专利名称：9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物及其制备和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化合物，具体涉及9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物及其制 备和应用。
背景技术：
避孕药物，多年来应用最多的是激素类避孕药，由于这类药物干扰正常人的生理 功能，副作用较大，因此，它的应用受到限制。另外，外用避孕药临床也有应用，但避孕效果 不够满意，加之其他副反应，因此，临床上未普遍推广应用。预计2020年全球将有10亿人 口进入生育高峰期，人口膨胀的压力随之增大，但人类缺乏新的生育控制方法。迄今为止， 男性避孕也仅限于避孕套和输精管结扎，而男性避孕药物仍为临床空白。因此，寻找高效、 低毒，尤其是避孕机理独特的男性避孕药，意义重大。附睾作为男性的附属性腺，对于精子的成熟、贮存和保护起决定作用，人们试图研 发作用于附睾的药物，它不影响睾丸精子发生、生殖内分泌和性功能，但能影响精子成熟， 从而发挥避孕效用。该类药物具有副作用少、生育可逆抑制等优点。但是，附睾是一个人类 器官，不能以此作为药物设计的靶点。因而必须考虑另外的有效点。附睾是精子获能和成熟 的场所。精子成熟的标志之一是头部的顶体和顶体酶形成。顶体酶是存在于精子顶体内的 一种类似于胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶，位于精子顶体内层浆膜上，属膜结合性酶，以酶原 形式合成并储存在顶体内。当发生顶体反应时，顶体酶原释放，它能能将卵细胞的透明带水 解出一条通道，便于精子穿过透明带与卵细胞结合。顶体酶是受精过程中的一种重要的蛋 白水解酶。对该酶有抑制作用的抑制剂能阻止精子的顶体反应、精子与透明带结合，以及阻 止精子对透明带和卵黄膜的穿透。因此，如果贮存在附睾中的精子顶体蛋白酶被抑制，将会 直接影响受精，从而达到避孕目的。由此可见，顶体蛋白酶在抗生育药物设计中受到关注。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于研究设计抑制贮存在附睾中的精子顶体蛋白酶 的男性避孕药。本发明人通过同源模建的方法首次构建了人顶体酶的三维蛋白结构，又采用多 拷贝同时搜寻(MCSS)方法进一步深入分析人顶体酶活性微点的空间特征、关键立场和关 键功能残基的分布，确定重要的药物结合位点，在此基础上，设计合成了 9-取代-2-氨 基-6-胍基嘌呤类化合物本发明提供了一种9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，该化合物如结构式VI
所示 其中，R为(1)萘-2-甲基；或(2) 2-苄氧基乙基；或(3)4’ _烷基-苯基-4-氧代丁基，其中所述的烷基为CV8的直链或支链烷基；或(4)苯环上未取代的苄基或苯环上有单或多个取代基取代的苄基，其中所述的取 代基为商素、氰基、商代烷基、(V8直链或支链烷基、CV8直链或支链烷氧基或为苄氧基；取代 位置可以是邻、间、对位取代或它们的任意组合。所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物结构式VI包括下列化合物 优选的，结构通式VI所述的一种9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤类化合物，其中 R为苯环上有单、双取代基取代的苄基，其中所述的取代基为卤素、氰基、三卤代烷基、C"直 链或支链烷基，CV8直链或支链烷氧基或为苄氧基，取代位置可以是邻、间、对位取代或它们 的任意组合。