乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮衍生物及其制备方法和应用的制作方法

专利名称：乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮衍生物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一系列乙酰氨基酸节酯修饰的异黄酮衍生物及其制备方法，进 一步涉及它们在制备抗肺瘤药物中的用途。本发明属于生物医药领域。
背景技术：
恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因恶性肿瘤而 引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。肿瘤的治疗 方法有手术治疗，放射治疗和药物治疗(化学治疗)。目前，化学治疗仍然是 临床治疗肿瘤的主要手段。寻找抗肺瘤药物是新药研究的热点之一。
5,7,4'-三羟基异黄酮是一种已知的具有抗肿瘤活性的天然产物，其抗肿瘤作 用通过对肿瘤细胞的细胞毒作用、对上皮细胞生长因子受体的抑制作用、对肿 瘤血管生成的抑制作用、对多要耐药蛋白(MPR)的特异性抑制作用等多个途 径实现。不过，5,7,4'-三羟基异黄酮的抗肿瘤活性不能够满足抗肿瘤治疗所需。 药物发明人认识到，在5,7,4'-三幾基异黄酮的7位、4'位同时引入氨基酸节酯或 5位、7位、4'位同时引入氨基酸卡酯可增强5,7,4'-三鞋基异黄酮的抗肿瘤活性。

发明内容
本发明的目的之一是，在5,7,4'-三羟基异黄酮的7位、4'位同时引入氨基酸 千酯或5位、7位、4'位同时引入氨基酸千酯，得到抗肿瘤活性增强的异黄酮衍 生物。
本发明的目的之一是通过以下技术方案实现的
通式Ia-q的乙酰氨基酸卡酯修饰的异黄酮衍生物，式中Ri、 &和R3均为 CH2CO-AA-Obzl,或者R^和112均为CH2CO-AA-OBzl, R3为H;其中，所述 CH2CO-AA-OBzl中的AA选自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。本发明的的目的之二是，提供一种制备上述乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮 书亍生物的方法。
本发明的目的之二是通过以下技术方案来实现的
(1) 将溴代乙酸与氨基酸苄酯偶联，得到溴乙酰氨基酸苄酯，其中，所述氨 基酸选自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、
天冬氨酸、谷氨酸；
(2) 将溴乙酰氨基酸节酯引入5,7,4'-三羟基异黄酮的7位和4'位或者将溴乙 酰氨基酸卡酯引入5,7,4'-三羟基异黄酮的5位、7位和4'位。
该制备方法可以用图1的路线概括。
本发明采用小鼠S18o肉瘤模型评价了通式Ia-q的乙酰氨基酸苄酯修饰的异 黄酮衍生物的抗肺瘤作用，表明它们具有优秀的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂。


图1为通式Ia-q的乙酰氨基酸千酯修饰的异黄酮衍生物的合成路线。i) THF， DCC, NMM，水浴；ii)丙酮，K2C03，水浴。其中R!、 R2和R3均为 CH2CO-AA-OBzl，或者R4和R2均为CH2CO-AA-OBzl， R3为H; CH2CO-AA-OBzl 中的AA选自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨 酸、天冬氨酸、谷氨酸。
为了进一步阐迷本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证 性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
具体实施例方式
实施例1制备溴乙酰氨基酸节酯的通法
将0.005 mol溴代乙酸用60 ml无水THF溶解在100 ml茄瓶中，水浴下加 入0.005 mol DCC,待反应完全(约30分钟)，加入0.005 mol AA-OBzl,加入NMM 调节PH-8 9, TLC监测反应情况，待AA-OBzl原料消失后终止反应，过滤，滤 液减压浓缩至干。得到的残余物用100 mL乙酸乙酯溶解、置于250 ml分液漏 斗中、依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗(30 mLx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30 mLx3)、5%硫酸氢钟水溶液洗(30 mLx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30 mLx3)、饱和碳酸氢 钠水溶液洗(30mLx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mLx3)。合并的乙酸乙酯层用无 水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓縮至干，得到的化合物溴乙酰氨基酸苄酯为 无色固体。
实施例2制备溴乙酰甘氨酸节酯
按照实施例l的通法，用lg Tos.Gly-OBzl制得585 mg (收率68.9°/。)溴乙酰甘 氨酸节酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z)310 [M+H+Na]+。
实施例3制备溴乙酰丙氨酸苄酯
