结合的靶标数量)，Ab-X和Ab-Y被定义为交叉-阻断的。t)也如本发明进一步所述，纳米抗体中氨基酸残基总数可以在110-120区间，优选为112-115，并且最优选为113。然而，应该注意纳米抗体的部分、片段、类似物或衍生物(如本发明进一步所述)不特别局限于它们的长度和/或大小，只要这样的部分、片段、类似物或衍生物满足本发明列出的深层要求，并且还优选地适于本文所述的目的；u)纳米抗体的氨基酸残基按照Kabat等("免疫学目的蛋白的序列(Sequenceofproteinsofimmunologicalinterest)，，，美国公众健康月艮务中心(USPublicHealthServices)，NIHBethesda,MD,公布号91)给出的关于VH结构域的通用编号方式进行编号，这种编号方式在Riechmann和Muyldermans，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)2000年6月23日；240(1-2):185-195的文章中用于来自骆驼科动物的VHH结构域(例如，参见所述公布的图2);或参考本文。按照这种编号方式，纳米抗体的FR1包括位置1-30的氨基酸残基，纳米抗体的CDR1包括位置31-35的氨基酸残基，纳米抗体的FR2包括位置36-49的氨基酸，纳米抗体的CDR2包括位置50-65的氨基酸残基，纳米抗体的FR3包括位置66-94的氨基酸残基，纳米抗体的CDR3包括位置95-102的氨基酸残基，以及，纳米抗体的FR4包括位置103-113的氨基酸残基。[在这一方面，应该注意一一如在本领域内关于VH结构域和关于VHH结构域公知的一一在每一CDR中的氨基酸残基的总数可以不同，并且可以不与由Kabat编号方式指示的氨基酸残基的总数相对应(即，按照Kabat编号方式的一个或多个位置可能不占据在实际序列中，或者实际序列可能包含比由Kabat编号方式允许的数目更多的氨基酸残基)。这意味着，通常，按照Kabat的编号方式可能或可能不与实际序列中的氨基酸残基的实际编号方式相对应。然而，通常可以认为，按照Kabat的编号方式并且不考虑CDR中的氨基酸残基的数目，按照Kabat编号方式的位置1对应FR1的起点，并且反之亦然，按照Kabat编号方式的位置36对应FR2的起点，并且反之亦然，按照Kabat编号方式的位置66对应FR3的起点，并且反之亦然，以及按照Kabat编号方式的位置103对应FR4的起点，并且反之亦然。]。用于编号VH结构域的氨基酸残基的备选方法是由Chothia等(自然(Nature)342,877-883(1989))所述的方法，即所谓的"AbM定义"和所谓的"^t《^^JT'，所述方法还可以以类似的方式用于来自骆驼科动物的VHH结构域以及用于纳米抗体。然而，在本说明书、权利要求和附图中，遵循由Riechmann和Muyldermans用于VHH结构域的按照Kabat的编号方式，除非另外指明；并且v)给出附图、序列表和实验部分/实施例只是进一步举例说明本发明，并且不应该被以任何方式解释为或者认为限制本发明和/或附上的权利要求的范围，除非本文中另外明确指明。关于重链抗体及其可变结构域的概括描述，其中参考本文引用的现有技术，参考Muyldermans在分子生物技术综述(ReviewsinMolecularBiotechnology)74(2001)，277-302中的综述论文；以及参考下述专利申请，其作为公知
背景技术：
提及VrijeUniversiteitBrussel的WO94/04678,WO95/04079和WO96/34103;Unilever的WO94/25591,WO99/37681,WO00/40968,WO00/43507,WO00/65057，WO01/40310，WO01/44301,EP1134231和WO02/48193;VlaamsInstituutvoorBiotechnologie(VIB)的WO97/49805，WO01/21817，WO03/035694，WO03/054016和WO03/055527;AlgonomicsN.V.和埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO03/050531;加拿大国家研究委员会的(theNationalResearchCouncilofCanada)WO01/90190;抗体研究所(theInstituteofAntibodies)的WO03/025020(=EP1433793);以及埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的WO04/041867，WO04/041862，WO04/041865，WO04/041863，WO04/062551,WO05/044858，WO06/40153,WO06/079372，WO06/122786,92WO06/122787和WO06/122825,和埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的其它公布的专利申请。还参考在这些申请中提及的其它现有技术，并且特别参考在国际申请WO06/040153第41-43页提及的参考文献列表，该列表和参考文献通过引用结合于此。按照本领域中所用的术语学(参见上述参考文献)，在天然存在的重链抗体中存在的可变结构域还叫作"F^/结构域"，以将它们与在常规的4-链抗体中存在的重链可变结构域(其在下文中叫作"^结构域")区分，以及与在常规4-链抗体中存在的轻链可变结构域(其在下文中叫作"F丄结构域")区分。如在上文提到的现有技术中提及，VHH结构域具有许多独特的结构特征和功能特性，这使得分离的VHH结构域(以及基于此的纳米抗体，其与天然存在的VHH结构域一起具有这些结构特征和功能特性)以及包含其的蛋白高度有利地用作功能性抗原-结合结构域或蛋白。特别地，并且不限于此，VHH结构域(其天然地就"设计"为功能性结合抗原，而无需存在轻链可变结构域，并且无需与轻链可变结构域的任何相互作用)和纳米抗体可以作用为单一的、相对小的、功能性抗原-结合结构单位、结构域或蛋白。这将VHH结构域与常规4-链抗体的Vh和VL结构域区分开，其本身通常不适合作为单一抗原-结合蛋白或结构域用于实际应用，但是需要以某种形式或另一形式结合以提供功能性抗原-结合单位(例如，在常规抗体片段诸如Fab片段中；在ScFv's片段中，其由共价连接到V^结构域上的VH结构域组成)。由于这些独特的特性，VHH结构域和纳米抗体用作单一抗原-结合蛋白或用作抗原-结合结构域(即，作为更大的蛋白或多肽的部分)的应用提供许多优于常规Vh和VL结构域、scFv's或常规抗体片段(诸如Fab-或F(ab')2-片段)应用的显著优点-只需要单结构域来以高亲和性和以高选择性结合抗原，致不需要存在两个单独的结构域，或者不需要保证这两个结构域以正确的空间构象和构型(即，通过使用专门设计的接头，如同SCFV，S)存在；-VHH结构域和纳米抗体可以由单一基因表达，并且不需要翻译后折叠或修饰；-VHH结构域和纳米抗体可以容易地加工成多价和多特异性形式(如本文进一步所讨论)；-V!ffl结构域和纳米抗体高度可溶，并且没有聚集倾向(如同Ward等，自然(Nature),341巻，1989,第544页所述的来源于小鼠的"dAb's");-VHH结构域和纳米抗体对热、pH、蛋白酶和其它变性剂或条件高度稳定(参见，例如，Ewert等，同前所述)；-VHH结构域和纳米抗体制备容易并且相对廉价，即使以生产需要的规模制备。例如，VHH结构域、纳米抗体和包含其的蛋白/多肽可以使用微生物发酵生产(例如，下文进一步所述)，并且不需要使用哺乳动物表达系统，如同例如常规抗体片段；-与常规4-链抗体及其抗原-结合片段相比，VHH结构域和纳米抗体相对较小(大约15kDa，或比常规IgG小10倍)，并且因此表现出比所述常规4-链抗体及其抗原-结合片段更高的组织(包括但不限于实体瘤和其它致密组织)穿透性；-VHH结构域和纳米抗体可以表现出所谓的洞隙-结合(cavity-binding)特性(与常规VH结构域相比，尤其由于它们延长的CDR3环)，并且因此还可以接近常规4-链抗体及其抗原-结合片段不能接近的靶标和表位。例如，已经表明VHH结构域和纳米抗体可以抑制酶(参见，例如，WO97/49805;Transue等,蛋白质(Protein)1998年9月1日；同前所述；32(4):515-22;Lauwereys等，胚胎学杂志(EMBOJ.)1998年7月1日；17(13):3512-20)。在一个具体且优选的方面中，本发明提供针对VEGF的纳米抗体，并且特别是针对来自温血动物的VEGF的纳米抗体，并且更特别是针对来自哺乳动物的VEGF的纳米抗体，且尤其是针对人VEGF的纳米抗体;以及包括至少一种所述纳米抗体的蛋白和/或多肽。特别地，本发明提供针对VEGF的纳米抗体，和包括其的蛋白和/或多肽，与常规针对VEGF的纳米抗体或其片段相比，与可能基于所述常规抗体或抗体片段(诸如Fab'片段、F(ab')2片段、ScFv构建体、"双抗体"和其它多特异性构建体(参见，例如，Holliger和Hudson的综述，自然生物技术(NatBiotechnol.)2005年9月;23(9):1126-36))的构建体相比，并且还与可能来源于常规抗体的可变结构域的所谓的"dAb's"或相似的(单)结构域抗体相比，其具有提高的治疗和/或药理学特征和/或其它有利的特征(诸如，例如，提高的制备容易性和/或降低的商品成本)。这些提高的且有利的特征将通过本文的进一步描述变得清楚，并且例如，包括，但不限于下列各项中的一种或多种-提高的针对VEGF的亲和性和/或亲和力，以单价形式，以多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；-适合以多价形式(例如，采用二价形式)格式化的更好的适合性；-适合以多特异性形式(例如，采用下文所述的多特异性形式之一)格式化的更好的适合性；-提高的对于"人源化"取代(如本文定义)的适应性或易感性；-较低的免疫原性，不管是以单价形式，多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；-提高的稳定性，不管是以单价形式，多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；-提高的针对VEGF的特异性，不管是以单价形式，多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)；-减小的、或需要时，提高的针对来自不同物种的VEGF的交叉反应性；和/或-一种或多种对于药学应用(包括预防应用和/或治疗应用)和/或对于诊断应用(包括但不限于成像目的的应用)是理想的其它提高的特征，不管是以单价形式，多价形式(例如，以二价形式)和/或以多特异性形式(例如，下文所述的多特异性形式之一)。如本文通常关于本发明的氨基酸序列所述，本发明的纳米抗体优选地以基本分离的形式(如本文定义)，或形成本发明的蛋白或多肽的部分(如95本文定义)，其可以包括一种或多种本发明的纳米抗体或基本上由其组成，并且其可以任选地还包括一种或多种其它氨基酸序列(均任选地通过一个或多个适当的接头连接)。例如，并且不限于，本发明的一个或多个氨基酸序列可以在这样的蛋白或多肽中用作结合单位，其可以任选地包含一种或多种可以作为结合单位(即，针对除VEGF外的一个或多个其它耙标)的其它氨基酸序列，以分别提供单价的、多价的或多特异性的本发明的多肽，均如本文所定义。特别地，这样的蛋白或多肽可以包括一种或多种本发明的纳米抗体和任选地一种或多种(其它)纳米抗体(S卩，针对除VEGF外的其它靶标)或基本上由其组成，所有的均任选地通过一个或多个适当的接头连接，以便分别提供单价的、多价的或多特异性的纳米抗体构建体，如本文进一步所述。所述蛋白或多肽还可以处于基本上分离的形式(如本文定义)。在本发明的纳米抗体中，关于结合VEGF的结合位点优选地由CDR序列形成。任选地，本发明的纳米抗体还可以，除了至少一个结合VEGF的结合位点之外，包含一个或多个结合其它抗原、蛋白或耙标的其它结合位点。对于引入所述第二结合位点的方法和位置，例如，参考Keck和Huston,生物物理学杂志(BiophysicalJournal)，71,1996年10月，2002-2011;EP0640130;WO06/07260。如本文关于本发明的氨基酸序列通常所述的，当本发明的纳米抗体(或包括其的本发明的多肽)意欲施用给受试者时(例如，用于如本文所述的治疗和/或诊断目的)，其优选地是针对人VEGF;而对于兽医用目的，其优选地是针对来自待治疗的物种的VEGF。此外，如使用本发明的氨基酸序列，本发明的纳米抗体可以或可以不是交叉-反应性的(即，针对来自两种或多种哺乳动物物种的VEGF，诸如针对人VEGF和来自至少一种本文提及的哺乳动物物种的VEGF)。此外，如本文关于本发明的氨基酸序列通常所述的，本发明的纳米抗体一般可以针对VEGF的任何抗原决定簇、表位、部分、结构域、亚基或构象(当适用时)。然而，通常假定和优选本发明的纳米抗体(和包括其的多肽)针对VEGFR-1的结合位点禾卩/或VEGFR-2的结合位点。如本文已经描述的，纳米抗体的氨基酸序列和结构可以被认为是-…然而，但不限于此——包括4个构架区或"FR，s"(或有时还称为"FW，s")，其在本领域中或在本文中分别称为"构架区1"或"FR1";称为"构架区2"或"FR2";称为"构架区3，，或"FR3";并且称为"构架区4"或"FR4";所述构架区被三个互补决定区或"CDR's"中断，其在本领域分别称为"互补性决定区l"或"CDR1";称为"互补性决定区2"或"CDR2";并且称为"互补性决定区3"或"CDR3"。在本发明的纳米抗体中存在的一些优选的构架序列和CDR's(及其组合)如本文所述。其它适当的CDR序列可以通过本文所述的方法获得。按照本发明的一个非限制性但优选的方面，本发明的纳米抗体(中存在的CDR序列)是这样的，以致-所述纳米抗体可以以10-5-10—12摩尔/升或更小、并且优选地10:1(T12摩尔/升或更小、并且更优选地10-S-10^摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与VEGF结合；和/或这样，以致■所述纳米抗体可以以102M-V1—约107M"s",优选103M-V1-107M"s"，更优选104M"s"■107M"s"，诸如105M-V1■107M"s"的k^-速率与VEGF结合；和/或这样，以致它们-所述纳米抗体可以以Is"(t1/2=0.69s)-l(T6s"(提供具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选l(T2s"-10-6s"，更优选l(T3s"-10-6s-1,诸如l(T4s"-l(T6s"的k。ff速率与VEGF结合。优选地，本发明的纳米抗体(中存在的CDR序列)是这样的，以致本发明的单价纳米抗体(或仅包含一个本发明的纳米抗体的多肽)优选是这样的，以致其将以小于500nM，优选地小于200nM，更优选地小于10nM,诸如小于500pM的亲和性结合VEGF。本发明的纳米抗体针对VEGF的亲和性可以以本身已知的方式确定，例如，使用本文提及的用于测量KD.KA,k。ff或k。n的通用技术，以及本文所述的一些特定的测定法。通过本文的进一步描述和实施例，本发明的纳米抗体(以及包括其的多肽)结合VEGF的一些优选的IC50值将变得清楚。在一个优选的但非限制性的方面中，本发明涉及针对VEGF的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO's:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:35.1-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或所述氨基酸序列的任何适当的片段。特别地，按照该优选的但非限制性的方面，本发明涉及针对VEGF的纳米抗体(如本文定义)，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO's:171-215的氨基酸序列；98b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或所述氨基酸序列的任何适当的片段如本文关于本发明的氨基酸序列通常提及的，当本发明的纳米抗体包含一个或多个b)和/或c)所述的CDR1序列时i)与a)所述的相对应的CDR相比，在b)和/或c)所述的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文所定义)；禾口/或ii)与a)所述的相对应的CDR相比，b)和/或c)所述的CDR优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；禾口/或iii)利用一种或多种本身已知的亲和力成熟技术通过亲和力成熟的方式，b)和/或c)所述的CDR可以是来源于a)所述的CDR的CDR。类似地，当本发明的纳米抗体包含一个或多个e)和/或f)所述的CDR2序列时i)与d)所述的相对应的CDR相比，在e)和/或f)所述的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文所定义)；和/或ii)与d)所述的相对应的CDR相比，e)和/或f)所述的CDR优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；和/或iii)利用一种或多种本身已知的亲和力成熟技术通过亲和力成熟的方式，e)和/或f)所述的CDR可以是来源于d)所述的CDR的CDR。此外，类似地，当本发明的纳米抗体包含h)和/或i)所述的一个或多个CDR3序列时i)与g)所述的相对应的CDR相比，在h)和/或i)所述的CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文所定义)；禾口/或ii)与g)所述的相对应的CDR相比，h)和/或i)所述的CDR优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；和/或iii)利用一种或多种本身已知的亲和力成熟技术通过亲和力成熟的方式，h)和/或i)所述的CDR可以是来源于g)所述的CDR的CDR。应该理解，最后的三个段落通常也适用于分别包括b),c),e),f),h)或i)所述的一个或多个CDR1序歹U、CDR2序列和/或CDR3序列的本发明的任何纳米抗体。在本发明的纳米抗体中，包括上文清楚的列出的一个以上CDR，s的纳米抗体是特别优选的；包括上文清楚的列出的两个以上CDR，s的纳米抗体是更特别优选的；并且包括上文清楚的列出的三个CDR，s的纳米抗体是最特别优选的。一些特别优选的但非限制性的CDR序列组合，以及优选的CDR序列和构架序列的组合，在下表A-l中提及，其列出了在许多优选的(但非限制性的)本发明的纳米抗体中存在的CDR序列和构架序列。如熟练的技术人员应该清楚的，在同一克隆中存在的CDR1,CDR2和CDR3序100列组合(即，在表A-1的同一行提及的CDR1，CDR2和CDR3序列)通常是优选的(尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，并且还包括表A-1中提及的其它适当的CDR序列组合)。此外，在同一克隆中存在的CDR序列和构架序列的组合(即，在表A-1的同一行提及的CDR序列和构架序列)通常是优选的(尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，并且还包括表A-1中提及的其它适当的CDR序列和构架序列的其他适当组合，以及所述CDR序列与其它适当的构架序列的组合，例如，如本文进一步所述)。此外，在包括表A-1中提及的CDR's组合的本发明的纳米抗体中，每个CDR可以被选自由与所提及的CDR's具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性(如本文定义)的氨基酸序列组成的组的CDR替代；其中i)与表A-1中提及的相对应的CDR序列相比较，在所述CDR中的任何氨基酸取代优选是保守氨基酸取代(如本文定义)；和/或ii)与表A-1中提及的相对应的CDR序列相比较，任何所述CDR序列优选地仅包含氨基酸取代，并且没有氨基酸删除或插入；和/或iii)任何所述的CDR序列是通过本身己知的亲和力成熟的技术来源的CDR，并且特别是起始于表A-1中所提及的相对应的CDR序列。然而，熟练的技术人员应该清楚的，表A-1中提及的CDR序列(的组合)、以及CDR序列和构架序列(的组合)通常是优选的。<table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage103</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage104</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage105</column></row><table>因此，在本发明的纳米抗体中，存在的CDR1,CDR2和CDR3序列至少之一适当地选自由分别在表A-l中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列组成的组；或选自分别由分别与表A-1列出的CDR1,CDR2和CDR3序列至少之一具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的"序列同一性"(如本文定义)的CDR1,CDR2禾QCDR3序列组成的组；和/或选自由分别与表A-l中列出的CDR1，CDR2和CDR3序列至少之一分别具有3，2或仅有1个"氨基酸差异"(如本文定义)的CDRl,CDR2和CDR3序列组成的组。在该情形中，"适当选自"意指，在适用时，分别地，CDR1序列选自适当的CDR1序列(即，如本文定义)，CDR2序列选自适当的CDR2序列(即，如本文定义)，并且CDR3序列选自适当的CDR3序列(即，如本文定义)。更特别地，优选地选择这样的CDR序列，以致本发明的纳米抗体以如本文定义的亲和性(适当的测量的和/或表示为KD-值(实际的或表观的),KA-值(实际的或表观的),kon-速率和/或kofT速率，或备选地作为ICso值,如本文进一步所述)结合VEGF。特别地，在本发明的纳米抗体中，至少存在的CDR3序列适当地选自由表A-1列出的CDR3序列组成的组，或选自由与表A-1列出的至少一种CDR3序列具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR3序列组成的组；和/或选自由与表A-l列出的至少一种CDR3序列具有3,2或仅有1个氨基酸差异的CDR3序列组成的组。优选地，在本发明的纳米抗体中，所述存在的CDR1、CDR2和CDR3序列中的至少两种适当地分别选自由表A-l中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，或分别选自由分别与表A-1中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列中至少之一具有至少80e/。、优选地至少90%、更优选地至少95°/。、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组；和/或分别选自由分别与表A-l列出的CDR1、CDR2和CDR3序列中至少之一具有3,2或仅有1个氨基酸差异的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。特别地，在本发明的纳米抗体中，至少存在的CDR3序列适当地选106自由表A-l列出的CDR3序列组成的组，或选自由分别与表A-l列出的至少一种CDR3序列具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR3序列组成的组；并且存在的CDR1和CDR2序列至少之一适当地分别选自由表A-l列出的CDR1和CDR2序列组成的组，或分别选自由分别与表A-l中列出的CDR1和CDR2序列中至少之一具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR1和CDR2序列组成的组；禾口/或分别选自由分别与表A-1列出的CDR1和CDR2序列中至少之一具有3，2或仅有1个氨基酸差异的CDR1和CDR2序列组成的组。最优选地，在本发明的纳米抗体中，全部三种存在的CDR1、CDR2和CDR3序列适当地分别选自由表A-l中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组，或分别选自由分别与表A-l中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列中至少之一具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组；禾口/或分别选自由分别与表A-l列出的CDR1、CDR2和CDR3序列中至少之一具有3,2或仅有1个氨基酸差异的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。甚至更优选地，在本发明的纳米抗体中，存在的CDR1、CDR2和CDR3序列至少之一适当地分别选自由表A-l中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。优选地，在该方面中，另外两种存在的CDR序列中的至少一种或优选地两种分别适当地选自与表A-l中列出的至少一种相对应的CDR序列具有至少80。/。、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR序列；和/或分别选自由与表A-l列出的至少一种相对应的序列具有3，2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。特别地，在本发明的纳米抗体中，至少存在的CDR3序列适当地选自由表A-1中列出的CDR3组成的组。优选地，在该方面中，所述存在的CDR1和CDR2序列中的至少一种或优选地两种分别适当地选自由分别与表A-l中列出的CDR1和CDR2序列具有至少80°/。、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99°/。的序列同一性的CDR1和CDR2序列组成的组；和/或分别选自由分别与表A-l列出的CDR1和CDR2序列至少之一具有3,2或仅有1个氨基酸差异的CDR1和CDR2序列组成的组。甚至更优选地，在本发明的纳米抗体中，存在的CDR1、CDR2和CDR3序列中的至少两种分别适当地选自由表A-l列出的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。优选地，在该方面中，其余存在的CDR序列适当地选自由与表A-l中列出的至少一种相对应的CDR序列具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR序列的组；和/或选自由与表A-l中列出的至少一种相对应的序列具有3，2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。特别地，在本发明的纳米抗体中，至少CDR3序列适当地选自由表A-l列出的CDR3序列组成的组，并且CDR1序列或CDR2序列分别适当地选自由表A-1列出的CDR1和CDR2序列组成的组。优选地，在该方面中，其余存在的CDR序列适当地选自由与表A-l中列出的至少一种相对应的CDR序列具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性的CDR序列的组；和/或选自由与表A-l列出的相对应的CDR序列具有3,2或仅有1个氨基酸差异的CDR序列组成的组。甚至更优选地，在本发明的纳米抗体中，全部三种存在的CDR1、CDR2和CDR3序列分别选自由表A-l中列出的CDR1、CDR2和CDR3序列组成的组。而且，通常，表A-1中所列出的CDR的组合(即，表A-1中在同一行中提及的那些)是优选的。因此，通常优选地，当本发明纳米抗体中的CDR是表A-l中所提及的CDR序列或适当地选自与表A-l中所列出的CDR序列具有至少80。/。、优选地至少90°/。、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99。/。的序列同一性的CDR序列的组；和减选自由与表A-1中所列出的CDR序列具有3个，2个或仅1个氨基酸差异的CDR序列组成的组时，其余CDR中的至少一种和优选地全部两种适当地选自属于表A-l中相同组合中(即，在表A-1中同一行中提及)的CDR序列，或适当地选自这样的CDR序列组，所述CDR序列与属于相同组合中的CDR序列具有至少80%、优选地至少90%、更优选地至少95%、甚至更优选地至少99%的序列同一性，禾n/或选自由这样的CDR序列组成的组，所述CDR序列与属于相同组合中的CDR序列具有3个，2个或仅1个氨基酸差异。以上段落中指出的其他优选方案也适用于表A-l提及的CDR的组合。由此，通过非限制性实例，本发明的纳米抗体可以例如包括CDR1序列，其与表A-1中所提及的CDR1序列之一具有超过80M的序列同一性，CDR2序列，其与表A-l中所提及的CDR2序列之一具有3个，2个或1个氨基酸差异(但属于不同的组合)，和CDR3序列。本发明一些优选的纳米抗体可以例如包括(l)CDRl序列，其与表A-l中所提及的CDRl序列之一具有超过80y。的序列同一性；CDR2序列，其与表A-l中所提及的CDR2序列之一具有3个，2个或1个氨基酸差异(但属于不同的组合)；和CDR3序列，其与表A-l中所提及的CDR3序列之一具有超过80%的序列同一性(但属于不同的组合)；或(2)CDR1序列，其与表A-l中所提及的CDR1序列之一具有超过80%的序列同一性；CDR2序列，和表A-1中所列出CDR3序列之一，或(3)CDR1序列；CDR2序列，其与表A-l中所列出CDR2序列之一具有超过80%的序列同一性；和CDR3序列，其与表A-l中所提及的与CDR2序列属于相同组合的CDR3序列具有3个，2个或1个氨基酸差异。本发明一些特别优选的纳米抗体可以例如包括(l)CDRl序列，其与表A-l中所提及的CDR1序列之一具有超过80%的序列同一性；CDR2序列，其与表A-1中所提及的属于相同组合的CDR2序列具有3个，2个或l个氨基酸差异；和CDR3序列，其与表A-1中所提及的属于相同组合的CDR3序列具有超过80y。的序列同一性；(2)CDR1序列；表A-l中所列出CDR2，和表A-l中所列出CDR3序列，(其中CDR2序列和CDR3序列可以属于不同的组合)。本发明一些甚至更优选的纳米抗体可以例如包括(l)CDRl序列，其与表A-l中所提及的CDR1序列之一具有超过80%的序列同一性；表A-l中所列出的属于相同组合的CDR2序列；和表A-1中所提及的属于不同组合的CDR3序列；或(2)表A-l中所提及的CDR1序列；CDR2序列，其与表A-l中所提及的属于相同组合的CDR2序列具有3个，2个或1个氨基酸差异；和CDR3序列，其与表A-l中所列出属于相同或不同组合的109CDR3序列具有超过80%的序列同一性。本发明特别优选的纳米抗体可以例如包括表A-l中所提及的CDR1序歹U，CDR2序列，其与表A-1中所提及的属于相同组合的CDR2序列具有超过80%的序列同一性;和表A-l中所提及的属于相同组合的CDR3序列。在本发明最优选的纳米抗体中，存在的CDR1，CDR2和CDR3序列分别适当地选自表A-l中所列出CDR1，CDR2和CDR3序列的组合之一。按照本发明的另一个优选的但非限制性的方面，(a)CDRl具有1-12个氨基酸残基的长度，且通常为2-9个氨基酸残基，诸如5，6或7个氨基酸残基；和/或(b)CDR2具有13-24个氨基酸残基的长度，且通常为15-21个氨基酸残基，诸如16和17个氨基酸残基；和/或(c)CDR3具有2-35个氨基酸残基的长度，通常为3-30个氨基酸残基，诸如6-23个氨基酸残基。在另一个优选的但非限制性的方面，本发明涉及这样的纳米抗体，其中所述CDR序列(如本文所定义的)与SEQIDNO，s:441-485的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有超过80%、优选地超过90%、更优选地超过95%、诸如99%或更高的序列同一性(如本文所定义的)。一般地，具有上述CDR序列的纳米抗体可以如本文进一步所述，并且优选地具有也如本文进一步所述的构架序列。因此，例如，并且如本文提及的，所述纳米抗体可以是天然存在的纳米抗体(来自任何适当的物种)、天然存在的VHH序列(即，来自骆驼科动物的适当的物种)或是合成的或半合成的氨基酸序列或纳米抗体，其包括但不限于部分人源化的纳米抗体或VHH序列、完全人源化的纳米抗体或VHH序列、骆驼源化的重链可变结构域序列、以及已经通过本文提及的技术获得的纳米抗体。因此，在一个具体的但非限制性的方面中，本发明涉及人源化的纳米抗体，其由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中CDR1-CDR3如本文定义，并且其中所述人源化的纳米抗体包括至少一个人源化取代(如本文定义)，并且特别地在其至少一个构架序列(如本文定义)中的至少一个人源化取代。在另一个优选的但非限制性的方面中，本发明涉及这样的纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQIDNO，s:441-485的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性、优选地至少80%的氨基酸同一性、更优选地至少90%的氨基酸同一性、诸如95%的氨基酸同一性或更高或甚至基本上100%的氨基酸同一性。该氨基酸同一性的程度可以，例如，通过确定在所述纳米抗体和SEQIDNO's:441-485序列的一种或多种之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。这样的纳米抗体可以是如本文进一步所述的。在另一个优选的但非限制性的方面中，本发明涉及具有这样的氨基酸序列的纳米抗体，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO's:441-485组成的组，或选自由与SEQIDNO's:441-485的至少一种氨基酸序列具有超过80%，优选地超过90%，更优选地超过95%，诸如99%或更高的序列同一性(如本文所定义的)的氨基酸序列组成的组。本发明的另一个优选的但非限制性的方面涉及SEQIDNO's:441-485的纳米抗体的人源化变体，与相对应的天然Vhh序列相比，其包括至少一个人源化取代(如本文定义)，并且特别是在其至少一个构架序列(如本文定义)中的至少一个人源化的取代。本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体或基本上由其组成。在SEQIDNO's:486-677中给出本发明的多肽的一些优选的但非限制性的实例。熟练的技术人员应该清楚，本文提及为优选的(或者"更优选的"、"甚至更优选的"等等)纳米抗体对于在本文所述的多肽中的应用也是优选的(或更优选的、或甚至更优选的，等等)。因此，包括一个或多个"优选的"本发明的纳米抗体或基本上由其组成的多肽一般是优选的，并且包括一个或多个"更优选的"本发明的纳米抗体或由其组成的多肽一般是更优选的，等等。通常，包括单一纳米抗体(诸如单一本发明的纳米抗体)或基本上由其组成的蛋白质或多肽在本文中称为"单价"蛋白质或多肽或称为"单价构建体"。包括两个或更多纳米抗体(诸如至少两个本发明的纳米抗体或至少一个本发明的纳米抗体和至少一个其他纳米抗体)或基本上由其组成的蛋白质和多肽在本文中称为"多价"蛋白质或多肽或称为"多价构建体"，且这些与本发明相应的单价纳米抗体相比，可以提供某些优势。从本文进一步的叙述中，所述多价构建体的一些非限制性实例将变得清楚。按照一个特定但非限制性的方面，本发明的多肽包括至少两个本发明的纳米抗体，诸如两个或三个本发明的纳米抗体或基本上由其组成。如本文进一步所述，该多价构建体与包括单个本发明纳米抗体或基本上由其组成的蛋白质或多肽相比，可以提供某些优势，诸如对VEGF提高很多的亲和力。基于本文的公开内容，所述多价构建体对于熟练的技术人员是清楚的；所述多价纳米抗体构建体的一些优选的、但非限制性的实例是SEQIDNO's:486-677的构建体。按照另一个特定但非限制性的方面，本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个其他结合单位(即，针对另一个表位，抗原，耙标，蛋白质或多肽)或基本上由其组成，其优选地也是纳米抗体。所述蛋白质或多肽在本文中还称为"多特异性"蛋白质或多肽或称为"多特异性构建体"，且这些与本发明相应的单价纳米抗体相比，可以提供某些优势(这将通过本文对一些优选的但非限制性的多特异性构建体的进一步的讨论而变得清楚)。基于本文的公开内容，所述多特异性构建体对于熟练的技术人员是清楚的；所述多特异性纳米抗体构建体的一些优选的但非限制性实例是SEQIDNO's:576-677的构建体。在一个方面中，本发明的多肽、化合物或构建体是多特异性(例如，双特异性)的多肽、化合物或构建体，其包括本发明针对VEGF的纳米抗体和针对VEGFR-1禾口/或VEGR-2的纳米抗体或基本上由其组成。在另一个方面中，本发明的多肽、化合物或构建体是多特异性(例如，双特异性)的多肽、化合物或构建体，其包括本发明针对VEGF的纳米抗体和针对肿瘤抗原的纳米抗体或基本上由其组成。在另一个方面中，本发明的多肽、化合物或构建体是多互补性(双互补性)的多肽、化合物或构建体，其包括针对VEGF上关于VEGFR-1的结合位点的纳米抗体和针对VEGF上关于VEGFR-2的结合位点的纳米抗体或基本上由其组成。按照另一个特定但非限制性的实施方案，本发明的多肽包括至少一个本发明的纳米抗体，任选地一个或多个其他纳米抗体，和至少一个其他氨基酸序列(诸如蛋白质或多肽)或基本上由其组成，所述其他氨基酸序列对本发明的纳米抗体和/或由此产生的融合蛋白赋予至少一种所需特性。此112相应的单价纳米抗体相比，可以提供某些优势。从本文进一步的叙述中，所述氨基酸序列和所述融合构建体的一些非限制性实例将变得清楚。还有可能组合两个或更多个上述方面，例如从而提供三价双特异性构建体，所述三价双特异性构建体包括两个本发明的纳米抗体和一个其他纳米抗体，和任选地一个或多个其他氨基酸序列。所述构建体以及本发明上下文中所特别优选的一些构建体的其他非限制性实例将通过本文进一步的叙述变得清楚。在以上构建体中，所述一个或多个纳米抗体和/或其他氨基酸序列可以彼此直接连接和/或通过一个或多个接头序列彼此适当地连接。所述接头的一些合适的但非限制性实例将通过本文进一步的叙述变得清楚。在本发明的一个具体的方面中，与相对应的本发明的氨基酸序列相比，本发明的纳米抗体或包括至少一个本发明的纳米抗体的本发明的化合物、构建体或多肽可以具有提高的半衰期。基于本文进一步的公开内容，所述纳米抗体、化合物和多肽的一些优选的但非限制性的实例将对熟练的技术人员变得清楚，并且例如，包括已经进行化学修饰(例如，通过聚乙二醇化)以提高其半衰期的本发明的纳米抗体序列或多肽；包括至少一个结合血清蛋白(诸如血清白蛋白)的另外结合位点的本发明的氨基酸序列；或包括至少一个与至少一个提高本发明的纳米抗体的半衰期的部分(并且特别是至少一个氨基酸序列)连接的本发明的纳米抗体的本发明的多肽。基于本文进一步的公开内容，包括所述半衰期延长部分或氨基酸序列的本发明的多肽的实例将对于熟练的技术人员变得清楚，并且例如，包括但不限于，这样的多肽，其中所述一个或多个本发明的纳米抗体适合连接一个或多个血清蛋白或其片段(诸如血清白蛋白或其适当的片段)或可以与血清蛋白结合的一个或多个结合单位(诸如例如，可以结合血清蛋白如血清白蛋白、血清免疫球蛋白如IgG、或运铁蛋白(transferrine)的纳米抗体或(单)结构域抗体)；这样的多肽，其中本发明的纳米抗体与Fc部分(诸如人Fc)或其适当的部分或片段连接；或这样的多肽，其中所述一种或多种本发明的纳米抗体适合连接一种或多种可以与血清蛋白结合的小蛋白或肽(诸如，但不限于，在WO91/01743,WO01/45746,WO02/076489和埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年12月5日提交的题目为"能够结合血清蛋白的肽"("尸e/ricfeyca/fl6/eo/6/"&"gtoseramprafe/ra")的埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的美国临时申请(也参见PCT/EP/2007/063348)中描述的蛋白和肽)。同样，熟练的技术人员应该清楚的，所述纳米抗体、化合物、构建体或多肽可以包含一个或多个另外的基团、残基、部分或结合单位，诸如一种或多种其它氨基酸序列或特别是一种或多种另外的纳米抗体(即，不是针对VEGF)，以提供三-或多特异性纳米抗体构建体。通常，具有提高的半衰期的本发明的纳米抗体(或包括其的化合物、构建体或多肽)优选地具有是相对应的本发明的氨基酸序列本身半衰期的至少1.5倍、优选地至少2倍、如至少5倍、例如至少10倍或超过20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的氨基酸序列本身相比，具有增加的半衰期的本发明的纳米抗体、化合物、构建体或多肽可以具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的半衰期。