更优选的，结构通式VI所述的一种9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤类化合物，其 中R为苯环上有单、双取代基取代的苄基，其中所述的取代基为卤素、氰基、三卤代甲基、CV4 直链烷基、Cy直链烷氧基或苄氧基，取代位置可以是邻、间、对位取代或它们的任意组合。最优选的，结构通式VI所述的一种9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤类化合物， 其中R为苯环上有单、双取代基取代的苄基，其中所述的取代基为卤素、氰基、三氟甲基、CV4 直链烷基、Cy直链烷氧基或苄氧基，取代位置可以是邻、间、对位取代或它们的任意组合。具体地，本发明涉及如结构通式VI所述的一种9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤 类化合物，其中R为苄基、邻氟苄基、对氟苄基、邻氯苄基、间氯苄基、对氯苄基、2，3-二氯节 基苄基、2，4_ 二氯苄基、3，4_ 二氯苄基、邻溴苄基、间溴苄基、对溴苄基、邻氰苄基、间氰节 基、对氰苄基、对三氟甲基苄基、邻甲基苄基、间甲基苄基、对甲基苄基、对甲氧基苄基、对叔 丁基苄基、萘-2-甲基、2-苄氧基乙基、3-苄氧基苄基或4’ -叔丁基-苯基-4-氧代丁基。本发明还涉及如结构通式VI所述的一种9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤类化合 物，其中R为4’ -烷基-苯基-4-氧代丁基，其中所述的烷基为C3_8的支链烷基，更优选的 是烷基为叔丁基的化合物。本发明的另一目的是提供了上述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物VI的制 备方法。本发明化合物VI的制备方法包括下列步骤 (1)中间体II ( 二甲氨基甲烯亚胺基-6-氯嘌呤)的制备在一个反应瓶中，先加入30-50mL的DMF，加入30_50mLP0Cl3，配成混合溶液.在 另一反应瓶中，加入200-400mL的1，2_ 二氯乙烷，20g鸟嘌呤I，滴加上述POCl3与DMF的 混合溶液，反应得到中间体II ；(2)中间体III (2-甲酰基-6-氯嘌呤)的制备上述反应液滴入到冰水中，分出有机相，盐酸调水相pH值(pH = 3-4)为酸性，升 温至70 75°C下保温反应5. Oh,反应完冷却至室温(25°C )，抽滤，得2-甲酰基-6-氯嘌 呤 III ；(3)中间体IV (6-氯鸟嘌呤)的制备上述中间体III在NaOH溶液中水解，反应用盐酸溶液调pH值为碱性(pH = 7. 5-8. 5)，静置过滤，水洗得6-氯鸟嘌呤粗品，粗品用DMF重结晶，过滤，水洗60°C烘干2h 得纯品；(4)中间体V (9-取代-6-氯鸟嘌呤)的制备将NaH和中间体IV(1.2 1)加入到无水DMF中，室温搅拌，过滤，得到无色或 浅黄色液体，在其中加入不同取代卤代衍生物，反应至原料消失(TLC检测)，反应液浓缩 (40-50°C)，得到固体，柱层析纯化(30g硅胶，二氯甲烷甲醇=100 1，含甲酸洗脱) 得到中间体V;(5)化合物VI (9-取代-2-氨基_6_胍基嘌呤类化合物)的制备NaH和盐酸胍(1 1)加入到无水乙腈和无水DMF (2 1)的混合溶液中，反应液 室温(温度？)搅拌8 10h，得到白色胍基溶液，加入中间体V，DABCO(三乙烯二胺)，室 温(25°C)搅拌至原料消失(TLC检测)，真空干燥(40-50°C)得粗品，硅胶柱层析纯化(60g 硅胶，乙酸乙酯乙醇丙酮水=16 1 1 1含氨水洗脱)得到最终产物VI。更具体地，本发明涉及到的(9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物)VI的制备 步骤为(1)中间体II的合成在干燥的反应瓶中，先加入80mL的DMF，于O 10°C条件下滴加70mLP0Cl3，配成混合溶液.