专利名称：使用包括特异性配体的亲和树脂用于纯化人生长激素多肽的方法
技术领域：
本发明涉及用于纯化生长激素多肽例如重组人生长激素的新型方法。该方法利用包括固相材料的亲和树脂，所述固相材料具有与之固定的一种或多种低分子量合成配体。 亲和树脂能够使生长激素与紧密相关蛋白质分离。治疗蛋白质在活细胞中产生，并且在患者中使用前必须从蛋白质和其他生物种类的复杂混合物中纯化。这种分离可以是非常费力且昂贵的。已描述了用于在此类分离中使用的众多层析材料。亲和层析使得生物物质例如蛋白质能够与互补结合物质选择性且可逆地吸附，所述互补结合物质例如固定在固相材料上的亲和配体，所述固相材料通常是填充在亲和柱中的多孔、聚合物基质。合适的配体直接或借助于接头与固相材料共价连接。含有对于配体具有亲和力的生物物质的样品可以在合适结合条件下与共价固定至固相材料的亲和配体接触，所述结合条件促进配体和对于配体具有亲和力的生物物质之间的特异性结合。亲和柱可以随后用缓冲液洗涤，以去除未结合的材料，并且在进一步的步骤中，对于配体具有亲和力的生物物质可以被洗脱且以纯化或甚至分离形式获得。因此，配体应优选显示出对于生物物质的特异性和可逆结合特征，所述生物物质是纯化或分离的目标。已描述了用于纯化人生长激素(hGH)的众多层析材料和过程。US 5，047, 333公开了使用离子交换层析或固定金属亲和层析用于纯化人生长激素的方法。US 4，332，717公开了使用疏水性相互作用层析用于纯化人生长激素的方法，其中具有疏水基团例如烷基或苯基基团的水不溶性载体用作层析材料。上述2种方法依赖于采用化合物的物理化学性质中的差异的常规纯化技术。然而，这些通常需要数个费力的纯化步骤，因而导致较低得率和较高成本。US 6，117，996公开了包括具有通式的配体的亲和配体-基质缀合物
权利要求
1. 一种用于纯化生长激素多肽的方法，所述方法包括以下步骤(a)在促进生长激素多肽的部分与亲和树脂结合的条件下，使含有所述生长激素多肽的悬浮液或溶液与所述亲和树脂接触；(b)任选地用洗涤缓冲液洗涤含有生长激素多肽的所述亲和树脂；和(c)用洗脱缓冲液洗脱含有生长激素多肽的所述亲和树脂，并且收集作为洗脱物的生长激素多肽；其中所述亲和树脂是固相材料，所述固相材料具有与之共价固定的具有通式(I)的一种或多种配体，
2.根据权利要求1的方法，其中Zl和Z2独立地选自氢、CV6烷基、咕吨-9-羰基、2-氨基烟酰基、2-喹哪啶羰基、4，8- 二羟基-2-喹啉羰基、4-喹啉羰基、5-甲基-2-硝基苯甲酰基、2-(巯基苯并咪唑)乙酰基、5-甲基-2-苯基-2H-1，2，3-三唑-4-羰基、6-羟基-2-萘甲酰基、4，7-二甲基吡唑并[5，l-c][l,2,4]三嗪-3-羰基、3-氨基-4-(苯磺酰)_2_噻吩羰基、(+/-)-3_氧代-1-茚满羰基、5，6，7，8-四氢吖啶-9-羰基、2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-羰基、5- (4-甲基-2-硝基苯基)糠酰基、1-环己基-4-氧代-1，4- 二氢喹啉_3_羰基、喹喔啉-6-羰基和4-甲基-2-苯基嘧啶-5-羰基。
3.根据权利要求1的方法，其中Zl和Z2独立地选自氢、Cp6烷基、咕吨-9-基-羰基、 5-甲基-2-苯基-2H-1，2，3-三唑-4-基-羰基、3-氨基-(苯磺酰)-噻吩_2_基-羰基、 (+/-) -3-氧代-1-茚满基、5，6，7，8-四氢吖啶-9-基-羰基和2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-羰基。
4.根据权利要求1的方法，其中Zl包括三环任选取代的杂芳族基团。
5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述配体具有通式(II)，
6.根据权利要求5的方法，其中A2i选自精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、异亮氨酸和赖氨酸，并且A22选自精氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸和色氨酸。
7.根据权利要求5的方法，其中所述配体具有通式(III)，
8.根据权利要求7的方法，其中所述配体选自编号(1)- (16)
9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤(b)中，至少一种洗涤缓冲液包含在 pH 6. 0-6. 5 下的 0-50 mM BisTris0
10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在步骤(c)中，所述洗脱缓冲液具有7.0 -8.0之间的pH。
11.根据权利要求10的方法，其中所述洗脱缓冲液包含在pH7. 0-7. 5下的0-200 mM BisTris0
12.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述生长激素多肽是人生长激素多肽。
13.根据权利要求12的方法，其中所述人生长激素多肽是重组人生长激素多肽。
14.根据权利要求12和13中任一项的方法，其中所述人生长激素多肽是修饰的人生长激素多肽。
15.根据权利要求14的方法，其中所述修饰的人生长激素多肽是PEG化的人生长激素多肽。
16.一种亲和树脂，其包括固相材料，所述固相材料具有与之共价固定的具有通式(I) 的一种或多种配体
17.根据权利要求16的亲和树脂，其中所述配体如权利要求2-8中任一项中指定的。
18.根据权利要求17的亲和树脂，其中所述配体选自如权利要求8中定义的配体 (1)" (16)，其中所述配体经由羧酸基团、直接或经由接头与所述亲和树脂的固相材料共价连接。
19.一种亲和配体，其选自本文定义的配体(1)- (16)。
全文摘要
本发明涉及用于纯化生长激素多肽例如重组人生长激素的新型方法。该方法利用包括固相材料的亲和树脂，所述固相材料具有与之固定的一种或多种低分子量合成配体。亲和树脂能够使生长激素与紧密相关蛋白质分离。
文档编号C07K14/61GK102216325SQ200980145338
公开日2011年10月12日 申请日期2009年11月13日 优先权日2008年11月13日
发明者B. 席奥特 C., E. 拉斯姆森 J., J. 詹森 K., 罗伊斯 M., M. 圣希莱雷 P. 申请人:诺沃-诺迪斯克有限公司