在本发明的一个优选而非限制性方面中，所述本发明的纳米抗体、化合物、构建体或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的半衰期。在本发明的另一个方面中，本发明的多肽包括与一个或多个允许所得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的(诸如两个且优选一个)氨基酸序列连接的(任选地通过一个或多个适当的接头序列连接)一个或多个(诸如两个或优选一个)本发明的纳米抗体。特别地，所述允许所得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的一个或多个氨基酸序列可以是一个或多个(诸如两个并且优选一个)纳米抗体，诸如在WO02/057445中所述的纳米抗体，其中FC44(WO06/040153的SEQIDNO:189)和FC5(WO06/040154的SEQIDNO:190)是优选的实例。特别地，包括一个或多个本发明的纳米抗体的多肽优选是这样的，以致它们-以10久10"2摩尔/升或更小、并且优选地10:10'12摩尔/升或更小、并且更优选地10义10"摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升膽尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与VEGF结合；和/或这样，以致它们-以102MfV1—约107M-V1,优选103M"s"■107M"s"，更优选104M"s"-107M"s",诸如105M'V1-107M'V1的k。n-速率与VEGF结合；和/或这样，以致它们-以Is"(t1/2=0.69s)-10—6s—1(提供具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选l(T2s"-IO'6s",更优选l(T3s-1-IO-6s—1,诸如10-4s"-IO-6s—1的k。ff速率与VEGF结合。优选地，包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽优选是这样的，以致它将以小于500nM,优选小于200nM,更优选小于10nM,诸如小于500pM的亲和性与VEGF结合。在这一方面，熟练的技术人员应该清楚，与包含仅一个本发明的氨基酸序列的多肽相比较，包含两个或多个本发明的纳米抗体的多肽可以以提高的亲和力与VEGF结合。对于本发明的氨基酸序列或多肽与VEGF结合的一些优选的ICso值将从本文的进一步描述和实施例中变得清楚。例如，按照本发明的这一优选的方面的其它多肽可以选自由与SEQIDNO's:486-677的一种或多种氨基酸序列具有超过80%、优选地超过90%、更优选地超过95%、诸如99°/。或更多"序列同一性"(如本文定义)的氨基酸序列组成的组，其中包含所述氨基酸序列中的纳米抗体优选地如本文进一步定义。本发明的另一方面涉及编码本发明的氨基酸序列(诸如本发明的纳米抗体)或包括其的本发明的多肽的核酸。同样，如本文通常关于本发明的核酸所述的，这样的核酸可以以遗传构建体的形式存在，如本文定义。在另一个方面中，本发明涉及表达或能够表达本发明的氨基酸序列(诸如纳米抗体)和/或包括其的本发明的多肽的宿主或宿主细胞；和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。通过本发明进一步的描述，所述宿主或宿主细胞的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。本发明的另一个方面涉及一种产品或组合物，所述产品或组合物包含或包括至少一种本发明的氨基酸序列、至少一种本发明的多肽和/或至少一种本发明的核酸、以及任选地一种或多种所述组合物本身已知的其它成分，即，取决于所述组合物的目的用途。例如，这样的产品或组合物可以是药物组合物(如本文所述)、兽医用组合物或用于诊断用途的产品或组合物(同样如本发明所述)。通过本发明进一步的描述，所述产品或组合物的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。本发明还涉及制备或生成本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的方法。通过本文进一步的描述，所述方法的一些优选而非限制性的实例将变得清楚。本发明还涉及本文所述的氨基酸序列、化合物、构建体、多肽、核酸、宿主细胞、产品和组合物的应用和用途，以及涉及用于预防和/或治疗与VEGF相关的疾病和病症的方法。通过本文进一步的描述，一些优选而非限制性的应用和用途将变得清楚。通过下文进一步的描述，本发明的其它方面、实施方案、优点和应用也将变得清楚。通常，应该注意，当用于本发明时，术语纳米抗体在其最广泛意义上不限于具体的生物来源或具体的制备方法。例如，如下文更详细地讨论，本发明的纳米抗体通常可以这样获得(1)通过分离天然存在的重链抗体的VHH结构域；(2)通过表达编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列；(3)通过将天然存在的Vhh結枸域"人源化"(如本发明所述)或者通过表达编码这样的人源化VHH结构域的核酸；(4)通过将来自于任何动物物种且特别是哺乳动物物种诸如来自于人类的天然存在的VH结构域"骆鸵源化(camelization)"(如本文所述)，或者通过表达编码这样的骆驼源化的VH结构域的核酸；(5)通过如Ward等(同前所述)所述将"结构域抗体"或"Dab""骆驼源化"，或者通过表达编码这样的骆驼源化VH结构域的核酸；(6)应用合成或半合成技术制备本身已知的蛋白、多肽或其它氨基酸序列；(7)通过应用本身己知的核酸合成技术制备编码纳米抗体的核酸，然后表达这样获得的核酸；和/或(8)通过前述一种或多种的任何结合。基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该清楚实行前述的适当的方法和技术，并且例如包括本发明更详细描述的方法和技术。一个优选的纳米抗体种类对应于针对VEGF的天然存在的重链抗体的vhh结构域。如本文进一步所述，这样的vhh序列通常可以这样产生或获得通过用VEGF适当免疫骆驼科动物物种(即，以产生针对VEGF的免疫反应和/或重链抗体)，通过获得来自所述骆驼科动物的适当的生物样品(诸如血液样品、血清样品或B-细胞样品)，并且通过利用本身己知的任何适当技术从所述样品开始产生针对VEGF的Vhh序列。所述技术对于熟练的技术人员应该是清楚的，和/或在本文中进一步所述。备选地，所述针对VEGF的天然存在的vhh结构域可以从首次用于实验的駱驼科动物vhh序列文库获得，例如，通过使用本身已知的一种或多种筛选技术用VEGF筛选这样的文库，或其至少一部分、片段、抗原决定簇或表位。例如，这样的文库和技术记述在WO99/37681，WO01/90190，WO03/025020和WO03/035694中。备选地，可以使用来源自首次用于实验的vhh文库的改进的合成的或半合成的文库，诸如通过诸如随机诱变和/或CDR重排的技术从首次用于实验的vhh文库获得的V朋文库，如例如记述在WO00/43507中的技术获得。因此，在另一个方面中，本发明涉及生成针对VEGF的纳米抗体的方法。在一个方面中，所述方法至少包括下列步骤a)提供纳米抗体序列的组、集合或文库；和b)从所述纳米抗体序列的组、集合或文库中筛选可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的纳米抗体序列；和c)分离所述可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的氨基酸序列。在这样的方法中，所述纳米抗体序列的组、集合或文库可以是首次用于实验的纳米抗体序列的组、集合或文库；合成的或半合成的纳米抗体序列的组、集合或文库；和/或已经进行了亲和力成熟的纳米抗体序列的组、集合或文库。在本方法的优选方面中，所述纳米抗体序列的组、集合或文库可以是纳米抗体序列的免疫组、集合或文库，且特别是来自已经用VEGF适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物物种的Vhh序列的免疫组、集合或文库。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。在上述方法中，所述纳米抗体或Vhh序列的組、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体、或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选纳米抗体序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本发明进一步的公开内容。同样参考WO03/054016和Hoogenboom在自然生物技术(NatureBiotechnology)，23,9，1105-1116(2005)中的综述。在另一个方面中，用于产生纳米抗体序列的方法包括至少下列步骤a)提供来自于骆驼科动物物种的表达免疫球蛋白序列的细胞的集合或样叩；b)筛选所述细胞集合或样品，以选择(i)表达能够结合和/或具有针对VEGF的亲和性的免疫球蛋白序列的细胞；和(ii)表达重链抗体的细胞，其中亚步骤(i)和(ii)可以基本上作为单个筛选步骤进行或以任何适当的顺序作为两个独立的筛选步骤进行，以提供表达能够结合和/或具有针对VEGF的亲和性的重链抗体的至少一种细胞；和c)(i)从所述细胞分离在所述重链抗体中存在的Vhh序列；或(ii)从所述细胞分离编码在所述重链抗体中存在的Vhh序列的核酸序列，然后表达所述Vjffl结构域。在本方面所述的方法中，所述细胞集合或样品可以，例如，是B-细胞集合或样品。此外，在该方法中，所述细胞样品可以来源于已经用VEGF或基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物。在一个特定的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。上述方法可以以任何适当的方式进行，这对于熟练的技术人员将是清楚的。例如，参考EP0542810，WO05/19824,WO04/051268和WO04/106377。步骤b)的筛选优选地使用流式细胞术技术诸如FACS进行。对于此，例如，参考Lieby等，血液(Blood),巻97，No.12,3820。特别参考记述在埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)国际申请WO06/079372中的所谓的"納米克隆tm"技术。在另一个方面中，生成针对VEGF的氨基酸序列的方法可以包括至少下列步骤a)提供编码重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列的组、集合或文库；b)从所述核酸序列的组、集合或文库中筛选编码可以结合和/或具有针对VEGF的亲和性的重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列；禾口c)分离所述核酸序列，然后分别表达在所述重链抗体中存在的Vhh序列或表达所述纳米抗体序列。在这样的方法中，所述编码重链抗体或纳米抗体序列的核酸序列的组、集合或文库可以是，例如，编码重链抗体或vhh序列的首次用于实验的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；编码纳米抗体序列的合成的或半合成的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库；和/或编码已经进行了亲和力成熟的纳米抗体序列的组、集合或文库的核酸序列的组、集合或文库。在该方法的优选方面中，所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是编码重链抗体或vhh序列的核酸序列的免疫的组、集合或文库，所述重链抗体或vhh序列来源于已经用VEGF适当免疫的、或用基于其或来源于其的适当的抗原决定簇(诸如其抗原部分、片段、区域、结构域、环或其它表位)适当免疫的骆驼科动物。在一个特别的方面中，所述抗原决定簇可以是细胞外部分、区域、结构域、环或其它细胞外表位。在上述方法中，所述核苷酸序列的组、集合或文库可以被展示在噬菌体、噬菌粒、核糖体或适当的微生物(诸如酵母)上，以诸如促进筛选。用于展示和筛选编码氨基酸序列的核苷酸序列(的组、集合或文库)的适当的方法、技术和宿主生物体对于本领域熟练的技术人员将是清楚的，例如，基于本文进一步的公开内容。还参考WO03/054016和Hoogenboom在自然生物技术(NatureBiotechnology),23,9,1105-1116(2005)中的综述。如熟练的技术人员清楚的，本文所述的方法的筛选步骤还可以作为选择步骤进行。因此，当用在本说明书中时，术语"筛选"可以包括选择、筛选或选择和/或筛选技术的任意适当的组合。此外，当使用序列的组、集合或文库时，其可以包含任意适合数量的序列，诸如1，2，3或约5,10,50，100,500,1000,5000,104,105，106,107，108或更多序列。此外，上述氨基酸序列的组、集合或文库中的一个或多个或全部序列可以通过合理的或半经验性方法诸如计算机建模技术或生物统计或数据采集(datamining)技术获得或确定。此外，所述组、集合或文库可以包括作为来自彼此的变体的一个、两个或多个序列(例如，具有设计的点突变或具有随机化的位置)，包括(compromise)来自于天然多样化序列的多变化组(例如，免疫文库)、或任何多变化序列其他来源的多个序列(例如，如Hoogenboom等，自然生物技术(NatBiotechnol)23:1105,2005和Binz等，自然生物技术(NatBiotechnol)2005,23:1247中所述)。所述序列的组、集合或文库可以展示在噬菌体颗粒、核糖体、细菌、酵母细胞、哺乳动物细胞的表面上，并且在这些载体内与编码所述氨基酸序列的核苷酸序列连接。这使得所述组、集合或文库能够按筛选步骤处理，以分离所需要的本发明的氨基酸序列。更一般地，当序列被展示在适当的宿主或宿主细胞上时，还可以(且习惯性的)从所述宿主或宿主细胞首先分离编码需要的序列的核苷酸序列，然后通过在适当的宿主生物体中适当地表达所述核苷酸序列而获得需要的序列。同样地，这可以以本身已知的任何适当的方式进行，这将是熟练的技术人员所清楚的。用于获得针对VEGF的vhh序列或纳米抗体序列的另一种技术包括适当免疫能够表达重链抗体的转基因哺乳动物(即，以产生针对VEGF的免疫应答和/或重链抗体)，从所述转基因哺乳动物获得适当的生物样品，所述生物样品包含所述Vhh序列或納米抗体序列(编码核酸序列)(诸如血液样品、血清样品或B-细胞样品)，然后通过利用本身己知的任何适当技术(诸如本文所述的任何方法或杂交瘤技术)从所述样品开始产生针对VEGF的Vhh序列。例如，对于这一目的，可以使用表达重链抗体的小鼠以及在WO02/085945,WO04/049794和WO06/008548和Janssens等.，美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.)2006年10月10日；103(41):15130-5中所述的其它方法和技术。例如，所述表达重链抗体的小鼠可以表达具有任何适当的(单)可变结构域的重链抗体，所述适当的(单)可变结构域诸如来自天然来源(例如，人(单)可变结构域、骆驼科动物(单)可变结构域或鲨鱼(单)可变结构域)的(单)可变结构域，以及例如合成的或半合成的(单)可变结构域。本发明还涉及通过上述方法获得的、或备选地通过包括上述方法之一以及另外至少下列步骤的方法获得的Vhh序列或納米抗体序列确定所述VHH序列或纳米抗体序列的核苷酸序列或氨基酸序列；并且以本身已知的方式，诸如通过在合适的宿主细胞或宿主生物体内表达或通过化学合成，而表达或合成所述VHH序列或纳米抗体序列。如本文提及的，本发明纳米抗体的一种特别优选的种类包括具有与天然存在的vhh结构域的氨基酸序列相对应的但是已被"人源化"的氨基酸序列的纳米抗体，"人源化"S卩，用在来自于人类的常规4-链抗体的vh结构域中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基替换所述天然存在的Vhh序列的氨基酸序列中(并且，特别是在构架序列中的)的一个或多个氨基酸残基(例如上文所示)。这可以以本身己知的方式进行，这对于熟练的技术人员是清楚的，例如，基于本发明的进一步描述以及本文引用的关于人源化的现有技术。此外，应该注意，本发明这样的人源化纳米抗体可以以本身已知的任何适当方法获得(即，在上文(l)-(8)点下所示)，并且因此没有严格地限于使用包括天然存在的vhh结构域的多肽作为起始原料而获得的多肽。本发明纳米抗体的另一种特别优选的种类包括具有与天然存在的VH结构域的氨基酸序列相对应但已被"骆驼源化"的氨基酸序列的纳米抗体，"骆驼源化"即，用在重链抗体的vhh结构域中对应位置存在的一个或多个氨基酸残基替换常规4-链抗体的天然存在的vh结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基。这可以以本身已知的方式进行，这对于熟练的技术人员是清楚的，例如，基于本文的进一步描述。这样的"骆鸵源化"取代优选插入在形成和/或存在于Vh-Vl界面的氨基酸位置，和/或在所谓的骆驼科动物(Camelidae)标志残基，如本文所定义(参见例如WO94/04678和Davies与Riechmann(1994和1996)，同前所述)。优选地，用作产生或设计所述骆驼源化纳米抗体的起始原料或起点的VH序列优选地是来自哺乳幼物的Vh序列，更优选地是人类的VH序列，猪如Vh3序列。然而，应该注意，这种骆驼源化的本发明纳米抗体可以以本身己知的任何适当方式获得(即，在上文(l)-(8)点下所示)，并且因此没有严格地限于使用包括天然存在的VH结构域的多肽作为起始原料而获得的多肽。例如，又如本文进一步所述，"人源化"和"骆驼源化"二者均可以这样进行提供分别编码天然存在的VHH结构域或VH结构域的核苷酸序列，并且然后以本身已知的方式以这样的方法改变所述核苷酸序列中的一个或多个密码子，以致新核苷酸序列分别编码"人源化的"或"骆驼源化的"本发明的纳米抗体。然后以本身已知的方式表达这种核酸，以提供理想的本发明的纳米抗体。备选地，分别基于天然存在的VHH结构域或Vh結枸域的氨基酸序列，可以分别设计需要的人源化或骆驼源化的本发明的纳米抗体的氨基酸序列，然后应用本身己知的肽合成技术从头开始合成。此外，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列或核苷酸序列，可以分别设计编码所述需要的人源化或骆驼源化的本发明的纳米抗体的核苷酸序列，然后应用本身已知的核酸合成技术从头开始合成，之后可以以本身上已知的方式表达这样获得的核酸，以提供合乎需要的本发明的纳米抗体。熟练的技术人员应该清楚从天然存在的VH序列或优选的Vhh序列起始而获得本发明的纳米抗体和/或编码其的核酸的其它适宜方法和技术，并且例如，可以包括以适当方式组合一个或多个天然存在的Vh序列的一个或多个部分(诸如一个或多个FR序列和/或CDR序列)，一个或多个天然存在的Vhh序列的一个或多个部分(诸如一个或多个FR序列或CDR序列)，和/或一个或多个合成的或半合成的序列，以提供本发明的纳米抗体或编码其的核苷酸序列或核酸(其接着可以被适当地表达)。基于本文的公开内容和/或本文引用的其它现有技术，编码VHH序列或纳米抗体的构架序列的核苷酸序列对于熟练的技术人员是清楚的(和/或可以备选地由使用本文所述的方法获得的核苷酸序列起始通过PCR获得)，并且可以与编码合乎需要的CDR的核苷酸序列适当组合(例如，通过使用重叠引物的PCR装配)，以提供编码本发明的纳米抗体的核酸。如本文提及的，纳米抗体可以特别以在一个或多个构架序列中存在一个或多个"标志残基(//a//m『A:A^/^")"(如本文所述)为特征。因此，按照本发明的一个优选的、但非限制性的方面，纳米抗体在其最广泛意义上通常可以定义为包括下列各项的多肽a)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中在按照Kabat编号方式的位置108的氨基酸残基是Q;和/或b)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文所定义)或半胱氨酸残基，并且在位置44的氨基酸残基优选是E;和/或c)包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组。因此，在第一优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q;和/或其中b)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸或半胱氨酸，并且按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基优选是E;和/或其中c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；并且其中d)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。特别地，纳米抗体在其最广泛意义上可以通常定义为这样的多肽，所述多肽包括a)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q;和/或b)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R;和/或c)包括被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P,R和S组成的组，并且特别是选自由R和S组成的组。因此，在一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q;和/或其中b)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R;和/或其中c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；并且其中d)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本发明的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本发明的一个更优选的方面而定义。特别地，按照本发明针对VEGF的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中a)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q;和/或其中b)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基是E，并且其中按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R;和/或其中c)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P、R和S组成的组，并且特别选自由R和S组成的组；并且其中d)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。特别地，按照本发明方面的一个优选的但非限制性的方面，纳米抗体通常可以定义为包括包含被3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列的多肽，其中a-l)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A,QE,D，QQ,R,S,L组成的组；并且优选地选自由QE或Q组成的组；和a-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L,R或C组成的组；并且优选地选自由L或R组成的组；和a-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W,R或S组成的组；并且优选地是W或R，并且最优选地为W;a-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q;或其中b-l)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由E和Q组成的组;禾口b-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R;和b-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R和S组成的组；并且优选地为W;b-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组;并且优选地为Q;或者其中c-1)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A，QE，D，Q，R,S和L组成的组；并且优选地选自由G,E和Q组成的组；和c-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L,R和C组成的组；并且优选地选自由L和R组成的组；和c-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P,R和S组成的组；并且特别选自由R和S组成的组；和c-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组;优选地为Q;并且其中d)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。因此，在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中a-l)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A,QE，D，QQ，R,S,L组成的组；并且优选地选自由QE或Q组成的组；并且其中a-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L,R或C组成的组；并且优选地选自由L或R组成的组；并且其中a-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R或S组成的组；并且优选地是W或R，并且最优选地为W;并且其中a-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基是Q;并且其中d)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中b-l)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由E和Q组成的组;并且其中b-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基是R;并且其中b-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由W，R和S组成的组；并且优选地为W;并且其中b-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组;并且优选地为Q;并且其中d)CDR1，CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中c-l)按照Kabat编号方式在位置44的氨基酸残基选自由A,QE,D，Q,R，S和L组成的组；并且优选地选自由QE和Q组成的组；并且其中c-2)按照Kabat编号方式在位置45的氨基酸残基选自由L,R和C组成的组；并且优选地选自由L和R组成的组；并且其中c-3)按照Kabat编号方式在位置103的氨基酸残基选自由P，R和S组成的组；并且特别选自由R和S组成的组；并且其中c-4)按照Kabat编号方式在位置108的氨基酸残基选自由Q和L组成的组;优选地为Q;并且其中d)CDR1，CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。本发明纳米抗体的两个特别优选的但非限制性的组是按照上述a);按照上述(a-l)到(a-4);按照上述b);按照上述(b-l)到(b-4);按照上述(c);和/或按照上述(C-l)到(C-4)的那些，其中每一个i)按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW(或如本文所述的GLEW-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q;或其中ii)按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE(或如所述的KERE-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q或L,并且优选地为Q。因此，在另一个优选的但非限制性方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中i)按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW(或如本文定义的GLEW-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q;并且其中ii)CDR1，CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在另一个优选而非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以具有下述结构FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区l-3，并且其中i)按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE(或KERE-样序列)，并且在位置108的氨基酸残基是Q或L，并且优选是Q;129并且其中ii)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在其中按照Kabat编号方式在位置43-46的氨基酸残基形成序列KERE或KQRE的本发明的纳米抗体中，在位置37的氨基酸残基最优选是F。在其中按照Kabat编号方式在位置44-47的氨基酸残基形成序列GLEW的本发明的纳米抗体中，在位置37的氨基酸残基选自由Y,H,I,L,V或F组成的组，并且最优选是V。因此，但不以任何方式局限于此，基于在上述位置存在的氨基酸残基，本发明的纳米抗体可以通常基于下述三组分类i)"GX5『-教，按照Kabat编号方式在位置44-47具有氨基酸序列GLEW并且按照Kabat编号方式在位置108具有Q的纳米抗体。如本文进一步所述，在这一组内的纳米抗体通常在位置37具有V，并且可以在位置103具有W,P,R或S，并且优选地在位置103具有W。所述GLEW组还包括一些GLEW-样的序列，诸如下表A-3中提及的那些。更通常地，但不限于，属于GLEW-组的纳米抗体可以定义为在位置44具有G和/或在位置47具有W的纳米抗体，其中位置46通常是E，并且其中优选地位置45不是带电荷的氨基酸残基并且不是半胱氨酸；ii)"i^i^-邀，按照Kabat编号方式在位置43-46具有氨基酸序列KERE或KQRE(或另一个KERE-样序列)并且按照Kabat编号方式在位置108具有Q或L的纳米抗体。如本文进一步所述，在这一组内的纳米抗体通常在位置37具有F，在位置47具有L或F;并且可以在位置103具有W，P，R或S，并且优选地在位置103具有W。更通常地，但不限于，属于KERE-组的纳米抗体可以定义为在位置44具有K,Q或R的纳米抗体(通常是K)，其中位置45是带电荷的氨基酸残基或半胱氨酸，并且位置47如本文进一步所定义；iii)'7Wfi,S-敛'在位置103具有P，R或S的纳米抗体。这些纳米抗体可以在按照Kabat编号方式的位置44-47具有氨基酸序列GLEW或者在按照Kabat编号方式的位置43-46具有氨基酸序列KERE或KQRE，后者最优选地与位置37的F和位置47的L或F结合(如关于KERE-组所定义)；并且可以在按照Kabat编号方式的位置108具有Q或L，并且优选地具有Q。此外，在适当的情形中，纳米抗体可以属于这些种类的两种或更多种(即，具有其特征)。例如，一个特别优选的纳米抗体组在位置44-47具有GLEW或GLEW-样序列；在位置103具有P，R或S(并且特别是R);并且在位置108具有Q(其可以被人源化为L)。更一般地，应该注意，上述引用的定义描述并且应用于采用天然(即，未人源化的)Vhh序列的形式的納米抗体，并且这些纳米抗体的人源化变体可以包含除上述那些之外的其它氨基酸残基(即，一个或多个如本文定义的人源化的取代)。例如，并且不限于，在GLEW-组或103P,R,S-组的一些人源化的纳米抗体中，在位置108的Q可以被人源化为108L。如本文已经提及的，基于本文的公开内容，其它人源化的取代(及其适当的组合)将变得清楚。另外，或者备选地，通过比较天然存在的Vhh序列的枸架区序列与一种或多种紧密相关的人vhh序列的相对应的构架序列，可以确定其它潜在有用的人源化取代，之后可以将这样确定的一个或多个潜在有用的人源化取代(或其组合)弓I入到所述Vhh序列中(以本身已知的任何方式，如本文进一步所述)，并且可以检测所得到的人源化的vhh序列针对靶标的亲和性、稳定性、表达的容易性和水平、和/或其它需要的特性。以这种方式，通过有限程度的试验和误差，熟练的技术人员基于本文的公开内容可以确定其它合适的人源化取代'(或其适当的组合)。此外，基于前述，纳米抗体(的构架区)可以被部分人源化或完全人源化。因此，在另一个优选、但非限制性的方面中，本发明的纳米抗体可以是属于GLEW-组(如本文定义)的纳米抗体，并且其中CDR1，CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在另一个优选、但非限制性的方面中，本发明的纳米抗体可以是属于KERE-组(如本文定义)的纳米抗体，并且CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。因此，在另一个优选的但非限制性的方面，本发明的纳米抗体可以是属于103P,R,S-组(如本文所定义)的纳米抗体，并且其中CDR1,CDR2和CDR3如本文所定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。此外，更一般地，并且除了上文提及的108Q,43E/44R和103P，R，S残基之外，本发明的纳米抗体可以在常规Vh結枸域中形成Vh/Vl界面(部分)的一个或多个位置包含一个或多个氨基酸残基，所述氨基酸残基比在相对应的天然存在的VH序列同一位置天然存在的氨基酸残基更加高度带电荷，并且特别是一个或多个带电荷的氨基酸残基(如表A-2中提及)。这样的取代包括，但不限于下表A-3中提及的GLEW-样序列；以及国际申请WO00/29004中所述关于所谓的"微体"的取代，例如以获得在位置108具有Q和在位置44-47具有KLEW组合的纳米抗体。基于本发明的公开内容，在这些位置的其它可能的取代对于熟练的技术人员应该是清楚的。在本发明的纳米抗体的一个方面中，在位置83的氨基酸残基选自由L,M,S,V和W组成的组；并且优选地为L。此外，在本发明的纳米抗体的一个方面中，位置83的氨基酸残基选自由R,K,N,E，QI，T和Q组成的组；并且最优选地为K或E(对于与天然存在的vhh结构域相对应的纳米抗体)或R(对于"人源化"纳米抗体，如本文所述)。在一个方面中，位置84的氨基酸残基选自由P,A，R,S，DT，和V组成的组，并且最优选地是P(对于与天然存在的vhh结构域相对应的纳米抗体)或R(对于"人源化"纳米抗体，如本文所述)。此外，在本发明的纳米抗体的一个方面中，位置104的氨基酸残基选自由G和D组成的组；并且最优选地是G。总而言之，在所述纳米抗体中如上文提及的在位置11,37,44，45，47,83,84,103,104和108的氨基酸残基在本文中还叫作"标志残基"。所述标志残基以及在最紧密相关的人VH结构域，即VH3的相对应的位置的氨基酸残基总结在表A-3中。在天然存在的vhh结构域中存在的这些标志残基的一些特别优选但非限制性的组合在表A-4中提及。为了比较，将叫作DP-47的人Vh3的相对应氨基酸残基以斜体显示。表A-3:纳米抗体中的标志残基位置人Vh3标志残基11L，V;主要为LL,M,S,V,W;优选L37V,I,F;一般为VF(1),Y,H,I,L或V,优选F("或Y44(8)GG(2),E(3),A,D，q,R,S,L;优选G(2)，E(3)或Q;最优选0(2)或E(3)45(8)LL(2),R(3),C,I,L,P,Q,V;优选L②或r(3)47(8)W,YW(2),L(D或F(1),A,G,I,M,R,S,V或Y;优选W(2、L(",fW或R83R或K;一般为RR,K(5),N,E(5),GI,M,Q或T;优选K或R;最优选K84A,T，D;主要为AP(5),A,L,R,S,T,D,V;优选P103WW(4),p(6),r(6)，&优选w104GG或D;优选G108L,M或T;主要为LQ,L。或R;优选Q或L(7)注释(1)特别地，但是不排除地，与在位置43-46的kere或kqre组合。(2)在位置44-47通常为glew。(3)在位置43-46通常为kere或kqre，例如，在位置43-47为kerel,keref,kqrel，kqref或kereg。备选地，还可能是序列诸如tere(例如terel)，kece(例如kecel或kecer),rere(例如rereg),qere(例如qereg),kgre(例如kgreg),kdre(例如kdrev)。一些其它可能的但较不优选的序列包括例如deckx禾卩nvcel。(4)具有在位置44-47的glew和在位置43-46的kere或kqre。(5)通常作为在天然存在的VHH结构域的位置83-84的KP或EP。(6)特别地，但是不排除，与在位置44-47的glew组合。(7)具有附加条件当位置44-47为glew时，在还在103包含w的(非人源化的)v冊序列中位置108总是q。(8)所述glew组还在位置44-47包含glew-样序列，诸如例如gvew,epew,gler,dqew,dlew,g正w,elew，gpew,ewlp,gper,gler禾口elew。133<table>tableseeoriginaldocumentpage134</column></row><table>在所述纳米抗体中，在除所述标志残基外的任何其它位置的每一氨基酸残基可以是在天然存在的vhh结构域的相应位置(按照Kabat编号方式)天然存在的任何氨基酸残基。熟练的技术人员对于这样的氨基酸残基应该是清楚的。表A-5-A-8提及一些非限制性的残基，其可以存在于天然存在的vhh结构域的FR1、FR2、FR3和FR4的任一位置(按照Kabat编号方式)。对于任一位置，在天然存在的vhh结构域的任一位置最经常存在的氨基酸残基(并且其在纳米抗体中对于所述位置是最优选的氨基酸残基)以粗体显示；并且对于每一位置的其它优选的氨基酸残基己加下划线(注意在天然存在的Vhh結构域的位置26-30发现的氨基酸残基的数目支持Chothia(同前所述)的构成编号方式的基础的假说，即，在这些位置的残基已经形成CDR1的部分)。在表A-5-A-8中，还已经提及可以在人VH3结构域的任一位置存在的一些非限制性的残基。此外，对于每一位置，在天然存在的人vh3结构域的每一位置最经常存在的氨基酸残基以粗体显示；并且其它优选的氨基酸残基加下划线。仅是为了参考，表A-5-A-8还包含对于代表性样品1118Vhh序列失于在每个氨基酸位置的Vhh摘("r朋^7/.")和vhh可变性("r册松k")的数据(数据由乌得勒支大学(UtrechtUniversity)的DavidLutjeHulsing禾qTheoVerrips教授馈赠)。关于VHH熵和VHH可变性的数值提供对于被分析的1118vhh序列之间的氨基酸残基的可变性和保守度的测量低数值(即<1,诸如<0.5)表示在所述vhh序列之间氨基酸残基是高度保守的(即，几乎没有可变性)。例如，在位置8的G和在位置9的G分别具有0.1和0的VHH熵数值，这表示这些残基是高度保守的，并且具有很小的可变性(并且假设在所分析的所有1118序列中位置9是G)，而对于形成CDR部分的残基通常发现1.5或更大的数值(数据未显示)。注意(1)在表A-5—A-8第二栏列出的氨基酸残基是基于比最后两栏引用的为确定vhh熵和vhh可变性而分析的1118Vhh序列大的祥品；并且(2)下述数据支持这样的假说在位置27-30的氨基酸残基以及还可能甚至在位置93和94的氨基酸残基已经形成CDR的一部分(尽管本发明不限于任何具体的假说或解释，并且如上文所提及，本发明使用按照Kabat的编号方式)。