专利名称：一种从红花中提取精制羟基红花黄色素a的方法
技术领域：
本发明涉及一种从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法。
背景技术：
轻基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A)是具有单查尔酮苷类结构的化合物，是红花药理功效的最有效水溶性部位，可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放，可竞争性地抑制血小板激活因子与血小板受体的结合，是红花黄色素的活血化瘀有效成分。它是ー种好的医药原料，也可用于制作保健和化装品，还是很好的食品染料。抗血小板和抗心肌缺血作用。抗凝血酶诱导的血小板聚集活性，抗炎活性，细胞保护活性，抗肿瘤活性。CN1475272A公开了ー种羟基红花黄色素A的提取精制方法，存在如下缺点1.エ 艺为“提取一分离ー醇沉ー纯化一再纯化(1-3次)”，整个エ艺需要5-7个步骤，エ艺步骤多、周期长、繁琐，エ业生产中不易进行实际操作。2.通过实验可知红花中羟基红花黄色素A在弱极性和中极性大孔吸附树脂中吸附性差，水就可以洗脱下来，在强极性大孔吸附树脂中吸附性极强，水和95%こ醇均无法洗脱，本专利在分离、纯化、再纯化工艺中，用去离子水即洗脱除去杂质又洗脱羟基红花黄色素A，没有监控エ艺的方法，仅以收集橙黄色色带流份来作为控制エ艺的指标，红花中大部分成分均为橙黄色，所以用顔色来判断洗脱終点的方法，误差大，分离、纯化、再纯化工艺可控性差，エ业生产中不易操作。3.本专利在纯化、再纯化工艺中用到聚酰胺或硅胶或葡聚糖凝胶，这三种填料价格较高，尤其是葡聚糖凝胶价格昂贵，再生困难，需用到甲醇、こ醇等有机试剂及酸、碱等试剂，再生次数及使用寿命不如大孔吸附树脂，这三种填料颗粒细小，装柱后柱体紧密，对设备、样品、操作人员要求较高，尤其是样品必须过滤好，最好过O. 45um膜，否则极易堵塞层析柱，在纯沉エ艺中使用了高浓度(60-90%)的こ醇或甲醇或丙酮，这些有机试剂均对环境及人身健康有极大的危害，导致エ业生产成本高、难度大。CN101195647A A也公开了ー种羟基红花黄色素A的提取精制方法，存在如下缺点1.エ艺为“提取一分离ー纯化一再纯化(3次)”，整个エ艺需要6个步骤，エ艺步骤多、周期长、繁琐，エ业生产中不易进行实际操作。2.在分离、纯化、再纯化工艺中，用去离子水即洗脱除去杂质又洗脱羟基红花黄色素A，虽然分离エ艺中用Molisch及茚三酮反应判断除杂终点，但生产中不易控制，杂质除去不完全，羟基红花黄色素A易损失，纯化、再纯化工艺仅以收集橙黄色色带流份来作为控制エ艺的指标，红花中大部分成分均为橙黄色，用颜色来判断洗脱終点的方法，误差大，所以整个分离纯化在纯化工艺没有有效监控エ艺的方法，导致エ艺可控性差，エ业生产中不易操作。3.本专利在纯化、再纯化工艺中用葡聚糖凝胶G-25，此填料价格昂贵，再生次数及使用寿命有限，物理性能差，颗粒细小，装柱后柱体紧密，对设备、样品、操作人员要求较高，尤其对待纯化样品，必须过滤O. 45um膜，否则极易堵塞层析柱，照成葡聚糖凝胶G-25损失，导致エ业生产成本高、难度大，不易实际应用于エ业生产。
CN101168539A也公开了ー种羟基红花黄色素A的提取方法，这种方法较为简単，缺点如下本专利只是用于注射用丹红的生产，所以只是对红花中羟基红花黄色素A进行了初步分离，产品注射用丹红中丹參酚酸B和羟基红花黄色素A 二者含量合计在60%以上，其中丹參提取物中丹參酚酸B的含量在80%以上，二者混合的比例是丹參和红花药材重量比是3:1，由此可见本专利只是对红花中羟基红花黄色素A进行了初步分离，其纯度低，不到20%。虽然红花提取液调酸后增强了对大孔吸附树脂的吸附性能，然后用酸水进行洗脱，羟基红花黄色素A并没有被酸水洗脱下来，可以和多糖等杂质充分分离，エ艺简单，便于エ业生产，但其纯度低，不能用于高纯度羟基红花黄色素A的制备。CN101215307A公开的羟基红花黄色素A的提取方法，存在缺点如下I.在分离エ艺中没有解决水洗脱除杂时，羟基红花黄色素A和多糖等杂质一起洗脱下来的问题，エ艺可空性差，不易于エ业实际生产。2.整个エ艺虽然简洁，但精致エ艺采用反相填料，对设备、样品及人员要求较高，尤其是设备要求，至少应能加压洗脱，并且能很好的控制流速，常规层析柱无法达到要求，样品应过滤O. 45um膜，以免堵塞层析柱，不易于エ业实际生产。3.反相填料价格较贵在再生次数及使用寿命有限均不如大孔吸附树脂，洗脱液均采用10-70% こ醇，对环境及人身安全存在隐患。
发明内容
本发明提供一种从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，该方法包括如下步骤
a、提取称取红花中药材，加水煎煮，减压浓缩，得提取液A;
b、第一次纯化提取液A以弱碱性离子交換树脂纯化，减压浓缩洗脱液，得浓缩液B;
C、第二次纯化浓缩液B以中极性大孔吸附树脂纯化，减压浓缩洗脱液，得浓缩液C ；
d、第三次纯化浓缩液C以非极性大孔吸附树脂纯化，减压浓缩洗脱液，得浓缩液D；
e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法优选为包括如下步骤
a、提取称取红花中药材，加水煎煮2-3次，每次加所投中药材重量的15-30倍水，除第一次室温浸泡20-60分钟后，微沸10-40分钟，其余均微沸10-40分钟，过滤，合并提取液，60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ;
b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂按照质量比-生药树脂为1:2-6的比例装柱，上样，饱和O. 5-2小吋，10-20倍柱体积的去离子水洗至中性，5-10倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为6-10倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性，然后用15-30倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为5-8倍柱体积每小时，收集4%醋酸铵洗脱液，60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ；
C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂按质量比-生药树脂为1:6-10的比例装柱，上样，饱和20-50分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5-3倍柱体积每小吋，前I. 6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为5-8倍柱体积每小时，每I倍柱体积洗脱液ー份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，600C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ；
d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂按质量体积比-羟基红花黄色素A 树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱，上样，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5-1倍柱体积每小时，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，将合并后洗脱液60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ;
