一种人参皂苷Rg₁的提取纯化方法

专利名称：一种人参皂苷Rg₁的提取纯化方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种提取纯化人参皂苷的新方法。
背景技术：
人参皂苷具有广泛而显著的药理活性(1)对中枢神经系统的保护作用；(2) 对心肌缺血再灌注损伤的保护作用；(3)对心率失常及动脉粥样硬化的治疗作用；(4)对小鼠脑缺血再灌注致学习记忆功能障碍的改善作用；(5)对免疫系统的促进作用；(6)抗疲劳及耐缺氧作用。由于人参皂苷恥工显示出的抗氧化作用及减少和延缓心肌细胞内钙超载，促进血管内皮细胞产生NO的能力，均证明人参皂苷1^在心脑血管疾病方向有良好的治疗作用。人参皂苷Rgl具有优良的成药基础，因此，对其制备方法研究一直是科研工作的重点。中国专利申请200610093615. 9 (公开号CN1869055A)公开了一种从人参叶中提取分离人参皂苷单体的方法；中国专利申请200610093615.9(公开号CN1869059A)公开了一种从人参叶中制备人参皂苷单体的方法。上述专利申请文献公开了以人参叶为原料，采用硅胶柱层析、氧化铝柱层析或ODS柱层析的方法可以到人参皂苷；所公开的方法仅适用于实验室研究，且生产成本高，难于实现工业化生产。中国专利申请03148804. 8 (公开号CN1566138A)公开了一种人参皂苷Rg1的制备工艺。以氯仿-甲醇-水混合溶剂为洗脱液，溶剂不易回收，对环境污染大。中国专利申请200710303793. 4(公开号CN101463061A)公开了三七中人参皂苷 Rg1 > Rb1及其总皂苷的制备方法，该文献优选反相C18为吸附柱填料，以醇与水的混合溶液为流动相洗脱，制得人参皂苷收工的纯度在90%以上，该方法生产成本高，产品含量低。中国专利申请200810096148. 4 (公开号CN101575357A)公开了一种三七皂苷队、 人参皂苷RgpR^Rb1和Rd的制备方法，采用反相高效液相色谱，以乙醇-水系统为流动相进行洗脱，该方法对生产设备要求高，生产成本高，不适用于公斤级以上产品的生产。中国专利申请200810114686. 1 (公开号CN101597314A)公开了一种人参皂苷的制备方法。采用该专利公开方法制备人参皂苷纯度在90%以上。

发明内容
基于上述原因，本发明创造性提出了一种适合于工业化生产、得率高、含量高、环境污染小的工艺方法，用于提取纯化人参皂苷Rg1，该方法采用大孔吸附树脂法和柱层析法对三七总皂苷进行了分离纯化，使用有机溶剂为洗脱液，得到纯度大于等于98%的人参皂苷Rg1，其产品得率高，可以获得公斤级的人参皂苷Rgl。本发明通过以下技术方案实现。取三七、人参或西洋参提取得到的总皂苷，加水溶解，通过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，水洗，洗脱液弃去，用10 % 70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得人参皂苷粗品；人参皂苷恥工粗品，加乙醇使其溶解，加入硅胶搅拌均勻，挥干溶剂后上于硅胶柱上，以有机溶剂为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，干燥，得干燥物；取上述干燥物加水溶解，溶液中加入0. 1% -5.0%活性炭，搅拌，过滤，除去活性炭，滤液干燥，得人参皂苷Rg1。上述非极性或弱极性大孔树脂可选自AB-8、HZ-801、HZ-841、DM130、NKA-9、NKA-II 或 HPD-600 ；上述硅胶可选自100-200目硅胶、200-300目硅胶或300-400目硅胶，活性炭的浓度优选1%。有机溶剂选自丙酮、丁酮、90% -100%的丙酮水溶液、90% -100%的丙酮甲醇溶液、90% -100%的丙酮乙醇溶液、90% -100%的丁酮甲醇溶液或90% -100%的丁酮乙醇溶液。所述百分比为体积百分比。一、人参皂苷含量测定方法与检查结果实验方法采用高效液相色谱法测定含量色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1. Oml/min ；柱温25°C;检测波长203nm ；理论塔板数按人参皂苷I^1计应不低于2500 ；以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱，运行60分钟；0-40分钟时，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50% ；40-43分钟时，水的比例由50%降至20%，乙腈的比例由50%升至80% ；43-48分钟时，保持水的比例为20%，保持乙腈的比例为80% ；48-50分钟时，水的比例由20%升至80%，乙腈的比例由80%降至20% ； 50-60分钟保持水的比例为20%，乙腈比例为80% ；对照品溶液的配制精密称取人参皂苷对照品到容量瓶中，加甲醇溶剂摇勻， 并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取样品到容量瓶中，加甲醇溶解摇勻，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，即得。注本发明所用人参皂苷对照品为法定品，购买自中国药品生物制品检定所。取本发明方法得到的人参皂苷Rg1，按上述实验方法进行检测分析。实验结果见表1表1人参皂苷Rg1样品测定结果
权利要求
1.一种人参皂苷恥工的提取纯化方法，其特征在于1)取三七、人参或西洋参提取得到的总皂苷，加水溶解，通过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，水洗，洗脱液弃去，用10 % 70 %乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得人参皂苷 Rg1粗品；2)人参皂苷Rg1粗品，加乙醇使其溶解，加入硅胶搅拌均勻，挥干溶剂后上于硅胶柱上， 以有机溶剂为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，干燥，得干燥物；3)取上述干燥物加水溶解，溶液中加入0.1% -5.0%活性炭，搅拌，过滤，除去活性炭， 滤液干燥，得人参皂苷Rg1。
2.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rg1的提取纯化方法，其中所述的非极性或弱极性大孔吸附树脂为 AB-8、HZ-801、HZ-841、DM130、NKA-9、NKA-II 或 HPD-600。
3.根据权利要求1所述的一种人参皂苷的提取纯化方法，其中所述的硅胶为 100-200目硅胶、200-300目硅胶或300-400目硅胶。
4.根据权利要求1所述的一种人参皂苷的提取纯化方法，其中所述的活性炭的浓度为1%。
5.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rg1的提取纯化方法，其中所述的有机溶剂选自丙酮、丁酮、90% -100%的丙酮水溶液、90% -100%的丙酮甲醇溶液、90% -100%的丙酮乙醇溶液、90% -100%的丁酮甲醇溶液或90% -100%的丁酮乙醇溶液。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，本发明公开了一种人参皂苷Rg1的制备方法，其特征在于采用大孔吸收树脂法和柱层析法制备纯度大于等于98％的人参皂苷Rg1，该方法可用于制备公斤级以上的人参皂苷Rg1，适合工业化生产，具有产品纯度高，提取率高，生产成本低，环境污染小的特点。
文档编号C07J17/00GK102532234SQ201010598478
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月10日 优先权日2010年12月10日
发明者吴卓, 孙学伟, 孙德杰, 渠守峰, 郭晓鹏, 顾群 申请人:北京本草天源药物研究院