在另一干燥的反应瓶中，加入400mL的1，2_ 二氯乙烷，40g鸟嘌呤I，其后于20 30°C下，滴加上述POCl3和DMF混合溶液，滴完保温搅拌1. Oh,然后升温回流5. Oh,反应完 冷却；(2)中间体III的制备上述反应液滴入到600mL的冰水中，分出有机相，水相用10% (质量分数)NaOH 调PH值为3. 5，升温至70 75°C下保温反应5. Oh,反应完冷却至室温，抽滤，得2-甲酰 基-6-氯嘌呤3，中间体不必烘干；(3)中间体IV的制备上述中间体3加到300mL，10% (质量分数)NaOH溶液中，于20°C下水解反应3. Oh, 反应完在20°C下用体积比为1 1的盐酸溶液调pH值为7. 5，静置过滤水洗得6-氯鸟嘌 呤粗品.粗品用DMF重结晶，过滤水洗烘干得31. 9g纯品，以鸟嘌呤计收率为59% ；(4)中间体V的制备将NaH (0. 55g，13. 8mmol ；60 %混悬于矿物油中)和化合物3加入到33mL无 水DMF中，室温搅拌2h，过滤，得到无色或浅黄色液体，在其中加入不同取代卤代衍生物 (13. 2mmol)，室温或加热至80°C反应至原料消失(TLC检测)，反应液真空干燥(50°C )，得 到固体用柱层析(硅胶30g，二氯甲烷甲醇=100 1，含甲酸)进行纯化，得到中间 体ν和副产物r；(4)化合物VI的制备NaH(0. 60g, 15mmol ；60%混悬于矿物油中)和盐酸胍(1. 43g，15mmol)加到无水乙 腈(30mL)和无水DMF(30mL)的混合溶液中，反应液室温搅拌8 10h，得到白色胍基溶液， 加入中间体5(3mmol)，DABCO (0. 34g，3mmol)，室温(25°C )搅拌至TLC检测原料消失，真空 干燥(40-50°C)，得粗品用硅胶(60g，乙酸乙酯乙醇丙酮水=16 1 1 1含 氨水)进行纯化，得到最终产物VI。本发明的又一目的是提供了结构通式VI所述的一种9-取代-2-氨基-6-胍 基_嘌呤类化合物在制备抗生育药物的应用。本发明人采用体外测活试验，检验了 26化合物与具有生育活性的人精子顶体酶 作用，通过改良的Kennedy法检测残余酶活性。并与经典的顶体酶抑制剂TLCK作比较。结 果表明所有测试的化合物1-26对人精子顶体酶均具有抑制活性，且都比阳性对照品TLCK 抑制活性强，其中结构通式VI化合物5、6、7、8、11、15、16具有较强抑制人精子顶体酶活性。
图1化合物V的单晶2化合物V’的晶胞图
具体实施例方式下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制 本发明。实施例1(i) 9-苄基取代-2-氨基-6-氯嘌呤的制备
(请将下式ν①和ν②用V和V’表示) (1)中间体II的合成在干燥的反应瓶中，先加入80mL的DMF，于O 10°C条件下滴加70mLP0Cl3，配成混 合溶液.在另一干燥的反应瓶中，加入400mL的1，2_ 二氯乙烷，40g鸟嘌呤I，其后于20 30°C下，滴加上述POCl3和DMF混合溶液。滴完保温搅拌1. Oh,然后升温回流5. Oh,反应完 冷却。(2)中间体III的合成上述反应液滴入到600mL的冰水中，分出有机相，水相用10% (质量分数)NaOH 调PH值为3. 5.升温至70 75°C下保温反应5. Oh.反应完冷却至室温，抽滤，得2-甲酰 基-6-氯嘌呤中间体III，中间体不必烘干.(3)中间体IV的合成上述中间体3加到300mL，10% (质量分数)NaOH溶液中，于20°C下水解反应3. Oh, 反应完在20°C下用体积比为1 1的盐酸溶液调pH值为7. 5，静置过滤水洗得6-氯鸟嘌呤 粗品。粗品用DMF重结晶，过滤水洗烘干得中间体IV31. 9g纯品。以鸟嘌呤计收率为59%。(4)中间体V的合成将NaH(0. 55g，13. 8mmol ；60%混悬于矿物油中)和中间体IV加入到33mL无水DMF 中，室温搅拌2h。