对于序列熵的一般解释，表A-5:FRl中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-3的脚注)<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>表A-5:FR1中的氨基酸残基的非限制性实例(续表)位置<table>tableseeoriginaldocumentpage137</column></row><table>表A-7:FR3中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-3的脚注)<table>tableseeoriginaldocumentpage138</column></row><table>表A-7:FR3中的氨基酸残基的非限制性实例(续表)<table>tableseeoriginaldocumentpage139</column></row><table>表A-8:FR4中的氨基酸残基的非限制性实例(关于脚注，参见表A-3的脚注)<table>tableseeoriginaldocumentpage139</column></row><table>因此，在另一个优选的但非限制性的方面中，本发明的纳米抗体可以定义为具有下述(通用)结构的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4,并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3,并且其中i)在按照Kabat编号的位置11,37，44,45,47,83,84,103,104和108的氨基酸残基的一个或多个选自表A-3中提及的标志残基；并且其中ii)CDR1，CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。例如，上述纳米抗体可以是Vhh序列或者可以是人源化的納米抗体。当上述納米抗体序列是Vhh序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。特别地，本发明的纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4其中FR1-FR4分别是指构架区1-4，并且其中CDR1-CDR3分别是指互补性决定区1-3，并且其中i)(优选地)在按照Kabat编号的位置11,37,44,45,47,83,84，103，104和108的氨基酸残基的一个或多个选自表A-3中提及的标志残基(这理解为，VHH序列应该包含一个或多个标志残基；并且部分人源化的纳米抗体应该通常，且优选地，[仍然]包含一个或多个标志残基，[尽管在按照本发明适当的情形中提供部分人源化的纳米抗体也在本发明范围之内，在所述部分人源化的纳米抗体中，所有的标志残基，而不是一个或多个其它氨基酸残基已被人源化];并且在完全人源化的纳米抗体中，在按照本发明适当的情形中，在标志残基位置处的所有氨基酸残基应该是在人VH3序列中存在的氨基酸残基。基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该清楚的，所述vHH序列，所述具有至少一个标志残基的部分人源化的纳米抗体，所述不具有标志残基的部分人源化的纳米抗体和所述完全人源化的纳米抗体全部形成本发明的方面)；并且其中'ii)所述氨基酸序列与SEQIDNO，s:1-22的至少一种氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成CDR序列的氨基酸残基(在SEQIDNO，s:1-22序列中用X表示)；并且其中iii)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。例如，上述纳米抗体可以是Vhh序列或者可以是人源化的納米抗体。当上述納米抗体序列是Vhh序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。表A-9:KERE，GLEW和P，R，S103组纳米抗体的代表性氨基酸序列。CDR用XXXX表示<table>tableseeoriginaldocumentpage142</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage143</column></row><table>说明书第117/204页特别地，本发明KERE组的纳米抗体可以是具有下述(通用)结构的氨基酸序列FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4射i)在按照Kabat编号的位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文定义)或半胱氨酸残基，并且位置"优选是E;并且其中ii)FR1是与下述氮基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-10:KERE-组的纳米抗体的代表性FW1序列。KEREFW1序列号1SEQIDNCmQS/QRVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTSSK￡S￡FW1序列号2SEQIDNO:24QVQLVESG的LVQTGDSLSLSCSASGRTFSKEREFW1序列号.3SEQICNO:25QVKLEESGGQLVQAGDSLRLSCAATGRAFGKEAEFW1序列号4SEQID歐26AVQLVESGGQLVQPGESLGLSCVASGRDFVKEFt￡FW1序列号5SEQIDNO:27BTClLVESGGGLVClAGiGSLFiLSCEVLGRTAGKEREFW1序列号6SEQIDMO:28QVQLVESGGGWVQPGGSLRLSCAASETILSKEREFW1序列号7SEQIDNO:29QVQLVESGGGTVQPGGSLNLSCVASQMTTNKEREFW1序列号8SEQIDNO:SOEVQLVESGGGLAQPGGSLQLSCSAPGFTLD關EFW1序歹D号9SEQIDMO:31AQELEESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFN并且其中iii)FR2是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-ll:KERE-组的纳米抗体的代表性FW2序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage145</column></row><table>并且其中iv)FR3是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-12:KERE-组的纳米抗体的代表性FW3序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage145</column></row><table>并且其中v)FR4是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-13:KERE-组的纳米抗体的代表性FW4序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage146</column></row><table>并且其中vi)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在上述纳米抗体中，一个或多个其它标志残基优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。此外，例如，上述纳米抗体可以是Vhh序列或者可以是人源化的納米抗体。当上述納米抗体序列是Vhh序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。关于构架1，熟练的技术人员应该理解，当通过表达核苷酸序列而产生上文列出的氨基酸序列时，最初的4个氨基酸序列(即，按照Kabat编号方式1-4的氨基酸残基)通常可以通过已经用来产生所述核酸的引物确定。因此，为了确定氨基酸同一性的程度，优选忽略最初的4个氨基酸残基。此外，关于构架l，并且尽管按照Kabat编号方式的氨基酸位置27-30被认为是构架区(并且不是CDR)的一部分，但是通过分析超过IOOO个VHH序列的数据库己经发现位置27-30具有比位置1-26的可变性大得多的可变性(表示为VHH熵和Vhh可変性-参见表A-5-A-8)。由于此，为了确定氨基酸同一性的程度，在位置27-30的氨基酸残基优选也被忽略。考虑到此，KERE种类的纳米抗体可以是包含由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中i)在按照Kabat编号的位置45的氨基酸残基是带电荷的氨基酸(如本文定义)或半胱氨酸残基，并且位置44优选是E;ii)FR1是在按照Kabat编号的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-14:KERE-组的纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。<table>tableseeoriginaldocumentpage147</column></row><table>iii)FR2,FR3和FR4如本文关于KERE-种类的纳米抗体的FR2,FR3和FR4所述；并且其中iv)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。例如，上述纳米抗体可以是Vhh序列或者可以是人源化的納米抗体。当上述納米抗体序列是Vhh序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。GLEW种类的纳米抗体可以是包含由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中i)优选地，当所述GLEW-种类的纳米抗体是非人源化的纳米抗体时，在位置108的氨基酸残基是Q;ii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-15:GLEW-组的纳米抗体的代表性FW1序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table>并且其中iii)FR2是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80°/。的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-16:GLEW-组的纳米抗体的代表性FW2序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table>并且其中iv)FR3是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-17:GLEW-组的纳米抗体的代表性FW3序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage149</column></row><table>并且其中v)FR4是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-18:GLEW-组的纳米抗体的代表性FW4序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage149</column></row><table>并且其中vi)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在上述纳米抗体中，一个或多个其它标志残基优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。关于构架l，熟练的技术人员同样应该理解，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略在位置1-4和27-30处的氨基酸残基。考虑到此，GLEW种类的纳米抗体可以是包含由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中i)优选地，当所述GLEW-种类的纳米抗体是非人源化的纳米抗体时，在位置108的氨基酸残基是Q;并且其中ii)FR1是在Kabat编号的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-19:KERE-组的纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。GLEWFW1序列号6SEQIDNO加VESGGGLVQPGGSLRLSCAASGGLEWFW1序列号7SEQIDNO:70EESGGGLAQPGGSLFiLSCVASGGLEWFW1序列号.8SEQIDNO:71VESGGGLALPGGSLTLSCVFSG并且其中m)FR2,FR3和FR4如本文关于GLEW-种类的纳米抗体的FR2,FR3禾口FR4所述；并且其中iv)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。例如，上述纳米抗体可以是Vhh序列或者可以是人源化的納米抗体。当上述納米抗体序列是Vhh序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。在上述纳米抗体中，一个或多个其它标志残基优选地如本文所述(例如，当它们是Vhh序列或是部分人源化的纳米抗体时)。P,R,S103种类的纳米抗体可以是包含由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中i)在按照Kabat编号的位置103处的氨基酸残基不同于W;并且其中ii)优选地，在按照Kabat编号的位置103处的氨基酸残基是P,R或S,并且更优选是R;并且其中iii)FR1是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-20:P，R，S103-组的纳米抗体的代表性FW1序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage151</column></row><table>并且其中iv)FR2是与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-21:P，R，S103-组的纳米抗体的代表性FW2序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage151</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage152</column></row><table>并且其中vii)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。在上述纳米抗体中，一个或多个其它标志残基优选地如本文所述(例如，当它们是VHH序列或部分人源化的纳米抗体时)。关于构架l，熟练的技术人员同样应该理解，为了确定氨基酸同一性的程度，优选地忽略在位置1-4和27-30处的氨基酸残基。考虑到此，P,R，S103种类的纳米抗体可以是包含由3个互补性决定区/序列中断的4个构架区/序列的氨基酸序列，其中i)在按照Kabat编号的位置103处的氨基酸残基不同于W;并且其中ii)优选地，在按照Kabat编号的位置103处的氨基酸残基是P,R或S,并且更优选是R;并且其中iii)FR1是在Kabat编号的位置5-26与下述氨基酸序列中的至少一种具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列表A-24:P，R，S103-组的纳米抗体的代表性FW1序列(氨基酸残基5-26)。P,R,S103FW1序列号,9SEQIDNO:100VESGGGLVQAGGSLRLSCAASGP,R,S103FW1序列号10SEQIDNO:101AESGGGLVQPGGSLKLSCAASR并且其中iv)FR2,FR3和FR4如本文关于P,R,S103-种类的纳米抗体的FR2,FR3和FR4所述；并且其中153v)CDR1,CDR2和CDR3如本文定义，并且优选地如按照本文的一个优选的方面而定义，并且更优选地如按照本文的一个更优选的方面而定义。例如，上述纳米抗体可以是Vhh序列或者可以是人源化的納米抗体。当上述納米抗体序列是Vhh序列时，它们可以被适当地人源化，如本文进一步所述。当所述纳米抗体是部分人源化的纳米抗体时，它们可以任选地被进一步适当地人源化，同样如本文所述。在上述纳米抗体中，一个或多个其它标志残基优选地如本文所述(例如，当它们是vhh序列或是部分人源化的纳米抗体时)。在另^t优选的但非限制性的方面中，本发明涉及上述纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQIDNO，s:441-485的至少一种氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性、优选地至少80%的氨基酸同一性、更优选地至少90%的氨基酸同一性、诸如95%的氨基酸同一性或更多或甚至基本上100%的氨基酸同一性。该氨基酸同一性的程度可以，例如，通过确定在所述纳米抗体和SEQIDNO's:441-485序列的一种或多种之间的氨基酸同一性的程度(以本文所述的方式)而确定，其中忽略形成构架区的氨基酸残基。这样的纳米抗体可以是如本文进一步所述的。如本文已经提及的，本发明的另一个优选的但非限制性的方面涉及具有这样的氨基酸序列的纳米抗体，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO，s:441-485组成的组，或选自由与.SEQIDNO，s:441-485的至少一种氨基酸序列具有超过80%，优选地超过90%，更优选地超过95%，诸如99%或更高的序列同一性(如本文所定义的)的氨基酸序列组成的组。此外，在上述纳米抗体中i)与SEQIDNO，s:441-485的相对应的氨基酸序列相比，任何氨基酸取代(当其不是如本文定义的人源化取代时)优选地是保守氨基酸取代,(如本文定义)；和/或ii)与SEQIDNO's:441-485的相对应的氨基酸序列相比，其氨基酸序列优选地仅包含氨基酸取代，或另外优选地不超过5个、优选地不超过3个、且更优选地仅有1或2个氨基酸删除或插入；和/或iii)所述CDR可以是通过亲和力成熟，例如由SEQIDNO，s:441-485的相对应的氨基酸序列的CDR起始而来源的CDR。优选地，在本发明纳米抗体中的CDR序列和FR序列是这样的，以致本发明的纳米抗体(以及包括其的本发明的多肽)-以10—5-10"2摩尔/升或更小、并且优选地10:10"2摩尔/升或更小、并且更优选地10.S-10"摩尔/升的解离常数(KD)(即，以105-1012升/摩尔或更大、并且优选地107-1012升/摩尔或更大、且更优选地108-1012升/摩尔的缔合常数(KA))与VEGF结合；和/或是这样的，以致它们-以102m"s"—约107mv1,优选103m-V1國107mV1,更优选104M'V1-107M"s",诸如105M"s"-107M'V1的k^-速率与VEGF结合；和/或是这样的，以致它们-以Is"(t1/2=0.69s)-10—6s'1(提供具有多天的t1/2的几乎不可逆的复合体)，优选10-2S-1-10—6S"，更优选IO'3S-1-10—6S",诸如10—4S'1-10—6S"的k。ff速率与VEGF结合。优选地，在本发明的纳米抗体中的CDR序列和FR序列优选是这样的，以致它将以小于500nM,优选小于200nM，更优选小于10nM，诸如小于500pM的亲和性与VEGF结合。按照本发明的一个非限制性方面，纳米抗体可以是如本发明所定义的，但是具有这样的限制条件与天然存在的人VH结构域的相对应的构架区相比，并且特别是与DP-47的相对应的构架区相比，其在至少一个构架区具有至少"一个氨基酸差异"(如本发明所定义)。更特别地，按照本发明的一个非限制性方面，纳米抗体可以是如本发明所定义的，但是具有这样的限制条件与天然存在的人VH结构域的相对应的构架区相比，并且特别是与DP-47的相对应的构架区相比，其在至少一个标志残基处(包括在位置108，103和/或45的那些)具有至少"一个氨基酸差异"(如本发明所定义)。通常，纳米抗体应该在FR2和/或FR4中的至少一种中，并且特别是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基处(同样，包括在位置108，103和/或45的那些)与天然存在的VH结构域具有至少一个这样的氨基酸155关已差升°此外，人源化的本发明的纳米抗体可以如本文所定义，但是具有这样的限制条件与天然存在的VHH结构域的相对应的构架区相比，其在至少一个构架区具有"至少一个氨基酸差异"(如本文所定义)。更特别地，按照本发明的一个非限制性方面，人源化的纳米抗体可以如本发明所定义，但是具有下述限制条件:与天然存在的VHH结构域的相对应的构架区相比，其在至少一个标志残基处(包括在位置108,103和/或45的那些)具有至少"一个氨基酸差异"(如本文所定义)。通常，人源化的纳米抗体应该在FR2和/或FR4中的至少一个、并且特别是在FR2和/或FR4中的至少一个标志残基处(同样，包括在位置108,103和/或45的那些)关于天然存在的VHH结构域具有至少一个所述氨基酸差异。从本发明的公开内容应该清楚，使用如本文所定义的本发明的纳米抗体的天然或合成的类似物、突变体、变体、等位基因、同系物和直向同源物(本发明笼统称为"类/〃激")，并且特别是SEQIDNO，s:441-485的纳米抗体的类似物也在本发明的范围之内。因此，按照本发明的一个方面，术语"本发明的纳米抗体"在其最广泛意义上还涵盖所述类似物。通常，在所述类似物中，与如本发明所定义的本发明纳米抗体相比，一个或多个氨基酸残基可以被取代、删除和/或添加。这样的取代、插入或删除可以在一个或多个构架区和/或在一个或多个CDR内进行。当所述取代、插入或删除在一个或多个构架区内进行时，它们可以在一个或多个标志残基处和/或在构架残基中的一个或多个其它位置进行，尽管通常较不优选在标志残基处的取代、插入或删除(除非这些是如本发明所述的适当的人源化取代)。通过非限制性实例的方式，例如，取代可以是保守取代(如本文所述)和/或氨基酸残基可以被天然存在于另一个VHH结构域中相同位置处的另一个氨基酸残基取代(关于这样的取代的一些非限制性实例参见表A-5-A-8)，尽管本发明通常不限于此。因此，在本发明的范围内包括任何一个或多个取代、删除或插入，或它们的任何组合，所述取代、删除或插入或其组合改善本发明的纳米抗体的特性，或至少没有将本发明的纳米抗体的理想特性或理想特性的平衡或组合减损太多(g卩，到所述纳米抗体不再适合其目的应用的程度)。基于本发明的公开内容，以及任选地在有限程度的常规实验之后，例如，常规实验可以包括引入有限数目的可能的取代并且确定它们对这样获得的纳米抗体特性的影响，熟练的技术人员通常应该能够确定并且选择适当的取代、删除或插入、或它们的适当的组合。例如，并且取决于用于表达本发明的纳米抗体或多肽的宿主生物体，所述删除和/或取代可以以这样的方式设计，所述方式去除一个或多个翻译后修饰的位点(诸如一个或多个糖基化位点)，这应该在本领域技术人员的能力范围内。备选地，可以设计取代或插入，以引入一个或多个附着官能团(如本发明所述)的位点，例如，以允许位点-特异性的聚乙二醇化(pegylation)(同样如本文所述)。从在上述表A-5-A-8中提供的关于Vhh摘和Vhh可変性的数据可以看出，在构架区中的一些氨基酸残基比其它的更保守。通常，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此，优选在较不保守的位置进行任何取代、删除或插入。此外，通常，氨基酸取代优于氨基酸删除或插入。所述类似物优选是这样的，以致它们可以以如本发明关于本发明的纳米抗体所定义的亲和性(适当测量的和/或表示为Krr值(实际的或表观的)，KA-值(实际的或表观的)，kon-速率和/或k。ff"速率，或备选地表示为ICso值，如本发明进一步所述)结合VEGF。所述类似物优选地还是这样的，以致它们保留如本文所述的纳米抗体的有利特性。此外，按照一个优选的方面，所述类似物与SEQIDNOs441-485的一个纳米抗体具有至少70%、优选地至少80%、更优选地至少90%、诸如至少95%或99%或更大的序列同一性程度；和/或优选地具有至多20个、优选地至多10个、甚至更优选地至多5个、诸如4、3、2或仅有1个氨基酸差异(如本文所定义)。此外，所述类似物的构架序列和CDR优选是这样的，以致它们与本发明限定的优选的方面一致。更通常地，如本发明所述，所述类似物应该具有(a)在位置108的Q;和域(b)在位置45的带电荷氨基酸或半胱氨酸残基，并且优选在位置44为E，并且更优选在位置44为E和在位置45为R;和/或(c)在位置103的P,R或S。157本发明纳米抗体的类似物的一个优选的种类包括已经被人源化的纳米抗体(g卩，与天然存在的本发明的纳米抗体的序列相比较)。如在本发明引用的
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中提及的，这样的人源化通常包括用在人VH结构域如人VH3结构域中相同位置存在的氨基酸残基取代在天然存在的VHH序列中的一个或多个氨基酸残基。熟练的技术人员应该清楚可能的人源化取代的实例或人源化取代的组合的实例，例如，从本文的表格，从在本文引用的
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中提及的可能的人源化取代，和/或从纳米抗体序列和天然存在的人VH结构域序列之间的比较获知。所述人源化取代应该这样选择，以致所得到的人源化的纳米抗体仍然保留如本发明所定义的纳米抗体的有利特性，并且更优选这样选择，以致它们如在前段中关于类似物的描述。基于本发明的公开内容，并且任选地在有限程度的常规实验之后，熟练的技术人员通常能够确定并选择适当的人源化取代或适当的人源化取代的组合，所述常规实验包括，例如，引入有限数量的可能的人源化取代，并且确定它们对这样获得的纳米抗体的特性的影响。一般地，作为人源化的结果，本发明的纳米抗体可以变得更加"人-样"，同时仍然保留如本文所述的本发明的纳米抗体的有利特性。结果，与相对应的天然存在的VHH结构域相比，这样人源化的纳米抗体可以具有一些优点，诸如减小的免疫原性。同样，基于本发明的公开内容，并且任选在有限程度的常规实验之后，熟练的技术人员应该能够选择人源化取代或适当的人源化取代组合，其最优化或获得一方面在通过人源化取代提供的有利特性和另一方面在天然存在的VHH结构域的有利特性之间的需要的或适当的平衡。本发明的纳米抗体可以在任何构架残基处被适当人源化，诸如在一个或多个标志残基处(如本文所定义)或在一个或多个其它构架残基处(即，非标志残基)或它们的任何适当的组合。关于"P,R,S-103组"或"KERE组"的纳米抗体的一个优选的人源化取代是将Q108取代成L108。"GLEW种类"的纳米抗体也可以通过将Q108取代成L108被人源化，条件是其它标志残基中的至少一个含有骆驼科动物(骆驼源化)取代(如本文所定义)。例如，如上文所提及，人源化的纳米抗体的一个特别优选的种类在位置44-47具有GLEW或GLEW-样序列；在位置103具有P,R或S(并且特别是R)，并且在位置108具有L。人源化的和其它类似物，以及编码其的核酸序列，可以以本身已知的任何方式提供。例如，所述类似物可以这样获得通过提供编码天然存在的vhh结构域的核酸，将要被取代的一个或多个氨基酸残基的密码子改变成相对应的合乎需要的氨基酸残基的密码子(例如，通过位点定向诱变或通过使用适当错配的引物进行的PCR)，在适当的宿主或表达系统中表达这样获得的核酸/核苷酸序列；并且任选地分离和/或纯化这样获得的类似物，以提供基本上分离形式(如本文进一步所述)的所述类似物。这通常可以应用本身已知的方法和技术而进行，所述方法和技术应该是熟练的技术人员所清楚的，例如从手册和本文所引用的参考文献、本文引用的
背景技术：
和/或从本文的进一步描述中可知。备选地，编码所述需要的类似物的核酸可以以本身已知的方法合成(例如使用用于合成具有预先确定氨基酸序列的核酸序列的自动装置)，并且然后可以如本文所述进行表达。另一种技术可以包括组合一个或多个分别编码所述理想的类似物的一部分的天然存在的和/或合成的核酸序列，并且然后如本文所述表达所组合的核酸序列。此外，所述类似物可以使用相关氨基酸序列的化学合成而提供，其应用本身己知的肽合成技术，诸如本文所提及的那些技术。在这一方面，熟练的技术人员还应该清楚，本发明的纳米抗体(包括它们的类似物)还可以从人Vh序列(即，氨基酸序列或相对应的核苷酸序列)起始设计和/或制备，所述人Vh序列猪如例如人VH3序列，诸如DP-47、DP-51、或DP-29，即，通过引入一个或多个骆驼源化的取代(即，将在所述人VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基改变成在VHH结构域相对应位置存在的氨基酸残基)，以提供本发明的纳米抗体序列，和/或将纳米抗体的有利特性赋予这样获得的序列。同样地，这通常可以应用前段中提到的各种方法和技术进行，其应用人VH结构域的氨基酸序列和/或核苷酸序列作为起点。一些优选的而非限制性的骆驼源化取代可以来自表A-5-A-8。同样应该清楚，在一个或多个标志残基的骆驼源化取代通常将比在一个或多个其它氨基酸位置的取代对所需要的梧性有更大的影响，尽管这两种取代以及159它们的任何适当的组合均包括在本发明范围之内。例如，可以引入一个或多个已经赋予至少一些所需要的特性的骆驼源化取代，并且然后引入进一步的骆驼源化取代，其进一步改善所述特性和/或赋予额外的有利特性。同样地，基于本发明的公开内容，并且任选地在有限程度的常规实验之后，熟练的技术人员将通常能够确定并选择适当的骆驼源化取代或适当的骆驼源化取代的组合，所述常规实验可以包括，例如，引入有限数量的可能的骆驼源化取代，并且确定是否获得或改善纳米抗体的有利特性(即，与原始VH结构域相比)。然而，通常，这样骆驼源化的取代优选是这样的，以致所得到的氨基酸序列至少包含(a)在位置108的Q;和/或(b)在位置45的带电荷氨基酸或半胱氨酸残基，并且还优选在位置44的E，并且更优选在位置44的E和在位置45的R;和/或(c)在位置103的P,R或S;以及任选地一个或多个其它骆驼源化的取代。更优选地，所述骆驼源化的取代是这样的，以致它们导致本发明的纳米抗体和/或导致其类似物(如本文所定义)，诸如导致人源化的类似物和/或优选地导致在前段中定义的类似物。通过本文的公开内容还应该清楚，使用如本文所定义的本发明纳米抗体的部分或片段、或两个或更多个部分或片段的组合、并且特别是纳米抗体SEQIDNO's441-485的部分或片段也在本发明的范围之内。因此，按照本发明的一个方面，术语"本发明的纳米抗体"在其最广泛意义上还涵盖这样的部分或片段。通常，本发明的纳米抗体(包括其类似物)的这样的部分或片段具有这样的氨基酸序列，S卩，与相对应的本发明的全长纳米抗体(或其类似物)的氨基酸序列相比，其中已经删除和/或去除N末端的一个或多个氨基酸残基、C末端的一个或多个氨基酸残基、一个或多个邻接的内部氨基酸残基、或它们的任何组合。所述部分或片段优选是这样的，以致它们可以以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和性(适当测量的和/或表示为KD-值(实际的或表观的),KA-值(实际的或表观的),kon-速率禾B/或kofr速率，或备选地表示为IC5()值，如本文进一步所述)结合VEGF。任何部分或片段优选是这样的，以致其包括相对应的全长本发明的纳米抗体的氨基酸序列的至少10个连续的氨基酸残基，优选至少20个连续的氨基酸残基，更优选至少30个连续的氨基酸残基，诸如至少40个连续的氨基酸残基。此外，任何部分或片段优选是这样的，以致其包括CDR1、CDR2和/或CDR3中的至少一个或至少其部分(并且特别是至少CDR3或至少其部分)。更优选地，任何部分或片段是这样的，以致其包括至少一个CDR(并且优选至少CDR3或其部分)，和至少一个其它CDR(B卩，CDR1或CDR2)或至少其部分，优选通过适当的构架序列或至少其部分连接。更优选地，任何部分或片段是这样的，以致其包括至少一个CDR(且优选至少CDR3或其部分)，和至少两个剩余CDR的部分，同样优选通过适当的构架序列或至少其部分连接。按照另一个特别优选的但非限制性的方面，这样的部分或片段包括相对应的本发明全长纳米抗体的至少CDR3，诸如FR3、CDR3和FR4，艮卩，例如，如在国际申请WO03/050531(Lasters等)中所述。如上文己经提及，还可以组合两个或更多个这样的部分或片段(即，来自相同的或不同的本发明的纳米抗体)，即，以提供本发明纳米抗体的类似物(如本文所定义)和/或以提供其它部分或片段(如本文所定义)。例如，还可以将本发明纳米抗体的一个或多个部分或片段与人VH结构域的一个或多个部分或片段组合。按照一个优选的方面，所述部分或片段与SEQIDNOs:441-485中的一个纳米抗体有至少50%、优选地至少60%、更优选地至少70%、甚至更优选地至少80%、诸如至少90%、95%或99%或更多的序列同一性程度。所述部分和片段，以及编码其的核酸序列可以以本身已知的任何方式提供并且任选地组合。例如，所述部分或片段可以通过在编码本发明的全长纳米抗体的核酸中插入终止密码子，并且然后以本身已知的方式(例如，如本文所述)表达这样获得的核酸而获得。备选地，编码所述部分或片段的核酸可以这样获得，即，通过适当限制性酶切(restrict)编码本发明的全长纳米抗体的核酸或通过以本身已知的方式合成这样的核酸。部分或片段还可以使用本身己知的肽合成技术提供。本发明在其最广泛意义上还包括本发明的纳米抗体的衍生物。这样的衍生物通常可以通过本发明的纳米抗体和/或形成本发明的纳米抗体的一个或多个氨基酸残基的修饰而获得，并且特别是通过化学和/或生物(例如，酶促)修饰获得。熟练的技术人员应该清楚这样的修饰的实例，以及纳米抗体序列中可以以这样的方式修饰的氨基酸残基的实例(即，在蛋白主链上但是优选地在侧链上)，可以用来引入所述修饰的方法和技术以及所述修饰的潜在用途和优点。例如，这样的修饰可以包括向本发明的纳米抗体内或向本发明的纳米抗体上引入(例如，通过共价连接或以其它适当的方式)一个或多个官能团、残基或部分，并且特别是赋予本发明的纳米抗体一种或多种理想的特性或官能性的一个或多个官能团、残基或部分。熟练的技术人员应该清楚所述官能团的实例。例如，所述修饰可以包括引入(例如，通过共价结合或以任何其它适当的方式)一个或多个这样的官能团，即，所述官能团增加本发明的纳米抗体的半衰期、溶解性和/或吸收，减少本发明的纳米抗体的免疫原性和/或毒性，消除或减弱本发明的纳米抗体的任何不理想的副作用，和/或赋予本发明的纳米抗体和/或多肽其它的有利特性和/或减少本发明的纳米抗体和/或多肽的不理想特性；或者两种或多种上述的任何组合。所述官能团的实例以及引入所述官能团的技术的实例应该为熟练的技术人员清楚，并且通常可以包括上文引用的综合
背景技术：
中提^:的所有官能团和技术，以及本身已知的用于修饰药物蛋白并且特别用于修饰抗体或抗体片段(包括ScFv's和单结构域抗体)的官能团和技术，关于其的参考文献例如参考雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceuticalSciences),第16版，Mack出版公司，Easton,PA(1980)。例如，所述官能团可以直接连接(例如共价地)到本发明的纳米抗体上，或者任选地通过适当的接头或间隔臂(spacer)连接，这也为熟练的技术人员所清楚。关于增加药物蛋白半衰期和/或减少药物蛋白的免疫原性最广泛应用的一种技术包括适当的药用聚合物诸如聚(乙二醇)(PEG)或其衍生物(诸如甲氧基聚(乙二醇)或mPEG)的附着。一般地，可以应用聚乙二醇化作用的任何适当的形式，诸如本领域中用于抗体和抗体片段(包括但不限162于(单)结构域抗体和ScFv，s)的聚乙二醇化作用；例如，参考Chapman,自然生物技术(Nat.Biotechnol.),54,531-545(2002);Veronese和Harris,高级药物递送综述(Adv.DrugDeliv.Rev.)54，453-456(2003),Harris和Chess,自然药物发现综述(Nat.Rev.Drug.Discov.)，2,(2003)以及在WO04/060965中。用于蛋白聚乙二醇化的各种试剂还可以商购，例如从美国Nektar治疗公司(NektarTherapeutics)购得。优选地，应用定向聚乙二醇化，特别是通过半胱氨酸-残基(参见例如Yang等，蛋白质工程(ProteinEngineering)，16,10,761-770(2003)。例如，为了这一目的，PEG可以附着到在本发明的纳米抗体中天然存在的半胱氨酸残基上，本发明的纳米抗体可以这样进行修饰，以适当地引入一个或多个用于PEG附着的半胱氨酸残基，或者可以将包括一个或多个用于PEG附着的半胱氨酸残基的氨基酸序列融合到本发明的纳米抗体的N-和/或C-端，全部应用本身为熟练的技术人员所了解的蛋白质加工技术。优选地，对于本发明的纳米抗体和蛋白，使用具有大于5000的分子量的PEG,所述分子量诸如大于10,000并且小于200,000，诸如小于100,000;例如在20,000-80,000范围内。另一种通常较不优选的修饰包括N-连接的或O-连接的糖基化，通常作为共翻译和/或翻译后修饰的一部分，其取决于为了表达本发明的纳米抗体或多肽所用的宿主细胞。另一种修饰可以包括引入一种或多种可检测的标记或其它信号-产生基团或部分，这取决于所标记纳米抗体的目的用途。适宜的标记以及附着、使用和检测它们的技术是熟练的技术人员所清楚的，并且例如包括但不限于，荧光标记(诸如荧光素、异硫氰酸酯、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二醛(o-phthaldehyde)、以及荧光胺和荧光素金属诸如152Eu或其它来自镧系的金属)，磷光性标记、化学发光标记或生物发光标记(诸如鲁米那、异鲁米诺、theromatic吖啶酯(acridiniumester)、咪唑、acridinium盐、草酸酯、二氧杂环丁垸或GFP及其类似物)，放射性-同位素(诸如3H,"I,32p,35S,"C，"Cr,36Cl，"Co,58Co,59Fe和75Se)，金属、金属螯合物或金属阳离子(例如金属阳离子诸如99mTc，123I，mIn,131I,97Ru，67Cu,67Ga和68Ga，或其它特别适合用于体内、体外或原位诊断和成像的金属或金属阳离子，诸如(^Gd，55Mn,162Dy，52Cr和56Fe))，以及发色团和酶(诸如苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、A-V-类固醇异构酶、酵母醇脱氢酶、a-磷酸甘油脱氢酶、丙糖磷酸异构酶、生物素-抗生物素蛋白过氧化物酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡糖氧化酶、卩-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、脲酶、过氧化氢酶、葡萄糖-VI-磷酸脱氢酶、葡萄糖淀粉酶和乙酰胆碱酯酶)。其它适宜的标记为熟练的技术人员所清楚，并且例如包括可以应用NMR或ESR光谱检测的部分。例如，这样标记的本发明的纳米抗体和多肽可以用于体外、体内或原位检测(包括本身已知的免疫检测，诸如ELISA,RIA,EIA和其它"夹心式检测"等)，以及体内诊断和成像目的，这取决于特定的标记的选择。熟练的技术人员应该清楚，另一种修饰可以包括引入螯合基团，例如以螯合上文提到的金属或金属阳离子中的一种。例如，适当的螯合基团包括但不限于二乙烯三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。另一种修饰可以包括引入作为特异性结合对诸如生物素-(链霉)抗生物素蛋白结合对的一部分的官能团。这样的官能团可以用来将本发明的纳米抗体与另一种蛋白、多肽或化学化合物结合，所述另一种蛋白、多肽或化学化合物与所述结合对的另一半结合，即，通过形成所述结合对。例如，本发明的纳米抗体可以缀合到生物素上，并且连接到与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的另一种蛋白、多肽、化合物或载体上。例如，这样缀合的纳米抗体可以用作报道子，例如在产生可检测的信号的试剂与抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白缀合的诊断系统中用作报道子。例如，这种结合对还可以用来将本发明的纳米抗体与载体结合，所述载体包括适用于药物目的的载体。一个非限制性的实例是Cao和Suresh,药物耙向杂志(JournalofDrugTargetting),8,4，257(2000)所述的脂质体制剂。这种结合对还可以用来将治疗活性剂与本发明的纳米抗体结合。对于一些应用，特别是对于意欲杀死表达本发明的纳米抗体所针对的靶标的细胞(例如，在治疗癌症时)，或者意欲减少或减缓所述细胞的生长和/或增殖的那些应用中，本发明的纳米抗体还可以与毒素或者毒性基或部分连接。例如，可以与本发明的纳米抗体连接以提供细胞毒性化合物的毒性部分、化合物或残基的实例对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如，可以在上文引用的现有技术和/或本文的进一步描述中找到。一个实例是在WO03/055527中描述的所谓的ADEPTtm技木。熟练的技术人员应该清楚其它潜在的化学和酶促修饰。