按照实施例l的通法，用lgTos.Ala-OBzl制得455mg(收率53.2。/(0溴乙酰丙 氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 324 [M+H+Na]+。
实施例4制备溴乙酰苯丙氨酸节酯
按照实施例l的通法，用lg Tos.Phe-OBzl制得534mg (收率60.6%)溴乙酰苯 丙氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 400 [M+H+Na]+。
实施例5制备溴乙酰色氨酸苄酯
按照实施例1的通法，用lg H3P(VTrp-OBzl制得643mg (收率60.7%)溴乙酰 色氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 439 [M+H+Na〗+。
实施例6制备溴乙酰异亮氨酸千酯
按照实施例l的通法，用lg Tos'Ile-OBz^Wf367mg (收率42.1%)溴乙酰异 亮氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 366 [M+H+Na]+。
实施例7制备溴乙酰亮氨酸苄酯
按照实施例l的通法，用lgTos.Leu-OBzl制得250mg(收率28.7。/。)溴乙酰亮 氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 366 [M+H+Na]+。
实施例8制备溴乙酰缬氨酸苄酯
按照实施例l的通法，用lg Tos'Val -OBz^WfMlmg (收率50,9°/。)溴乙酰錄氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 352 [M+H+Na]+。
实施例9制备溴乙酰天冬氨酸节酯
按照实施例l的通法，用lg Tos'Asp-(OBzl)-OBzl制得463mg (收率51.7%)溴 乙酰天冬氨酸节酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 458 [M+H+Na]+。
实施例10制备溴乙酰谷氨酸千酯
按照实施例l的通法，用lgTos'Glu-(OBzl)-OBzl制得511mg(收率56.9%) 溴乙酰谷氨酸千酯，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 449 [M+H]+。
实施例11制备5-羟基-7，4'-二乙酰基氨基酸节酯-异黄酮的通法
0.001 mol染料木素用60ml丙酮溶解在100ml茄瓶中，水浴下分两次加入 0.0035mol共0.007molK2CO3,约2个小时后，加入0.006mol溴乙酰氨基酸，TLC 监测反应情况，待染料木素原料消失后终止反应，过滤，滤液减压浓缩至干。 得到的残余物用100 mL乙酸乙酯溶解、置于250 ml分液漏斗中、依次用饱和 碳酸氬钠水溶液洗(30 mLx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30 mLx3)。合并的乙酸乙酯 层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干。得到5-羟基-7,4'-二乙酰基氨 基酸千酯-异黄酮，为无色固体。
实施例12制备5-幾基-7，4'-二乙酰甘氨酸节酯-异黄酮(Ia)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Gly-OBzl制得68 mg (收率17.2%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z)681 [M+H]+。
实施例13制备5-鞋基-7，4'-二乙酰丙氨酸节酯-异黄酮(Ib)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Ala-OBzl制得99 mg (收率25.4%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 709 [M+H〗+。
实施例14制备5-羟基-7，4'-二乙酰苯丙氨酸千酉旨-异黄酮(Ic)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Phe-OBzl制得100 mg (收率20.5%)目 标化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 861 [M+H〗+。实施例15制备5-羟基-7,4'-二乙酰色氨酸千酯-异黄酮(Id)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Trp-OBzl制得84mg (收率22.3%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 939[M+H]+。
实施例16制备5-羟基-7，4'-二乙酰异亮氨酸节酉旨-异黄酮(Ie)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Ile-OBzl制得166mg (收率42.9%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 793 [M+H]+。
实施例17制备5-羟基-7，4'-二乙酰亮氨酸节酯-异黄酮(If)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Leu-OBzl制得75mg (收率19.4%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 793 [M+H〗+。