过滤，得到无色或浅黄色液体，在其中加入氯化苄1. 66g (13. 2mmol)，室温 搅拌过夜，原料消失(TLC)。反应液真空干燥，得到固体用柱层析，洗脱剂为CH2Cl2 CH3OH =100 1(含甲酸)进行纯化。得到中间体V和副产物V’。(5)目标化合物VI-化合物1(9-苄基取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤)的合成 NaH(0. 60g,15mmol ；60%混悬于矿物油中)和盐酸胍(1. 43g, 15mmol)加入到无水乙腈 (30mL)和无水DMF(30mL)的混合溶液中，反应液室温搅拌过夜，得到白色胍基溶液。在
15上述反应液中加入中间体V0. 78g(3mmol)，DABCO(0. 34g,3mmol)，室温搅拌至TLC检测原 料消失。真空干燥，得粗品用硅胶(30g)，洗脱剂为EtOAc CH3CH20H 丙酮H20 = 16 1 1 1(含氨水)进行纯化。得到最终产物VI-化合物1。实施例2-26化合物2-16均按实施例1的方法制备。表3化合物V~(①一@)的熔点和产率
④ 化合物VI (1-26)的熔点、产率以及质谱 注温度计未校正本发明人通过核磁氢谱测验证明了中间体9-取代-2-氨基-6-氯嘌呤和最终产 物9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物的化学结构。其核磁共振谱数据见表1表1化合物V~(①一@)结构及其核磁共振谱数表2化合物VI-1-26结构及其核磁共振谱数据
3.74 (t, 2H, CH2), 4. 23 (t, 2H, CH2) 4. 46 (s, 2H, CH2) ’
6.80 (s, 2H, NH2)，7. 18-7. 28 (ra, 5H, Ar-H)
7.93-8. 02 (br, 4H, NH)，8. 03 (s, 1H，8-H)
5.05 (s，2H, N-CH2)，5. 22 (s, 2H, 0—CH2)，6. 94 (s, 2H, NH2)，
6.70-6. 90 (m，3H, Ar-H) ’ 7. 22-7. 41 (m, 6H, Ar-H)，8.13 (s, 1H, 8-H),
8.43-8. 57 (br, 4H, NH)
1. 28 (s, 9H, C (CH3) 3), 2. 07 (m, 2H, CH2)，3. 02 (t, 2H, M. 9Hz, COCH2)
4.07 (t, 2H, N-CH2), 6, 46 (s, 2H, NH2), 7. 10 (d, 2H，J=S. 4Hz, Ar-H)
7.41 (d，2H，Jh%. 4Hz, Ar-H) ,7.91 (s，1H, 8-H), 8. 63-8. 73 (br, 4H, NH)在合成中间体V的过程中，杂质七位取代产物与九位取代产物在TLC上显示极性 不同.根据理论判断九位取代产物极性较小，通过柱层析分离得到纯品。我们选取化合物 V- ，以甲醇为溶剂培养单晶。晶体结构见图3与图4，晶体数据见表3.晶体结构显示判断正确.表4化合物V-◎的晶体结构数据
化合物
5m
分子式 分子量 晶系 空间群 a/nm, α /(° ) b/nm, β/(° ) c/nm, y/(° ) V/nm3, Z 密度(g/crrf3)，F(OOO) 2Θ (最大值)/ ) F2的拟合度 独立衍射点
