一种吩噻嗪类药物的半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种吩噻嗪类药物的半抗原、人工抗原和单克隆抗体及其制备方法与应用，该半抗原含有吩噻嗪类药物的共有结构部分，并且在所述吩噻嗪类药物人工抗原的制备过程中，利用了引入的羧基与载体蛋白连接，也就是使该共有结构部分远离载体蛋白，充分暴露给动物的免疫识别系统。因此，以该人工抗原作为免疫原免疫动物，可以获得能同时识别多种吩噻嗪类药物的广谱特异性抗体，用于快速免疫分析和筛选，提高检测效率，缩短检测时间，降低检测成本。
【专利说明】一种吩噻嗪类药物的半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其制
备方法与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及食品安全领域，具体涉及一种吩噻嗪类药物的族特异性半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002]吩噻嗪类药物作为一类镇静剂主要用于缓解动物异常躁动，达到镇静、化学保定和配合麻醉等目的，此类药物的常见品种有氯丙嗪、异丙嗪、乙酰丙嗪、奋乃静、氟奋乃静、硫利达嗪。近些年，一些不法饲料商或养殖者为了追求饲料的高转化率和高额利润，在饲料中随意添加吩噻嗪类药物，以减少动物的活动量，从而起到催肥作用。在动物运输过程中使用，可降低动物的维持需要和减少途中失重、死亡率。但这类药物在动物体内代谢缓慢，在体内的残留时间可达2-3个月。它们在畜牧养殖业中的滥用，不仅会引起动物的中毒，还会通过在动物性食品(肉、奶、蛋等)中的残留直接危害到消费者身体健康。所以，中国农业部规定此类药物不得以抗应激和促生长为目的在养殖业中使用，且在动物性产品中不得检出。因此，必须要对动物性食品中可能残留的吩噻嗪类药物进行监控，以保证动物性食品安全和消费者健康。
[0003]目前，对动物性食品中吩噻嗪类药物的残留检测主要采用高效液相色谱法、液-质联用法、气相色谱法等仪器检测方法。但是仪器分析法操作复杂，样品前处理过程繁琐，需要专业技术人员，耗费时间长，无法对大批次产品进行检测，且成本较高，不适宜进行推广普及。而免疫分析法，是现在兽药残留检测的重要方法，其方便，快捷，可应用于大批量样品的筛选，宜于推广普及。免疫分析法的核心试剂是抗体。到目前为止，国内外虽有针对此类药物的抗体制备研究，但结果均不能满足多残留检测的目的。1978年，Hubbard等用不同的方法合成了吩噻嗪类药物中氯丙嗪的3种半抗原:(7-(3-羰基丙酰)氯丙嗪、N-(3-羰基丙酰)氯丙嗪、N-( 2-羰基乙酯)去甲基氯丙嗪)，制备的多克隆抗体与氯丙嗪有100%交叉反应率，但与其他吩噻嗪类药物没有交叉反应性。1979年，Midha等合成了氯丙嗪的半抗原N-(2-羰基乙酯)去甲基氯丙嗪，制备的多克隆抗体与氯丙嗪交叉反应率为100%，但与其他吩噻嗪类药物没有交叉反应性。2010年，Liu等以乙酰丙嗪为基础合成半抗原，制备了单克隆抗体，该抗体与氯丙嗪交叉反应率为100%，但对其他吩噻嗪类药物的交叉反应率极低1%)。2011，Shen等合成了氯丙嗪的半抗原7-氨基氯丙嗪，制备了针对氯丙嗪的多克隆抗体，该抗体与氯丙嗪交叉反应率为100%，对其他吩噻嗪类药物没有交叉反应。因此，目前已有的各种抗体均是以氯丙嗪或乙酰丙嗪为模板合成半抗原，制备的抗体不能同时识别其他吩噻嗪类药物，当然也就不能用于多残留免疫检测多种吩噻嗪类药物。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种吩噻嗪类药物的半抗原及相应的人工抗原、抗体。
[0005]本发明的再一个目的是提供一种吩噻嗪类药物的半抗原及相应的人工抗原、抗体的制备方法。
[0006]本发明的第三个目的是提供一种吩噻嗪类药物的族特异性半抗原及相应的人工抗原、抗体的应用。
[0007]为实现上述目的，本发明采取以下技术方案:一种吩噻嗪类药物的半抗原，其分子结构式如式I所示:
【权利要求】
1.一种吩噻嗪类药物的半抗原，其特征在于:其分子结构式如式1所示:
2.一种如权利要求1所述的吩噻嗪类药物的半抗原的制备方法，其特征在于:包括如下步骤，以下按物质的量计: (a)将1份2-氯吩噻嗪溶于四氢呋喃中，搅拌下加入1飞份的氢化钠，搅拌反应10-30分钟；(b)向上述反应体系中加入f2份的溴乙酸钠，加热至回流，反应6~12小时后停止加热并降至室温； (c)向上述反应体系中加入5~10份的氢化钠，回流反应8~12小时后停止反应并降至室温； (d)向上述反应体系中加入无水乙醇除去过量的氢化钠，减压抽滤，所得滤液在旋转蒸发器上蒸干，得固体，将所得固体在乙醇中酸化后采用柱层析法分离得式1所示化合物。
3.—种吩噻嗪类药物的人工抗原，其特征在于:由权利要求1所述的吩噻嗪类药物的半抗原与载体蛋白偶联而成，其分子结构式如式2所示:
4.如权利要求3所述的吩噻嗪类药物的人工抗原的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: (a)将0.lmmol的吩噻嗪类药物半抗原溶于3mL N, N- 二甲基甲酰胺中，然后加入20μ?三乙胺和0.1~0.5mmol氯甲酸异丁酯，4~10°C搅拌反应1~2小时，得A液； (b)将0.02mmol的牛血清白蛋白溶解于2mL lmol/L碳酸氢钠溶液中，得B液； (c)将A液滴加到B液中，4~10℃搅拌反应10-12小时，得到含吩噻嗪类药物人工抗原的反应液； (d)将上述含吩噻嗪类药物人工抗原的反应液在4~20℃用PBS透析3~4天，然后将透析袋中的溶液在无菌条件下用滤径为0.2um的滤膜过滤，得到吩噻嗪类药物的人工抗原。
5.一种吩噻嗪类药物的单克隆抗体，是能与权利要求3所述的吩噻嗪类药物的人工抗原发生特异性免疫反应的免疫球蛋白。
6.如权利要求5所述的吩噻嗪类药物的单克隆抗体的应用，所述单克隆抗体用于吩噻嗪类药物的免疫检测。
【文档编号】C07K14/77GK103554056SQ201310513612
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年10月28日 优先权日:2013年10月28日
【发明者】王建平, 刘静, 张会彩, 高宝龙 申请人:河北农业大学