专利名称：人免疫系统毒性蛋白颗粒酶h特异性抑制剂、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的人免疫系统毒性蛋白颗粒酶H抑制剂、它的制备方法以及用途。
背景技术：
细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)在机体进行抗病毒及细胞内细菌感染、器官移植排斥和抗肿瘤应答中具有重要作用。死亡受体途径(FAS/FASL)以及释放细胞毒性颗粒是这两类杀伤细胞导致靶细胞凋亡及清除的重要通路，而后者是最重要且最有效的杀伤武器。细胞毒性颗粒内主要含有打孔蛋白穿孔素(perforin)和颗粒酶(granzymes)。颗粒酶是一类高度保守的丝氨酸蛋白酶家族成员，具有经典的丝氨酸蛋白酶折叠构象及催化三联体结构。在人类中目前一共发现5种颗粒酶(A、B、K、H和M)。颗粒酶H的基因定位于14qll. 2，在颗粒酶B以及组织蛋白酶G(cath印sin G)基因簇之间。尽管从基因进化上分析，颗粒酶H基因部分被颗粒酶B所取代，两者之间有着71 %的氨基酸序列同源性，颗粒酶H却具有完全不同于颗粒酶B的酶学特性。颗粒酶H仅在疏水性芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸后特异性水解底物。功能上，颗粒酶H—方面通过切割ICAD (人凋亡蛋白酶激活因子I)，Bid等底物导致细胞凋亡；另一方面通过水解宿主自身抗原蛋白La，可抑制La介导的HCV(Hepatitis virus C)的转录复制。更重要的是，颗粒酶H通过直接切割腺病毒蛋白组装蛋白100K和DNA结合蛋白，解除100K对颗粒酶B的抑制，并且有效抑制腺病毒的组装和复制。鉴于颗粒酶H唯一高表达于NK细胞中，其表达量不受NK细胞活化状态的影响，关于颗粒酶H的研究证明其中天然免疫过程中的独特作用。根据颗粒酶H的特殊结构，设计颗粒酶H特异性的抑制剂，可在相关领域的科学研究，及临床抑制器官移植排斥反应和自身免疫性疾病的治疗中发挥重要的作用。
发明内容
本发明在人颗粒酶H结构与功能的解析基础上，设计合成了一种人颗粒酶H特异
性的抑制剂，其化学结构式如下
权利要求
1.式(1)的化合物
2.权利要求I所述的化合物，其特征在于多肽组成以及它们的相对结构位置为Pro-Thr-Ser-Tyr ；ACE表示乙酰基；CMK表示氯甲基酮。
3.权利要求I或2所述的式(I)的化合物，其是人免疫系统毒性蛋白颗粒酶H结合口袋识别多肽序列。
4.权利要求3所述的式(I)的化合物，其中Tyr-CMK与人免疫系统毒性蛋白颗粒酶H的结合口袋之间形成的共价键。
5.式(I)的化合物的制备方法，该方法包括以下步骤 (1)根据化学式(I)的化合物的氨基酸组成及其相对位置，合成肽段； (2)对步骤(I)中合成肽段的N端进行乙酰化修饰；和 (3)对步骤(2)中修饰完成的肽段进行C端CMK修饰。
6.权利要求5所述的制备方法，进一步包括分离纯化和通过质谱法鉴定所得肽段。
7.权利要求I或2所述的式(I)的化合物在制备人免疫系统毒性蛋白颗粒酶H抑制剂中的用途。
8.权利要求7所述的用途，其中所述抑制剂用于减少器官移植排斥、治疗自身免疫病和/或治疗肿瘤。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)的化合物，其中ACE(乙酰基，ACE)为乙酰基，CMK(氯甲基酮，CMK)为氯甲基酮，Pro、Thr、Ser、Tyr分别代指脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、酪氨酸四种氨基酸。式(I)化合物可作为颗粒酶H抑制剂用于相关科学研究，并具有应用于临床器官移植和自身免疫病治疗等的潜在应用价值。
文档编号C07K5/117GK102718834SQ20111025829
公开日2012年10月10日 申请日期2011年9月2日 优先权日2011年9月2日
发明者吴连锋, 唐海东, 孙飞, 李翀, 王丽, 翟羽佳, 范祖森 申请人:中国科学院生物物理研究所