C13H9ClN6 284. 71 单斜晶系 P2 ⑴/c 0.7823(3), 90.00 1.4065(5)，92.021(5) 2.3408(9)，90.00 2. 5741(17), 8 1.469，1168 26. 530 0. 925 4996 实施例27本发明化合物抗生育活性试验1、试验目的测试本发明化合物1-26体外抑制人精子顶体酶活性。2、检测原理人精子顶体酶是受精过程中必不可少的蛋白水解酶，抑制该酶活性可达到避孕目 的。16个不同浓度的本发明化合物1-26(实施例1-26制得)与具有生育活性人精子作 用，以N-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基苯甲酰胺盐(ΒΑΡΝΑ)为底物，与去精子释放的顶体酶 反应，显色，得到与不同浓度化合物作用后的顶体酶的活性值。并与公认的顶体酶抑制剂 TLCK (N-tosy-L-lysine chloromethyl ketone)进 亍比较评价。3、检测材料与仪器精子顶体酶试剂盒购自江苏省南京欣迪生物药业工程有限公司。试剂盒包括分离剂、顶体酶激活剂、抑制剂、反应底物剂；N-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)购自Fluka公司；人精子经医学伦理委员讨论通过，在知情同意情况下，采自健康一生育男性。由长海医院生殖医学中心提供，并提供分析检测报告；精子、微生物动(静)态图像分析系统(荧光版5.0)，清华同方；BB16UV/BB5060UV C02 培养箱，Heraeus ；XW-80A漩涡混合器；Lanbda 25UV/VIS 分光光度计；BIOAD smartSpec 3000 分光光度计；Hettich Uni 32R冷冻高速离心机；THZ-C恒温振荡器。4、检测步骤4.1精子计数新鲜精液液化后用精子、微生物动(静)态图像分析系统计数，以X百万/ml表示 密度，计数后，按每管7. 5 X IO6精子数计算每管所需精液量。4. 2化合物与精子作用目标化合物以5% DMSO配成不同浓度梯度。将标为实验管(T1-Tn管)的试管中 加入7. 5 X IO6个精子的精液后，加入一定摩尔数化合物，以生理盐水调整总量为1ml。另配两管含7. 5X IO6个精子的5% DMSO/生理盐水溶液，标为对照管(C1、C2管)。 其中Cl为试剂盒空白对照，C2为无抑制的正常精子顶体酶活性值对照。将T1-Tn管，C” C2管1000G/5min离心，小心吸除上清，保留沉淀精子。用lmL5% DMSO/生理盐水加入后震荡洗涤，1000G/5min再次离心，小心吸除上清，保留约200 μ L溶 液。5、测顶体酶活性
5. 1取两组1. 5mL eppondoff离心管，分别标记为TT1-TTn管；CC1,CC2管。各管加 入分离剂0. 5mL，将对应T1-Tru C1, C2管内约200 μ L溶液吹打混勻后贴壁小心加到对应的 T1-TrKCCpCC2管内的分离剂液面上，离心1500G/20min，仔细吸除上层液体，保留沉淀精子。5. 2 T1-Tn, CC1, CC2管先加顶体酶激活剂各900 μ L，后加反应底物剂100 μ LC1管 再加抑制剂100yL。充分混勻，置于培养箱25-37°C孵育90min，期间取出震荡1-2次。90 分钟后，各TT1-TTn管和C2管加抑制剂100 μ L，终止反应，震荡混勻，离心1500g/5min。5. 3顶体酶活性计算值。
每管取上清700 μ L，分光光度计λ = 410nm时OD值，以蒸馏水调零。 公式精子顶体酶活性(IU/106精子)=(T管OD值-C1管OD值)X 329 正常对照组的酶活性参考值
正常精子顶体酶活性(IU/106精子)=(C2管OD值-C1管OD值)X 329 抑酶比值=(精子正常对照酶活性值-样品酶活性值精子正常对照酶活性
6、正常参考值
当计算值> 36(IU/106精子)时认为所测精子活性在可生育正常范围,
7、实验结果见表3
表3化合物VI抑酶活性结果 8、结论采用体外测活试验，检验了 1-26化合物与具有生育活性的人精子顶体酶作用，通 过改良的Kennedy法检测残余酶活性。并与经典的顶体酶抑制剂TLCK作比较。结果表明 所有测试的化合物对人精子顶体酶均具有抑制活性，且都比阳性对照品TLCK抑制活性强， 其中化合物5、6、7、8、11、15、16具有较强抑制人精子顶体酶活性。