实施例18制备5-羟基-7，4'-二乙酰缬氨酸千酯-异黄酮(Ig)的数据
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Val-OBzl制得47mg (收率12.1%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 765 [M+H〗+。
实施例19制备5-羟基-7，4'-二乙酰天冬氨酸千酉旨-异黄酮(Ih)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Asp-(OBzl)-OBzl制得85mg (收率22.7%) 目标化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 978 [M+H+Na〗+。
实施例20制备5-羟基-7，4'-二乙酰谷氨酸千酯-异黄酮(Ii)
按照实施例11的通法，用lg BrAC-Glu-(OBzl)-OBzl制得127mg (收率34.0%) 目标化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1005 [M+H]+。
实施例21制备5，7，4'-三乙酰氨基酸千酯-异黄酮的通法
0.001 mol染料木素用60 ml丙酮溶解在100ml茄瓶中，水浴下分两次加入 0扁5mo1共0.007molK2CO3,约2个小时后，加入0.006mol溴乙酰氨基酸，TLC 监测反应情况，待染料木素原料消失后终止反应，过滤，滤液减压浓缩至干。 得到的残余物用100 mL乙酸乙酯溶解、置于250 ml分液漏斗中、依次用饱和 碳酸氢钠水溶液洗(30mLx3)、饱和氯化钠水溶液洗(30mLx3)。合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓缩至干。得到5,7,4'-三乙酰氨基酸苄酯 -异黄酮，为无色固体。
实施例22制备5，7，4'-三乙酰甘氨酸苄酯-异黄酮(Ij)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Gly-OBzl制得80mg (收率15.5%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 886 [M+H]+。
实施例23制备5,7，4'-三乙酰丙氨酸苄酯-异黄酮(Ik)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Ala-OBzl制得140mg (收率27.2%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 938 [M+H]+。
实施例24制备5，7，4'-三乙酰苯丙氨酸苄酯-异黄酮(11)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Phe-OBzl制得250mg (收率48.8%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1156 [M+H广。
实施例25制备5，7，4'-三乙酰色氨酸苄酯-异黄酮(Im)
按照实施例21的通法，用lgBrAC-Trp-OBzl制得108mg (收率21.1%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1273 [M+H〗+。
实施例26制备5，7，4'-三乙酰亮氨酸节酯-异黄酮(In)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Leu-OBzl制得76mg (收率14.8%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1054 [M+H]+。
实施例27制备5,7，4'-三乙酰缬氨酸节酯-异黄酮(Io)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Val-OBzl制得390mg (收率75.9%)目标 化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1012 [M+H]+。
实施例28制备5，7，4'-三乙酰天冬氨酸苄酯-异黄酮(Ip)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Asp-(OBzl)-OBzl制得204mg (收率40.0%) 目标化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1331 [M+H]+。实施例29制备5，7,4'-三乙酰谷氨酸节酯-异黄酮(Iq)
按照实施例21的通法，用lg BrAC-Glu-(OBzl)-OBzl制得177mg (收率34.7%) 目标化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/z) 1372 [M+H〗+。
试验例1通式Ia-q的化合物的抗肿瘤活性实验 1 )阳性对照品为阿霉素。
2) 实验动物ICR小鼠，雄性，体重20士2g(^士s);每10只小鼠一组，空白 及阳性对照各一组。
3) 剂量设置
本发明的化合物设为8.9jimol/kg，阳性对照设为2.0pmol/kg，均采用腹腔单 次给药。
3) 药物配制