这种修饰还可以为研究目的引入(例如，为了研究功能-活性关系)。例如，参考Limdblad和Bradshaw,生物技术和应用生物化学(Biotechnol.Appl.Biochem.)，26，143-151(1997)。优选地，所述衍生物是这样的，以致它们以如本文关于本发明的纳米抗体所定义的亲和性(适当测量和/或表示为KD-值(实际的或表观的),KA-值(实际的或表观的)，k。n-速率和域kofr速率，或备选地为ICso值，如本文进一步所述)与VEGF结合。如上文提及，本发明还涉及基本上由至少一个本发明的纳米抗体组成或包括至少一个本发明的纳米抗体的蛋白或多肽。"基本上由……组成"意指本发明的多肽的氨基酸序列与本发明纳米抗体的氨基酸序列完全相同，或者与本发明纳米抗体的氨基酸序列相对应，其将有限数目的氨基酸残基，诸如1-20个氨基酸残基，例如1-10个氨基酸残基并且优选地1-6个氨基酸残基，诸如1,2,3,4,5或6个氨基酸残基添加到所述纳米抗体的氨基酸序列的氨基末端、羧基末端或者氨基末端和羧基末端两端。所述氨基酸残基可以或者可以不变化、改变或者另外影响所述纳米抗体的(生物学)特性，并且可以或者可以不为所述纳米抗体添加其它的官能性。例如，所述氨基酸残基-可以包括N-端Met残基，例如，作为在异源宿主细胞或宿主生物体内表达的结果；-可以形成信号序列或前导序列，当合成时其引导所述纳米抗体从宿主细胞中分泌。适宜的分泌性前导肽应该是熟练的技术人员所清楚的，并且可以是本文进一步所述的。通常，这样的前导序列与所述纳米抗体的N端连接，尽管本发明在其最广泛意义上不限于此；-可以形成这样的序列或信号，即，所述序列或信号允许所述纳米抗体导向和/或透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或所述序列或信号允许所述纳米抗体透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。165所述氨基酸序列的实例对于熟练的技术人员是清楚的。一些非限制性的实例是在WO03/026700和Temsamani等，生物学治疗的专家观点(ExpertOpin.Biol.Ther,),1,773(2001);Temsamani和Vidal,今日药物发现(DrugDiscov.Today),9,1012(004)以及Rousselle,药理学和实验治疗学杂志(J.Pharmacol.Exp.Ther.)，296,124-131(2001)中所述的小肽载体("Pep-trans载体")，和由Zhao等，程序性细胞死亡(Apoptosis),8,631-637(2003)所述的膜易位体序列。例如，用于抗体片段细胞内靶向的C端和N端氨基酸序列由Cardinale等，方法(Methods),34,171(2004)所述。关于细胞内靶向的其它适宜的技术包括所谓的"细胞内抗体(intrabody)"的表达和/或应用，所述"细胞内抗体"包括本发明的纳米抗体，如下文所提及；-可以形成"标记"，例如允许或促进所述纳米抗体的纯化的氨基酸序列或残基，例如使用针对所述序列或残基的亲和技术进行纯化。然后，所述序列或残基可以被去除(例如，通过化学或酶促裂解)，以提供纳米抗体序列(为了这一目的，所述标记可以任选地通过可裂解的接头序列与所述纳米抗体序列连接或包含可裂解的基序)。这种残基的一些优选的但非限制性的实例是多组氨酸残基、谷胱甘肽(glutatione)残基以及myc-标记(例如，参见WO06/12282的SEQIDNO:31)。-可以是己经被官能化和/或可以作为官能团附着的位点的一个或多个氨基酸残基。适宜的氨基酸残基和官能团应该是熟练的技术人员所清楚的，并且包括但不限于，本文为本发明的纳米抗体的衍生物提及的氨基酸残基和官能团。按照另一个方面，本发明的多肽包括本发明的纳米抗体，所述纳米抗体在其氨基末端、在其羧基末端、或者在其氨基末端和其羧基末端两端融合至少一个其它氨基酸序列，即，以提供包括所述本发明的纳米抗体和一个或多个其它氨基酸序列的融合蛋白。这种融合体在本文还叫作"纳米抗体融合体"。所述一个或多个其它氨基酸序列可以是任何适宜的和/或需要的氨基酸序列。所述其它氨基酸序列可以或可以不变化、改变或另外影响所述纳米抗体的(生物学)特性，并且可以或可以不为本发明的纳米抗体或多肽加入其它的官能性。优选地，所述其它氨基酸序列是这样的，以致它赋予本发明的纳米抗体或多肽一种或多种需要的特性或官能性。例如，所述其它氨基酸序列还可以提供第二结合位点，所述结合位点可以针对任何需要的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位(包括但不限于与本发明的纳米抗体所针对的相同的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位，或不同的蛋白、多肽、抗原、抗原决定簇或表位)。这样的氨基酸序列的实例是熟练的技术人员所清楚的，并且通常可以包括基于常规抗体及其片段(包括但不限于ScFv's和单结构域抗体)的用于肽融合的所有氨基酸序列。例如，参考Holliger和Hudson,自然生物技术(NatureBiotechnology),23，9,1126-1136(2005)的综述。例如，与本发明的纳米抗体本身相比，这样的氨基酸序列可以是这样的氨基酸序列，即，其增加本发明的多肽的半衰期、溶解性、或吸收，减少本发明的多肽的免疫原性或毒性，消除或减弱本发明的多肽的不理想的副作用，和/或赋予本发明的多肽其它有利的特性和/或减少本发明的多月太的不理想特性。所述氨基酸序列的一些非限制性实例为血清蛋白，诸如人血清白蛋白(参见，例如WO00/27435)或半抗原分子(例如被循环抗体识别的半抗原，参见例如WO98/22141)。特别地，在本领域已经描述将免疫球蛋白的片段(诸如Vh結枸域)与血清白蛋白或其片段连接可以用来增加半衰期。参考WO00/27435和WO01/077137。按照本发明，本发明的纳米抗体优选与血清白蛋白(或与其适当的片段)直接连接或通过适当的接头连接，并且特别地通过适当的连接肽连接，以致本发明的多肽可以作为遗传融合体(蛋白)表达。按照一个特定的方面，本发明的纳米抗体可以与至少包括血清白蛋白的结构域ni或其部分的血清白蛋白的片段连接。例如，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年3月31日提交的题目为"白蛋白来源的氨基酸序列，其用于提高治疗用蛋白的半衰期的应用以及包括其的其它治疗用蛋白和实体、以及丰勾建体的应用(爿/6ww/"cfen.ved"mz."oflc/d1se<grwe"c&f/zereo/y^rew故/as,awdco"Wrwchcompn.w."gf/zesame)"的美国临日寸申i青60/788,256(也参见PCT/EP2007/002817)。备选地，所述其它氨基酸序列可以提供针对血清蛋白(诸如例如，人血清白蛋白或其它血清蛋白如IgG)的第二结合位点或结合单位，以在血清中提供增加的半衰期。例如，所述氨基酸序列包括下文所述的纳米抗体，以及在WO91/01743,WO01/45746和WO02/076489中所述的小肽和结合蛋白，和在WO03/002609与WO04/003019中所述的dAb，s。还参考Harmsen等.,疫苗(Vaccine),23(41);4926-42，2005,以及EP0368684，以及本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的下述美国临时申请60/843,349(还参见PCT/EP2007/059475)，60/850,774(还参见PCT/EP2007/060849),60/850,775(还参见PCT/EP2007/060850)和埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年12月5日提交的题目为"能够结合血清蛋白的月太(户e/"dasca/a6/eo/Zz'wW"g/o/ra&zVw)"的美国临时申请(还参见PCT/EP2007/063348)。所述氨基酸序列可以特别针对血清白蛋白(并且更特别地针对人血清白蛋白)和/或针对IgG(并且更特别地针对人IgG)。例如，所述氨基酸序列可以是针对(人)血清白蛋白的氨基酸序列和可以与在(人)血清白蛋白上不参与血清白蛋白与FcRn的结合的氨基酸残基结合的氨基酸序列(参见，例如WO06/0122787)和/或能够与在血清白蛋白上不形成血清白蛋白的结构域III的部分的氨基酸残基结合的氨基酸序列(同样参见，例如WO06/0122787);具有或可以提供增加的半衰期的氨基酸序列(参见，例如，埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年9月8日提交的题目为"具有长半衰期的血清白蛋白结合蛋白(&n/附a/6wm/wW"d/"g/ra^/raw她/(wg)"的美国临时申请60/843,349;还参见PCT/EP2007/059475);与来自至少一个哺乳动物物种的、并且特别是与至少一个灵长类动物物种(诸如但不限于，来自猕猴属(M"C"M)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(MflCflca/a^/cM/an'力)和/或恒河猴(恒河猴(Macacamw/afto)))和狒狒(豚尾狒狒CPaj^'owra/m))的血清白蛋白交叉反应的针对人血清白蛋白的氨基酸序列(同样参考美国临时申请60/843,349和PCT/EP2007/059475);可以以不依赖pH方式结合血清白蛋168白的氨基酸序列(参见，例如，埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年10月11日提交的题目为"以基本上不依赖pH的方式结合血清白蛋白的氨基酸序列，包含其的化合物及其应用G4/^"oac^化^e"c"toserwwprafez>wZwa决afes^e油'a〃yzW印ewcfe"fo/f/zecompow"^iscompn\yz>2g//2esa附e，a"(iwsas^zereo力"的美国临时申i青60/850,774;还参见PCT/EP2007/059475)，和/或是条件粘合物的氨基酸序列(例如，参见埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)于2006年10月11日提交的题目为"以条件方式结合需要的分子的氨基酸序列(^m>20化(^e"casf/wf6zWtoacfes7>-ed附o/ecw/e/"a的美国临时申请60/850,775;还参见PCT/EP2007/060850)。按照另一个方面，所述一个或多个其它氨基酸序列可以包括常规4链抗体(且特别是人抗体)和/或重链抗体的一个或多个部分、片段或结构域。例如，尽管通常较不优选，本发明的纳米抗体可以与常规(优选人)VH或Vl结构域连接或者与VH或结构域的天然的或合成的类似物连接，同样任选地通过接头序列(包括但不限于其它(单)结构域抗体，诸如Ward等所述的dAb's)连接。所述至少一个纳米抗体还可以与一个或多个(优选人的)CH1、Ch2和/或CH3结构域连接，这任选地通过接头序列连接。例如，与造宜的Ch1結构域连接的纳米抗体，可以例如一一与适当的轻链一起一—用来产生类似.于常规Fab片段或F(ab')2片段的抗体片段/结构，但是其中一个或者(在F(ab，)2片段的情形中)一个或两个常规VH结构域已被本发明的纳米抗体取代。此外，两个纳米抗体可以与CH3结构域(任选通过接头)连接，以提供具有增加的体内半衰期的构建体。按照本发明的多肽的一个具体的方面，一个或多个本发明的纳米抗体可以与一个或多个恒定结构域(例如，可以用作Fc部分的一部分/用于形成Fc部分的2或3个恒定结构域)、与Fc部分和/或与一个或多个抗体部分、片段或结构域连接(任选地通过适当的接头或铰链区)，所述抗体部分、片段或结构域赋予本发明的多肽一种或多种效应子功能，和/或可以赋予与一个或多个Fc受体结合的能力。例如，为了这一目的，并且不限于此，所述一个或多个其它氨基酸序列可以包括抗体、诸如来自重链抗体(如本文所述)并且更优选来自常规人4-链抗体的一个或多个CH2和/或CH3结构域；和/或可以形成Fc区域的(部分)和Fc区域，例如来自IgG(例如，来自IgGl，IgG2，IgG3或IgG4)，来自IgE或来自另一种人Ig，诸如IgA,IgD或IgM。例如，WO94/04678描述了包括骆驼科动物VHH结构域或其人源化的衍生物的重链抗体(即，纳米抗体)，其中所述骆驼科动物CH2和/或Ch3结构域已被人CH2和CH3结构域取代，以提供由2条重链组成的免疫球蛋白，其中每条重链包括纳米抗体和人CH2与CH3结构域(但是无CHl结构域)，所述免疫球蛋白具有由所述Ch2和Ch3结构域提供的效应子功能，并且所述免疫球蛋白可以在无需任何轻链的存在下行使功能。熟练的技术人员应该清楚可以适当与本发明的纳米抗体连接以提供效应子功能的其它氨基酸序列，并且可以基于所需要的效应子功能进行选择。例如，参考WO04/058820,WO99/42077，WO02/056910和WO05/017148,以及Holliger和Hudson,同前所述的综述，以及参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的题目为"包括单可变结构域和来自于IgE的Fc部分的构建体(Gm^ractoccw戸'w'"gw."g/evor/a6/ecfow"/ra朋daw尸c^n》W/ram的未重新公布的美国临时申请，该申请的提交日期为2007年12月4日。与相对应的本发明的纳米抗体相比，本发明的纳米抗体与Fc部分偶联也可以导致提高的半衰期。对于一些应用，使用赋予提高的半衰期而无任何生物学显著效应子功能的Fc部分和/或恒定结构域(即，CH2和/或CH3结构域)也可以是适当的或者甚至是优选的。熟练的技术人员应该清楚包括具有提高的体内半衰期的一个或多个纳米抗体和一个或多个恒定结构域的其它适当的构建体，并且例如，其可以包括与CH3结构域连接的两个纳米抗体，任选地通过接头序列连接。通常，具有提高的半衰期的任何融合蛋白或衍生物将优选具有大于50kD的分子量，50kD是肾吸收的截断值。在另一个特定的但非限制性的方面中，为了形成本发明的多肽，可以将一个或多个本发明的氨基酸序列连接到(任选地通过合适的接头或铰链区)天然存在的、合成的或半合成的恒定结构域(或其类似物、变体、突变体、部分或片段)上，其具有减小的(或基本上没有)自我缔合成二聚体的趋向性(即，与在常规4链抗体中天然存在的恒定结构域相比)。所述单体(即，无自我缔合)Fc链变体，或其片段，对于熟练的技术人员是清楚的。例如，Helm等.，生物化学杂志(JBiolChem)19962717494,描述了可以用在本发明的多肽链中的单体Fcs链变体。此外，所述单体Fc链变体优选是这样的，以致它们仍然能够结合互补的或相关的Fc受体(取决于它们所来源的Fc部分)，和/或是这样的，以致它们仍然具有它们所来源自其中的Fc部分的一些或全部的效应子功能(或处于降低的但仍然适于目的应用的水平)。备选地，在这样的本发明的多肽链中，单体Fc链可以用来对该多肽链赋予提高的半衰期，在该情形中，所述单体Fc链也可以不具有或基本上不具有效应子功能。二价/多价、双特异性/多特异性或双互补性/多互补性的本发明的多肽还可以与Fc部分连接，以提供在2007年12月4日提交的题目为"免疫球蛋白构建体(z>wmmog/o^/z>zcora/racto)"的未重新公布的美国临时申请中所述的类型的多肽构建体。所述其它氨基酸序列还可以形成信号序列或前导序列，当合成时其引导本发明的纳米抗体或多肽从宿主细胞中分泌(例如，以提供本发明的多肽的前体-(pre-)、原-(pro-)或前原-(prepro-)形式，这取决于用来表达本发明的多肽的宿主细胞)。所述其它氨基酸序列还可以形成这样的序列或信号，即，所述序列或信号允许本发明的纳米抗体或多肽导向和/或透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或所述序列或信号允许本发明的纳米抗体或多肽透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述氨基酸序列的适当的实例对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如包括但不限于，上文提及的"Peptrans"载体，Cardinale等描述的序列，以及本身己知的可以用来将本发明的纳米抗体和多肽表达或生产为所述"细胞内抗体"的氨基酸序列和抗体片段，例如，如在WO94/02610，WO95/22618,US-A画7004940，WO03/014960，WO99/07414;WO05/01690;EP1512696;和Cattaneo，A.与Biocca,S.(1997)细胞内抗体开发和应用(IntracellularAntibodies:DevelopmentandApplications).Landes禾口Springer-Verlag;以及在Kontermann,方法(Methods)34,(2004),163-170，以及本发明所述的其它参考文献中所述。m对于一些应用，特别是对于意欲杀死表达本发明的纳米抗体所针对的靶标的细胞(例如，在治疗癌症时)，或者意欲减少或减缓所述细胞的生长和/或增殖的那些应用中，本发明的纳米抗体还可以与(细胞)毒性蛋白或多肽连接。例如，可以与本发明的纳米抗体连接以提供本发明的细胞毒性多肽的所述毒性蛋白和多肽的实例对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如，可以在上文引用的现有技术和/或本文的进一步描述中找到。一个实例是在WO03/055527中所述的所谓的ADEPTtm技木。按照一个优选但非限制性的方面，所述一个或多个其它氨基酸序列包括至少一个其它的纳米抗体，以提供包括至少两个、诸如三个、四个、五个或更多个纳米抗体的本发明的多肽，其中所述纳米抗体可以任选地通过一个或多个接头序列(如本文所定义)连接。包括两个或更多个纳米抗体的本发明的多肽，其中至少一个是本发明的纳米抗体，在本发明中还将称为本发明的"多价"多肽，并且在所述多肽中存在的纳米抗体还将在本发明中称为处于"多价形式"。例如，本发明的"二价"多肽包括2个纳米抗体，任选地通过一个接头序列连接，而本发明的"三价"多肽包括3个纳米抗体，任选地通过两个接头序列连接；等等；其中在所述多肽中存在的至少一个纳米抗体，并且多达在所述多肽中存在的所有纳米抗体，是本发明的纳米抗体。在本发明的多价多肽中，所述两个或更多个纳米抗体可以是相同的或不同的，并且可以针对同一抗原或抗原决定簇(例如，针对相同部分或表位或者针对不同部分或表位)，或可以备选地针对不同的抗原或抗原决定簇；或它们的任何适当的组合。例如，本发明的二价多肽可以包括(a)2个相同的纳米抗体；(b)针对蛋白或抗原的第一抗原决定簇的第一纳米抗体，和针对所述蛋白或抗原的同一抗原决定簇的第二纳米抗体，所述第二纳米抗体不同于所述第一纳米抗体；(c)针对蛋白或抗原的第一抗原决定簇的第一纳米抗体，和针对所述蛋白或抗原的另一个抗原决定簇的第二纳米抗体；或(d)针对第一蛋白或抗原的第一纳米抗体，和针对第二蛋白或抗原(即，与所述第一抗原不同)的第二纳米抗体。类似地，本发明的三价多肽可以，例如但不限于此，包括(a)3个相同的纳米抗体；(b)针对抗原的第一抗原决定簇的两个相同的纳米抗体，和针对同一抗原的不同抗原决定簇的第三纳米抗体；(C)针对抗原的第一抗原决定簇的两个相同的纳米抗体，和针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第三纳米抗体；(d)针对第一抗原的第一抗原决定簇的第一纳米抗体，针对所述第一抗原的第二抗原决定簇的第二纳米抗体，和针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第三纳米抗体；或(e)针对第一抗原的第一纳米抗体，针对不同于所述第一抗原的第二抗原的第二纳米抗体，和针对不同于所述第一和第二抗原的第三抗原的第三纳米抗体。在本发明的一个优选方面中，本发明的二价多肽是本发明的多肽(如本文定义)，其包括针对VEGF上关于VEGFR-1的结合位点的第一纳米抗体，和针对VEGF上关于VEGFR-2的结合位点的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文定义)连接。包含至少两个纳米抗体的本发明的多肽，其中至少一个纳米抗体针对第一抗原(即，VEGF)，并且至少一个纳米抗体针对第二抗原(即，不同于VEGF的抗原)，所述多肽还叫作本发明的"多特异性"多肽，并且存在于所述多肽中的纳米抗体在本文中还叫作处于"多特异性形式"。因此，例如，本发明的"双特异性"多肽是包括至少一个针对第一抗原(即VEGF)的纳米抗体和至少一个针对第二抗原(即，不同VEGF的抗原)的其它纳米抗体的多肽，而本发明的"三特异性"多肽是这样的多肽，S卩，其包括至少一个针对第一抗原(即VEGF)的纳米抗体，至少一个针对第二抗原(即，不同于VEGF的抗原)的其它纳米抗体，和至少一个针对第三抗原(即，不同于所述第一、和所述第二抗原二者)的其它纳米抗体；等等。因此，在另一种形式中，本发明的双特异性多肽是本发明的二价多肽(如本文所定义)，其包括针对VEGF的第一纳米抗体，和针对第二抗原的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文所定义)而连接；而以其最简单形式存在的本发明的三特异性多肽是本发明的三价多肽(如本文所定义)，其包括针对VEGF的第一纳米抗体，针对第二抗原的第二纳米抗体，和针对第三抗原的第三纳米抗体，其中所述第一、第二和第三纳米抗体可以任选地通过一个或多个，并且特别是一个或多个特别是两个接头序列连接。在本发明的一个优选的方面中，本发明的双特异性多肽是本发明的二价多肽(如本文定义)，其包括针对VEGF的第一纳米抗体，和针对VEGF受体的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文所定义)而连接。本发明的双特异性多肽可以是本发明的二价多肽(如本文定义)，其包括针对VEGF的第一纳米抗体和针对VEGFR-1的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文所定义)而连接；此外，本发明的双特异性多肽是本发明的二价多肽(如本文定义)，其包括针对VEGF的第一纳米抗体，和针对VEGFR-2的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文所定义)而连接。在本发明的另一个优选的方面中，本发明的双特异性多肽是本发明的二价多肽(如本文定义)，其包括针对VEGF的第一纳米抗体，和针对肿瘤抗原的第二纳米抗体，其中所述第一和第二纳米抗体可以任选地通过接头序列(如本文定义)连接。所述本发明的纳米抗体通过双特异性多肽的靶向将导致所述纳米抗体的低系统暴露和在肿瘤部位存在高浓度的所述纳米抗体，其可以提高肿瘤治疗的功效，同时减少使用当前治疗法观察到的副作用。然而，如通过上文所述所清楚的，本发明不限于此，在该意义上，本发明的多特异性多肽可以包括至少一个针对VEGF的纳米抗体，和任何数量的针对一个或多个不同于VEGF的抗原的纳米抗体。此外，尽管在本发明的范围内包括，在本发明的多肽中的多个纳米抗体的特定顺序或排列可以对最终本发明的多肽的特性具有一些影响(包括但不限于针对VEGF、或针对一个或多个其它抗原的亲和性、特异性或亲和力)，所述顺序或排列通常不是重要的，并且可以由熟练的技术人员适当地选择，任选地在本文的公开内容的基础上在经过一些有限的常规实验后选择。因此，当参考本发明的特定的多价或多特异性多肽时，应该注意，这包括相关纳米抗体的任何顺序或排列，除非另外明确指明。最后，本发明的多肽包含两个或更多个纳米抗体以及一个或多个其它氨基酸序列(如本发明所提及)也在本发明的范围之内。对于包含一个或多个VHH结构域的多价和多特异性多肽及其制备，还参考Conrath等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.),巻276,10.7346-7350,2001;Muyldermans,分子生物技术综述(ReviewsinMolecularBiotechnology)74(2001)，277-302;以及例如，WO96/34103和WO99/23221。本发明的一些具体的多特异性和/或多价多肽的一些其它实例可以在本发明所引用的埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的申请中找到。本发明的多特异性多肽的一个优选而非限制性的实例包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个提供增加的半衰期的纳米抗体。所述纳米抗体可以例如是这样的纳米抗体，其针对血清蛋白、且特别针对人血清蛋白，所述血清蛋白诸如人血清白蛋白、甲状腺素结合蛋白、(人)运铁蛋白、血纤蛋白原、免疫球蛋白如IgG、IgE或IgM，或是针对WO04/003019中列出的一种血清蛋白。在这些之中，可以结合血清白蛋白(且特别是人血清白蛋白)或IgG(且特别是人IgG，参见例如，Muyldermans，同前所述的综述中描述的纳米抗体VH-1)的纳米抗体是特别优选的(尽管，例如，对于在小鼠或灵长类动物中的实验，可以使用分别针对或与小鼠血清白蛋白(MSA)或来自所述灵长类动物的血清白蛋白交叉反应的纳米抗体。然而，对于药学用途，通常优选针对人血清白蛋白或人IgG的纳米抗体)。提供增加的半衰期并且可以用于本发明的多肽中的纳米抗体包括在下列各项中所述的针对血清白蛋白的纳米抗体WO04/041865,WO06/122787和埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)其它专利申请，诸如上文引用的那些。例如，用于本发明提供增加的半衰期的所述一些优选的纳米抗体包括可以与在(人)血清白蛋白上不参与血清白蛋白与FcRn的结合的氨基酸残基结合的纳米抗体(参见，例如WO06/0122787);能够与在血清白蛋白上不形成血清白蛋白的结构域III的部分的氨基酸残基结合的纳米抗体(参见，例如WO06/0122787);具有或可以提供增加的半衰期的纳米抗体(参见，例如，本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的美国临时申请60/843,349;还参见PCT/EP2007/059475);与来自至少一个哺乳动物物种的、并且特别是与至少一个灵长类物种(诸如但不限于，来自猕猴属(M"Mca)的猴子(诸如，并且特别地，食蟹猴(食蟹猴(Afoc^a/osc/ra/an;s))禾口/或恒河猴(恒河猴(Afacacaww/arta)))和狒狒(豚尾狒狒175CP^Zowra/m^))的血清白蛋白交叉反应的针对人血清白蛋白的纳米抗体(见例如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的美国临时申请60/843,349和PCT/EP2007/059475);可以以不依赖pH方式结合血清白蛋白的纳米抗体(参见，例如，本文提及的埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的美国临时申请60/850,774;还参见PCT/EP2007/060849)，和/或是条件粘合物的纳米抗体(例如，参见埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的美国临时申请60/850,775;还参见PCT/EP2007/060850)。提供增加的半衰期且可以用在本发明的多肽中的一些特别优选的纳米抗体包括在WO06/122787中公开的纳米抗体ALB-1到ALB-10(见表II和III)，其中ALB-8(WO06/122787中的SEQIDNO:62)是特别优选的。SEQIDNO's:576-677给出了本发明多肽的一些优选的但非限制性的实例，其包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个提供增加的半衰期的纳米抗体。按照本发明一个特定但非限制性的方面，除了一个或多个本发明的纳米抗体之外，本发明的多肽还包含至少一个针对人血清白蛋白的纳米抗体。通常，包括一个或多个本发明的纳米抗体的具有提高的半衰期的任何本发明的多肽，具有提高的半衰期的本发明的纳米抗体的任何衍生物或所述多肽的任何衍生物，优选地具有是相对应的本发明的纳米抗体本身的半衰期的至少1.5倍、优选地至少2倍、如至少5倍、例如至少10倍或超过20倍的半衰期。例如，与相对应的本发明的纳米抗体本身相比，具有增加的半衰期的所述衍生物或多肽可以具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的半衰期。在本发明的一个优选而非限制性方面中，所述衍生物或多肽在人中表现出至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期。例如，所述衍生物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的半衰期。按照本发明的一个方面，所述多肽能够与可以增加所述多肽的体内半衰期的一个或多个分子结合。本发明的多肽在体内是稳定的，并且它们的半衰期通过与抗降解和/或清除或螯合的分子结合来增加。典型地，所述分子是本身具有长久的体内半衰期的天然存在的蛋白。本发明的多特异性多肽的另一个优选而非限制性的实例包括至少一个本发明的纳米抗体和至少一个这样的纳米抗体，§卩，所述纳米抗体引导本发明的多肽，和/或允许本发明的多肽透过或进入特异性的器官、组织、细胞、或者细胞的部分或区室，和/或允许所述纳米抗体透过或穿过生物屏障诸如细胞膜、细胞层诸如上皮细胞层、肿瘤包括实体瘤、或血脑屏障。所述的纳米抗体的实例包括针对所需要的器官、组织或细胞的特异性的细胞表面蛋白、标记或表位(例如，与肿瘤细胞相关的细胞表面标记)的纳米抗体，和在WO02/057445和WO06/040153中描述的单结构域耙向脑的抗体片段，其中FC44(WO06/040153的SEQIDNO:189)和FC5(WO06/040154的SEQIDNO:190)是优选的实例。在本发明的多肽中，所述一个或多个纳米抗体和所述一个或多个多肽可以直接彼此连接(例如在WO99/23221中所述)和/或可以通过一个或多个适宜的间隔臂或接头或其任意组合而彼此连接。用于多价和多特异性多肽的适宜的间隔臂或接头应该是熟练的技术人员所清楚的，并且通常可以是本领域用来连接氨基酸序列的任何接头或间隔臂。优选地，所述接头或间隔臂适合用于构建意欲药用的蛋白或多肽。一些特别优选的间隔臂包括本领域中用于连接抗体片段或抗体结构域的间隔臂和接头。这些包括上文所引用的公知
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中提及的接头，以及例如在本领域中用于构建双抗体或ScFv片段的接头(在这一方面，然而，应该注意，尽管在双抗体和在ScFv片段中，所用的接头序列应该具有某种长度、某种程度的柔性以及允许相关的Vh和VL结构域靠近在一起形成完整的抗原-结合位点的其它特性，但是，由于每一纳米抗体本身形成完整的抗原-结合位点，所以对于用于本发明的多肽的接头的长度或柔性没有特别的限制)。例如，接头可以是适当的氨基酸序列，并且特别是1-50、优选1-30、177诸如i-io个氨基酸残基的氨基酸序列。所述氨基酸序列的一些优选实例包括gly-ser接头，例如，(glyxsery)z型的，诸如(例如(gly4ser)3或(gly3ser2)3，如在WO99/42077中所述，和在本文提及的Ablynx的申请中所述的GS30,GS15，GS9和GS7接头(参见，例如，WO06/040153和WO06/122825)，以及铰链样区域如天然存在的重链抗体的铰链区或类似的序列(如在WO94/04678中所述)。一些其他特别优选的接头是聚丙氨酸(如AAA),以及接头GS30(在WO06/122825中的SEQIDNO:85)和GS9(在WO06/122825中的SEQIDNO:84)。其它适宜的接头通常包括有机化合物或聚合物，特别是适用于药用蛋白的那些。例如，聚(乙二醇)部分己经用来连接抗体结构域，参见例如WO04/081026。下列情形也在本发明范围内，所用的接头的长度、柔性程度和/或其他特性(尽管不是关键的，由于它通常是用在ScFv片段中的接头)可以对本发明最终的多肽的特性具有一些影响，包括但不限于针对VEGF、或针对一种或多种其他抗原的亲和性、特异性或亲和力。基于本文的公开内容，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头，任选地在一些有限的常规实验之后。例如，在包括针对多聚体抗原(诸如多聚体受体或其他蛋白)的纳米抗体的本发明的多价多肽中，所述接头的长度和柔性优选是这样的，以致其允许在所述多肽中存在的每一个本发明的纳米抗体结合在所述多聚体每个亚基上的抗原决定簇。类似地，在包括针对在同一个抗原上的两个或更多个不同抗原决定簇(例如，针对抗原的不同表位和/或针对多聚体受体、通道或蛋白的不同亚基)的纳米抗体的本发明的多特异性多肽中，所述接头的长度和柔性优选是这样的，以致其允许每个纳米抗体与其目的抗原决定簇结合。同样地，基于本发明的公开内容，任选地在一些有限的常规实验之后，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头。下列情形也在本发明范围内所用接头赋予本发明的多肽一种或多种其它有利特性或官能性，和/或提供用于形成衍生物和/或用于官能团附着178的一个或多个位点(例如，如本文关于本发明的纳米抗体的衍生物的描述)。例如，包含一个或多个带电荷氨基酸残基(参见上表A-2)的接头可以提供提高的亲水特性，而形成或包含小的表位或标记的接头可以用于检测、鉴定和/或纯化目的。并且，基于本文的公开内容，任选地在一些有限的常规实验之后，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头。最后，当两个或更多个接头用于本发明的多肽时，这些接头可以相同或不同。并且，基于本文的公开内容，任选地在一些有限的常规实验之后，熟练的技术人员应该能够确定用于本发明的特异性多肽的最佳接头。通常，为了使表达和生产容易，本发明的多肽将是线性多肽。然而，本发明在其最广泛意义上不限于此。例如，当本发明的多肽包括三个或更多个纳米抗体时，可以利用具有三个或更多个"臂"的接头连接它们，所述每个"臂"与纳米抗体连接，以提供"星形"的构建体。尽管通常较不优选，但是还可以使用环形的构建体。本发明还包括本发明多肽的衍生物，其可以基本上类似于本发明纳米抗体的衍生物，即，如本文所述。本发明还包括"基本上由"本发明的多肽"组成的蛋白或多肽"(其中措辞"基本上由……组成"具有基本如上文所示相同的意思)。按照本发明的一个方面，本发明的多肽基本上以分离的形式存在，如本发明所定义。本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽和核酸可以以本身已知的方式制备，熟练的技术人员应该从本文的进一步描述中而清楚。例如，本发明的纳米抗体和多肽可以以本身已知用于制备抗体且特别是用于制备抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的任何方式制备。制备所述氨基酸序列、纳米抗体、多肽和核酸的一些优选但非限制性的方法包括本文所述的方法和技术。熟练的技术人员应该清楚，用于制备本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽的一种特别有用的方法通常包括下列步骤i)在适宜的宿主细胞或宿主生物体(本文还叫作"本发明的宿主")中或在另一种适宜的表达系统中，表达编码所述本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的核酸(本文还叫作"本发明的核酸")，任选地接着进行ii)分离和/或纯化这样获得的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。特别地，这样的方法可以包括下列步骤i)在某种条件下培养和/或维持本发明的宿主，所述条件是这样的，以致所述本发明的宿主表达和/或生产至少一种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽；任选地接着进行-ii)分离和/或纯化这样获得的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。本发明的核酸可以是单链或双链DNA或RNA的形式，并且优选地是双链DNA形式。例如，本发明的核苷酸序列可以是基因组DNA、cDNA或合成的DNA(诸如具有特别适用于在要用的宿主细胞或宿主生物体中表达的密码子应用的DNA)。按照本发明的一个方面，本发明的核酸是基本上分离的形式，如本文所定义。本发明的核酸还可以是这样的形式，存在于和/或是载体的一部分，诸如例如质粒、黏端质粒或YAC，其也可以是基本上分离的形式。本发明的核酸可以以本身已知的方法制备或获得，其基于关于本文给出的本发明的多肽的氨基酸序列的信息，和/或可以从适当的天然来源分离。为了提供类似物，例如，编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列可以进行位点定向诱变，以提供编码所述类似物的本发明的核酸。并且，熟练的技术人员应该清楚，为了制备本发明的核酸，一些核苷酸序列，诸如至少一种编码纳米抗体的核苷酸序列，以及例如编码一种或多种接头的核酸，还可以以适当的方法连接在一起。用于产生本发明的核酸的技术应该是熟练的技术人员所清楚的，并且例如可以包括但不限于，自动DNA合成；位点定向诱变；将两个或多个天然存在的和/或合成的序列(或者其两个或更多个部分)结合，引入引起截短表达产物表达的突变；引入一个或多个限制性位点(例如，以产生可以使用适宜的限制性酶容易地消化和/或连接的盒和/或区)，和/或通过PCR反应的方法引入突变，所述PCR反应使用一个或多个"错配"引物。这些以及其它技术应该是熟练的技术人员所清楚的，并且参考也参见上文提及的标准手册，诸如Sambrook等和Ausubel等，以及下文的实施例。本发明的核酸还可以是这样的形式，存在于和/或是遗传构建体的一部分，这对于本领域的技术人员应该是清楚的。这样的遗传构建体通常包括至少一种本发明的核酸，其任选地与本身已知的一个或多个遗传构建体元件连接，诸如例如一个或多个适宜的调节元件(诸如适当的启动子、增强子、终止子、等等)和本文提到的其它遗传构建体元件。包括至少一种本发明的核酸的所述遗传构建体在本文也叫作"本发明的遗传构建体"。本发明的遗传构建体可以是DNA或RNA，并且优选地是双链DNA。本发明的遗传构建体还可以是适于意欲的宿主细胞或宿主生物体的转化的形式，适于结合到要用的宿主细胞的基因组DNA中的形式，或者适于在要用的宿主生物体中独立复制、维持和/或遗传的形式。例如，本发明的遗传构建体可以是载体形式，诸如例如质粒、黏端质粒、YAC、病毒载体或转座子。特别地，所述载体可以是表达载体，即，可以提供体外和/或体内表达的载体(例如，在适宜的宿主细胞、宿主生物体和/或表达系统中)。在一个优选的但非限制性的方面中，本发明的遗传构建体包括i)至少一种本发明的核酸；其可操作性地连接ii)一个或多个调节元件，诸如启动子和任选地适宜的终止子；并且任选地还有iii)本身已知的一个或多个其它遗传构建体元件；其中术语"调节元件"、"启动子"、"终止子"和"可操作性地连接"具有它们在本领域中的通用意思(如本文进一步所述)；并且其中存在于遗传构建体中的所述"其它元件"，例如，可以是3'-或5'-UTR序列、前导序列、选择标记、表达标记/报道子基因、和/或可以促进或增加转化或整合(效率)的元件。用于所述遗传构建体的这些和其它适宜的元件对于熟练的技术人员应该是清楚的，并且例如可能取决于所用的构建体、要用的宿主细胞或宿主生物体的类型；本发明的目的核苷酸序列在其中表达的方式(例如，通过组成型的、瞬时的或可诱导的表达)；和/或要用的转化技术。例如，本身已知用于抗体和抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)表达和生产的调节序列、启动子和终止子可以以基本上相似的方式使用。优选地，在本发明的遗传构建体中，所述至少一种本发明的核酸和所述调节元件，以及任选地所述一个或多个其它元件，彼此"可操作性地连接"，这通常意指它们彼此是功能性关系。例如，如果所述启动子能够起始或者另外控制/调节编码序列的转录和/或表达，那么启动子被视为与编码序列"可操作性地连接"(其中所述编码序列应该理解为"受控于"所述启动子)。一般地，当两个核苷酸序列可操作性地连接时，它们应该在相同的方向，并且通常还在同一阅读框中。它们通常还应该基本上邻接，尽管这也可以不是必需的。优选地，本发明的遗传构建体的调节以及其它元件是这样的，以致它们能够在要用的宿主细胞或宿主生物体内提供它们需要的生物学功能。例如，在要用的宿主细胞或宿主生物体中，启动子、增强子或终止子应该是"可操作的"，这意味着(例如)所述启动子应该能够起始或者另外控制/调节与其可操作性地连接(如本文所定义)的核苷酸序列一一例如，编码序列一一的转录和/或表达。一些特别优选的启动子包括但不限于，本身已知用于在本文提及的宿主细胞中表达的启动子；并且特别是用于在细菌细胞中表达的启动子，诸如本文提及的那些和/或在实施例中所用的那些。选择标记应该是这样的，以致其允许一一即，在适当的选择条件下一一己经(成功地)转化了本发明的核苷酸序列的宿主细胞和/或宿主生物体与没有(成功地)转化的宿主细胞/生物体区分开来。所述标记的一些优选的但非限制性的实例是提供针对抗生素(诸如卡那霉素或氨节青霉素)的抗性的基因，提供温度抗性的基因，或者在培养基中不存在某些因子、化合物和/或(食物)成分时允许所述宿主细胞或宿主生物体维持的基因，所述因子、化合物和/或(食物)成分是未转化的细胞或生物体生存所必需的。前导序列应该是这样的，以致一一在要用的宿主细胞或宿主生物体中一一其允许需要的翻译后修饰和/或以致其将转录的mRNA导向细胞的需要部分或细胞器。前导序列还可以允许从所述细胞分泌表达产物。同样地，前导序列可以是在所述宿主细胞或宿主生物体中可操作的任何原-(pro-)、前-(pre-)或前原-(prepro-)序列。对于在细菌细胞中表达，前导序列可以不是必需的。例如，本身己知用于抗体和抗体片段(包括但不限于单结构域抗体和ScFv片段)表达和生产的前导序列可以以基本上相似的方式使用。表达标记或报道分子基因应该是这样的，以致一一在宿主细胞或宿主生物体中一一其允许检测所述遗传构建体(上存在的基因或核苷酸序列)的表达。表达标记任选地还可以允许表达产物的定位，例如，定位在细胞的特定部分或细胞器中和/或在多细胞生物体的特定细胞、组织、器官或部分中。所述报道分子基因还可以表达为与本发明的氨基酸序列融合的蛋白融合体。一些优选的但非限制性的实例包括荧光蛋白如GFP。适宜的启动子、终止子和其它元件的一些优选的但非限制性的实例包括可以用于在本文提及的宿主细胞中表达的那些；并且特别是适用于在细菌细胞中表达的那些，诸如本文提及的那些和/或在下述实施例中所用的那些。关于可以存在于/用于本发明的遗传构建体的启动子、选择标记、前导序列、表达标记和其它元件的一些(其它)非限制性的实例一一诸如终止子、转录和/或翻译增强子和/或整合因子_一参考上文提及的通用手册，诸如Sambrook等和Ausubel等，以及WO95/07463,WO96/23810,WO95/07463,WO95/21191,WO97/11094,WO97/42320,WO98/06737,WO98/21355,US-A-7,207，410,US-A-5,693,492和EP1085089中给出的实例。其它实例对于熟练的技术人员应该是清楚的。参考也参见上文引用的公知