e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。本发明从红花中提取精制 羟基红花黄色素A的方法中所使用的弱碱性离子交換树脂优选为D900树脂、D301R树脂或者D380树脂，中极性大孔吸附树脂优选为XAD-7HP树月旨、HPD450树脂或者HPD400树脂，非极性大孔吸附树脂优选为D3520树脂、HPD100树脂或者HPD300树脂。本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，更优选为包括如下步骤
a、提取称取红花中药材，加水煎煮3次，每次加所投中药材重量的23倍水，除第一次室温浸泡30分钟后，微沸20分钟，其余均微沸20分钟，过滤，合并提取液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ；
b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂D900按照质量比-生药树脂为1:4的比例装柱,上样,饱和I小时，15倍柱体积的去离子水洗至中性，6倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为8倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性，然后用20倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为6倍柱体积每小吋，收集4%醋酸铵洗脱液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ；
C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂XAD-7HP按质量比-生药树脂为1:7. 5的比例装柱，上样，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为I倍柱体积每小吋，前
I.6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为6倍柱体积每小吋，每I倍柱体积洗脱液ー份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，600C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ；
d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂D3520按质量体积比-羟基红花黄色素A :树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱，上样，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为
O.7倍柱体积每小时，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ;
e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，第一次纯化的层析柱的径高比优选为I :6，上样流速优选为2倍柱体积每小时，第二次纯化的层析柱的径高比优选为I :7，上样流速优选为I倍柱体积每小时，第三次纯化的层析柱的径高比优选为I :8，上样流速优选为O. 7倍柱体积每小时。本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法还优选为包括如下步骤
a、提取称取红花中药材，加水煎煮2次，每次加所投中药材重量的15倍水，第一次室温浸泡20分钟后，微沸10分钟，第二次微沸10分钟，过滤，合并提取液，60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ;
b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂D900按照质量比-生药树脂为1:6的比例装柱,层析住径高比为I :6，上样流速为2倍柱体积每小时，饱和2小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性，10倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为10倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性,然后用30倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为8倍柱体积每小吋，收集4%醋酸铵洗脱液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ；
C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂XAD-7HP按质量比-生药树脂为1:6的比例装柱,层析柱径高比为I :7，上样流速为I倍柱体积每小时，饱和20分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5倍柱体积每小吋，前I. 6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为5倍柱体积每小吋，每I倍柱体积洗脱液ー份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，600C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ；
d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂D3520按质量体积比-羟基红花黄色素A :树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱,层析柱径高比为I :8，上样流速为O. 7倍柱体积姆小吋，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为I倍柱体积每小吋，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ;
e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法还优选为包括如下步骤
a、提取称取红花中药材，加水煎煮3次，每次加所投中药材重量的30倍水，除第一次室温浸泡60分钟后，微沸40分钟，其余两次均微沸40分钟，过滤，合并提取液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ;
b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂D900按照质量比-生药树脂为1:2的比例装柱,层析住径高比为I :6，上样流速为2倍柱体积每小时，饱和O. 5小时，10倍柱体积的去离子水洗至中性,5倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为6倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性,然后用15倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为5倍柱体积每小吋，收集4%醋酸铵洗脱液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ；