权利要求
9 取代 2 氨基 6 胍基嘌呤类化合物，其特征在于该化合物具有结构式VI其中，R为萘 2 甲基、2 苄氧基乙基或4’ 烷基 苯基 4 氧代丁基，所述的烷基为C1 8的直链或支链烷基；或烷基为苯环上未取代的苄基或苯环上有单或多个取代基取代的苄基，所述的取代基为卤素、氰基、卤代烷基、C1 8直链或支链烷基、C1 8直链或支链烷氧基或为苄氧基，所述取代位置为邻位、间位或对位取代或它们的任意组合。FSA00000085507800011.tif
2.根据权利要求1所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，其特征在于所述结构 式VI化合物包括下列化合物
3.根据权利要求1所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，其特征在于所述R为 苯环上有单、双取代基取代的苄基，所述的取代基为卤素、氰基、三卤代烷基、C"直链或支 链烷基，C1^8直链或支链烷氧基或为苄氧基，所述取代位置为邻位、间位或对位取代或它们 的任意组合。
4.根据权利要求1所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，其特征在于所述R为 苯环上有单、双取代基取代的苄基，其中所述的取代基为卤素、氰基、三卤代甲基、C"直链 烷基、CV4直链烷氧基或苄氧基，所述取代位置为邻位、间位或对位取代或它们的任意组合。
5.根据权利要求1所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，其特征在于所述R 为苄基、邻氟苄基、对氟苄基、邻氯苄基、间氯苄基、对氯苄基、2，3-二氯苄基苄基、2，4-二 氯苄基、3，4_ 二氯苄基、邻溴苄基、间溴苄基、对溴苄基、邻氰苄基、间氰苄基、对氰苄基、 对三氟甲基苄基、邻甲基苄基、间甲基苄基、对甲基苄基、对甲氧基苄基、对叔丁基苄基、 萘-2-甲基、2-苄氧基乙基、3-苄氧基苄基或4’ -叔丁基-苯基-4-氧代丁基。
6.根据权利要求1所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，其特征在于所述R为 4’ -烷基-苯基-4-氧代丁基，所述的烷基为C3_8的支链烷基。
7.根据权利要求1所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物，其特征在于所述R为 4’ -叔丁基_苯基-4-氧代丁基。
8.如权利要求1-7中任一项所述9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物的制备方法， 其特征在于该方法包括下列步骤5 (1)中间体II二甲氨基甲烯亚胺基-6-氯嘌呤的制备在一个反应瓶中，先加入30-50mL的DMF，加入30-50mL POCl3,配成混合溶液.在另一 反应瓶中，加入200-400mL的1，2- 二氯乙烷，鸟嘌呤I，滴加上述POCl3与DMF的混合溶液， 反应得到中间体II ；(2)2-甲酰基-6-氯嘌呤中间体III的制备上述反应液滴入到冰水中，分出有机相，盐酸调水相PH值为3-4，升温至70 75°C下 保温反应5. Oh,反应完冷却至25°C，抽滤，得2-甲酰基-6-氯嘌呤III ；(3)6-氯鸟嘌呤中间体IV的制备上述中间体III在NaOH溶液中水解，反应用盐酸溶液调pH值为7. 5-8. 