专利名称：一种大叶茜草素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种大叶茜草素的制备方法，属于天然药物领域，具体涉及一种利用 大孔树脂和硅胶柱层析技术，从茜草中提取纯化大叶茜草素的方法。
背景技术：
茜草为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L.的干燥根和根茎。始载于《神农本 草经》，具有凉血、祛瘀、止血、通经的功效，用于吐血、衄血、崩漏、外伤出血、淤阻经闭、关节 痹痛、跌扑肿痛。茜草主产于陕西渭南、河南嵩县、安徽、江苏、山东等地。目前，已知茜草中 含有多种蒽醌类成分、萘醌类成分、环六肽成分，其中萘醌类成分为茜草类药材的特征性成 分。茜草有显著的止血、抑菌、消炎作用，大叶茜草素是其主要有效成分之一，体外实验表 明，茜草素对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌和克雷伯氏菌 等均有显著的抑制作用。刘广等发现甲醇溶液中的大叶茜草素在光照下不稳定，测定其含 量应避光操作。谭朝阳通过实验发现三七总皂苷、三七素、大叶茜草素是三七、茜草治疗宫 环出血的主要有效部位，三七总皂苷、三七素、大叶茜草素均能使家兔子宫勻浆6-K-PGFla/ TXB2比值明显降低，而三七、茜草提取后的剩余物无相应作用或作用较弱。尤昭玲等的实 验发现SQ重组复方能改善置Cu-IUD家兔子宫内膜血管内皮细胞及平滑肌细胞线粒体水肿 及空泡变，改善间质细胞的泡沫样变，体外实验表明，其中的有效组分大叶茜草素对花生四 烯酸、胶原诱导的兔血小板聚集有较强的抑制作用，对血小板激活因子诱导的血小板聚集 也有抑制作用，在另一组实验中发现实验中的模型组家兔红细胞比容、全血黏度(低切、中 切、高切)、血浆黏度都显著提高，与空白对照组差异有显著性(P < 0. 01)，分别经三七总 皂苷、三七素、大叶茜草素及吲哚美辛治疗后均可降低以上指标，并且三七总皂苷、三七素、 大叶茜草素与阳性对照组药物同样使所测指标达到正常，均具有治疗作用；因此，三七总皂 苷、三七素、大叶茜草素是SQ复方有效部位，通过调节血液流变性，达到去瘀生新的止血作 用。目前国内对大叶茜草素提取纯化工艺研究方面文献较少，谭朝阳、刘倩、彭亮等均 采用乙醇回流提取，该方法仅得到茜草粗提物，无法得到高含量的大叶茜草素。
发明内容
本发明的目的在于提供一种大叶茜草素的制备方法，可得到高含量的大叶茜草 素。该方法对环境要求不高，成本低，操作简单，易于控制，适合于从茜草中工业化制备提取 该化合物。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种大叶茜草素的制备方法，包括下列步骤a.将茜草根及根茎粉碎，加入有机溶剂进行提取，提取两次，过滤，保留滤液，浓 缩；b.用水悬浮，加入大孔吸附树脂柱吸附，80-100%甲醇或乙醇洗脱，收集洗脱液，
3减压浓缩至干；c.上述浓缩物采用硅胶柱层析分离纯化，石油醚-乙酸乙酯、石油醚-甲醇或正己 烷-乙酸乙酯梯度洗脱，收集流分，根据TLC跟踪监测将相同流分合并；d.将大叶茜草素流分减压回收试剂，浓缩至干，二氯甲烷-丙酮重结晶得到大叶 茜草素纯品。所述步骤a.中有机溶剂选自丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲醇中的一种或几种。所述步骤a.中提取方法可选微波提取、超声提取、加热回流提取、渗漉提取或索 氏提取中的一种。所述步骤b.中大孔树脂可选XSD-I、DlOl、AB_8、HPD100等非极性或弱极性树脂。所述步骤c.中洗脱剂体积比为49 1-2 1。本发明制备方法简单，成本低、选用树脂吸附，富集量大，除杂效果好，能耗低，避 免高温发生结构变化；采用硅胶柱分离效果好。
具体实施例方式下面的实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形式限制本发明。实施例1:以陕西产茜草为原料，取10kg，用90%丙酮索氏提取，过滤，取滤液，将药渣再重 复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入DlOl大孔吸 附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，再 用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-乙酸乙酯为系统溶 剂进行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液，每500ml为 一个流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结晶， 真空干燥得43. 2g大叶茜草素，含量为90. 36%。实施例2:以陕西产茜草为原料，取10kg，用甲醇索氏提取，过滤，取滤液，将药渣再重复上述 操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入大孔吸附树脂柱吸 附，吸附后先用水洗脱杂质，再以80%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，再用无水硫 酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-氯仿为系统溶剂进行梯度洗 脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液，每500ml为一个流分，根 据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结晶，真空干燥得 57. 2g大叶茜草素，含量为91. 45%。实施例3:以陕西产茜草为原料，取20kg，用90 %乙醇加热回流提取，过滤，取滤液，将药渣 再重复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入HPD100 大孔吸附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以90%甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回收 乙醇，再用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-氯仿为系统 溶剂进行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液，每500ml 为一个流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结 晶，真空干燥得76. 3g大叶茜草素，含量为92. 43%。