背景技术：
和本文引用的其它参考文献。本发明的遗传构建体通常可以通过将本发明的核苷酸序列与上文所述的一个或多个其它元件适当地连接而提供，例如应用上文提及的通用手册诸如Sambrook等和Ausubel等中所述的技术。通常，本发明的遗传构建体通过将本发明的核苷酸序列插入到本身已知的适当的(表达)载体中而获得。适当的表达载体的一些优选的但非限制性的实例是下述实施例中所用的那些，以及本文提及的那些。本发明的核酸和/或本发明的遗传构建体可以用于转化宿主细胞或宿主生物体，即，用于表达和/或生产本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。适当的宿主或宿主细胞是熟练的技术人员所清楚的，并且例如可以是任何适当的真菌的、原核的或真核的细胞或细胞系，或者任何适当的真菌的、原核的或真核的生物体，例如细菌菌株，其包括但不限于革兰氏-阴性菌株，诸如大肠杆菌(Esc/zen'c/n'aco//)菌株；变形菌属(尸rato^)菌株，例如奇异变形菌(Pro&wmz'ra&to)菌株；假单胞菌属(尸化M(iomo"ay)菌株，例如荧光假单胞菌(/^Womowosy/ww^cmy)菌株；以及革兰氏-阳性菌株，诸如芽孢杆菌属(Ba"7/w)菌株，例如枯草芽孢杆菌(Ba"7/wsw&z'fc)菌株或短芽孢杆菌(5ac/肠6rev&)菌株；链霉菌属(&，tom戸s)菌株，例如浅青紫链霉菌(&w/tow;;c&s//v/dara)菌株；葡萄球菌属(Sto//^/0C0CCi^)菌株，例如肉葡萄球菌(5"to//^/。COCCi^C"^77CW^)菌株；以及乳球菌属(丄actococcw)菌株，例如乳酸乳球菌(i^ctococcuy/ac^s)菌株；真菌细胞，其包括但不限于来自下列各项物种的细胞木霉属(7Hc/o&rwa),例如7Hc/2oafermareaye/的物禾中；脉孢菌属(iVewra^spora),例如禾且糙脉孢菌(A^wmsporacrawa);粪壳属(5W脂.a),例如大孢粪壳(5WaWa(^■spergzY/z^),例如黑曲霉(^s/erg/〃z^m'ge;O或酱油曲霉(^y/e/^7/ws^/^);或其它丝状真菌；酵母细胞，其包括但不限于来自下列各项物种的细胞酵母属(iSacc/7aramyces)，例如酉良酒酵母(iSacc/aramyc&scwev/Wae);裂殖酵母属(5b/^o^cc/2aram;;cas)，例如粟酒裂殖酵母(5b/z/zosacc/^ram^caspo附6e入毕赤酵母属(P/c/n'a)，例如巴斯德毕赤酵母(_P/c/z/<3/7as^0nij或_P/c/z/ame^z""o/z'ca;》又逊酵母属(//arae"w/a)，例如多形汉逊酵母(/foraem^/apo(ywo/7^a);克鲁维酵母属(《/M;/vmw^cM义例如乳酸克鲁维酵母(幻w"eram;;c&s/acto);^rxw/a，例如^4n:w/aacfew/mVorara;K/rraw/a,例如Ka7r0wZa/z>o/>^ca;两栖类细胞或细胞系，诸如爪蟾卵母细胞(Xe"0/7WOOC^^);来源于昆虫的细胞或细胞系，诸如衍生于鳞翅目(lepidoptera)的细胞/细胞系，包括但不限于贪夜蛾"/x^c^era)SF9和Sf21细胞，或者衍生于果蝇属(Dmso;/n7a)的细胞/细胞系，诸如Schneider和Kc细胞；植物或植物细胞，例如在烟草(tobacco)植物中；和或-哺乳动物细胞或细胞系，例如来源于人的细胞或细胞系、来源于哺乳动物的细胞或细胞系，包括但不限于CHO-细胞、BHK-细胞(例如BHK-21细胞)，以及人细胞或细胞系，诸如HeLa,COS(例如COS-7)和PER,C6细胞；以及本身已知的用于表达和生产抗体及抗体片段(包括但不限于(单)结构域抗体和ScFv片段)的所有其它宿主或宿主细胞，这对于熟练的技术人员应该是清楚的。参考还参见上文引用的公知
背景技术：
，以及例如WO94/29457;WO96/34103;WO99/42077;Frenken等，(1998),同前所述;Riechmann禾卩Muyldermans,(1999),同前所述；vanderLinden,(2000)，同前所述；Thomassen等，(2002),同前所述；Joosten等，(2003),同前所述;Joosten等,(2005),同前所述；以及本文所引用的其它参考文献。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以被引入多细胞生物体的一个或多个细胞、组织或器官中并且在其中表达，例如用于预防和/或治疗目的(例如，作为基因治疗)。为了这一目的，可以将本发明的核苷酸序列以任何适当的方式引入到细胞或组织中，例如照此(例如使用脂质体)或者在它们插入到适当的基因治疗载体(例如，衍生于反转录病毒诸如腺病毒，或者细小病毒诸如腺伴随病毒)中之后。同样对于熟练的技术人员应该是清楚的，这样的基因治疗可以在体内进行和/或在患者体内原位进行，其通过给患者或患者的特定细胞或特定组织或器官施用本发明的核酸或者编码其的适当的基因治疗载体而进行；或者适宜的细胞(通常取自要治疗的患者的身体，诸如移植的淋巴细胞、骨髓吸出物或活组织切片)可以用本发明的核苷酸序列在体外进行治疗，然后适当地(重新)引入回到所述患者的身体内。所有这些可以使用熟练的技术人员公知的基因治疗载体、技术和递送系统进行，例如，在下列各项中所述Culver,K.W.,"基因治疗(GeneTherapy)"，1994,p.xii，MaryAnnLiebert公司，出版，NewYork,纽约)；Giordano,自然F医学(NatureFMedicine)2(1996),534-539;Schaper,循环研究(Circ.Res).79(1996)，911-919;Anderson,科学(Science)256(1992),808-813;Verma，自然(Nature)389(1994),239;Isner,柳叶刀(Lancet)348(1996)，370-374;Muhlhauser,循环研究(Circ.Res).77(1995),1077-1086;Onodera,血液学(Blood)91;(1998),30-36;Verma,基因治疗(GeneTher).5(1998),692-699;Nabel，纽约科学院年刊(Ann.N.Y.Acad.Sci.):811(1997),289-292;Verzeletti,人类基因治疗(Hum.GeneTher.)9(1998),2243-51;Wang,自然医学(NatureMedicine)2(1996),714-716;WO94/29469;WO97/00957,US5,580,859;US5,5895466;或Schaper,现代生物技术观点(CurrentOpinioninBiotechnology)7(1996),635-640。例如，在本领域中已描述ScFv片段(Afanasieva等，基因治疗(GeneTher.),10,1850-1859(2003))和双抗体(Blanco等，免疫学杂志(J.Immunol),171,1070-1077(2003))的原位表达。对于纳米抗体在细胞中的表达，它们还可以作为所谓的"细胞内抗体"表达，例如在WO94/02610,WO95/22618和US-A-7004940;WO03/014960中所述；在Cattaneo,A.和Biocca,S.(1997)细胞内抗体开发和应用(IntracellularAntibodies:DevelopmentandApplications).Landes禾口Springer醫Verlag;以及在Konte腿nn,方法(Methods)34,(2004),163-170中所述。例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以在转基因哺乳动物的乳中产生，例如在兔、母牛、山羊或绵羊的乳中(对于将转基因引入哺乳动物的通用技术参见例如US-A-6,741,957，US-A-6，304,489和US-A-6，849,992)，在植物中或植物的部分中产生，所述植物部分包括但不限于它们的叶、花、果实、种子、根或块茎(turbers)(例如在烟草、玉米、大豆或苜蓿中)中，或者例如在蚕家蚕(Bombixmori)的蛹中。此外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以在不含细胞的表达系统中表达和/或生产，并且这样的系统的适当的实例应该是熟练的技术人员所清楚的。一些优选的但非限制性的实例包括在麦芽胚系统中的表达；在兔网织红细胞裂解物中表达；或者在大肠杆菌(五.co//)Zubay系统中表达。如上文提及，应用纳米抗体的一个优点在于，基于此的多肽可以通过在适宜的细菌系统中表达而制备，并且适宜的细菌表达系统、载体、宿主细胞、调节元件等对熟练的技术人员是清楚的，例如参考上文引用的参考文献。然而，应该注意，本发明在其最广泛意义上并不限于在细菌系统中表达。优选地，在本发明中，应用(体内或体外)表达系统，诸如细菌表达系统，其以适于药用的形式提供本发明的多肽，并且所述表达系统也是熟练的技术人员所清楚的。熟练的技术人员还应该清楚，适于药用的本发明的多肽可以使用肽合成技术制备。对于工业规模的生产，用于纳米抗体或包含纳米抗体的蛋白治疗剂的(工业)生产的优选的异源宿主包括大肠杆菌、巴斯德毕赤酵母(尸/c/z/apaeon's)、酿酒酵母".cwev/w'ae)的菌株，其适用于大规模表达/生产/发酵，并且特别适用于大规模药物(即，GMP级别)表达/生产/发酵。所述菌株的适当的实例是熟练的技术人员所清楚的。所述菌株以及生产/表达系统也可从公司诸如Biovitmm(Uppsala,瑞典)获得。备选地，哺乳动物细胞系，特别是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，可以用于大规模表达/生产/发酵，并且特别用于大规模药物表达/生产/发酵。并且，所述表达/生产系统也可从上文提及的一些公司获得。具体的表达系统的选择部分取决于特定的翻译后修饰的需要，更具体地是糖基化的需要。生产对于其糖基化是理想的或者必需的包含纳米抗体的重组蛋白，将使得应用具有将所表达的蛋白糖基化的能力的哺乳动物表达宿主成为必要。在这一方面，熟练的技术人员应该清楚，获得的糖基化模式(即，附着的残基的种类、数量和位置)将取决于表达所用的细胞或细胞系。优选地，使用人细胞或细胞系(即，形成基本上具有人糖基化模式的蛋白)，或者使用另一种哺乳动物细胞系，其可以提供基本上和/或功能上与人糖基化作用相同的糖基化模式或者至少模拟人糖基化作用。一般地，原核宿主诸如大肠杆菌不具有将蛋白糖基化的能力，并且应用更低等真核细胞诸如酵母通常导致与人糖基化作用不同的糖基化模式。不过，应该理解，所有前述宿主细胞和表达系统可以用于本发明，这取决于要获得的需要的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。因此，按照本发明的一个非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽被糖基化。按照本发明的另一个非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽未被糖基化。按照本发明的一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在细菌细胞中生产，特别是在适于大规模药物生产的细菌细胞，诸如上文提及的菌株的细胞中生产。按照本发明另一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在酵母细胞中生产，特别是在适于大规模药物生产的酵母细胞，诸如上文提及的物种的细胞中生产。按照本发明另一个优选的但非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在哺乳动物细胞中生产，特别是在人细胞或人细胞系的细胞中，并且更特别是在适于大规模药物生产的人细胞或人细胞系的细胞中，诸如上文提及的细胞系中生产。当应用在宿主细胞中的表达来生产本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽时，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以在细胞内产生(例如，在细胞溶质中，在外周胞质或在内含体中)，然后从宿主细胞分离，并且任选地进一步纯化；或者可以在细胞外产生(例如，在培养所述宿主细胞的培养基中)，然后从培养基分离，并且任选地进一步纯化。当使用真核宿主细胞时，由于极大地促进进一步的分离以及获得的纳米抗体和蛋白的下游处理，所以通常优选细胞外生产。除了少数种类的蛋白诸如毒素和溶血素之外，细菌细胞诸如上文提及的大肠杆菌的菌株一般不向细胞外分泌蛋白，并且在大肠杆菌内的分泌生产是指蛋白穿过内膜易位到外周胞质空间。外周胞质生产相对于细胞溶质生产提供一些优点。例如，在通过特异的信号肽酶将分泌信号序列裂解之后，所分泌的产物的N-端氨基酸序列可以与天然基因产物相同。此外，在外周胞质中比在细胞质中似乎存在少得多的蛋白酶活性。另外，由于在外周胞质中更少的污染蛋白，所以蛋白纯化更简单。另一个优点是，由于外周胞质提供比细胞质更加氧化性的环境，所以可以形成正确的二硫键。在大肠杆菌中过量表达的蛋白通常在不溶的聚集体，即所谓的内含体中发现。这些内含体可以位于细胞溶质中或在外周胞质中；从这些内含体回收生物活性蛋白需要变性/重折叠步骤。许多重组蛋白，包括治疗性蛋白，是从内含体回收的。备选地，熟练的技术人员应该清楚，可以使用细菌的重组菌株，其已被遗传修饰，以分泌需要的蛋白，并且特别是本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。因此，按照本发明的一个非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽是在细胞内产生并且从宿主细胞分离，并且特别是从细菌细188胞或者从细菌细胞中的内含体中分离的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。按照本发明的另一个非限制性的方面，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽是在细胞外产生并且从培养宿主细胞的培养基中分离的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。与这些宿主细胞一起使用的一些优选的但非限制性的启动子包括，-用于在大肠杆菌中表达:lac启动子(及其衍生物，诸如laclJV5启动子);阿拉伯糖启动子；噬菌体X的左向-(PL)和右向(PR)启动子；trp操纵子的启动子；杂合lac/trp启动子(tac和trc);T7-启动子(更具体地是T7-噬菌体基因10的启动子)以及其它T-噬菌体启动子;TnlO四环素抗性基因的启动子；上述启动子的工程变体，其包括一个或多个拷贝的外来调节操纵基因序列；-用于在酿酒酵母中表达组成型:ADH1(醇脱氢酶1)，ENO(烯醇化酶):CYC1(异-l细胞色素c),GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶);PGK1(磷酸甘油酸激酶),PYK1(丙酮酸激酶)；调节型GAL1，10,7(半乳糖代谢酶):ADH2(醇脱氢酶2),PH05(酸性磷酸酶),CUP1(铜金属硫蛋白)；异源型CaMV(花椰菜花叶病毒35S启动子)；-用于在毕赤酵母(Pichiapastoris)中表达:A0X1启动子(醇氧化酶I);-用于在哺乳动物细胞中表达人巨细胞病毒(hCMV)即时早期增强子/启动子；人巨细胞病毒(hC雨)即时早期启动子变体，其包含两个四环素操纵基因序列，以致所述启动子可以受Tet抑制基因调节；单纯疱疹病毒胸苷激酶(TK)启动子；劳斯肉瘤病毒长末端重复(RSVLTR)增强子/启动子；来自于人、黑猩猩、小鼠或大鼠的延伸因子la(hEF-la)启动子；SV40早期启动子;HIV-1长末端重复启动子；(3-肌动蛋白启动子；与这些宿主细胞一起使用的一些优选的但非限制性的载体包括-用于在哺乳动物细胞中表达的载体pMAMneo(Clontech),pcDNA3(Invitrogen),pMClneo(Stratagene),pSG5(Stratagene),EBO-pSV2-neo(ATCC37593),pBPV-l(8國2)(ATCC37110)，pdBPV-MMTneo(342-12)(ATCC37224),pRSVgpt(ATCC37199),pRSVneo(ATCC37198),pSV2-dhfr(ATCC37146),pUCTag(ATCC37460)禾卩1ZD35(ATCC37565),以及基于病毒的表达系统，诸如基于腺病毒的那些；-用于在细菌细胞中表达的载体pET载体(Novagen)和pQE载体(Qiagen);-用于在酵母或其它真菌细胞中表达的载体pYES2(Invitrogen)和毕赤表达载体(Invitrogen);-用于在昆虫细胞中表达的载体:pBlueBacII(Invitrogen)和其它杆状病毒载体；-用于在植物或植物细胞中表达的载体例如基于花椰菜花叶病毒或烟草花叶病毒的载体，适宜的农杆菌(Agrobacterium)菌株，或基于Ti-质粒的载体。与这些宿主细胞一起使用的一些优选的但非限制性的分泌序列包括-用于细菌细胞诸如大肠杆菌Pe旧，Bla,OmpA，OmpC，OmpF，OmpT，StII,PhoA，PhoE,MalE，Lpp,LamB,等；TAT信号肽，溶血素C-端分泌信号；-用于酵母a-交酉己因子前原-序歹U(a-matingfactorprepro-sequence)，磷酸酶(phol)，转化酶(Suc),等；-用于哺乳动物细胞在靶标蛋白是真核起源的情形中固有的信号(indigenoussignal);鼠IgK-链V-J2-C信号肽;等。用于转化本发明的宿主或宿主细胞的适宜的技术对熟练的技术人员是清楚的，并且可以取决于要用的宿主细胞/宿主生物体和要用的遗传构建体。参考也参见上文提及的手册和专利申请。转化后，可以进行检测并且选择已经成功转化了本发明的核苷酸序列/遗传构建体的那些宿主细胞或宿主生物体的步骤。例如，这可以是基于存在于本发明的遗传构建体中的选择标记的选择步骤，或者是包括检测本发明的氨基酸序列的步骤，例如，使用特异的抗体进行。转化的宿主细胞(其可以是稳定的细胞系的形式)或宿主生物体(其可以是稳定的突变系或株系的形式)形成本发明的另一方面。优选地，这些宿主细胞或宿主生物体是这样的，以致它们表达或者(至少)能够表达(例如，在适宜的条件下)本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽(并且在宿主生物体的情形中在它的至少一种细胞、部分、组织或器官中)。本发明还包括本发明的宿主细胞或宿主生物体的其它世代、后代和/或子代，例如，其可以通过细胞分裂或者通过有性或无性生殖获得。为了生产/获得本发明的氨基酸序列的表达，所述转化的宿主细胞或转化的宿主生物体通常可以在本发明(需要的)氨基酸序列、纳米抗体或多肽得到表达/生产的条件下保藏、维持和/或培养。适宜的条件对熟练的技术人员是清楚的，并且通常取决于所用的宿主细胞/宿主生物体，以及取决于控制本发明的(相关)核苷酸序列表达的调节元件。此外，参考参见在上文关于本发明的遗传构建体段落中提及的手册和专利申请。一般地，适宜的条件可以包括使用适宜的培养基，存在适宜的食物来源和/或适宜的营养素，使用适当的温度，并且任选地存在适当的诱导因子或化合物(例如，在本发明的核苷酸序列在可诱导启动子的控制下的情形中)；所有这些可以由熟练的技术人员选择。此外，在这样的条件下，本发明的氨基酸序列可以以组成型方式、以瞬时方式、或者只在适当地诱导时表达。熟练的技术人员还应该清楚，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以(首先)以不成熟的形式(如上文提及)产生，其然后可以进行翻译后修饰，这取决于所用的宿主细胞/宿主生物体。并且，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以被糖基化，这也取决于所用的宿主细胞/宿主生物体。然后，本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽可以从宿主细胞/宿主生物体和/或从培养所述宿主细胞或宿主生物体的培养基中分离，这使用本身已知的蛋白分离和/或纯化技术，诸如(制备级)层析和/或电泳技术、示差沉淀技术、亲和技术(例如，使用与本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽融合的特异性的、可裂解的氨基酸序列)和/或制备级免疫学技术(即，使用针对要被分离的氨基酸序列的抗体)。通常，对于药物应用，本发明的多肽可以配制成药物制剂或组合物，其包括至少一种本发明的多肽和至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂和/191或辅剂，以及任选地一种或多种其它药物活性多肽和/或化合物。通过非限制性实例的方式，这样的制剂可以是适于下列各项的形式口服给药，肠胃外给药(诸如通过静脉内、肌内或皮下注射或静脉内输注)，局部给药，通过吸入、皮肤贴片、植入物、栓剂给药，等等。所述适宜的给药形式一一其可以是固体、半固体或液体，取决于给药的方式一一以及制备其所用的方法和载体，这对熟练的技术人员是清楚的，并且在本文中进一步描述。因此，在另一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种本发明的氨基酸，至少一种本发明的纳米抗体或至少一种本发明的多肽，以及至少一种适当的载体、稀释剂或赋形剂(即，适于药用)，以及任选地一种或多种其它活性物质。通常，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以以本身已知的任何适当的方法配制和施用，例如，关于其的参考文献参见上文引用的公知
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(并且特别参见WO04/041862,WO04/041863,WO04/041865和WO04/041867)，以及参见标准手册，诸如雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceuticalSciences),第18版，Mack出版公司，美国(1990)或雷明顿，制药科学和实践(Remington,theScienceandPracticeofPharmacy),第21版，LippincottWilliams禾口Wilkins(2005)。例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以本身已知的用于常规抗体及抗体片段(包括ScFv's和双抗体)和其它药物活性蛋白的任何方法配制和施用。所述制剂以及制备其的方法对于熟练的技术人员是清楚的，并且例如，包括适于肠胃外给药(例如静脉内、腹膜内、皮下、肌内、腔内、动脉内或鞘内给药)或适于局部(及透皮的或皮内)给药的制剂。例如，用于肠胃外给药的制剂可以是适于输注或注射的无菌溶液、混悬液、分散液或乳剂。例如，用于所述制剂的适宜的载体或稀释剂包括但不限于，无菌水以及水性缓冲液和溶液，诸如生理磷酸盐缓冲液、林格溶液、葡萄糖溶液、和Hank's溶液；水油(wateroils);甘油；乙醇；甘醇诸如丙二醇，或者以及矿物油，动物油和植物油例如花生油、豆油，及它们的适宜的混合物。通常优选水性溶液或混悬液。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以使用递送的基因治疗方法进行施用。参见，例如，美国专利号5,399,346，其完全结合作为参考。使用递送的基因治疗方法，转染了编码本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的基因的原代细胞另外可以用组织特异性启动子转染，以靶向特异的器官、组织、移植物、肿瘤或细胞，并且另外可以使用用于亚细胞定位表达的信号和稳定序列进行转染。因此，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以全身施用，例如，口服地，与药用赋形剂诸如惰性稀释剂或可同化的食用载体结合。它们可以包封在硬壳或软壳的明胶胶囊中，可以压縮成片剂，或者可以直接与患者日常饮食的食物结合。对于口服治疗性施用，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以与一种或多种赋形剂结合，并且以可摄取的片剂、颊含片剂、药片、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆、糯米纸囊剂等形式使用。所述组合物和制剂应该包含至少0.1%的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。当然，所述组合物和制剂的百分数可以变化，并且可以便利地在所给单位剂型的约2-约60重量％之间。本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在这样的治疗有效组合物中的量是这样的，以致获得有效的剂量水平。所述片剂、药片、丸剂、胶囊等还可以包含下列各项粘合剂，诸如黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，诸如磷酸二转；崩解剂，诸如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸等；润滑剂，诸如硬脂酸镁；并且可以加入甜味剂，诸如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦，或者调味剂，诸如薄荷、冬青油、或樱桃调味剂。当单位剂型是胶囊时，除上述类型的物质之外，它还可以包含液体载体，诸如植物油或聚乙二醇。各种其它物质可以作为涂层存在，或者另外修饰所述固体单位剂型的物理形式。例如，片剂、丸剂、或胶囊可以用胶、蜡、紫胶或糖等包被。糖浆或酏剂可以包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽，作为甜味剂的蔗糖或果糖，作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯类，染料和调味剂诸如樱桃或橙味调味剂。当然，在制备任何单位剂型中所用的任何物质都应该是药物可接受的，并且在所用的量上基本上无毒。另外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以结合在持续释放的制剂和装置中。用于口服给药的制备物和制剂还可以被提供以肠衣，所述肠衣允许本发明的构建体抵抗胃环境，并且进入肠内。更一般地，用于口服给药的制备物和制剂可以适当地配置成用于递送到胃肠道的任何需要的部分。另外，适宜的栓剂可以用于递送到胃肠道内。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽还可以通过输注或注射进行静脉内或腹膜内施用。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽或者它们的盐的溶液可以在水中制备，任选地与无毒表面活性剂混合。分散体系还可以在甘油、液体聚乙二醇、三醋精及其混合物中以及在油中制备。在普通的保存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物的生长。适于注射或输注的药物剂型可以包括无菌的水溶液或分散体系或者包含活性成分的无菌粉剂，其适合即时制备无菌注射或输注溶液或分散体系，任选地包封在脂质体中。在所有情形中，在制备和保存条件下，最终剂型必须是无菌的、流动的和稳定的。液体载体或赋形剂可以是溶剂或液体分散介质，例如，其包括水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其适当的混合物。可以保持适当的流动性，例如，通过形成脂质体，在分散体系的情形中通过保持需要的颗粒大小或者通过使用表面活性剂。防止微生物作用可以通过各种抗细菌和抗真菌试剂获得，所述抗细菌和抗真菌试剂例如，对羟基苯甲酸酯类、氯代丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在许多情形中，优选地包括等渗剂，例如，糖、缓冲剂或氯化钠。可注射组合物的延长吸收可以通过在所述组合物中使用延迟吸收剂例如单硬脂酸铝和明胶而获得。无菌注射溶液通过将需要量的本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽结合在适当的溶剂中.，当需要时，与上文列举的各种其它成分一起结合，然后进行过滤除菌而制备。在用无菌粉剂制备无菌注射溶液的情形中，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其产生活性成分加上在先前的无菌过滤溶液中存在的任何其它需要的成分的粉剂。对于局部给药，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以以纯的形式应用，S卩，在它们是液体的情形中。然而，通常理想地将它们作为与皮肤病学可接受的载体结合的组合物或制剂施用到皮肤上，所述载体可以是固体或液体。有用的固体载体包括细分的固体，诸如滑石、粘土、微晶纤维素、硅石、矾土等。有用的液体载体包括水、羟烷类或甘醇类或水-醇/甘醇掺合物，其中本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以以有效水平溶解或分散，任选地在无毒表面活性剂的帮助下。可以添加辅剂诸如香味剂和其它抗微生物剂，以将给定用途的特性最优化。得到的液体组合物可以通过吸收衬垫应用，用于浸渍的绷带及其它敷料，或者使用泵型或气溶胶喷雾器喷到感染区域。增稠剂诸如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐及酯、脂肪醇、改性纤维素或改性的矿物质还可以与液体载体一起使用，以形成易涂开的糊剂、凝胶、药膏、皂剂等，用于直接涂覆到使用者的皮肤。可以用于将本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽递送到皮肤的有用的皮肤病用组合物的实例是本领域已知的；例如，参见Jacquet等(美国专利号4,608,392),Geria(美国专利号4,992,478),Smith等(美国专利号4,559,157)和Wortzman(美国专利号4,820,508)。在一个优选的方面中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽在缓慢释放的制剂中递送。缓慢释放的制剂包括(但不限于)包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的固体疏水聚合物的半渗透性基质。这些基质采用成形的制品的形式，例如，薄膜、或微胶囊。缓慢释放的基质的实例包括聚酯、水凝胶如聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)，如Langer等.(生物医学材料研究杂志(J,Biomed.Mater.Res.)1981,15:167)和Langer(化学技术(Chem.Tech.),1982，12:98-105)所述，或聚(乙烯醇)，聚交酯(US3,773,919),L-谷氨酸和Y乙基-L-谷氨酸酯的共聚物(Sidman等.生物聚合物(Biopolymers),1983,22:547),不可降解的乙烯-醋酸乙烯(Langer等.，同前所述)，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，如LupronDepotTm(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙立德组成的可注射的微球体)，葡聚糖羟基乙基甲基丙烯酸酉旨(DextranHydroxyEthylMethAcrylate)聚合物(Vlugt-Wensink等.，生物大分子(Biomacromolecules),2006,7:2983)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。尽管聚合物如乙烯-醋酸乙烯和乳酸-乙醇酸能够持续超过100天进行分子释放，但是某些水溶胶以较短的时间阶段释放蛋白。当包封的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽长时间保留在体内时，它们可能由于暴露于处于37°C的湿度而变性或聚集，这导致失去生物活性和免疫原性的可能的改变。本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的缓慢释放的组合物还包括脂195质体包埋的(entrapped)本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。包含本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的脂质体通过本领域已知的方法制备，诸如在Epstein等.(美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1985，82:3688),Hwang等.(美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)1980,77:4030),US4,485,045和US4,544,545中所述的方法。通常，脂质体是小的(约200-800埃)单层类型，其中脂质内含物为大于约30mo1%的胆固醇，所选的比例可以调节以进行最佳的治疗。具有提高的循环时间的脂质体公开在US5,013,556中。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的有用剂量可以通过比较它们的体外活性和在动物模型中的体内活性而确定。将在小鼠和其它动物中的有效剂量推导至人的方法是本领域己知的；例如，参见美国专利号4,938,949。通常，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽在液体组合物诸如洗液中的浓度约0.1-25重量-%,优选地约0.5-10重量-%。在半固体或固体组合物诸如凝胶或粉剂中的浓度约0.1-5重量-%，优选地约0.5-2.5重量-%。需要用于治疗的本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的量不但随着所选的特定的氨基酸序列、纳米抗体或多肽而变化，而且随着施用途径、要治疗的病症的性质以及患者的年龄和病症而变化，并且最终取决于随从医生或临床医生的判断力。此外，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的剂量变化取决于靶标细胞、肿瘤、组织、移植物或器官而变化。需要的剂量可以便利地以单一剂量或作为在适当的时间间隔施用的分剂量而存在，例如，作为每天2、3、4次或更多的亚剂量。所述亚剂量本身可以进一步分割，例如，分割成许多次不连续的宽松间隔的施用；诸如从吸入器多次吸入，或者通过使用多滴到眼睛中。施用方案可以包括长期的、日常的治疗。"长期"意指至少2周，并且优选地数周、数月或数年的持续时间。在这一剂量范围的必要的修改可以由本领域的普通技术人员仅仅使用本文的教导所给的常规实验而确定。参见雷明顿药物科学(Remington'sPharmaceuticalSciences)(Martin,E.W.，第4版),Mack出版公司，Easton，PA。在任何并发症情形中，剂量还可以由个别医生进行调整。在另一方面中，本发明涉及预防和/或治疗至少一种以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症或疾病的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列，包括其的本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或药物组合物。在本发明的内容中，术语"预防和/或治疗"不但包括预防和/或治疗疾病，而且通常包括预防所述疾病的发作，减缓或逆转疾病进程，防止或减缓与所述疾病相关的一种或多种症状的发作，减少和/或减轻与所述疾病相关的一种或多种症状，减少所述疾病和/或与之相关的任何症状的严重性和/或持续时间，和/或防止所述疾病的严重性和/或与之相关的任何症状的进一步增加，防止、减少或逆转由所述疾病引起的任何生理损害以及通常对被治疗的患者有益的任何药理作用。待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，并且更特别是人类。熟练的技术人员应该清楚，待治疗的受试者特别是患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的人。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种与VEGF、与其生物学或药理学活性、和/或与其中涉及VEGF的生物学途径或信号传导相关的疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。特别地，本发明涉及一种用于预防和/或治疗可以通过调节VEGF、其生物学或药理学活性、和/或其中涉及VEGF的生物学途径或信号传导的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。特别地，所述药用有效量可以是足以调节VEGF、其生物学或药理学活性、和/或其中涉及VEGF的生物学途径或信号传导的量；和/或在循环中提供足以调节VEGF、其生物学或药理学活性、和/或其中涉及VEGF的生物学途径或信号传导的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽的水平的量。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种可以通过给患者施用本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体或本发明的多肽而预防和/或治疗的疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。更特别地，本发明涉及预防和/或治疗选自由本文列出的疾病和病症组成的组的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括，给需要所述方法的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。在另一个方面中，本发明涉及免疫治疗的方法，并且特别涉及被动免疫治疗的方法，所述方法包括给患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的受试者施用药物活性量的本发明的氨基酸序列、本发明的纳米抗体、本发明的多肽、和/或包括其的药物组合物。在上述方法中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽和/或包含其的组合物可以以任何适当的方式施用，这取决于要用的特定的药物制剂或组合物。