5，静置过滤，水 洗得6-氯鸟嘌呤粗品，粗品用DMF重结晶，过滤，水洗60°C烘干2h得纯品；(4)中间体V9-取代-6-氯鸟嘌呤的制备将NaH和中间体IV 1.2 1加入到无水DMF中，室温搅拌，过滤，得到无色或浅黄色液 体，在其中加入不同取代卤代衍生物，反应至原料消失TLC检测，反应液浓缩，得到固体，柱 层析纯化，30g硅胶，二氯甲烷甲醇=100 1，含甲酸洗脱，得到中间体V;(5)9-取代-2-氨基-6-胍基嘌呤类化合物VI的制备NaH和盐酸胍1 1加入到无水乙腈和无水DMF的混合溶液2 1中，反应液室温25°C 搅拌8 10h，得到白色胍基溶液，加入中间体V，三乙烯二胺，室温25°C搅拌至原料消失 TLC检测，40-50°C真空干燥得粗品，硅胶柱层析纯化，60g硅胶，乙酸乙酯乙醇丙酮 水=16 1 1 1含氨水洗脱，得到最终产物VI。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤(1)中间体II的合成在干燥的反应瓶中，先加入80mL的DMF，于O 10°C条件下滴加70mLP0Cl3，配成混合溶 液.在另一干燥的反应瓶中，加入400mL的1，2- 二氯乙烷，40g鸟嘌呤1，其后于20 30°C 下，滴加上述POCl3和DMF混合溶液，滴完保温搅拌1. Oh,然后升温回流5. Oh,反应完冷却；(2)中间体III的制备上述反应液滴入到600mL的冰水中，分出有机相，水相用10 %质量分数NaOH调pH值为 3. 5，升温至70 75°C下保温反应5. Oh,反应完冷却至室温，抽滤，得2-甲酰基-6-氯嘌呤 III，中间体III不必烘干；(3)中间体IV的制备上述中间体III加到300mL，10%质量分数NaOH溶液中，于20°C下水解反应3. Oh,反应 完在20°C下用体积比为1 1的盐酸溶液调pH值为7. 5，静置过滤水洗得6-氯鸟嘌呤粗 品.粗品用DMF重结晶，过滤水洗烘干得31. 9g中间体IV纯品，以鸟嘌呤计收率为59% ；(4)中间体V的制备将NaHO. 55g，13. 8mmol ；60%混悬于矿物油中和加入到33mL无水DMF中，25°C搅拌2h， 过滤，得到无色或浅黄色液体，在其中加入不同取代卤代衍生物中间体IV 13. 2mmol,25°C 或加热至80°C反应至原料消失TLC检测，反应液40-50°C真空干燥，得到固体，用柱层析30g 硅胶，二氯甲烷甲醇=100 1，含甲酸进行纯化，得到中间体5和副产物5’ ；(4)化合物VI的制备NaHO. 60g, 15mmol ；60%混悬于矿物油中和盐酸胍1. 43g，15mmol加到无水乙腈30mL 和无水DMF30mL的混合溶液中，反应液室温搅拌8 10h，得到白色胍基溶液，加入中间体 V3mmol, DABCO 0. 34g，3mmol，25°C搅拌至TLC检测原料消失，40_50°C真空干燥，得粗品用 60g硅胶，乙酸乙酯乙醇丙酮水=16 1 1 1含氨水进行纯化，得到最终产 物VI。
10.如权利要求1-7中任一项所述9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤类化合物在制备抗 生育药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了9-取代-2-氨基-6-胍基-嘌呤类化合物VI，经体外测活试验，检验了26个相关化合物与具有生育活性的人精子顶体酶作用，通过改良的Kennedy法检测残余酶活性。并与经典的顶体酶抑制剂TLCK作比较。结果表明所有测试的化合物对人精子顶体酶均具有抑制活性，且都比阳性对照品TLCK抑制活性强，研究证实，它们的抗生育活性强，可用于制备抗生育药物。为临床提供新的男性避孕药，有较大的应用价值，本发明提供了制备方法。
文档编号A61K31/52GK101899045SQ20101014825
公开日2010年12月1日 申请日期2010年4月15日 优先权日2010年4月15日
发明者付小旦, 刘雪飞, 吕加国, 吴蕴琦, 周有骏, 宋云龙, 张晓梦, 朱驹, 盛春泉, 祈晶晶, 薛博亮, 郑灿辉 申请人:中国人民解放军第二军医大学;黑龙江成功药业有限公司