本发明的通式Ia-q化合物在水中难溶，实验时加入少量的吐温80润湿助溶， 逐渐加入0.5。/。CMC-Na溶液至所需浓度。阳性对照品阿霉素用同样方法溶解。
4) 给药方案
本发明的化合物每天腹腔给药一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共给药7次。 阴性对照每天一次，0.2ml 0.5。/。CMC-Na/鼠，连续给药7天，共给药7次。 阳性对照腹腔给药。每天一次腹腔给药一次，0.2ml/鼠，连续给药7天，共 给药7次。
5) 动物模型
采用体内抗肿瘤腋皮下接种模型在无菌条件下抽取接种7d,后取生长旺 盛S咖腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用 新鲜配制的0.2%台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细 胞，不染色者为活细胞，按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。
细胞浓度=4大方格内活细胞数/4 x 104x稀释倍数=细胞数/ml
细胞存活率-活细胞数/(活细胞数+死细胞数)x 100%
将存活率大于90%的瘤液用匀浆法制备成lxl0M"/ml的细胞悬液，于相应宿 主腋皮下接种0.2m1/鼠，制成实体瘤动物模型。
6) 实体瘤抑瘤率和体重增长的测定
各组连续给药7天后，于第8天脱颈推处死小鼠，称取体重(处死体重)，然后 用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率。
抑瘤率％ =[(阴性对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)+CMC-Na对照组平均 瘤重]xl00。/()
7) 统计方法
本实验数据统计均采用f检验和方差分析，以(j^tSD)表示。
8) 实验结果
本发明的化合物对荷S180肉瘤的体内抗肿瘤活性实验结果如表1所示。在 8.9pmol/kg剂量下本发明的化合物经腹腔连续7天给药以后，对S180小鼠肺瘤有 显著的抑制作用。
表l本发明的通式Ia-q化合物的抗肿瘤活性 给药组别 瘤重(mg) 抑瘤率％
CMC陽Na1482.3±190.6—
阿霉素985.5±251.7**33.5
Ia1239.8±303.616.4
Ib979.9±294.(T33.8
Ic926.1±363.8**37.5
Id1225.7±242.8*17.3
Ie*承 1183.1±116.120.2
If1086.2±278.5"26.7
Ig1305.2±189.412.0
Ih680.4±198.5"54.1
Ii1151.4±215.4**22.3
Ij875.5±185.7**40.9
Ik936.4±379.8"36.8
111377.3±380.17.0
Im1003.2 ±256.4"32.3
In1256.1±239.9*15.3
Io1297.5±173.512.5
Ip774.8±286.9"47.7Iq 809.3土241.2" 45.4
染料木素_1130.2±281.7*_23.8
注:与对照组比较*尸< 0. 05, **尸< 0. 01; Ia-q剂量=8.9 pmol/kg;阿霉素剂量=2.0
|imol/kg
权利要求
1、通式Ia-q的乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮衍生物，式中R1、R2和R3均为CH2CO-AA-Obzl，或者R1和R2均为CH2CO-AA-OBzl，R3为H；其中，所述CH2CO-AA-OBzl中的AA选自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。
2、 制备权利要求1的乙酰氨基酸节酯修饰的异黄酮衍生物的方法，该方法 包括(1) 将溴代乙酸与氨基酸节酯偶联，得到溴乙酰氨基酸苄酯；(2) 将溴乙酰氨基酸节酯引入5,7,4'-三羟基异黄酮的7位和4'位或者将溴乙 酰氨基酸苄酯引入5，7,4'-三羟基异黄酮的5位、7位和4'位。
3、 权利要求2的乙酰氨基酸千酯修饰的异黄酮衍生物的制备方法，其中， 所述氨基酸节酯的氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。
4、 一种治疗肿瘤的药物组合物，由有效量的权利要求1的乙酰氨基酸千酯 修饰的异黄酮衍生物和药学上可接受的载体或辅料组成。
5、 权利要求1的乙酰氨基酸爷酯修饰的异黄酮衍生物在制备抗肿瘤药物中 的用途。
全文摘要
本发明公开了通式Ia-q的乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮衍生物，式中R₁、R₂和R₃均为CH₂CO-AA-OBzl或者R₁和R₂均为CH₂CO-AA-Obzl而R₃为H，其中所述CH₂CO-AA-OBzl中的AA选自甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。还公开了通式Ia-q的乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮衍生物的制备方法。本发明采用S₁₈₀小鼠模型评价了通式Ia-q的乙酰氨基酸苄酯修饰的异黄酮衍生物的抗肿瘤作用，表明它们具有优秀的抗肿瘤活性，可作为抗肿瘤剂。
文档编号C07D405/00GK101565413SQ200910084399
公开日2009年10月28日 申请日期2009年5月22日 优先权日2009年5月22日
发明者彭师奇, 李一帆, 明 赵 申请人:北京大学