因此，例如，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/多肽和/或包含其的组合物可以口服、腹膜内(例如，静脉内、皮下、肌内、或者通过避开胃肠道的任何其它施用途径)、鼻内、透皮地、局部施用，通过栓剂、通过吸入方式施用，这也取决于要用的特定药物制剂或组合物。临床医生能够选择适当的施用途径和用于所述施用的适当的药物制剂或组合物，这取决于要预防或治疗的疾病或病症以及临床医生公知的其它因素。本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽和/或包含其的组合物按照治疗方案进行施用，所述治疗方案适于预防和/或治疗要被预防或治疗的疾病或病症。临床医生通常能够确定适宜的治疗方案，取决于下列因素，诸如要被预防或治疗的疾病或病症，要被治疗的疾病的严重性和/或其症状的严重性，要用的本发明的特定的氨基酸序列、纳米抗体或多肽，要用的特定的施用途径和药物制剂(farmaceuticalformulation)或组合物，患者的年龄、性别、体重、饮食、综合病况，以及临床医生公知的类似因素。一般地，所述治疗方案包括以一种或多种药物有效量或剂量施用一种或多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽，或者包含其的一种或多种组合物。施用的具体量或剂量由临床医生确定，同样基于上文引用的因素。通常，对于预防和/或治疗本文提及的疾病和病症，并且取决于要治疗的具体疾病或病症，要用的特定的本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽的功效，具体的施用途径和使用的特定的药物制剂或组合物，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽一般以每天每kg体重1克-0.01微克的量施用，优选地每天每kg体重0.1克-0.1微克，诸如每天每kg体重约1，10,100或1000微克，作为单一的每日剂量连续施用(例如，通过输注)或者在一天内作为多次分剂量施用。临床医生通常能够确定适宜的日常剂量，这取决于本文提及的因素。还应该清楚，在具体的情形中，临床医生可以选择偏离这些量，例如，基于上文引用的因素以及他的专业判断。一般地，关于施用量的一些指导可从通过基本上相同的途径通常施用的相当的针对相同施用靶标的常规抗体或抗体片段的量而获得，但是要考虑亲和性/亲和力、功效、生物分布、半衰期以及熟练的技术人员公知的类似因素的不同。通常，在上述方法中，将使用单一的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。然而，使用组合的两种或更多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体和/或多肽也在本发明范围之内。本发明的纳米抗体、氨基酸序列和多肽还可以与一种或多种其它药物活性化合物或成分(principles)组合应用，即，作为组合治疗方案，其可以或者可以不引起增效效应。并且，基于上文所引用的因素及其专业判断，临床医生能够选择所述的其它化合物或成分，以及适宜的组合治疗方案。特别地，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽可以与其它药物活性化合物或成分组合应用，所述其它药物活性化合物或成分是或者能够用于预防和/或治疗本文所引用的疾病和病症，结果可以或不可以获得增效效应。所述化合物和成分的实例，以及施用其的途径、方法和药物制剂或组合物是临床医生所清楚的。在本发明的实施方案中，本发明的氨基酸序列、纳米抗体和多肽与化疗试剂联合使用，所述化疗试剂是用于或者可以用于预防和/或治疗肿瘤疾病，诸如本文提及的不同的肿瘤、癌症和/或癌性病。表现出抗癌活性的任何化疗试剂可以与本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽联合使用。优选地，所述化疗试剂选自由下列各项组成的组烷化剂，抗代谢药、叶酸类似物、嘧啶类似物，嘌呤类似物和相关的抑制剂，长春花生物碱，表鬼臼毒素(epipodopyyllotoxin)，抗生素，L-天冬酰胺酶，拓扑异构酶抑制剂，干199扰素，铂配位复合物，蒽二酮取代的尿素，甲基肼衍生物，肾上腺皮质抑制剂，肾上腺皮质类固醇，黄体酮，雌激素，抗雌激素，雄激素，抗雄激素，和促性腺激素释放激素类似物。更优选地，所述化疗试剂选自由下列各项组成的组5-氟尿嘧啶(5-FU),叶酸(leucovorin)(LV),irenotecan,奥沙利铂，卡培他滨，紫杉醇和doxetaxel。两种或多种化疗试剂可以以混合物使用，以与本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽的施用联合进行施用。一种优选的联合化疗是基于氟尿嘧啶的，包括5-FU和一种或多种其它化疗试剂。联合化疗的适当的给药方案在本领域内是已知的，并且例如，记述在Saltz等.(Proc.ASCO1999,18:233a)和Douillard等.(Lances2000,355:1041)中。当两种或更多种物质或成分用作联合治疗方案的一部分时，它们可以通过相同的施用途径或者通过不同的施用途径在基本上相同的时间或在不同时间(例如，基本上同时地、连续地、或者按照备选方案)施用。当所述物质或成分通过相同的施用途径同时施用时，它们可以作为不同的药物制剂或组合物或者作为组合的药物制剂或组合物的一部分进行施用，这是熟练的技术人员所清楚的。并且，当两种或更多种活性物质或成分作为联合治疗方案的一部分使用时，每一物质或成分可以以相同的量施用，并且按照与当所述化合物或成分单独使用时相同的方案施用，并且所述联合应用可以或可以不引起增效效应。然而，当所述两种或更多种活性物质或成分的联合应用引起增效效应时，还可以可能地减少要施用的一种、多种或全部物质或成分的量，同时仍旧获得理想的治疗作用。例如，这可以用于避免、限制或减少当以它们的常规用量使用时与一种或多种所述物质或成分的应用相关的任何不需要的副作用，同时仍旧获得理想的药物或治疗效果。按照本发明所用的治疗方案的效果可以以本身已知的用于所涉及的疾病或病症的任何方式进行确定和/或遵循，这是临床医生所清楚的。在适当的并且基于病例/病例基础的情形中，临床医生还应该能够改变或改进特定的治疗方案，以便获得理想的治疗效果，以避免、限制或减少不需要的副作用，和/或实现一方面获得理想的治疗效果与另一方面避免、限制或减少不理想的副作用之间的适当的平衡。200通常，应该遵循所述治疗方案，直到获得理想的治疗效果和/或所述理想的治疗效果持续需要保持的那么久。并且，这可以由临床医生确定。在另一方面中，本发明涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备用于预防和/或治疗至少一种以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症或疾病的药物组合物中的应用；和/或在本文所述的一种或多种治疗方法中的应用。待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，并且更特别是人类。熟练的技术人员应该清楚，待治疗的受试者特别是患有或者有危险患有本文提及的疾病和病症的人。本发明还涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备药物组合物中的应用，所述药物组合物用于预防和/或治疗至少一种可以通过给患者施用本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽而得到预防和/或治疗的疾病或病症。更特别地，本发明涉及本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽在制备用于药物组合物中的应用，所述药物组合物用于预防和/或治疗以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症或疾病、且特别是用于预防和治疗本发明列出的一种或多种疾病和病症。同样地，在这样的药物组合物中，所述一种或多种本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽还可以适当地与一种或多种其它活性成分如本发明提及的那些组合。最后，尽管更优选本发明的纳米抗体(如本文所定义)和本发明的多肽的应用，但是基于本
发明内容应该清楚，熟练的技术人员还应该能够以类似的方式设计和域产生针对VEGF的其它氨基酸序列和特别是(单)结构域抗体，以及包括所述(单)结构域抗体的多肽。例如，熟练的技术人员还应该清楚，将上述关于本发明的纳米抗体提及的一个或多个CDR"移接"当所述(单)结构域抗体或其它蛋白支架上可以是可能的，所述其它蛋白支架包括但不限于，人支架或非免疫球蛋白支架。适当的支架和用于所述CDR移接的技术将是熟练的技术人员清楚的，并且是本领域内公知的，参见，例如，US-A-7,180,370,WO01/27160，EP0605522,EP0460167，US-A-7,054，297，Nicaise等.，蛋白质科学(ProteinScience)(2004)，13:1882-1891;Ewert等.,方法(Methods),2004年10月；34(2):184-199;Kettleborough等.,蛋白质工程(ProteinEng.)1991年10月；4(7):773-783;O'Brien和Jones,分子生物学方法(MethodsMol.Biol,)2003:207:81-100;Skerra,分子识别杂志(J.Mol.Recognit.)2000:13:167-187,和Saerens等.，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)2005年9月23日;352(3):597-607，和其引用的其它参考文献。例如，本身已知的用于将小鼠或大鼠CDR移接到人支架和构架上的技术可以以类似的方式使用，以提供嵌合蛋白，所述嵌合蛋白包括一个或多个本发明的纳米抗体的CDR—和一个或多个人构架区或序列。还应该注意，当本发明的纳米抗体包含除上文提及的优选的CDR序列之外的一个或多个其它CDR序列时，这些CDR序列可以以本身已知的任何方法获得，例如，从纳米抗体(优选)、来自常规抗体(并且特别来自人抗体)的VH结构域、重链抗体、常规4-链抗体(诸如常规人4-链抗体)或针对VEGF的其它免疫球蛋白序列获得。针对VEGF的这种免疫球蛋白序列可以以任何本身已知的方法产生，如熟练的技术人员所清楚的，艮卩，通过用VEGF免疫或通过用VEGF筛选免疫球蛋白序列的适宜的文库，或其任何适当的组合。任选地，这可以接着进行技术诸如随机或位点定向诱变和/或其它本身已知的用于亲和力成熟的技术。产生这样的免疫球蛋白序列的适宜的技术是熟练的技术人员所清楚的，并且例如包括Hoogenboom,自然生物技术(NatureBiotechnology)，23,9,1105-1116(2005)综述的筛选技术。产生针对指定的靶标的免疫球蛋白的其它技术包括，例如，纳米克隆技术(例如，在公布的美国专利申请2006-0211088中所述)，所谓的SLAM技术(例如欧洲专利申请0542810中所述)，应用表达人免疫球蛋白的转基因小鼠或者公知的杂交瘤技术(参见，例如Larrick等，生物技术(Biotechnology),巻7,1989，第934页)。所有这些技术可以用来产生针对VEGF的免疫球蛋白，并且这种免疫球蛋白的CDR，s可以用于本发明的纳米抗体，即，如上文列出的。例如，这样的CDR序列可以被确定、合成和/或分离，并且插入到本发明的纳米抗体的序列中(例如，以便取代相对应的天然CDR)，均使用本身已知的技术，诸如本文所述的那些，或者包含所述CDR's的本发明的纳米抗体(或编码其的核酸)可以从头合成，这也应用本文提及的技术。基于本发明的公开内容，本发明的氨基酸序列、纳米抗体、多肽、核酸、遗传构建体以及宿主与宿主细胞的其它应用是熟练的技术人员所清楚的。例如，并且不限于，本发明的氨基酸序列可以连接在适当的载体或固体支持物上，以提供一种介质，所述介质可以以本身已知的方式用于从包含其的组合物和制备物中纯化VEGF。包括适当的可检测标记的本发明的氨基酸序列的衍生物也可以用作(定性或定量)确定VEGF在组合物或制备物中存在的标记，或作为选择性检测VEGF在细胞或组织表面存在的标记(例如，与适当的细胞分选技术结合)。现在将通过下述非限制性实例和附图的方式对本发明进一步描述，其中所述附图显示图1:如实施例2所述，在ELISA中筛选阻断VEGF-VEGFR-2和VEGF-VEGFR-1相互作用的周质提取物。孔H12包含不表达的纳米抗体，并且用作背景样品，以计算％阻断。图2:在如实施例3所述的VEGF-VEGFR-1和VEGF-VEGFR-2a筛选测定中评估纯化的单价(图2A)和二价(图③)抗-VEGF纳米抗体的中和能力。图3:在如实施例4所述的HUVEC细胞增殖测定中评估纯化的二价抗-VEGF纳米抗体的中和能力。图4:如实施例6中所述，.关于与VEGF109的结合筛选抗-VEGF纳米抗体周质提取物。阴性对照(未加入纳米抗体的周质提取物)存在于孔G6，H6,G12禾卩H12中。图5:在如实施例8所述的VEGF-VEGFR1和VEGF-VEGFR2ELISA中评估抗-VEGF纳米抗体的周质提取物的中和能力。阴性对照(未加入纳米抗体的周质提取物)存在于孔E12和F12中。实施例实施例h鉴定结合VEGF的纳米抗体203按照标准流程免疫两只美洲驼(llamas)(No.99和No.102)，6次肌内注射配制在Titermax金(TitermaxUSA，Norcross,GA，美国)中的hVEGF165(R&D系统，Minneapolis,MN,美国)(100或50昭/剂量，以一周一次的时间间隔)。在第4周，收集血清，以通过ELISA确定针对hVEGF165的抗体滴度。简言之，用hVEGF165包被96-LMaxisorp平板(NuncWiesbaden,德国)。在封闭和加入稀释的血清样品后，使用兔抗-美洲驼免疫球蛋白抗血清和抗-兔免疫球蛋白碱性磷酸酶缀合物，证明抗-hVEGF165纳米抗体的存在。对于两只动物，滴度超过16000。文库构建使用Ficoll-Hypaque，按照供应商的使用说明，从血清样品中制备外周血单核细胞。其次，从这些细胞中提取总RNA，并且用作RT-PCR的起始材料，用以扩增编码纳米抗体的基因片段。将这些片段克隆到来源于pUC119的表达载体中，所述载体包含LacZ启动子，大肠杆菌噬菌体pIII蛋白编码序列，关于氨苄青霉素和羧苄青霉素的抗性基因，多克隆位点和gen3前导序列。与所述纳米抗体编码序列符合阅读框，所述载体编码C-端c-myc标记和(His)6标记。按照标准方法制备噬菌体(参见，例如，现有技术和本文引用的由本申请人提交的申请)，并且在过滤除菌后在4°C保存备用。选择由美洲驼No.99和No.102获得的噬菌体文库用于不同的选择。在第一轮选择中，将hVEGF121(R&D系统，Minneapolis,MN,美国)以1和0.2|ug/ml包被到Maxisorp96-孔平板上(Nunc,Wiesbaden,德国)。在与所述噬菌体文库温育和充分洗涤后，用胰蛋白酶(lmg/ml)或甘氨酸(0.1M)非特异性(aspecifically)洗脱结合的噬菌体。在第二轮选择中，将生物素酰化的hVEGF165(R&D系统，Minneapolis,MN，美国)捕获在中性抗生物素蛋白(neutravidin)包被的固相上。在用所述噬菌体文库温育且充分洗涤后，用Avastin(Genentech,罗氏(Roche)),VEGFR1或VEGFR2特异性洗脱结合的噬菌体。在第三轮选择中，将可溶的生物素酰化的hVEGF165与所述噬菌体文库温育。在充分洗涤后，将生物素酰化的hVEGF165捕获在中性抗生物素蛋白包被的固相上。用Avastin⑧,VEGFRl或VEGFR2特异性洗脱结合的噬菌体。在所有的选择中，观察到富集。将来自每次选择的输出结果作为一个集合重新克隆到来源于pUC119的表达载体中，所述表达载体包含LacZ启动子，关于氨苄青霉素或羧苄青霉素的抗性基因，多克隆位点和gen3前导序列。与所述纳米抗体编码序列符合阅读框，所述载体编码C-端c-myc标记和(His)6标记。挑取菌落并且在96深孔平板(lml体积)中生长，并且通过加入IPTG诱导纳米抗体表达。按照标准方法制备周质提取物(体积80jil)(参见，例如现有技术和本文引用的由本申请人提交的申请)。所获得的克隆的序列表示在表B-1中。实施例2:筛选阻断VEGF的纳米抗体在VEGFR1和VEGFR2ELISA中筛选在实施例1中获得的周质提取物，以评估所表达的纳米抗体的阻断能力。ELISA进行如下lpg/mlVEGFR1-Fc和VEGFR2-Fc(R&D系统；Minneapolis,MN,美国)嵌合体在4°C包被过夜。平板用300PBST洗涤5次，然后在RT用300(ilPBS/1%酪蛋白封闭2小时。这之后用300^1PBST洗涤5次。将1/10稀释的周质提取物在RT用2nMhVEGF165预温育1小时。将预温育的混合物加入到ELISA平板中，并且在RT下温育IO分钟。随后平板用300piPBST洗涤5次，并且加入100|nl生物素酰化的抗-VEGF(R&D系统，Minneapolis,MN,美国)。在洗涤之后，加入100^链霉抗生物素蛋白-HRP(DAKO，Glostrup，丹麦)。洗涤后，加入100^3，3，，5,5，-四甲基联苯胺(TMB)(Pierce,RockfordIL,美国)。用100pl2MH2SO4终止反应，并且在450nm读取OD。备选地，将生物素酰化的hVEGF165用周质提取物预温育，并且使用链霉抗生物素蛋白-HRP检测VEGF-受体结合。在这些VEGFR1和VEGFR2ELISA中筛选提取物鉴定可以阻断VEGF-VEGFR1禾口/或VEGFR2相互作用达到50%(图l)的克隆。实施例3:在a筛选测定中评估阻断VEGF的纳米抗体然后在VEGFR1和VEGFR2a筛选测定中评估所纯化的纳米抗体的阻断相互作用。按照供应商的使用说明，将VEGFR1和VEGFR2Fc嵌合体(R&D系统，Minneapolis,MN,美国)偶联到接受体珠上(PerkinElmer，Waltham,MA,美国)。hVEGF165用生物素(西格玛(Sigma)，StLouis，MO,美国)和生物素氨基己酸3-硫代-N-羟基琥珀酰亚胺酯钠盐(西格玛，StLouis,MO,美国)进行生物素酰化。利用ELISA，该生物素酰化的hVEGF165表现出对VEGFR1和VEGFR2结合仍然是功能性的。通过向5plVEGFR2或VEGFR1接受体珠(100pg/ml)加入10pl生物素酰化的hVEGF165(2.5nM)而确定VEGF与各自的受体的结合。在RT和暗处温育45分钟后，加入5pl链霉抗生物素供体珠(100|ig/ml)，然后在RT和暗处温育1小时。当激发供体珠时，接受体珠发射的荧光信号与VEGF与所述各自的受体结合的水平相关。在a筛选测定中按下述确定抗-VEGF纳米抗体的中和能力。制备从2HM起始的纳米抗体稀释系列，并且在RT下与生物素酰化的hVEGF165预温育30分钟。向该混合物中，加入VEGFR接受体珠和链霉抗生物素蛋白供体珠，并且实验按前述进行。随着增加的纳米抗体浓度观察到的荧光信号的减少表示对VEGF与各自受体结合的阻断。图2A显示用增加浓度的抗-VEGF纳米抗体观察到的VEGF-VEGFR2相互作用的减少。这表明本发明的纳米抗体干扰VEGF-VEGFR2相互作用。为了评估二价和双特异性抗-VEGF纳米抗体能否具有相似的作用，使用GGGGSGGGS(SEQIDNO:678)接头和/或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:679)接头(表B-3,B-4，B-5和B-6)产生二价和双特异性构建体，其按照标准方法表达并且纯化(参见，例如，现有技术和本文引用的由本申请人提交的申请)。在VEGFR2a筛选测定中评估1H10-1H10和1C4-1C4，表明这些分子也能够阻断VEGF-VEGFR2相互作用(图2B)。实施例4:抗-VEGF纳米抗体可以阻断VEGF诱导的HUVEC细胞增殖206VEGF是已知的内皮细胞增殖刺激剂，并且因此，可以在评估内皮细胞增殖的测定中确定VEGF拮抗剂的中和能力。在37。C在EBM2补充的培养基中培养HUVEC(人脐带静脉内皮细胞)(Cambrex,Venders,比利时)。在实验开始前两天，使用包含10%FCS，10%人AB血清和1%青霉素-链霉素(PS)的RPMI1640/M119培养基(l:l)，使细胞休眠。将细胞以3750个细胞/孔的密度接种在96孔平板的包含5%FCS和1%PS的M199培养基中，并且在37。C在湿润的室中培养。将抗-VEGF纳米抗体与hVEGF165预温育1小时。接种后6小时，向细胞中加入VEGF+纳米抗体混合物，导致10ng/mlhVEGF165的终浓度。在1天和4天后，加入其余的hVEGF165。在第4天，向细胞中加入BrdU。将细胞继续再培养18小时，并且利用化学发光BrdU细胞增殖ELISA(罗氏(Roche),Mannheim,德国)确定BrdU结合。在这一测定中检测二价抗-VEGF纳米抗体(1H10-1H10)和阴性对照纳米抗体(12B2)的LPS低制剂(<100Eu/mg)。仅对1H10-1H10二价纳米抗体观察到对VEGF刺激的增殖的抑制，这强调了所述抗-VEGF纳米抗体的VEGF中和活性(图3)。实施例5:鉴定结合VEGF的纳米抗体免疫按照标准流程免疫两只美洲驼(Nal50和No.151)，5次肌内注射配制在Stimune(CediDiagnostics,荷兰)中的hVEGF165-KLH(R&D系统，Minneapolis,,,美国)(100或50jag/剂量，以两周一次的时间间隔)。一个月后，这之后是4次肌内注射配制在Stimune中的大肠杆菌表达的VEGF109HNKCECRPKKD;SEQIDNO:680)(100或50pg/剂量，以一周一次和两周一次的时间间隔)。文库构建使用Ficoll-Hypaque，按照供应商的使用说明，从血清样品中制备外207周血单核细胞。其次，从这些细胞中提取总RNA，并且用作RT-PCR的起始材料，用以扩增编码纳米抗体的基因片段。将这些片段克隆到来源于pUC119的表达载体中，所述载体包含LacZ启动子，大肠杆菌噬菌体pIII蛋白编码序列，关于氨苄青霉素和羧苄青霉素的抗性基因，多克隆位点和gen3前导序列。与所述纳米抗体编码序列符合阅读框，所述载体编码C-端c-myc标记和(His)6标记。按照标准方法制备噬菌体(参见，例如，现有技术和本文引用的由本申请人提交的申请)，并且在过滤除菌后在4°C保存备用。选择由美洲驼No.150和No.151获得的噬菌体文库用于进行选择。在第一轮选择中，将生物素酰化的hVEGF165(R&D系统，Minneapolis,MN,美国)捕获到以2-0.2pg/ml中性抗生物素蛋白包被的Maxisorp96-孔平板上(Nunc,Wiesbaden,德国)。在与所述噬菌体文库温育和充分洗涤后，用TEA非特异性(a-spedfically)洗脱结合的噬菌体。拯救噬菌体，并且将其用于下一轮选择。在第二轮选择中，将生物素酰化的hVEGF109捕获在以2-0.02pg/ml中性抗生物素蛋白包被的Maxisorp96-孔平板上。在用所述噬菌体文库温育且充分洗涤后，用三乙醇胺(TEA)非特异性洗脱结合的噬菌体。拯救噬菌体，接种，挑取单个菌落并且产生周质提取物。所获得的克隆的序列表示在表B-2中。实施例6:筛选结合VEGF的纳米抗体在VEGF109ELISA中筛选在实施例5中获得的周质提取物。按下述进行ELISA:在中性抗生物素蛋白包被的平板中捕获1iLig/ml生物素酰化的VEGF10930分钟。用300^1PBST洗涤平板5次。周质提取物1/10稀释在0.in/。酪蛋白/PBS中，加入到ELISA平板中，并且在RT温育1小时。随后用300iiilPBST洗涤平板5次。在洗涤后，加入1/2000抗-myc(罗氏(Roche)，Basel,瑞士)，并且温育1小时。随后用300piPBST洗涤平板5次。洗涤后，加入抗-小鼠马辣根过氧化物酶(HRP)(DAKO,Glostrup,丹麦)，并且用3，3，,5,5'-四甲基联苯胺(TMB)(Pierce,Rockford,IL,美国)检测结合。用100lil2MH2S04终止反应，并且在450nm读取OD。在该VEGF109ELISA中筛选提取物鉴定可以结合VEGF109的克隆(图4)。实施例7:在SPR分析中评估结合VEGF的纳米抗体的解离速率(offrate)将VEGF109和VEGF165包被在CM5芯片上，并且使用Biacore3000评估在实施例5中获得的抗-VEGF纳米抗体周质提取物的结合动力学。使用BIA评估软件进行结果分析。通过'拟合动力学分离的ka/kd'模型，langmuir解离，而确定解离速率。使用+-100秒的时间间隔进行拟合。解离曲线表示解离速率在10'1至U10'41/秒的范围内(表C-1)。结果表示所述纳米抗体与VEGF165和VEGF109二者均相互作用。实施例8:抗-VEGF纳米抗体可以阻断VEGF-VEGFR1和VEGF-VEGFR2相互作用在VEGF165-VEGFR1和VEGF165-VEGFR2ELISA中评估抗-VEGF纳米抗体的中和能力。VEGFR1-Fc和VEGFR2-Fc(R&D系统，美国)是在MaxiSorp平板上包被过夜的固相。次日，用PBS洗涤平板，并且用PBS/l。/。酪蛋白封闭。将所述纳米抗体周质提取物的1/5稀释液与2nM生物素酰化的VEGF165预温育1小时，并且然后加入到VEGFR1或VEGFR2包被的平板中10分钟。用PBST洗涤后，使用Extravidin-HRP(西格玛(Sigma),St.Louis，MO,美国)和TMB(Pierce,Rockford，IL，美国)检测生物素酰化的VEGF165与受体的结合，之后用H2S04终止反应。测量450nm处的OD，并且所得到的数值与VEGF结合相关。图5显示的结果表明，与仅包含生物素酰化的VEGF(孔E12和F12)的阴性对照相比较，抗-VEGF纳米抗体的周质提取物可以阻断VEGF和VEGFR1之间以及VEGF和VEGFR2之间达到90%的相互作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage210</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage211</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage212</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage213</column></row><table>-VBGFPMP14G5-9GS-14G5,S印ID投0:5CH/PRT;GLVQAGGSIiRLSCAASGRT工SSYTMOTFRQAPGKEREFVAAGTWSTSVTEYADSVKGRF"TISHDTAKHTLYL<VEGFPMP1C4-S印工D投0:505,.PRT'-EDTAVYTCAAKERGSGAYDYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42B10-9GS-42B10,SE<3工DKTO:50S;PRT;->EVC^VESGGGLVQAGGSLRXSCTASGRALDTYTVTWFRQTPGKEREFVASNRWNAKPYTTDSVKGRFTISRDedtavyycaadlttwadgpyrywgqgtqvtvss>PVEGFPMP42C5-SSG工DNO:507;PRT,'->iCVQLVESGGGLVQAGGSLiRIjSCAASGRALDTYTVTWFRQTPGKEREFVASIRWNAKPYTTDSVKGRFTISRD>pvegfpmp42h5-9gs-42h5,s即idno:508;prtf*GSLRLSCTASGRALDTYTVTWFRQTPGKEREFVASNRWNAKPYVTDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQITOSLKPEDTAVYYCAADIiTTWADGPYRYWGQGTQVTVSSEDTAVTYCAADLTTWADGPYRFWGQGTGVTVSS>PVEGFPMP42E2-9GS-42E2,SEQ工DNOs510;PRT;.NAKNTV5GSLRLSCAASGRALDTYTVTWFRQTPGKGREFLASIR丽AKiPYTTDSVKGRFTMSRDNAKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAADPTTOADGPYRTOGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42F1-9GS-42F1,SEQ工DNO:5i:L;PRT';>EVQIiVESGGGLiVQPGGSIiRLSCAASGRAXiDTYTVTWFRQTPGKTREFVASVRWNAKlPYTTDSVKGRFTISRDGSIiRLSCAASGRAliDTYTVTWFRQTPGKTREFVASVRWNAKPYTTOSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSIjKPEDTAVTYCAADPTTWADGPYRYWGQGTQVTVSS__________'PVEGFPMP42G5-9GS-42G5,SEQ工DNO:GSIiRIiSCAASGRALDTYTVTWFRQTPGKTREFVASVRWNAKPYTTDSVKGRFTISRDHAKNTVYLQMNSlLKPEDTAVYYCAADPTTWADGPYRTOGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42A9-SEQIDNO:513;PRT;nNAKNTVYLQMNSIiKPEDTAVYYCAAQKGTPPLGCPAYYGMDYWGKGTIiVTVSSGGGGSGGGSEVQIjVESGGQMHSLKPEDTAVYYCAAQKGTPPLGCPAYYGMDYWGKGTLVTVSS>pvegfpmp42b5-9gs-42b5,s印id议o:514/prt,'-dnakwtvylqmnsiikpedaavyycaaqkgtppu;cpayygmdyv!fgkgtia7tvssggggsgggsevq]jvesggqmnslk:pedaavyycaaqk:gtppIjGCpayygmdywgkgt:lvtvss'PVEGFPMP42A5-9GS-42A5,SEQ工DWO:515;E>RT;'GDPNDTVyi/QMTSrjKPEDTAVYYCATGRASRTSDYYTDTaTOSWGQGAQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGQMTSIjKPEDTAVYYCATGRASRTSDYYTDRJYDSWGQGAQVTVSS214,PVEGFTMP42F10-9GS-42F10,S即工DNOtGDPNDTVYLQMTSLKPEDTAVYYCATGRASRTSDYYTDRITOSWGQGAQVTVSSGGGGSGGGSEVQIATESGaQMTSLKPEDTAVYYCATGRASRTSDYYTDRIYDSWGQGAQVTVSS>PVBGFPW42Ai:i-S卯IDNO:513;PRT;QMTSLKPEDTAVYyCATGRASSTSDYYTDRIYDSWGQGAQVTVSS>PVEGFPMP42C1-9GS-42C1,SEQIDNO:519;PRT;-GNPmTVYIiQMTSLiKPEDTAVYYCATGRAYRGSDYYTDRIYDSWGQGAQVTVSSGGGGSGGGSEVQ:LVESGG，PVEGFPMP42C12-9GS-42C12,SEQIDNO:520;PRT;-:KPSDTAVYYCAADSLYWRSSRMATDYDYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42H9-9GS-42H9,SEQIDKO:521;PRT;-:DNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGMNSIiKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42E3-9GS-42E3,SEQIDNO:522;PRT'"DNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGMNSIiKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42C7-9GS-42C7,SEQ工DNO:523''PRT;.MNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYgAIAYQYWGKGTgVTVSS>PVEGFPMP42D5-9GS-42D5,SEQIDNOs524,-PRT;->EVQLVESGGGLVHAGGAIiRLSCAASGRAFETYRMGWFRQAPGKEREFVALINWSSGTTVYADSVKGRFTISGDNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSSGGGGSGOGSEVQLVESGGGLVHAGGALRLSCAASGRAFETYRMG附RQAPGKEREFVALtINWSSGTTVYADSVKGRFT工SGDNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSAIiAYQYWGQGTQVTVSS_>PVEGFEW42D7-9GS-42D7,SEQIDNO:525,'PRT;->EVQIiVESGGGLVQAGGAIiRPSCAASGRTFETYRMGWFRQAPGKEREFVALINWSSGTTVYADSVKGRFTISGDNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQAGGALRPSCAASGRTFETYRMGWFRQAPGKEREFVAIilNWSSGTTVYADSVKGRHTISGDNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRRWSGSYYSAIAYQYWGQGTQVTVSS_)PVEGFPMP42C10-9GS-42C10,SEQIDNO:526;PRT;->EVQLVESGGGLVQAGGALRLSCAVSGRTFESYRMGWFRQAPGKEREFVSLINWSSGKTIYADSVKGRFT工SGDNAKDTVyLEMNSLKPEDTAVYXCAVGRAWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGUVQAGGALiRIjSCAVSGRTFESYRMGWFRQAPGKEREFVSLINWSSGKTIYADSVKGRFTISGDNAKDTVYIiE:MNSLKPEDTAVYYCAVGRAWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42D10-9GS-42D10,SEQIDNO:527,'PRT,'.LVQAGGAIiRIiSCAASGRTKETYRMGWFRQAPGKEREFVALINWSSGITVYLDSVKGRFTISGDNAKDTVYIiEMNSIjKPEDTAVYYCAVGRAWSGSYYSALAYQYWGQCTQVTVSS215<table>tableseeoriginaldocumentpage216</column></row><table>表B-4:针对VEGF的二价纳米抗体<table>tableseeoriginaldocumentpage216</column></row><table><VEGFPMP12E3-30GS-12E3,SEQIDNO:540/PRT;->GRFTISRDNAKMTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAGYFKRLGPTSPRDYTyWGQGTQVTVSS<VEGFp14p7d7-30GS-7D7,SEQIDNO:541;PRT;->tisrdngkntmylqmns:lkpedtavyycaqgwsiaefrswgqgtwtvss<VEGFPMP8F7-30GS-8F7,SEQIDNO:542;PRT;-:<VEGFPMP7G6-30GS-7G6,S印ID议O:543WT;-><VEGFPMP25B1-30GS-25B1,SEQID议O:544,'PRT,'->DNAKNTVSI^MNSIjKPEDTAVYYCAAKASGTIRGGSYYDSAGYSHWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSVQLVESGGGljVQSGGSrjRLSCAASGIiAFSTYAMGWFRQAPGKDREMVIA^NWSGDRT<VEGFPMP25E1、30GS-25E1,SEQ工DNO:545;PRT;-:DNAKNTVYIi,S!jKPEDTAAYYCAAQDRRRGDYYTP;DYHYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSVRGRFTISRDMAKNTVYLQMNSLKPEDTAAYYCAAQDRRRGDyyTPDraYWGQGTQVTVSS_<VEGF*PMP25D1-30GS-25D1,SEQID恥546;PRT;->DNNKNTVYIiQMNSLKSEDTAVYYCAADSGAWGGSYYRAEEYVYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGKDSVKGRFTMSRDNNKNTVYLQMNSLKSTBDTAVYYCAADSGAWGGSYYRAEEYVYWGQGTQVTVSS_EVQIiVESGGGIiVQAGASIiRLSCAASGRTFSSYDMG^FRQAPGKERALVAAITSSGGRRWYADSVLGRFTISRDNAKNTVSIiQMSSIiRPEOTAVYYCAAR^VDYNYyNKDAYTYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGDSVLGRFr工SRD船KNTVSIiQMSSLRPEDTAVYYCAARGRVDYNYYNKDAYTYWGQGTQVTVSS_<VEGFPMP25M-30GS-25D3,SEQID恥S48;PR/T;->~EVGLVESGGIOiVOAGDSIiRLSCAASGGTVRNYAMGWFRQAPGQEREIljSSITRTDNITYYEDSVKGRFTIVRGGGSGGGGSEVQLVESGGRLVQAGDSLRLSCAASGGTVRNYAMGWFRQAPGQEREILSSITRTONITYYEDSVKGRFTIVRDTAKNTVYLQMNSLKPEPTAVYYCAAAMTHFAVLEREYGYWGQGTQVTVSS_<VEGFPMP14G5-30GS-14G5,SEQIDNO:549'-PRT'"EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTISSYTMGWFRQAPGKEREFVAAGTWSTSVTEYADSVKGRFTISRDTAKNTLVliQMNSLKPEDTAVYYCAAEPYIPVRTMRHMTFIiTYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVGLVBSGGGLVQAGGSIiRLSCAASGRTISSYTMGWFRQAPGKEREFVAAGTWSTSVTEYADSVKGRFTISRDTAKNTIjYI^MKtSLlCPEDTAVYYgAAEPYIPVRTMRHMTFIiTYWGQGTQVTVSS__<VEGFPMP1C4-30GS^1C4，SEQ工DNO:550,,PRT">EVQLVESGGGIiVQAGGSLRLSCAPSGhDISSYIMGWFRQAPGKEREFTAMWWNGSWRFYAESVNGRPTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVyyCAAKERGSGAYDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLiVESGGGLVQAGGSLRLSCAPSGRDISSVTMGWFRQAPGKEIlEFTADINWNGSWIlFYAESWGR217，PVEGFPMP42B10-30GS-42B10,S印ID投0:55iL,'P;RT;SVQIiVESGGGIjVQAGGSIjRIjSCTASGRAXiDTYTVTWFRQTPGKERE:KAraTTVYIjQMNSIjKPEDTiWYYCAADLjTTWADGPYRyWGQG1WrVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG"ISRDKAKNT^Y3^QMNSIjKPEDTAVYYCAADIjTTWADGPYRYWGQ"QVTVSS____>PVSGFPMP4:2C5-30GS-42C5,SEQIDNOrSS2PRT,-->KVGIjVESGGGLV(3AGGSLR:LSCAASGRALDTYTVTWFRl3TPGKEREFVAS工R丽AKPYTTDSV"KGRETISRDFTISRENAKNTVYI^MKSIikpE:DTA工YYC!AADIjTTWADGPYRY^GQGTQVTVSS______>PVEGFPMP42H5-30GS-42H5,SEQIDNO-*553;PRT;->>PVEGFPMP42E12-30GS-42E12,S印工DNOi>'EVQLVESGGGLVQAGGSLRXjSCAASGRALDTYTVTWFHQTPGKEREFVASDRWNAKPYTTDSVKGRFTISRDSGGGGSEVGLVSSGGGIiVQAGGSLRIjSCAASGRALDTYTVTWFRGTPGKEREFVASDRWNAKPYTTDSVKGR>PVEGFPMP42E2-30GS-42E2,S印工DNO:555_>FTMSRDNAKNTVYLQMNSLRPEDTAVYYCAADPTTWADGPYRYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42F1-30GS-42F1,卿工D投Oi55S/PRT;->SGGGGSEVQLVESGGGIiVQPGGSLRIiSCAASGRAIjDTYTVTWFRQTPGKTREFVASVRWNAKPYTTDSVKGRFTISRDNAKNTVYIiQMNSIiKPEDTAVYYCAADPTTWADGPYRYWGQGTQVTVSS_>FVEGFPMP42G5-30GS-42G5,SEQ工DKO:557,'PRT;->gTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAADPTTWADGPYKYWGQGTQVWSS_>PVEGFPMP42A9-30GS-42A9,SEQIDNO:558'-PRT,-->DNAKNTVYIiQMNSIiKPEDTAVYYCAAQKGTPP:LGCPAYYG即yWGKGTTjVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGG>PVEGFPMP42B5-30GS-42B5,SEQIDNO:S59'-PRT;-:>PVEGFPM:P42A5-30GS-42A5,SEQ工DNO:5S0'.PRT":>PVEGFPMP42A3-30GS-42A3,SEQ工E)NOt561'.PRT;'AVSVKGRFTISRGDPNDTVYLQMTSIiKPEDTAVYYCATGRASRTSDYYTDRIYDSWGQGAQVTVSS>PVEGFPMP42F10-30GS-42F10,S印IDNO:562;PRTf'->218<table>tableseeoriginaldocumentpage219</column></row><table>-PVEGFPMP42B11-30GS-42311,S印H)恥575,WT;!VTVSS表B-5:针对VEGF的双特异性纳米抗体<VEGFPMP1H9-9GS-ALB8,SSQ工DNOs575PRT,'MKSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLfVTVSS-VEGFALB8-SEQ工DNO:577;PRT;-:VYYCAADPSRYFITTDRRGYDYWGQGTQVTVSS<VEGFPMP19C6-9GS-A:LB8,SEQIDNO:578;PRT;DNAKKTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAASRGVALATARPYBYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQIjVESGGGLVSLRPEDTAVYYCTIGGSIjSRSSGGIXVTVSS<VEGFALB8-9GS-PMP19C6;,SEQ工DNO:579;PRT;-DNAKTTIiYI^MNSLRPEDTAVYYCTIGGSXiSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSKVGIjVESGGGLVQAGGSLRIjVYYCAASRGVALATARPYDYWGQGTQVTVSS<VEGFPMP1D1-SGS-ALB8,SEQIDNOs580,'PRT/GMNSLRPEDTAVYYCTIGQSLSRSSQGTIiVTVSS:VEGPALBB-9GS-PMP1D1,S即工D恥581;PRT;.VYYCAASWRSSIWIPAESDSYDFWAQGTQVTVSS<VEGFPMPIDIO-9GS-ALB8,SEQ工DNO:582;PRT'-TAVYYCTIGGSLSRSSQGTLiVTVSS<VEGFALB8-9GS-PMP1D10,SEQIDNO:583;PRT;DNAKTTLYLQMNSLRP它DTAVYYCTIGGSIiSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQljVESGGGLVQPGGS:LRIjIjYSCAKGGAPNYTPRGRGTGVTVSS-VEGFSEQIDNX):584;PRT;-:yyct工ggs:lsrssqgtlvtvss<VEGFALB8-9GS-PMP25H1,SEQIDNO:585/PRT;VYYCVQSHRTPRSQGTQVTVSS220<:VEGFPMP1F7-9GS-ALB8,S即IDNO:5B6;PRT「DNAKNTLYLQMNSIjKSEDTAVyYCAKDAAGRTRGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQIiVESGGGLVQPGNSIiRIiVYYCTIGGSLSRSSOGTIiVTVSS_<VEGPALB8-9GS-PMP1F7,SEQIDNO:587;FRT;-:VYYCAKDAAGRTRGQGTQVTVSS<VEGFPMP25G2-9GS-ALB8,SEQIDNO:588,-PRT'-'RPEDTAVYYCTIGGSIiSRSSOGTLVTVSS<VEGFALB8-9GS-PMP25G2,SEQH)NO:589〖PRT;-DKAKTTIiYIiQMNSIiRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTIiVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGDLVQPGGSIiRLVYYCLNRDYGTSWADFPSWGQGTQVTVSS<VEGFPMPIHIO-9GS-ALBB,SEQ工DNO:SSO'.PRT'-.VYYCTIGGSLjSRSSiDGTIArTVSS<VEGFALB8-9GS-PMP1H10,SEQ工DNO:591;PRT;.SCAASGFTVSSYTMTOARQAPGKELEWVS11FTNGEGTYYSDSVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLKPEDTAIiYYCARDPFGKLKGQGTQVTVSS<VEGFPMP1D2-9GS-SEQIX)JJO:592;PRT;.MUSLRPEDTAVYYCTIGGSJLSRSSQGTIjVTVSS<VEGFALB8-9GS-PMP1D2,SEQIDNO:593;PRT;'YYCAADVFFSGAHRYEASQVHYWGQGTQVTVSS<:VEGFPMP12E3-9GS-ALB8,SEQIDNO:59.4;PRT->EVQIiVESGGGLVQPGGSLRIiSCAASVRTFSNyFMGWFRQAPGKEREFVATIGWSGTDYADSVKGRFTISRDNSIiRPEDTAVYYCTIGGSIiSRSSQGTIiVTVSS<VEGFALB8-9GS-SEQ工DNO:5$5;PRT'-->EVQljVESGGGIjVQPGNSIiRIiSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTIiYADSVKGRFTISRSCAASVRTFSNYFMGWFRQAPGKEREFVATIGWSGTDYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSIiKPEDTAVYYCAAGYFKRLGPTSPRDYTYWGQCTQVTVSS____<VEGFPMP7D7-9GS-ALB8,SEQID恥536;PRT'>~EVQIiVESGGGLVQAGGSIiRLSCVASGRTFGSYDMGWFRQAPGKEREFVAA工STGGGWRRYADSVKGRFT工SRDNGKNTMYIiQMNSIiKFEDTAVYYCAQGWSLAEFRSWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLrVGPGNSI^IiSCAASGFTFSSFGMSWVHQAPGJCGIiEWVSSISGSGSDTXYADSVKGRFTISRDNAKTTIjYIjQMNSijRPEDTAVYYCTIGGSIiSRSSOGTLVTVSS__<VEGFPMP7D7,SEQIDNO:597;PRT;->~"VYYCAQGV7SLAEFRSWGQGTQVTVSS221<table>tableseeoriginaldocumentpage222</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage223</column></row><table>nakhtvscaasgraldtytvtwfrqtpgkel^efvasdrwnakpyttosvpcgrftisrdk^kktvyl^mnslkpedtavy"ycaadiittoadgpyrfwgqgtqvtvss_>pvegfpmp42e2-9gs-alb8,seqidno:>pedtavyyct工ggs:lsrssggt:lvtvss_—>alb8-9gs-pveigfpmp42e2,seqidno:s25;prt;-:SCAASGRALOTYTVTWFRQTPGKGREFLASIRWNAKPYTTDSVKGRFTMSRDNAKNTVYI^MNSLRPEDTAVY"YCAADPTTWADGPYRVWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42F1-9GS-ALB8,SEQIDKOsS25;PRT;>ALB8-9GS-PVEGFPMP42F1,SEQ工DNO:S27;PRT;.YTCAADPTTWADGPYRYWGQGTQVTVSS，PVEGFPMP42G5-9GS-PJjB6,S迈QIDNOi628;PUT,'-:NAKNTVYLQMNSLtKPEDTAVYYCAADPTTWADGPYRYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTIiVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42G5,ssqidno:529;PRT,'-:SCAASGRALDTYTVTWFRQTJPGKTREFVASVRWNAKPYTTDSVKGRFTISRDNAKNTVYI^MNSIifCPEDTAV>PVEGFPMP42A9-9GS-AIiB8,SEQIDNO:530;PRT;->QMNSIjRP丑DTAVYYCTIG(3SIiSRSSQ(3TIjVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42A9,SEQ工d恥S31;PRT,-'VYTCAAQKGTPPIiGCPAYYG即YWGKGTIiVTVSSQMNSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42B5,SEQIDNO:533'-PRT;-DNAJCnXYiLQMNSIjRPEDTAVyYCTIGGSIiSRSSQGTirVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSX^LVTYCAAQKGTPPIjGCPAYYGHDYWGKGTIjVTVSS224>ALB8-9GS-PVEGFPMP42A5,SEQIDNO-S35,'PRTVDNAKTTIiYLGMNSXiRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVGIjVESGGGIjVQAGGSIiRIjVYYCATGRASRTSDYYTDRIYDSWGQGAQVTVSS>PVEGFPMP42A3-SEQ工D恥S3S;PRT;'QMNSLRPEDTAVYYCTIGGSIjSRSSQGTLVTVSS>PVEGFPMP42F10-9GS-ALB8,SEQ工DNO:638,'PRT;-:>QMNSIiRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTiLVTVSS>ALB8-9GS-FVEGFPMP42F10,SEQIDKTO;639;PRT;->VYYCATGRASRTSDYYTDR工YDSWGQGAQVTVSS_>PVEGFPMP42A11-9GS-ALB8,SEQIDNO:640;PRT;->QMNSIiRPEDTAVYYCTTGGSIiSRSSQGTLVTVSSVYYCATGRASSTSDYYTDRITOSWGGGAQVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42C1,SEQ工DNO:643,-PRT;->EVQLVESGGGIiVQPGNSI^rjSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSGSDTIjYADSVKGRFTISRSCAASGRTFSGVDVAWFROAPGKEREFVAAIiAWSGIRTYYAVSVKGRFTISRGNPNDTVYLQMTSIiKPEE)TAVYYCATGRAYRGSDYYTDRiyDSWGQGAQVTVSS_________>PVEGFPMP42C12-9GS-ALB8,SEQIDNO:644;PRT;->""~^EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRALSSYSWWFRQAPGKEREFVTAISWSVPYYADSVKGRKTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAADSIiYWRSSRMATDYDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKG1jEOTSSISGSGSDTIjYADSVKGRFTIsrdnakttlylqmnSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSGGTLVTVSS_>ALB8-9GS-PVEGFPMP42C12,SEGIDNO:645,'PRT,'->YCAADSIiYWRSSRMATDYDYWGQGTWTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42A3,SEQIDNOt637;PRT;-:VYYCATGRASRTSDYYTDRIYDSWGQGAQVTVSS>PVEGFPMP42A5-9GS-ALB8,SEQIDNOs534;PRT;->>PVEGFPMP42Cl-9GS」MiB8,SEQIDNOs642;PRT;QMNSLRPEDTAVYrcTIGGSLSRSSQGTLVTVSSsLNDRpw!，丄朋GGLFGYTVNcEDS，￡王wsENpQsiQTVADFGsEQGRGs五wGs225>AI38-9GS-PVEGFPMP42H9,SEQ工DNO:547;PRT;->EVQI/raSGGGLiVQPGNSLRLSCAASGFTFSSreMSWVRQAPGKGI^WVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISR>PVBGFPMP42E3-9GS-ALB8,SEQ工DNO:"8;PRT;->，PVEGFPMP42C7-9GS-ALB8rSEQIDNO:>ALB8-SGS-PVEGFPMP42C7,卿IDNO:651;PRT;-DNAKTTIiYLQMNSIjRPEDTAVYYCTIGGSljSRSSQGTLVTVSSGGGGSGGGSEVQIArESGGGLVQAGGALRLVYYCAVGRRWSGSYYSAIAYQYWGKGTOVTVSS>PVEGFPKiP42DS-9GS-ALBB,SEQ工DNO:652;PRT,'.MNSIiRPEDTAVYYCTIGGSXjSRSSQGTIjVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42D5,SEGIDNO:653;PRT;VYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS^VEGFPMP42D7-9GS-ALB8,SSQIDNO:654;PRT;MMSLRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSGGTLVTVSSVYYCAVGRRWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP42C10-9GS-ALB8,SSQ工DNO:656,-PRT/DNAKDTVYLEMNSLKPEDTAVYYCAVGRAWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGSEVQIjVESGGGMNSIjRPEDTAVYYCTIGGSLSRSSQGTLiVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42C;I0,SEQIDWO:S57;PRT;。EVGLVESGGGLVQPGNSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGJCGLEWVSSISGSGSDTLYADSVKGRFTISRVYYCAVGRAWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS>PVEGFPMP4r2H9-9GS-SSQII>NO:S4S;PRT;MWSiLRPHIDTAVTYCTIGGSIiSJRSSQGTlLVTVSS>ALB8-9GS-PVEGFPMP42E3,SEQID恥"3;PRT;-:GGQTsLQAGTs犯paGs—TGKssTDd4QGEGsGQAssGT-GsSGIGqGswGVGFIETRcLc卫sEFNpwQsRGYTLQ6NcDs226>pvegfpmp42d10-9gs-al38,seq工Dno:558;prtr.->MNSLRPEDTAVYYCTIGGSLiSRSSQGTLVTVSS>als8-SEQIDNOf659,-PRT;'>dnakttlylqmnslrpedt;ivyyctiggsIjSRSSQgtlvtvssggggsgggsevq;lvesggg:lvqaggalrlvyycavgrawsgsyysaiayqywgq^tqvtvss_>PVEGFPMP42E4-9GS-ALB8,SEQIDNO:SS0;PRT;->>ALB8-SGS-PVEGFPMP42E4,SE^IDNO:S61WT,'->VYYCAVGRAWSGSYYSALAYQYWGQGTQVTVSS_>PVEGFPMP42B4-SGS-ALB8,SEQ工DNO:S62,'PRT'.->MNSLRPEDTAVYYCT工GGSIiSRSSQGTLVTVSS_>ALB8-9GS-PVEGFPMP42B4,SEQ工D议O:663;PRT;VYYCAVGRAWSGSHYSALAYQYWGQGTQVTVSS_>PVEGFPMP42B11-9GS-AliB8,SEQIDNOs6S4;PRT'>QIWSIiRPEDTAVYYCTIGGSIjSRSSQGTIjVTVSS_>ALB8-9GS-PVEGFPMP42B11,SEQIDNO:>VYYCAADRWFSYTTYDATDTWHYWGQGTQVTVSS表B-6:针对VEGF的三价-双特异性纳米抗体<vegfalb8-9gs-pmp1cm-9gs-pmp1c4,seq工1>NO:"6;prt;SCAPSGRDISSYIMGWFRQAPGKEREFTADINWNGSWRFYAESVNGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAKERGSGAYDYWGQOTQVTVSSGGGGSGGGSEVQIiVESGGGLVQAGGSIiRLiSCAPSGRDISSY工MGWFRQAPGKEREFTADINWNGSWRFYAESWGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAKEkGSGAYPYWGQGTQVTVSS_<VEGFPMPlC"30GS-AIiB8-9OS-PMPlC4,S迈GIDNO:667;PRT;->EVGLVESGGGLVQAGGSIjRIiSCAPSGRDISSYIMGWFRGAPGKEREFTADINWKGSWRFYAESVWGRFTISRDNAKNTVYLQMNSliKPEDTAVYYCAAICERGSGAYDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVGLVESGGGIA^PGNSLiRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGIiEWVSSISGSGSDTIiYADSVKGRPEDTAVYYCAAKERGSGATOYWGQGTQVTVSS227<table>tableseeoriginaldocumentpage228</column></row><table>>PVEGFPMP42B10-9GS-AliB8-9GS-PMP42B10,SEQ工D议O:S75,-PIOVWFRQTPGKEREFVASNR丽AKPYTTDSVKGRFTISRDNAKNTV化QMNS!4KPEDTAVYYCAAD乙TTWADGPYRYWGQGTQVTVSS_>PVEGFPMP42B10-30GS-PMP42B10-9GS-ALB8,SEQ工DNO:577;PRT;->FTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEIDTAVYYCAADIiTTWADGPYRYWGQOTQVTVSSGGGGSGGGSEVQLVESGGQMNSIiRPEDTAVYYCTIGGSIjSRSSQGTLVTVSS229表C-1:关于不同抗-VEGF纳米抗体的解离速率关于VEGF1-109PMP42A15.95E-04PMP42A25.96E-04PMP42A32.84E-03PMP42A46.09E-03PMP42A51.67E-03PMP42A〗05.6犯^04PMP42B1U1E-03PMP42B31.77E-03PMP42B85.78E-04PMP42B95.80E-04PMP42B102.27E-04PMP42C8.25E"03PMP42C35.81E-04PMP42C54.48E-04PMP42C76.10E-04PMP42C87.64E-03PMP42C107.5犯-03PMP42C111.63E-04PMP42D25.79E-04PMP42D37.57E-03PMP42D41.61E-03PMP42D53.68E-04PMP42D71.76E-04PMP42D8I.74E-03PMP42D92.22E-04PMP42D104.11E-03PMP42E11.96E-04PMP42E21.34E-04PMP42E3.6.89E-04PMP42E47.74E-03PMP42E57.4犯-03PMP42E73.60E-04PMP42E81.5犯"03PMP42E97.47E-03PMP42E02.01E-03PMP42E17.47E-03PMP42F1PMP42F31.88E-04PMP42F41.83E-04PMP42F56.75E-03PMP42F72.19E-04PMP42F101.76E~03PMP42G21.19E-04PMP42G36.15E-04PMP42G52.51E-04关于VEGF1-165k必(l/s)PMP42A11.39E-03PMP42A21.42E-03PMP42A32.59E"03PMP42A41.73E-02PMP42A51.54E"03PMP42A101.35E-03PMP42B11.63E-03PMP42B31.63E-03PMP42B81.3犯>03PMP42B91.49E-03PMP42B103.62E-04PMP42C18.35E-03PMP42C31.42E-03PMP42C56.41E-04PMP42C71.51E-03PMP42C80.0164PMP42C101.68E-02PMP42C113,05E"04PMP42D21.48E-03PMP42D31.62E-02PMP42D41.57E"03PMP42D51.47E-03PMP42D79.40E-04PMP42D81.6犯-03PMP42D93.55E"04PMP42D106.34E-03PMP42E14.08E-04P旨42E23.11E-04PMP42E31.50^03PMP42E42.O0E-02PMP42E51.93E-02PMP42E71.28E-03PMP42E81.53E-03PMP42E91.88E-02PMP42E10/PMP42E111.91E-02PMP42F15.01E-04PMP42F34.13E-04PMP42F43.93E"04PMP42F51.74E42PMP42F76.33E~04PMP42H01.65E-03PMP42G22,7犯-04PMP42G31.65E-03PMP42G54.47E-04230<table>tableseeoriginaldocumentpage231</column></row><table>权利要求1.氨基酸序列，其针对VEGF和/或可以特异性结合VEGF。2.按照权利要求1的氨基酸序列，所述氨基酸序列针对和/或可以特异性结合VEGF上关于VEGFR-1的结合位点和/或VEGF上关于VEGFR-2的结合位点。3.按照权利要求1或2任一项的氨基酸序列，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合。4.按照权利要求1或2任一项的氨基酸序列，其在不抑制VEGF与VEGFR-2的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-1的结合。5.按照权利要求1或2任一项的氨基酸序列，其抑制VEGF与VEGFR-2的结合。6.按照权利要求1或2任一项的氨基酸序列，其在不抑制VEGF与VEGFR-1的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-2的结合。7.按照权利要求1或2任一项的氨基酸序列，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合和VEGF与VEGFR-2的结合。8.按照权利要求l-7中任一项的氨基酸序列，其减少过量的血管发生和/或新血管形成。9.按照权利要求1的氨基酸序列，其激活VEGF或其中涉及VEGF的机制或途径。10.按照权利要求1或9任一项的氨基酸序列，其基本上以分离的形式存在。11.按照权利要求1-10中任一项的氨基酸序列，用于施用给受试者，其中所述氨基酸序列在所述受试者中不是天然存在的。12.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其可以以1(T5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10—12摩尔/升或更小、并且更优选地10-S-10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。13.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其可以以102M"s"一约107m-V1,优选103m-V1-107mV,更优选104m—V1■107m"s-1，诸如1()5M"s"-107M"s"的缔合速率(k。,速率)特异性结合VEGF。14.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其可以以ls"-l(T6s",优选10—2s"-IO-6s"，更优选10—3s"-IO-6s"，诸如10—4s"-10_6s"的解离速率(k。ff速率)特异性结合VEGF。15.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其可以以小于500nM,优选小于200nM,更优选小于10nM,诸如小于500pM的亲和力特异性结合VEGF。16.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其是天然存在的氨基酸序列(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的氨基酸序列。17.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其包括免疫球蛋白折叠，或其在适当条件下能够形成免疫球蛋白折叠。18.按照前述权利要求中任一项的氮基酸序列，其基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成。19.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其为免疫球蛋白序列。20.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的免疫球蛋白序列。21.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其是人源化的免疫球蛋白序列，骆驼源化的免疫球蛋白序列，或是已经通过诸如亲和力成熟的技术获得的免疫球蛋白序列。22.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由轻链可变结构域序列(例如Vl-序列)組成；或由重链可变结构域序列(例如VH-序列)组成。23.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由来源于常规4链抗体的重链可变结构域序列组成，或其基本上由来源于重链抗体的重链可变结构域序列组成。24.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)组成，由单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)组成，由"dAb"(或适合用作dAb的氨基酸序列)组成或由纳米抗体⑧(包括但不限于Vhh序列)組成。25.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由纳米抗体⑧组成。26.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由这样的纳米抗体⑧组成，所述纳米抗体⑧a)与SEQIDNO's:1-22的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中-b)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37，44,45,47,83，84，103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。27.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由这样的纳米抗体⑧组成，所述纳米抗体⑧i)与SEQIDN0，s:441-485的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中ii)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37,44,45,47,83，84,103，104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。28.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其基本上由人源化的纳米抗体⑧组成。29.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，除了至少一个用于针对VEGF结合的结合位点之外，其包含一个或多个用于针对其他抗原、蛋白或耙标结合的另外的结合位点。30.针对VEGF的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的一个或多个氨基酸残基序列-a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；d)SEQIDNO's:261—305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351—395的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；或它们的任何适当的组合。31.按照权利要求30的氨基酸序列，其中至少一个所述氨基酸残基序列形成用于针对VEGF结合的抗原结合位点的一部分。32.按照权利要求30或31任一项的氨基酸序列，其包括选自由下列各项组成的组的两个或更多个氨基酸残基序列a)SEQIDNO's:175—215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO's:175-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:175-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；d)SEQIDNO's:261—305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3，2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351—395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；以致(i)当第一氨基酸残基序列对应于a)，b)或c)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于d),e)，f),g),h)或i)所述的氨基酸序列之一；(ii)当第一氨基酸残基序列对应于d),e)或f)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a)，b),c),g),h)或i)所述的氨基酸序列之一；或(iii)当第一氨基酸残基序列对应于g)，h)或i)所述的氨基酸序列之一时，第二氨基酸残基序列对应于a),b),c),d),e)或f)所述的氨基酸序列之一。33.按照权利要求32的氨基酸序列，其中所述至少两个氨基酸残基的序列形成用于针对VEGF结合的抗原结合位点的一部分。34.按照权利要求30-33中任一项的氨基酸序列，其包括三个或更多个氨基酸残基序列，其中所述第一氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171—215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；所述第二氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261—305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3，2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；并且所述第三氨基酸残基序列选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列。35.按照权利要求34的氨基酸序列，其中所述至少三个氨基酸残基序列形成用于针对VEGF结合的抗原结合位点的一部分。36.按照权利要求30-35中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQIDNO's:441-485的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性，优选至少80%的氨基酸同一性，更优选至少90%的氨基酸同一性，诸如95%的氨基酸同一性或更多或者甚至基本上100%的氨基酸同一性。37.针对VEGF的氨基酸序列，其交叉阻断按照权利要求30-36中任一项的至少一种氨基酸序列与VEGF结合。38.针对VEGF的氨基酸序列，其与VEGF的结合被按照权利要求30-36中任一项的至少一种氨基酸序列交叉阻断。39.按照权利要求30-38中任一项的氨基酸序列，其基本上以分离的形式存在。40.按照权利要求30-39中任一项的氨基酸序列，其用于施用给受试者，其中所述氨基酸序列在所述受试者中不是天然存在的。41.按照权利要求30-40中任一项的氨基酸序列，其可以以10久10"2摩尔/升或更小、并且优选地10-7-10_12摩尔/升或更小、并且更优选地10-S-10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。42.按照权利要求30-41中任一项的氨基酸序列，其可以以102M-V1-约107M"s",优选103M"s"-107M"s",更优选104M"s"-107M'V1,诸如105NTV1-107M"s'1的缔合速率(k。n-速率)特异性结合VEGF。43.按照权利要求30-42中任一项的氨基酸序列，其可以以ls"-10—6S",优选10-2S"-IO-6S"，更优选IO'3S"-l(T6S",诸如10—4S"-lO"S"的解离速率(k。ff速率)特异性结合VEGF。44.按照权利要求30-43中任一项的氨基酸序列，其可以以小于500nM,优选小于200nM,更优选小于10nM,诸如小于500pM的亲和力特异性结合VEGF。45.按照权利要求30-44中任一项的氨基酸序列，其是天然存在的氨基酸序列(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的氨基酸序列。46.按照权利要求30-45中任一项的氨基酸序列，其包括免疫球蛋白折叠，或其在适当条件下能够形成免疫球蛋白折叠。47.按照权利要求30-46中任一项的氨基酸序列，其是免疫球蛋白序列。48.按照权利要求30-47中任一项的氨基酸序列，其是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的免疫球蛋白序列。49.按照权利要求30-48中任一项的氨基酸序列，其是人源化的免疫球蛋白序列，骆驼源化的免疫球蛋白序列，或是已经通过诸如亲和力成熟的技术获得的免疫球蛋白序列。50.按照权利要求30-49中任一项的氨基酸序列，其基本上由轻链可变结构域序列(例如Vl-序列)組成；或由重链可变结构域序列(例如VH-序列)组成。51.按照权利要求30-50中任一项的氨基酸序列，其基本上由来源于常规4链抗体的重链可变结构域序列组成，或其基本上由来源于重链抗体的重链可变结构域序列组成。52.按照权,利要求30-51中任一项的氨基酸序列，其基本上由结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)组成，由单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)组成，由"dAb"(或适合用作dAb的氨基酸序列)组成或由纳米抗体⑧(包括但不限于Vhh序列)組成。53.按照权利要求30-52中任一项的氨基酸序列，其基本上由纳米抗体⑥组成。54.按照权利要求30-53中任一项的氨基酸序列，其基本上由这样的纳米抗体⑧组成，所述纳米抗体⑧a)与SEQIDNO's:1-22的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中b)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37,44，45,47,83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。55.按照权利要求30-54中任一项的氨基酸序列，其基本上由这样的纳米抗体⑧组成，所述纳米抗体⑧a)与SEQIDNO，s:266-285的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中b)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37，44，45,47，83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。56.按照权利要求30-55中任一项的氨基酸序列，其基本上由人源化的纳米抗体⑧组成。57.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，除了至少一个由CDR序列形成的用于结合的结合位点之外，其包含一个或多个用于针对其他抗原、蛋白或靶标结合的另外的结合位点。58.