C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂XAD-7HP按质量比-生药树脂为1:10的比例装柱,层析柱径高比为I :7，上样流速为I倍柱体积每小时，饱和50分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为3倍柱体积每小吋，前I. 6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为8倍柱体积每小时，每I倍柱体积洗脱液一份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，600C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ；
d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂D3520按质量体积比-羟基红花黄色素A :树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱,层析柱径高比为I :8，上样流速为O. 7倍柱体积姆小时,饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5倍柱体积每小时，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ;
e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法中的原料中药材红花的中药材拉丁学名为CARTHAMI FLOS,又称为草红花、刺红花、杜红花、金红花等，为菊科植物红花(拉丁学名-,Carthamus tinctorius L.)的干燥花。
采用本发明从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法连续生产五批羟基红花黄色素A，转移率均在20%以上，纯度均超过80%，详细结果见表I
表I连续五批生产羟基红花黄色素A的纯度和转移率结果
权利要求
1.一种从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，该方法包括如下步骤 a、提取称取红花中药材，加水煎煮，减压浓缩，得提取液A; b、第一次纯化提取液A以弱碱性离子交換树脂纯化，减压浓缩洗脱液，得浓缩液B; C、第二次纯化浓缩液B以中极性大孔吸附树脂纯化，减压浓缩洗脱液，得浓缩液C ; d、第三次纯化浓缩液C以非极性大孔吸附树脂纯化，减压浓缩洗脱液，得浓缩液D; e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。
2.根据权利要求I所述的从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，该方法包括如下步骤 a、提取称取红花中药材，加水煎煮2-3次，每次加所投中药材重量的15-30倍水，除第一次室温浸泡20-60分钟后，微沸10-40分钟，其余均微沸10-40分钟，过滤，合并提取液，.60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ; b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂按照质量比-生药树脂为1:2-6的比例装柱，上样，饱和O. 5-2小吋，10-20倍柱体积的去离子水洗至中性，5-10倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为6-10倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性，然后用.15-30倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为5-8倍柱体积每小时，收集4%醋酸铵洗脱液，60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ； C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂按质量比-生药树脂为1:6-10的比例装柱，上样，饱和20-50分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5-3倍柱体积每小吋，前I. 6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为5-8倍柱体积每小吋，每I倍柱体积洗脱液ー份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ; d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂按质量体积比-羟基红花黄色素A树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱，上样，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5-1倍柱体积每小吋，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，将合并后洗脱液60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ; e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。
3.根据权利要求1-2任一项所述的从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，所述弱碱性离子交換树脂为D900树脂，中极性大孔吸附树脂为XAD-7HP树脂，非极性大孔吸附树脂为D3520树脂。
4.根据权利要求3所述的从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，该方法包括如下步骤 a、提取称取红花中药材，加水煎煮3次，每次加所投中药材重量的23倍水，除第一次室温浸泡30分钟后，微沸20分钟，其余均微沸20分钟，过滤，合并提取液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ； b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂D900按照质量比-生药树脂为1:4的比例装柱,上样,饱和I小时，15倍柱体积的去离子水洗至中性，6倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为8倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性，然后用20倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为6倍柱体积每小时，收集4%醋酸铵洗脱液，60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ； C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂XAD-7HP按质量比-生药树脂为1:7.5的比例装柱，上样，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为I倍柱体积每小时，前I.6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为6倍柱体积每小吋，每I倍柱体积洗脱液ー份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，600C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ； d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂D3520按质量体积比-羟基红花黄色素A :树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱，上样，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O.7倍柱体积每小时，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ; e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。
5.根据权利要求4所述的从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，第一次纯化的层析柱的径高比为I :6，上样流速为2倍柱体积每小时，第二次纯化的层析柱的径高比为I :7，上样流速为I倍柱体积每小时，第三次纯化的层析柱的径高比为I :8，上样流速为O. 7倍柱体积每小时。
6.根据权利要求3所述的从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，该方法包括如下步骤 a、提取称取红花中药材，加水煎煮2次，每次加所投中药材重量的15倍水，第一次室温浸泡20分钟后，微沸10分钟，第二次微沸10分钟，过滤，合并提取液，60°C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ； b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂D900按照质量比-生药树脂为1:6的比例装柱,层析住径高比为I :6，上样流速为2倍柱体积每小时，饱和2小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性，10倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为10倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性,然后用30倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为8倍柱体积每小吋，收集4%醋酸铵洗脱液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ； C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂XAD-7HP按质量比-生药树脂为1:6的比例装柱,层析柱径高比为I :7，上样流速为I倍柱体积每小时，饱和20分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5倍柱体积每小吋，前I. 6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为5倍柱体积每小吋，每I倍柱体积洗脱液ー份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ； d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂D3520按质量体积比-羟基红花黄色素A :树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱,层析柱径高比为I :8，上样流速为O. 7倍柱体积姆小吋，饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为I倍柱体积每小吋，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ; e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。
7.根据权利要求3所述的从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法，该方法包括如下步骤 a、提取称取红花中药材，加水煎煮3次，每次加所投中药材重量的30倍水，除第一次室温浸泡60分钟后，微沸40分钟，其余两次均微沸40分钟，过滤，合并提取液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. 25g/ml，得提取液A ; b、第一次纯化将提取液A和弱碱性离子交换树脂D900按照质量比-生药树脂为1:2的比例装柱,层析住径高比为I :6，上样流速为2倍柱体积每小时，饱和O. 5小时，10倍柱体积的去离子水洗至中性,5倍柱体积浓度为10%醋酸冲洗，流速为6倍柱体积每小时，20倍柱体积的去离子水洗至中性,然后用15倍柱体积浓度为4%的醋酸铵洗脱，流速为5倍柱体积每小吋，收集4%醋酸铵洗脱液，600C以下减压浓缩至生药浓度为O. lg/ml，得浓缩液B ； C、第二次纯化将浓缩液与中极性大孔吸附树脂XAD-7HP按质量比-生药树脂为1:10的比例装柱,层析柱径高比为I :7，上样流速为I倍柱体积每小时，饱和50分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为3倍柱体积每小时，前I. 6倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 2倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，接着改变洗脱流速为8倍柱体积每小时，每I倍柱体积洗脱液一份，共接6份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩至羟基红花黄色素A浓度为3. 45mg/ml，得浓缩液C ； d、第三次纯化将浓缩液C和非极性大孔吸附树脂D3520按质量体积比-羟基红花黄色素A :树脂为O. 444mg: Iml的比例装柱,层析柱径高比为I :8，上样流速为O. 7倍柱体积姆小时,饱和30分钟，去离子水洗脱，洗脱流速为O. 5倍柱体积每小时，前O. 8倍柱体积洗脱液不要，然后每O. 17倍柱体积洗脱液ー份，共接7份，然后每I倍柱体积洗脱液ー份，共接4 份，分别测定每份羟基红花黄色素A的含量，合并洗脱液，60°C以下减压浓缩，得浓缩液D ; e、冷冻干燥将浓缩液D，过滤，冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A。
全文摘要
本发明公开了一种从红花中提取精制羟基红花黄色素A的方法。羟基红花黄色素A是具有单查尔酮苷类结构的化合物，富含于中药材红花(CARTHAMI FLOS)之中，本发明从中药红花中经过提取、离子交换树脂纯化、中极性大孔吸附树脂纯化、非极性大孔吸附树脂纯化，冷冻干燥五个步骤，得到含量为80%以上的羟基红花黄色素A，转移率20%以上。
文档编号C07H7/04GK102675379SQ20111006095
公开日2012年9月19日 申请日期2011年3月15日 优先权日2011年3月15日
发明者姜新刚, 贾继明, 赵韶华 申请人:河北以岭医药研究院有限公司