实施例4 以陕西产茜草为原料，取20kg，用60 %乙酸乙酯加热回流提取，过滤，取滤液，将 药渣再重复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入 AB-8大孔吸附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以95 %甲醇洗脱，收集洗脱液，减压 回收乙醇，再用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-乙酸乙 酯为系统溶剂进行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液， 每500ml为一个流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙 酮重结晶，真空干燥得78. 4g大叶茜草素，含量为94.沈％。实施例5 以陕西产茜草为原料，取30kg，用90 %甲醇微波提取，过滤，取滤液，将药渣再重 复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入XSD-I大孔 吸附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以85%甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇， 再用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，正己烷-乙酸乙酯为系统 溶剂进行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液，每500ml 为一个流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结 晶，真空干燥得112. 5g大叶茜草素，含量为95. 12%。实施例6 以陕西产茜草为原料，取30kg，用70%乙醇索氏提取，过滤，取滤液，将药渣再重 复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入DlOl大孔吸 附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以90%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，再 用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-甲醇为系统溶剂进 行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液，每500ml为一个 流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结晶，真空 干燥得104. 6g大叶茜草素，含量为93. 37%。实施例7 以陕西产茜草为原料，取50kg，用95 %甲醇超声提取，过滤，取滤液，将药渣再重 复上述操作提取一次，合并两次滤液，浓缩得茜草浸膏；将浸膏用水悬浮，加入AB-8大孔吸 附树脂柱吸附，吸附后先用水洗脱杂质，再以90%甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，再 用无水硫酸钠脱水至接近无水分；采用硅胶柱色谱进行分离，石油醚-乙酸乙酯为系统溶 剂进行梯度洗脱，洗脱液体积配比为49 1、19 1、9 1、2 1，收集洗脱液，每500ml为 一个流分，根据TLC跟踪监测，合并相同流分，减压浓缩大叶茜草素流分，再用丙酮重结晶， 真空干燥得184. Og大叶茜草素，含量为92. 33%。
权利要求
1.一种大叶茜草素的制备方法，包括下列步骤a.将茜草根及根茎粉碎，加入有机溶剂进行提取，提取两次，过滤，保留滤液，浓缩；b.用水悬浮，加入大孔吸附树脂柱吸附，80-100%甲醇或乙醇洗脱，收集洗脱液，减压 浓缩至干；c.上述浓缩物采用硅胶柱层析分离纯化，石油醚-乙酸乙酯、石油醚-氯仿或正己 烷-乙酸乙酯梯度洗脱，收集流分，根据TLC跟踪监测将相同流分合并；d.将大叶茜草素流分减压回收试剂，浓缩至干，二氯甲烷-丙酮重结晶得到大叶茜草 素纯品。
2.根据权利要求1所述大叶茜草素的制备方法，其特征在于所述步骤a.中所用原药材 茜草为陕西产茜草。
3.根据权利要求1所述大叶茜草素的制备方法，其特征在于所述步骤a.中有机溶剂选 自丙酮、乙醇、乙酸乙酯、甲醇中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述大叶茜草素的制备方法，其特征在于所述步骤a.中提取方法可 选微波提取、超声提取、加热回流提取、渗漉提取或索氏提取中的一种。
5.根据权利要求1所述大叶茜草素的制备方法，其特征在于所述步骤b.中大孔树脂可 选XSD-I、DlOl、AB-8、HPD100等非极性或弱极性树脂。
6.根据权利要求1所述大叶茜草素的制备方法，其特征在于所述步骤c.中洗脱剂体积 比为 49 1-2 1。
全文摘要
本发明涉及一种大叶茜草素的制备方法，该方法是将茜草干燥并粉碎，采用有机溶剂提取，浓缩，用水悬浮，大孔吸附树脂与硅胶柱层析连续分离纯化，浓缩洗脱液，二氯甲烷-丙酮结晶，得到大叶茜草素纯品。整个分离过程对环境要求不高，成本低，操作简单，易于控制，适用于工业化生产。
文档编号C07D311/92GK102060835SQ201010603999
公开日2011年5月18日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司