氨基酸序列，其基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有3，2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；禾口/或-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO，s:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80°/。的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。59.氨基酸序列，其基本上由4个构架区(分别为FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别为CDR1-CDR3)组成，其中-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2，或l个氨基酸差异的氨基酸序列；和-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261—305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO's:261-305的至少一个氨基酸序列具有3，2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO's:351-395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列。60.按照权利要求58或59中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的CDR序列与SEQIDNO's:441-485的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性，优选至少80%的氨基酸同一性，更优选至少90%的氨基酸同一性，诸如95%的氨基酸同一性或更多或者甚至基本上100%的氨基酸同一性。61.针对VEGF的氨基酸序列，其交叉阻断按照权利要求58-60中任一项的至少一种氨基酸序列与VEGF结合。62.针对VEGF的氨基酸序列，其与VEGF的结合被按照权利要求58-60中任一项的至少一种氨基酸序列交叉阻断。63.按照权利要求58-62中任一项的氨基酸序列，其基本上以分离的形式存在。64.按照权利要求58-63中任一项的氨基酸序列，其用于施用给受试者，其中所述氨基酸序列在所述受试者中不是天然存在的。65.按照权利要求58-64中任一项的氨基酸序列，其可以以10—5-10_12摩尔/升或更小、并且优选地10—7-10'12摩尔/升或更小、并且更优选地10义10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。66.按照权利要求58-65中任一项的氨基酸序列，其可以以102m"s"—约107m-V1,优选103MTV1■107mV1,更优选104m"s"-107M"s—1，诸如105M-V1-107M'Y1的缔合速率(k。n-速率)特异性结合VEGF。67.按照权利要求58-66中任一项的氨基酸序列，其可以以ls-1-10_6s",优选10_2s—1-10—6s",更优选10—3s—1-10-6s",诸如10_4s—1-10-6s"的解离速率(k。ff速率)特异性结合VEGF。68.按照权利要求58-67中任一项的氨基酸序列，其可以以小于500nM,优选小于200nM,更优选小于10nM,诸如小于500pM的亲和力特异性结合VEGF。69.按照权利要求58-68中任一项的氨基酸序列，其是天然存在的氨基酸序列(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的氨基酸序列。70.按照权利要求58-69中任一项的氨基酸序列，其包括免疫球蛋白折叠，或其在适当条件下能够形成免疫球蛋白折叠。71.按照权利要求58-70中任一项的氨基酸序列，其是免疫球蛋白序列。72.按照权利要求58-71中任一项的氨基酸序列，其是天然存在的免疫球蛋白序列(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的免疫球蛋白序列。73.按照权利要求58-72中任一项的氨基酸序列，其是人源化的免疫球蛋白序列，骆驼源化的免疫球蛋白序列，或是已经通过诸如亲和力成熟的技术获得的免疫球蛋白序列。74.按照权利要求58-73中任一项的氨基酸序列，其基本上由轻链可变结构域序列(例如Vl-序列)組成；或由重链可变结构域序列(例如VH-序列)组成。75.按照权利要求58-74中任一项的氨基酸序列，其基本上由来源于常规4链抗体的重链可变结构域序列组成，或其基本上由来源于重链抗体的重链可变结构域序列组成。76.按照权利要求58-75中任一项的氨基酸序列，其基本上由结构域抗体(或适合用作结构域抗体的氨基酸序列)组成，由单结构域抗体(或适合用作单结构域抗体的氨基酸序列)组成，由"dAb"(或适合用作dAb的氨基酸序列)组成或由纳米抗体⑧(包括但不限于Vhh序列)組成。77.按照权利要求58-76中任一项的氨基酸序列，其基本上由纳米抗体⑧组成。78.按照权利要求58-77中任一项的氨基酸序列，其基本上由这样的纳米抗体⑧组成，所述纳米抗体⑧a)与SEQIDNO，s:1-22的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中b)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37,44,45，47,83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。79.按照权利要求589-78中任一项的氨基酸序列，其基本上由这样的纳米抗体⑧组成，所述纳米抗体⑧a)与SEQIDNO's:441-485的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中b)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37,44,45,47，83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。80.按照权利要求589-79中任一项的氨基酸序列，其基本上由人源化的纳米抗体⑥组成。81.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，除了至少一个由所述CDR序列形成的用于结合的结合位点之外，其包含一个或多个用于针对其他抗原、蛋白或靶标结合的另外的结合位点。82.纳米抗体，其针对VEGF和/或可以特异性结合VEGF。83.按照权利要求82的纳米抗体，所述纳米抗体针对和/或可以特异性结合VEGF上关于VEGFR-1的结合位点和/或VEGF上关于VEGFR-2的结合位点。84.按照权利要求82或83任一项的纳米抗体，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合。85.按照权利要求82或83任一项的纳米抗体，其在不抑制VEGF与VEGFR-2的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-1的结合。86.按照权利要求82或83任一项的纳米抗体，其抑制VEGF与VEGFR-2的结合。87.按照权利要求82或83任一项的纳米抗体，其在不抑制VEGF与VEGFR-1的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-2的结合。88.按照权利要求82或83任一项的纳米抗体，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合和VEGF与VEGFR-2的结合。89.按照权利要求82-88中任一项的纳米抗体，其减少过量的血管发生和/或新血管形成。90.按照权利要求82的纳米抗体，其激活VEGF或其中涉及VEGF的机制或途径。91.按照权利要求82-90中任一项的纳米抗体，其基本上以分离的形式存在。92.按照权利要求82或91任一项的纳米抗体，其可以以10-5-10"2摩尔/升或更小、并且优选地10:10"2摩尔/升或更小、并且更优选地10-s-10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。93.按照权利要求82-92中任一项的纳米抗体，其可以以1(fM'V1-约107M-V，优选1。3M-V'-107M-V,更优选104M"s"-l()7M-V1,诸如lf^M'V1-1()7M"s"的缔合速率(lW"速率)特异性结合VEGF。94.按照权利要求82-93中任一项的纳米抗体，其可以以ls"-l(T6S",优选IO'2S—1-10—6S"，更优选It)—3S"-If)—6S",诸如10—4S"-10—6S"的解离速率(k。ff速率)特异性结合VEGF。95.按照权利要求82-94中任一项的纳米抗体，其可以以小于500nM,优选小于200nM，更优选小于10nM,诸如小于500pM的亲和力特异性结合VEGF。96.按照权利要求82-95中任一项的纳米抗体，其是天然存在的纳米抗体(来自任何适宜的物种)或者是合成的或半合成的纳米抗体。97.按照权利要求82-96中任一项的纳米抗体，其是Vhh序列，部分人源化的Vhh序列，完全人源化的Vhh序列，骆驼源化的重链可变结构域，或是己经通过诸如亲和力成熟的技术获得的纳米抗体。98.按照权利要求82-97中任一项的纳米抗体，其a)与SEQIDNO，s:1-22的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中b)优选地，在按照Kabat编号的位置11，37，44，45,47,83,84,103，104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。99.按照权利要求82-98中任一项的纳米抗体，其a)与SEQIDNO's:441-485的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性，其中为了确定氨基酸同一性的程度的目的，忽略形成所述CDR序列的氨基酸残基；并且其中b)优选地，在按照Kabat编号的位置11,37，44,45,47，83,84,103,104和108的一个或多个氨基酸残基选自表A-3中提及的标志残基。100.按照权利要求82-99中任一项的纳米抗体，其中-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171—215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO's:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDN0，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO，s:261—305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有3，2，或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和/或-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO，s:351—395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO，s:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。101.按照权利要求82-100中任一项的纳米抗体，其中-CDR1选自由下列各项组成的组a)SEQIDNO，s:171-215的氨基酸序列；b)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；c)与SEQIDNO，s:171-215的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和-CDR2选自由下列各项组成的组d)SEQIDNO's:261-305的氨基酸序列；e)与SEQIDNO，s:261-305的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氮基酸序列；f)与SEQIDNO，s:261—305的至少一个氨基酸序列具有3,2,或1个氨基酸差异的氨基酸序列；和-CDR3选自由下列各项组成的组g)SEQIDNO's:351—395的氨基酸序列；h)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有至少80%的氨基酸同一性的氨基酸序列；i)与SEQIDNO's:351-395的至少一个氨基酸序列具有3,2或1个氨基酸差异的氨基酸序列。102.按照权利要求82-101中任一项的纳米抗体，其中所述CDR序列与SEQIDNO，s:441—485的至少一个氨基酸序列的CDR序列具有至少70%的氨基酸同一性，优选至少80%的氨基酸同一性，更优选至少90%的氨基酸同一性，诸如95%的氨基酸同一性或更多或者甚至基本上100%的氨基酸同一性。103.按照权利要求82-102中任一项的纳米抗体，其是部分人源化的纳米抗体。104.按照权利要求82-103中任一项的纳米抗体，其是完全人源化的纳米抗体。105.按照权利要求82-104中任一项的纳米抗体，其选自由SEQIDNO's:441—485组成的组，或选自由与SEQIDNO，s:441-485的至少一个氨基酸序列具有大于80°/。，优选大于90%，更优选大于95%，诸如99%或更多序列同一性(如本文所定义)的氨基酸序列组成的组。106.按照权利要求82-105中任一项的纳米抗体，其选自由SEQIDNO，s:411-485组成的组。107.针对VEGF的纳米抗体，其交叉阻断权利要求30-36或58-60中任一项的至少一种氨基酸序列或权利要求100-106中任一项的纳米抗体与VEGF结合。108.针对VEGF的纳米抗体，其与VEGF的结合被权利要求30-36或58-60中任一项的至少一种氨基酸序列或权利要求100-106中任一项的纳米抗体交叉阻断。109.化合物或构建体，其包括按照权利要求1-81中任一项的一个或多个氨基酸序列和/或按照权利要求82-108中任一项的一个或多个纳米抗体或基本上由按照权利要求1-81中任一项的一个或多个氨基酸序列和/或按照权利要求82-108中任一项的一个或多个纳米抗体组成，并且任选地还包括任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位。110.按照权利要求109的化合物或构建体，其中所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位是氨基酸序列。111.按照权利要求109或110任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个接头，如果存在，是一个或多个氨基酸序列。112.按照权利要求109-111中任一项的化合物或构建体，其中所述"个或多个其他基团、残基、部分或结合单位是免疫球蛋白序列。113.按照权利要求109-112中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位选自由下列各项组成的组结构域抗体、适合用作结构域抗体的氨基酸序列、单结构域抗体、适合用作单结构域抗体的氨基酸序列、"dAb"、适合用作dAb的氨基酸序列、或纳米抗体。114.按照权利要求109-113中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列是免疫球蛋白序列。115.按照权利要求109-114中任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个本发明的氨基酸序列选自由下列各项组成的组结构域抗体、适合用作结构域抗体的氨基酸序列、单结构域抗体、适合用作单结构域抗体的氨基酸序列、"dAb"、适合用作dAb的氨基酸序列、或纳米抗体。116.化合物或构建体，其包括一个或多个按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体或基本上由按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体组成，并且其中所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位是纳米抗体。117.按照权利要求109-116中任一项的化合物或构建体，其是多价构建体。118.按照权利要求109-116中任一项的化合物或构建体，其是多特异性构建体。119.按照权利要求118的化合物或构建体，其包括针对VEGF的纳米抗体和针对VEGFR-1和/或VEGR-2的纳米抗体或者基本上由针对VEGF的纳米抗体和针对VEGFR-1和/或VEGR-2的纳米抗体组成。120.按照权利要求118的化合物或构建体，其包括针对VEGF的纳米抗体和针对肿瘤抗原的纳米抗体或者基本上由针对VEGF的纳米抗体和针对肿瘤抗原的纳米抗体组成。121.按照权利要求118的化合物或构建体，其包括针对VEGF上关于VEGFR-1的结合位点的纳米抗体和针对VEGF上关于VEGFR-2的结合位点的纳米抗体、或者基本上由针对VEGF上关于VEGFR-1的结合位点的纳米抗体和针对VEGF上关于VEGFR-2的结合位点的纳米抗体组成。122.按照权利要求109-121中任一项的化合物或构建体，分别与相对应的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列本身或与按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体本身相比较，所述化合物或构建体具有增加的半衰期。123.按照权利要求122的化合物或构建体，其中分别与相对应的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列本身或与按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体本身相比较，所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位为所述化合物或构建体提供增加的半衰期。124.按照权利要求123的化合物或构建体，其中为所述化合物或构建体提供增加的半衰期的所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位选自由下列各项组成的组血清蛋白或其片段，可以结合血清蛋白的结合单位，Fc部分，以及可以结合血清蛋白的小蛋白或肽。125.按照权利要求123的化合物或构建体，其中为所述化合物或构建体提供增加的半衰期的所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位选自由人血清白蛋白或其片段组成的组。126.按照权利要求123的化合物或构建体，其中为所述化合物或构建体提供增加的半衰期的所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位选自由可以结合血清白蛋白(诸如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(诸如IgG)的结合单位组成的组。127.按照权利要求123的化合物或构建体，其中为所述化合物或构建体提供增加的半衰期的所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位选自由下列各项组成的组结构域抗体，适合用作结构域抗体的氨基酸序列，单结构域抗体，适合用作单结构域抗体的氨基酸序列，"dAb"，适合用作dAb的氨基酸序列，或可以结合血清白蛋白(诸如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(诸如IgG)的纳米抗体。128.按照权利要求123的化合物或构建体，其中为所述化合物或构建体提供增加的半衰期的所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位是可以结合血清白蛋白(诸如人血清白蛋白)或血清免疫球蛋白(诸如IgG)的纳米抗体。129.按照权利要求122-128中任一项的化合物或构建体，其具有分别是相对应的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列本身或按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体本身的半衰期至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的血清半衰期。130.按照权利要求122-129中任一项的化合物或构建体，分别与相对应的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列本身或按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体本身相比较，所述化合物或构建体具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的血清半衰期。131.按照权利要求122-130中任一项的化合物或构建体，其在人中具有至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期；例如，本发明的化合物或多肽可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的血清半衰期。132.单价构建体，其包括按照权利要求1-81中任一项的一个氨基酸序列和/或按照权利要求82-108中任一项的一个纳米抗体或基本上由按照权利要求1-81中任一项的一个氨基酸序列和/或按照权利要求82-108中任一项的一个纳米抗体组成。133.按照权利要求132的单价构建体，其中所述本发明的氨基酸序列选自由下列各项组成的组结构域抗体、适合用作结构域抗体的氨基酸序列、单结构域抗体、适合用作单结构域抗体的氨基酸序列、"dAb"、适合用作dAb的氨基酸序列、或纳米抗体。134.单价构建体，其包括按照权利要求82-108中任一项的一个纳米抗体或基本上由按照权利要求82-108中任一项的一个纳米抗体组成。135.核酸或核苷酸序列，其编码按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体。136.按照权利要求135的核酸或核苷酸序列，其以遗传构建体的形式存在。137.宿主或宿主细胞，所述宿主或宿主细胞表达或其在适当的环境下能够表达下列各项按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-136中任一项的单价构建体；和/或所述宿主或宿主细胞包括按照权利要求135的核酸或核苷酸序列、或按照权利要求136的遗传构建体。138.生产按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体的方法，所述方法至少包括下列步骤a)在适当的宿主细胞或宿主生物体内或在另一种适当的表达系统内表达按照权利要求135的核酸或核苷酸序列、或按照权利要求136的遗传构建体；任选地接着b)分离和/或纯化这样获得的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体。139.生产按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体的方法，所述方法至少包括下列步骤a)在使所述宿主或宿主细胞表达和/或生产下列各项中的至少一种的条件下按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，培养和/或维持按照权利要求137的宿主或宿主细胞；任选地接着:.b)分离和/或纯化这样获得的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体。140.组合物，所述组合物包括至少一个的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、按照权利要求132-134中任一项的单价构建体、或按照权利要求135-136的核酸或核苷酸序列。141.按照权利要求140的组合物，其是药物组合物。142.按照权利要求141的组合物，其是药物组合物，其还包括至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂和/或辅剂，并且其任选地包括一种或多种其他的药物活性多肽和/或化合物。143.用于预防和/或治疗以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的至少一种病症或疾病的方法，所述方法包括给需要其的受试者施用药物活性量的下列各项的至少一种按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列，按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体，按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体，按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，或按照权利要求140-142中任一项的组合物。144.用于预防和/或治疗与VEGF相关的、与其生物或药学活性相关的、和/或与其中涉及VEGF的生物途径或信号传导相关的至少一种疾病或病症的方法，所述方法包括给需要其的受试者施用药物活性量的下列各项的至少一种按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列，按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体，按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体，按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，或按照权利要求140-142中任一项的组合物。145.用于预防和/或治疗可以通过给需要其的受试者施用下列各项而预防和/或治疗的至少一种病症或疾病的方法按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列，按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体，按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体，或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，所述方法包括给需要其的受试者施用药物活性量的下列各项的至少一种:，按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列，按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体，按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体，按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，或按照权利要求140-142中任一项的组合物。146.用于免疫治疗的方法，所述方法包括给需要所述方法的受试者施用药物活性量的至少一个按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列，按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体，按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体，按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，或按照权利要求140-142中任一项的组合物。147.按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体用于制备药物组合物；和/或用于按照权利要求143-146—种或多种方法中的应用，所述药物组合物用来预防和/或治疗以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的至少一种病症或疾病。148.按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体、按照权利要求109-131中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，用于预防和/或治疗以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的至少一种病症或疾病；和/或用于按照权利要求143-146的一种或多种方法中。149.按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列的或按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体的部分或片段。150.按照权利要求149的部分或片段，其可以特异性结合VEGF。151.按照权利要求150的部分或片段，其针对和/或可以特异性结合VEGF上关于VEGFR-1的结合位点和/或VEGF上关于VEGFR-2的结合位点。152.按照权利要求150或151任一项的部分或片段，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合。153.按照权利要求150或151任一项的部分或片段，其在不抑制VEGF与VEGFR-2的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-1的结合。154.按照权利要求150或151任一项的部分或片段，其抑制VEGF与VEGFR-2的结合。155.按照权利要求150或151任一项的部分或片段，其在不抑制VEGF与VEGFR-1的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-2的结合。156.按照权利要求150或151任一项的部分或片段，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合和VEGF与VEGFR-2的结合。157.按照权利要求150或156任一项的部分或片段，其减少过量的血管发生和/或新血管形成。158.按照权利要求150的部分或片段，其激活VEGF或其中涉及VEGF的机制或途径。159.按照权利要求149-158中任一项的部分或片段，其可以以10-5-10"2摩尔/升或更小、并且优选地10_7-10"2摩尔/升或更小、并且更优选地10义10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。160.按照权利要求149-159中任一项的部分或片段，其可以以102mV1—约107m-V1,优选103m"s"-107m-V1,更优选1041VfV1-107m"s",诸如105m'V1-107]VrV1的缔合速率(k。n-速率)特异性结合VEGF。161.按照权利要求149-160中任一项的部分或片段，其可以以ls"-IO-6s",优选10-2s"-l(T6s",更优选10-3s"-10_6s",诸如l(T4s"-10'6s"的解离速率(koff速率)特异性结合VEGF。162.化合物或构建体，其包括一个或多个按照权利要求149-161中任一项的部分或片段或基本上由一个或多个按照权利要求149-161中任一项的部分或片段组成，并且任选还包括任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位。163.按照权利要求162的化合物或构建体，其中所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位是氨基酸序列。164.按照权利要求162-163任一项的化合物或构建体，其中所述一个或多个接头，如果存在，是一个或多个氨基酸序列。165.核酸或核苷酸序列，其编码按照权利要求149-161中任一项的部分或片段，或按照权利要求162-164中任一项的化合物或构建体。166.组合物，所述组合物包括至少一个的按照权利要求149-161中任一项的部分或片段、按照权利要求162-164中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求165的核酸或核苷酸序列。167.按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列的、或按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体的衍生物。168.按照权利要求167的衍生物，其可以特异性结合VEGF。169.按照权利要求168的衍生物，其针对和/或可以特异性结合VEGF上关于VEGFR-1的结合位点和/或VEGF上关于VEGFR-2的结合位点。170.按照权利要求168或169任一项的衍生物，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合。171.按照权利要求168或169任一项的衍生物，其在不抑制VEGF与VEGFR-2的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-1的结合。172.按照权利要求168或169任一项的衍生物，其抑制VEGF与VEGFR-2的结合。173.按照权利要求168或169任一项的衍生物，其在不抑制VEGF与VEGFR-1的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-2的结合。174.按照权利要求168或169任一项的衍生物，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合和VEGF与VEGFR-2的结合。175.按照权利要求168-174中任一项的衍生物，其减少过量的血管发生和/或新血管形成。176.按照权利要求168的衍生物，其激活VEGF或其中涉及VEGF的机制或途径。177.按照权利要求167-176中任一项的衍生物，其可以以10久10"2摩尔/升或更小、并且优选地10:10—12摩尔/升或更小、并且更优选地10-S-10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。178.按照权利要求167-177中任一项的衍生物，其可以以1(^M—V1—约107M-V1,优选103M"s"-107M"s"，更优选104M"s"-107M"s",诸如1(^M"^-l(^M"s"的缔合速率(k。n-速率)特异性结合VEGF。179.按照权利要求167-178中任一项的衍生物，其可以以ls"-10_6s",优选IO'2s'1-10—6s—1,更优选10-3s"-10-6s",诸如10-4s"-10'6s"的解离速率(k。ff速率)特异性结合VEGF。180.按照权利要求109-134中任一项的化合物或构建体的衍生物。181.按照权利要求180的衍生物，其可以特异性结合VEGF。182.按照权利要求181的衍生物，其针对和/或可以特异性结合VEGF上关于VEGFR-1的结合位点和/或VEGF上关于VEGFR-2的结合位点。183.按照权利要求181或182任一项的衍生物，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合。184.按照权利要求181或182任一项的衍生物，其在不抑制VEGF与VEGFR-2的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-1的结合。185.按照权利要求181或182任一项的衍生物，其抑制VEGF与VEGFR-2的结合。186.按照权利要求181或182任一项的衍生物，其在不抑制VEGF与VEGFR-1的结合的条件下抑制VEGF与VEGFR-2的结合。187.按照权利要求181或182任一项的衍生物，其抑制VEGF与VEGFR-1的结合和VEGF与VEGFR-2的结合。188.按照权利要求181-187中任一项的衍生物，其减少过量的血管发生和/或新血管形成。189.按照权利要求181的衍生物，其激活VEGF或其中涉及VEGF的机制或途径。190.按照权利要求180-189中任一项的衍生物，其可以以10_5-10-12摩尔/升或更小、并且优选地10'7-10"2摩尔/升或更小、并且更优选地10-S-10"摩尔/升的解离常数(KD)特异性结合VEGF。191.按照权利要求180-190中任一项的衍生物，其可以以1(^NrV1—约107NfV1，优选103M"s"-107NfV，更优选104M-V1画107M'V1,诸如10SM—V-l(^M"s"的缔合速率(k。n-速率)特异性结合VEGF。192.按照权利要求180-191中任一项的衍生物，其可以以ls"-IO'6S",优选l(T2S"-IO-6S",更优选IO-3S"-l(T6S"，诸如IO'4S"-10"S"的解离速率(k。ff速率)特异性结合VEGF。193.按照权利要求167-192中任一项的衍生物，其具有分别是相对应的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列本身、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体本身、或按照权利要求109-134中任一项的化合物或构建体本身的半衰期至少1.5倍、优选地至少2倍，如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍的血清半衰期。194.按照权利要求167-193中任一项的衍生物，与相对应的按照权利要求1-81中任一项的氨基酸序列本身、按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体本身、或按照权利要求109-134中任一项的化合物或构建体本身相比较，所述衍生物具有增加超过1小时，优选超过2小时，更优选超过6小时，诸如超过12小时，或甚至超过24、48或72小时的血清半衰期。195.按照权利要求167-197中任一项的衍生物，其在人中具有至少约12小时、优选至少24小时、更优选至少48小时、甚至更优选至少72小时或更多的血清半衰期；例如，本发明的衍生物可以具有至少5天(诸如约5-10天)、优选至少9天(诸如约9-14天)、更优选至少约10天(诸如约10-15天)、或至少约11天(诸如约11-16天)、更优选至少约12天(诸如约12-18天或更多)、或超过14天(诸如约14-19天)的血清半衰期。196.按照权利要求167-195中任一项的衍生物，其是聚乙二醇化的衍生物。197.化合物或构建体，其包括一个或多个按照权利要求167-196中任一项的衍生物或基本上由一个或多个按照权利要求167-196中任一项的衍生物组成，并且任选还包括任选地通过一个或多个接头连接的一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位。198.按照权利要求197的化合物或构建体，其中所述一个或多个其他基团、残基、部分或结合单位是氨基酸序列。199.按照权利要求197或198的化合物或构建体，其中所述一个或多个接头，如果存在，是一个或多个氨基酸序列。200.核酸，其编码按照权利要求167-196中任一项的衍生物或按照权利要求197-199中任一项的化合物或构建体。201.组合物，所述组合物包括至少一个权利要求167-196中任一项的衍生物、按照权利要求197-199中任一项的化合物或构建体、或按照权利要求200的核酸或核苷酸序列。202.缓慢释放的制剂，其包括至少下列各项按照权利要求1-81中任一项的氨基酸，按照权利要求82-108中任一项的纳米抗体，或按照权利要求109-131、162-164或197-199中任一项的化合物或构建体，按照权利要求132-134中任一项的单价构建体，按照权利要求140-142、166或201中任一项的组合物，按照权利要求149-161中任一项的部分或片段，或按照权利要求167-196中任一项的衍生物。全文摘要本发明涉及针对血管内皮生长因子(VEGF)的氨基酸序列，以及包括一个或多个所述氨基酸序列或基本上由其组成的化合物或构建体、且特别是蛋白和多肽。所述氨基酸序列、化合物和构建体可以用于预防、治疗或诊断目的，诸如用于治疗以过量的和/或病理性血管发生或新血管形成为特征的病症和疾病。文档编号C07K16/22GK101663319SQ200880005830公开日2010年3月3日申请日期2008年2月21日优先权日2007年2月21日发明者亨德里克斯·雷内瑞斯·雅各布斯·马托伊斯·霍根博姆,帕斯卡尔·热拉尔·梅谢尔,彼得·维赫森申请人:埃博灵克斯股份有限公司